Создание лаборатории ВРТ - Global Fertility Academy

Предлагаем вашему вниманию главу 3.
Эта глава называется «Создание лаборатории ВРТ».
Автор — Joyce Mathew.
1
Главная функция лаборатории ВРТ — обеспечить оптимальные условия для
гамет и эмбрионов. Чтобы создать в лаборатории ВРТ эффективную и
безопасную рабочую среду, необходимо сосредоточить внимание на трех
основных вопросах — месте или расположении лаборатории, подборе
эмбриологов и используемыхпротоколах или процедурах.
Настоящая глава посвящена физическим условиям, создаваемым в центре,
основному необходимому оборудованию и расходным материалам,
используемым в лаборатории ВРТ. Будет рассказано об обязанностях ведущих
сотрудников лаборатории, эмбриологов и значимости применяемых процедур
и протоколов.
Некоторые из рекомендаций основаны на положениях 7-го издания
практического руководства Комитета по оплодотворению и эмбриологии
человека (HFEA — Human Fertilization and Embryology Authority,
Великобритания) и Американского общества репродуктивной медицины
(ASRM — American Society for Reproductive Medicine).
Первым и наиболее важным принципом является выбор местоположения. При
создании лаборатории, отвечающей высоким стандартам, это имеет
решающее значение. Среда в лаборатории ЭКО должна быть безопасной,
стабильной, не содержать токсичных веществ и инфекционных возбудителей.
Таким образом, выбор расположения лаборатории требует тщательной
оценки.
Среда лаборатории играет первостепенную роль в поддержании частоты
успешных попыток ЭКО на постоянном уровне. Основные опасения связаны с
негативным воздействием воздуха низкого качества на развитие эмбрионов
(Cohen, 1997 г.). Идеальный вариант — это расположение лаборатории вдали
от зон с высоким загрязнением, например, промышленных предприятий или
транспортных магистралей. Также следует избегать мест, прилегающих к
автомобильным стоянкам, автозаправочным станциям и строительным
площадкам, что поможет ограничить негативное влияние загрязняющих
веществ на культуры клеток и тканей (Hall, 1998 г.).
Cohen J, Gilligan A, Esposito W, Schimmel T, and Dale B Ambient air and its
potential effects on conception in vitro. Hum.Reprod. 1997; 12: 1742-1749
Hall, J, Gilligan A, Schimmel T, Cecchi M, Cohen J, The origin, effects and control of
air pollution in laboratories used for human embryo culture. Hum.Reprod. 1998;
13(Suppl 4): 146-155.
При создании нового учреждения для выполнения процедур ЭКО следует
логически спроектировать лабораторию с учетом прогнозируемой рабочей
нагрузки. Она должна примыкать к процедурному кабинету или операционной
(Американское общество репродуктивной медицины — ASRM, 2008 г.).
Критически важными элементами планировки лаборатории являются
конструктивная схема и схема климатического оборудования. Было показано,
что как структура лаборатории, так и системы климатического оборудования
могут оказать влияние на состав воздуха. С помощью определенных
инженерных решений и подбора правильных материалов можно уменьшить
загрязнение воздуха (Cohen, 1998 г.).
Схема климатического оборудования призвана обеспечить оптимальное
соответствие воздуха, циркулирующего в помещении, всем выполняемым в
нем процедурам. Конструктивная схема включает в себя планировку
лаборатории и технические характеристики, касающиеся высоты рабочей
поверхности, настилки полов, покраски стен, освещения и т. д. Чтобы удалить
из среды лаборатории летучие органические соединения (ЛОС) и химические
загрязнители воздуха, в таком планировании должны участвовать эксперты по
проектированию чистых помещений.
The American society for reproductive medicine. Revised guidelines for human
embryology and andrology laboratories. Fertil Steril. 2008; 90:S45-59
Cohen J, Gilligan A and Willadsen S Culture and quality control of embryos.
Hum.Reprod. 1998;13 (Suppl.3): 137-144.
4
Воздух, циркулирующий в лаборатории, должен иметь высокий уровень
стерильности. Это достигается путем создания для лаборатории ВРТ
отдельной системы отопления, вентиляции и кондиционирования воздуха
(ОВКВ) и системы обработки воздуха. Над потолком, в месте подачи свежего
воздуха, должны быть установлены фильтры предварительной очистки. Для
обеспечения абсорбции из воздуха загрязняющих веществ вслед за
фильтрами предварительной очистки в месте подачи воздуха следует
установить фильтры с активированным углем и перманганатом калия. Для
поддержания чистоты поступающего в лабораторию воздуха эти фильтры
следует регулярно менять.
