БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 36, 2010 М.Т.Луценко, И.А.Андриевская ДИНАМИКА АКТИВНОСТИ СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В НЕЙТРОФИЛАХ

БЮЛЛЕТЕНЬ
Выпуск 36, 2010
УДК 618.2/.3:616.523:612.12.121(612.015.12+612.112.91)
М.Т.Луценко, И.А.Андриевская
ДИНАМИКА АКТИВНОСТИ СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В НЕЙТРОФИЛАХ
ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ В ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ
ГЕРПЕС-ВИРУСНУЮ ИНФЕКЦИЮ
Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения РАМН,
Благовещенск
тометре «Stat-Fax-2100» (США). Кровь, взятая из
локтевой вены, центрифугировалась в гепаринизированной пробирке на центрифуге при 1500
об/мин. После получения лейкоцитарной пленки 2
капли лейкоцитарной взвеси (пипеткой) помещали
в инкубационный раствор, состоящий из 2 см 3 10%
янтарно-кислого натрия, приготовленного на буфере Зёренсена с pH 7,6. К этому раствору добавляли 0,5 см3 0,1% метиленовой сини (Methylene
blue pure A.R., Koch-Light Limiled, England), тщательно взбалтывали и помещали на 5 мин в термостат при температуре 37°С.
После этого несколько капель инкубационной
взвеси помещали на предметное стекло Stat Sprin
SL72 (США) и накрывали покровным стеклом,
края которого запаивали парафином. Готовый препарат помещался на электрофотомикроскоп Opton
(Германия) при комнатной температуре (24°С).
Выбирался объект наблюдения (нейтрофил), за
которым через каждые 15 минут велась съемка на
фотопленку Kodak (США).
РЕЗЮМЕ
Установлено, что при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекции, активность
сукцинатдегидрогеназы в нейтрофилах периферической крови резко подавляется.
Ключевые слова: сукцинатдегидрогеназа,
герпес, метиленовая синь.
SUMMARY
M.T.Lutsenko, I.A.Andriyevskaya
DYNAMICS OF SUCCINATDEHYDROGENASE
ACTIVITY IN NEUTROPHILES
OF PERIPHERAL BLOOD OF PREGNANT
WOMEN THAT SUFFERED HERPES-VIRUS
INFECTION IN THE THIRD TRIMESTER
It is established that in pregnancy complicated by herpes-virus infection the succinatdehydrogenase activity in neutrophiles of peripheral blood gets suppressed strongly.
Key words: succinatdehydrogenase, herpes,
methylene blue.
Результаты исследования и их обсуждение
Первоначально активность сукцинатдегидрогеназы оценивалась в клетках по реакции восстановления метиленовой сини [1, 3]. Эту реакцию использовали для оценки длительности проявления
активности этого дыхательного фермента в различных тканях [2]. С ее помощью автор отмечал
скорость обесцвечивания метиленовой сини в различных клетках, что позволяло установить, в каких
элементах тканей сукцинатдегидрогеназа действует активней.
Было установлено, что зернистость нейтрофилов здоровых беременных, окрашенная интенсивно
(рис. 1а) метиленовой синькой, остается в таком
качестве 30 мин. (рис. 1б), после чего, интенсивность окраски начинает ослабевать и к 45 минутам
наблюдения остаются окрашенными единичные
зерна, через 90 мин. препарат обесцвечивается
(рис. 1 в).
Параллельное наблюдение за препаратом, приготовленным из лейкоцитов крови беременных,
перенесших герпес-вирусную инфекцию (титр антител к вирусу герпеса 1:12800) показывает, что
нейтрофилы начинают быстро обесцвечиваться и к
30 мин. наблюдения они оказываются лишенными
окраски (рис. 2 а, б).
Исследования активности сукцинатдегидрогеназы путем обесцвечивания метиленовой синьки за
счет ее восстановления является крайне необходимыми, когда речь идет об оценке дыхательных
возможностей изучаемого объекта. Это не возможно увидеть на фиксированном тканевом объекте,
так как фермент становиться иммобилизованным.
Проведенные исследования позволили установить, что нейтрофилы периферической крови, обладающие большими возможностями к окислительно-восстановительным процессам, могут их
частично терять при контакте с токсическими фак-
Материалы и методы исследования
Материалом для исследования служила кровь 20
беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию (титр антител к
вирусу герпеса 1:12800). Контролем была периферическая кровь здоровых беременных. Исследования проводились на базе акушерского отделения
клиники ДНЦ ФПД СО РАМН. Все исследования
были проведены с учетом требований Хельсинской
декларации Всемирной ассоциации «Этические
принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г.
и «Правилами клинической практики в Российской
Федерации», утвержденными Приказом Минздрава
РФ от 19.06.2003 г. №266.
Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом (ИФА) на спектрофо15
БЮЛЛЕТЕНЬ
Выпуск 36, 2010
Рис. 1. Периферическая кровь беременной во время гестации. Нейтрофилы, окрашенные метиленовой синькой
на реакцию определения активности сукцинатдегидрогеназы: а – исходное состояние;
б – через 30 мин. инкубации; в – через 90 мин. инкубации. Остаются единичные зерна реакции.
Увеличение 10 ∙ 90.
Рис. 2. Периферическая кровь беременной, перенесшей в третьем триместре обострение герпес-вирусной инфекции (титр антител 1:12800). Нейтрофилы, окрашенные метиленовой синькой на реакцию сукцинатдегидрогеназы: а – исходное состояние; б – через 15 мин. инкубации; в – через 30 мин. инкубации.
торами герпес-вирусной инфекции, что и приводит
к резкому снижению активности реакции, определяемой по быстрому обесцвечиванию после окрашивания метиленовой синькой.
2. Герпес-вирусная инфекция снижает реакцию
окислительно-восстановительных процессов в нейтрофилах периферической крови у беременных,
перенесших эту инфекцию в третьем триместре.
Выводы
ЛИТЕРАТУРА
1. Метод окрашивания живых объектов (нейтрофилов) метиленовой синькой в присутствие
янтарно-кислого натрия позволяет в динамике наблюдать за интенсивностью течения окислительновосстановительных процессов по скорости обесцвечивания объекта.
1. Глик Д. Методика гисто- и цитохимии . М.:
Изд-во иностр. литературы. 1950. 484 с.
2. Роскин Г.И. Микроскопическая техника //
Сов. наука. М., 1954. 444 с.
3. Михлин Д.М. Биохимия клеточного дыхания. М.: Изд-во АН СССР. 1960. 414 с.
Поступила 02.06.2010
Михаил Тимофеевич Луценко, руководитель лаборатории,
675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22;
Mikhail T. Lutsenko,
22 Kalinin Str., Blagoveschensk, 675000;
E-mail: [email protected]

16