Кроме того, на потолке лаборатории должны быть установлены
высокоэффективные сухие воздушные фильтры (HEPA-фильтры, от «High
efficiency particulate air») или сверхвысокоэффективные воздушные фильтры
(Boone, 1999 г.).
Кратность воздухообмена должна составлять не менее 18. Чтобы воздух из
прилежащих помещений не проникал в лабораторию, в ней необходимо
создавать повышенное давление.
Для обеспечения абсорбции летучих органических соединений,
выделяющихся из электрооборудования, новой мебели и др. источников,
внутри лаборатории также должны быть размещены угольные фильтры
(Cohen, 1998 г.).
Boone WR, Johnson JE, Locke AJ, Crane MM 4th, Price TM. Control of air quality in
an assisted reproductive technology laboratory. Fertil. Steril. 1999; 71: 150-154
Cohen J, Gilligan A and Willadsen S Culture and quality control of embryos.
Hum.Reprod. 1998;13 (Suppl.3): 137-144.
5
Стены лаборатории должны быть окрашены нетоксичной глянцевой
неиспаряющейся краской без запаха. Потолок должен быть сплошным. Полы
должны быть из нескользкого материала, преимущественно из винила,
который легко подвергается очистке.
Шкафы и столешницы должны быть покрыты моющимся термостойким
материалом с матовой поверхностью. Мебель должна иметь стандартную
рабочую высоту и эргономичный дизайн, способствующий снижению
утомляемости персонала.
Уровень освещения должен регулироваться диммером (светорегулятором). В
помещении должно быть установлено достаточное количество розеток.
Все важное оборудование, например, инкубаторы, микроманипулятор,
холодильник и замораживатель, должно быть подключено к источнику
бесперебойного питания с триггерной сигнализацией (Gianaroli, 2000 г). На
стене устанавливается регистрирующее устройство, отображающее
температуру и влажность воздуха в лаборатории.
Gianaroli L, Plachot M, Van Kooij R, Al Hasani S, Dawson K, DeVos, Magli MC,
Mandelbaum J, Selva J and Van Inzen W. Guidelines for good practice in IVF
laboratories. Hum.Reprod. 2000; 15: 2241-2246
6
Планировка лаборатории должна быть разумной и логичной, приспособленной
для бесперебойного выполнения стандартных процедур.
Лаборатория ВРТ — это специализированный объект, предназначенный
только для работы, связанной с выполнением ЭКО. В ней может находиться
только персонал лаборатории. После надевания медицинского операционного
халата, обуви и шапочки вход в лабораторию осуществляется только через
обдувочный шлюз с установленными в нем HEPA-фильтрами. Моечная зона
имеет раковину, предназначенную для обработки рук, и другие
специализированные области для мытья и упаковки.
Основная область лаборатории включает специализированные зоны для
культивирования ооцитов и эмбрионов и для подготовки сперматозоидов к
ВРТ. К основной зоне культивирования примыкает процедурный кабинет или
операционная. Эти две зоны соединены с помощью передаточного окна, через
которое фолликулярные аспираты передаются в лабораторию.
Чтобы во время процедур не происходило нецелесообразных перемещений
персонала по лаборатории, каждое рабочее место обеспечивается
собственным ламинарным шкафом, инкубатором и микроскопом.
Кроме того, должны быть предусмотрены отдельные зоны для
микроманипуляций, криоконсервации, хранения данных или записей, а также
зона для хранения расходных материалов.
7
Инкубаторы — это самое важное оборудование в лаборатории ВРТ. В них
поддерживается температура 37 °C. В состав питательной среды вносится
бикарбонатный буфер, поэтому для поддержания в питательной среде
должного уровня рН обычно используются газовые фазы на основе воздуха с
содержанием 5 % или 6 % CO2 или газовая фаза, состоящая из трех
компонентов: 6 % CO2, 5 % O2 и 89 % N2. Доказано, что предпочтительным
является использование низкого парциального давления кислорода (Meintjes,
2009 г.).
Точность поддерживаемой температуры среды проверяется с помощью
откалиброванного термометра или термопары. Уровень рН питательной
среды, содержащей бикарбонатный буфер, в инкубаторе поддерживается с
помощью CO2, а определяется рН-метром.
Инкубатор применяется для предварительного уравновешивания питательной
среды, инкубации сперматозоидов, культивирования ооцитов и эмбрионов.
В лаборатории должно быть установлено достаточное количество
инкубаторов. Предпочтительно, чтобы они имели по 4–6 отсеков. Следует
избегать частого открывания и закрывания дверцы инкубатора, поскольку это
приводит к колебаниям температуры, уровня рН и осмолярности (Abramczuk и
Lopata, 1986 г.).
Meintjes M, Chantlis SJ, Douglas JD, Rodriguez AJ, Guerami AR, Bookout DM,
Barnett BD and Madden JD. A controlled randomized trial evaluating the effect of
lowered incubator oxygen tension on live births in a predominantly blastocyst transfer
program. Hum.Reprod. 2009; 24(2): 300-307
Abramczuk JW and Lopata A. Incubator performance in the clinical in vitro fertilization
program: importance of temperature conditions for the fertilization and cleavage of
human oocytes. Fertil.Steril. 1986; 46: 132-134.
8
Во время процедур ВРТ при работе с ооцитами и эмбрионами чрезвычайно
важно контролировать температуру окружающей среды. Показано, что
кратковременное нахождение человеческих ооцитов в среде с комнатной
температурой приводит к разрушению веретена деления и разборке
микротрубочек (Pickering и соавт., 1990 г.). Таким образом, необходимо
приложить все усилия, чтобы в лаборатории во время любых манипуляций с
ооцитами и эмбрионами не допустить колебаний температуры среды и
поддерживать ее на уровне 37 °C.
Ламинарные шкафы в сочетании с HEPA-фильтрами связывают и удаляют
загрязнители, переносимые с воздухом, и создают рабочую среду, не
содержащую частиц. Стереомикроскоп можно встроить в ламинарный шкаф, а
также установить подогрев всей столешницы для поддержания температуры
на уровне 37 °C. Эти решения следует использовать при работе с ооцитами и
эмбрионами.
Все микроскопы должны быть снабжены нагревательными предметными
столиками, поддерживающими температуру 37 °C. Для микроманипуляций и
контроля состояния эмбрионов используют инвертированные микроскопы,
имеющие большее рабочее расстояние. Для оценки сперматозоидов
используются прямые микроскопы. К микроскопу должна быть подключена
система видеорегистрации, использующаяся в целях обучения и оценки.
Pickering SJ, Braude PR, Johnson MH, Cant A and Currie J. Transient cooling to
room temperature can cause irreversible disruption of the meiotic spindle in the
human oocyte. Fertil Steril 1990; 54: 102-108
9
Микроманипуляционные системы устанавливаются в изолированной зоне
лаборатории, в которой не проводится никаких других процедур.
Вся система включает инвертированный микроскоп, микроманипуляторы и
микроинъектор. Инвертированный микроскоп, который используется для
микроманипуляций, должен быть снабжен объективами с четырех, десяти и
двадцатикратным увеличением и нагревательным предметным столиком.
Этот микроскоп необходимо установить на антивибрационную платформу.
По обеим сторонам микроскопа крепится два идентичных микроманипулятора.
Микроманипуляторы способны перемещаться по трем осям, в различных
направлениях. С помощью них справа можно пользоваться инъекционной
микропипеткой, а слева — микроприсоской. Микроинъектор состоит из шприца
и силиконовой трубки, конец которой подсоединен к микроинструменту. Такие
микроинструменты для удерживания ооцитов и инъекции сперматозоидов
доступны в продаже.
С помощью этих систем выполняются такие процедуры, как инъекция
сперматозоида в цитоплазму ооцита (ИКСИ), биопсия эмбриона и др.
Центрифуга необходима для подготовки сперматозоидов к выполнению ЭКО
путем инсеминации или инъекции сперматозоида в цитоплазму ооцита
(ИКСИ). Центрифуги требуют регулярной очистки и обслуживания.
Для хранения питательной среды необходим медицинский холодильник.
Температура в холодильнике и замораживателе обычно отмечается на
температурной диаграмме.
С помощью системы очистки получают воду высокой степени чистоты,
которая очень важна для лаборатории ВРТ, в том числе для приготовления
сред (Weimer и соавт., 1998 г.). При подготовке стеклянной посуды и изделий
(особенно стеклянных пастеровских пипеток), используемых для манипуляций
с гаметами и эмбрионами чрезвычайно важно использовать воду высокой
степени очистки. В воде особой чистоты производится замачивание
стеклянных пипеток перед их мытьем, упаковкой и стерилизацией. Стоимость
таких систем высока, они требуют регулярного обслуживания и замены
различных фильтров.
Wiemer KE, Anderson A and Stewart B. The Importance of water quality for media
preparation. Hum. Reprod. 1998; 13 (Suppl. 4): 166-172
В настоящее время в лабораториях ВРТ применяются одноразовые расходные
материалы. Стерилизация в сухожаровом шкафу используется для подготовки
стеклянных пастеровских пипеток. Пипетки замачиваются в воде высокой
степени очистки, затем моются, упаковываются и стерилизуются в
сухожаровом шкафу. Металлические блоки, штативы из нержавеющей стали
для пробирок и силиконовые трубки стерилизуются в сухожаровом шкафу в
конце каждого дня. Необходимо проводить плановые проверки точности
температуры, создаваемой в сухожаровом шкафу.
С помощью нагревателей для пробирок температура фолликулярных
аспиратов, содержащихся в пробирках, поддерживается на уровне 37 °C.
Несмотря на то, что аспираторы используются в процедурном кабинете для
аспирации фолликулярной жидкости, ответственность за их обслуживание
лежит на персонале лаборатории ВРТ. Аспираторы требуют планового
обслуживания и повторных калибровок для обеспечения точности давления
аспирации.
Медленное замораживание осуществляется с помощью замораживателя, в
котором температура снижается постепенно. Вся программа замораживания
длится приблизительно 2–2,5 часа. Данным методом можно замораживать
эмбрионы на стадии дробления, бластоцисты и ткань яичника. Такие аппараты
имеют высокую стоимость и требуют регулярного обслуживания. Однако,
благодаря последним достижениям в витрификации, протоколы
замораживания, требующие применения этого сложного оборудования, могут
быть заменены протоколами витрификации (Balaban и соавт., 2008 г.).
В криохранилищах с жидким азотом содержатся замороженные гаметы,
эмбрионы и яичниковая ткань. Образцы можно хранить как в самом жидком
азоте, так и в его парах. Эти криохранилища регулярно полностью
заполняются жидким азотом. Кроме того, в них устанавливаются датчики,
которые сигнализируют о низком уровне жидкого азота.
Balaban B, Urman B, Ata B, Isiklar A, Larman MG, Hamilton R and Gardner DK. A
randomized controlled study of human Day3 embryo cryopreservation by slow
freezing or vitrification: vitrification is associated with higher survival, metabolism
and blastocyst formation. Hum.Reprod. 2008; 23(9): 1976-1982.
Покупка оборудования для новой лаборатории является критически важным
этапом. Следует покупать проверенные или общепризнанные модели, которые
применяются в других успешных центрах. Необходимо приобретать
высококачественное и надежное оборудование. Оно должно быть безопасным
в использовании. Перед его вводом в эксплуатацию инженеры по
биомедицинскому оборудованию выполняют испытания на утечку тока.
Обязательным условием является регулярное техническое обслуживание
оборудования. Поэтому следует применять оборудование, для которого
предоставляется поддержка при техническом обслуживании и надежная
ремонтная служба. Важно, чтобы у поставщиков имелось запасное
оборудование, которым можно было бы воспользоваться как резервным при
неисправности имеющегося оборудования.
Все оборудование для ЭКО должно быть снабжено источником резервного
электропитания. Критически важное оборудование, например, инкубаторы,
микроманипуляционные системы, медицинские холодильники,
замораживатели и т. д., должны быть подключены к источнику бесперебойного
питания с триггерной сигнализацией или функцией вызова оператора.
Есть несколько моментов, о которых следует помнить после завершения
устройства новой лаборатории. Необходимо сделать в лаборатории уборку и
протереть все оборудование до того, как оно будет в нее перемещено.
Необходимо увеличить интенсивность вентиляции и давление воздуха для
изгнания воздуха из лаборатории, чтобы избавиться от любых раздражающих
веществ и летучих органических соединений, выделившихся из новых
материалов, мебели и т. д. Чтобы абсорбировать все газы и раздражающие
вещества, выделяющиеся из недавно установленных в помещении
материалов, в ключевые места устанавливаются фильтры с активированным
углем и перманганатом калия.
Для чистых помещений, в том числе лабораторий ВРТ, требуется длительный
период «выдерживания» (Boone и соавт., 1999 г.). Его длительность зависит от
типа используемых строительных материалов, применяемых способов уборки
и других факторов. В этот период «выветривания» в помещении лаборатории
не должны находиться люди или выполняться какая-либо деятельность.
Перед вводом лаборатории в эксплуатацию обязательно проводятся
соответствующие испытания, подтверждающие соответствие лаборатории
спецификациям по схеме климатического оборудования и конструктивной
схеме.
Boone WR, Johnson JE, Locke AJ, Crane MM 4th, Price TM. Control of air quality in
an assisted reproductive technology laboratory. Fertil. Steril. 1999; 71: 150-154
15
В лаборатории ВРТ следует применять расходные материалы
общепризнанных марок, применяемые в успешных центрах, с доказанной
безопасностью для гамет и эмбрионов человека.
Пластиковая посуда и изделия, например, пробирки, чашки Петри,
градуированные пипетки, четырехлуночные культуральные чашки, катетеры
для переноса эмбрионов, а также стеклянная посуда и изделия, например,
инъекционные иглы и держатели для ИКСИ, катетеры для переноса
эмбрионов и иглы для аспирации ооцитов, должны быть одноразовыми и
утилизироваться после использования. Перчатки используются только
неопудренные. Расходные материалы должны иметь качество, пригодное для
работы с культурами тканей. Для каждой серии материалов должен быть
указан номер партии. Должна присутствовать четкая маркировка срока
годности.
Не следует использовать материалы слишком большого количества
различных поставщиков. В данном вопросе очень важна стандартизация.
Применимость всех новых расходных материалов или продуктов для
использования в рамках лаборатории ВРТ проверяется с помощью теста на
выживаемость сперматозоидов (Critchlow и соавт., 1989 г.).
Critchlow JD, Matson PL, Maureen CN, Horne G, Troup, SA, Lieberman BA. Quality
control in an in-vitro fertilization laboratory: Use of human sperm survival studies.
Hum. Reprod. 1989; 4: 545-549.
16
Раньше питательные среды приготавливались в лабораториях ЭКО. При этом
необходим строгий контроль качества, который является достаточно
трудоемким процессом. В продаже имеются готовые высококачественные
питательные среды, которые все чаще используются в лабораториях по всему
миру. Следует повторить, что важно применять те питательные среды,
которые по данным научной литературы подходят для культивирования
ооцитов и эмбрионов человека.
Важно применять легко доступные для приобретения среды. В процедурах
ЭКО среды должны использоваться только после надлежащей регистрации.
Каждая серия среды должна иметь сертификат испытания на уровень рН,
осмолярности, на уровень эндотоксинов, теста на токсичность для эмбрионов
мышей (MEA — mouse embryo assay) (Jin и соавт., 1998 г.) и теста на
выживаемость сперматозоидов. Для каждой серии среды должны быть
указаны номера партий, а на емкости со средой четко отмечены даты
изготовления и истечения срока годности.
Если питательная среда изготавливается в другой стране, она должна иметь
соответствующую упаковку, поддерживающую правильную температуру
хранения.
Важно не смешивать среды, изготовленные разными компаниями. Лучшим
вариантом обращения со средой является соблюдение инструкций
изготовителя.
Jin M, Jin Z, Hyllner SJ, Svalander P. Sensitivity evaluation of a mouse embry assay
(MEA) used for qual;ity control of IVF culture media. Hum.Reprod. 1998; 13: 282
17
Обычно используется два типа систем культивирования эмбрионов. Культура в
виде микрокапель (Lane и Gardner, 1992 г.), покрытых маслом, и другая форма
культуры, в которой используется обычный объем питательной среды без
масляного покрытия.
Культура эмбрионов в виде микрокапель, покрытых маслом, требует быстрого
приготовления, поскольку капли питательной среды имеют объем 10–20 мкл.
Преимуществом данной системы является то, что она позволяет избежать
испарения среды, и в результате снижается вредное воздействие повышения
осмолярности. Кроме того, уменьшаются колебания уровня рН, которые
происходят вследствие потери средой CO2 при извлечении культуральных
чашек из инкубатора с целью оценки состояния эмбрионов.
Другой метод культивирования эмбрионов — культивирование в
четырехлуночных чашках без масляного покрытия. Для снижения колебаний
рН, вызванных потерей средой CO2 из питательной среды, во время оценки
состояния эмбрионов чашки можно помещать в инкубаторы, газовая среда
которых содержит 5 % или 6 % CO2.
Lane M and Gardner DK. Effect of incubation volume and embryo density on the
development and viability of mouse embryos in vitro. Hum.Reprod.1992; 7: 558-562
При создании высококачественной лаборатории ЭКО самым ценным ее
активом являются эмбриологи. Руководить лабораторией должен
квалифицированный и ответственный специалист с опытом работы в области
эмбриологии (Gianaroli и соавт. al, 2000 г.).
Следует подбирать эмбриологов с надлежащим образованием и опытом
работы в области репродуктивной биологии или биологических наук. Они
должны хорошо владеть методами асептики. Эмбриолог должен быть
способен консультировать пациентов и работать в тесном контакте с другим
медицинским персоналом. Наиболее важен практический опыт во всех
аспектах клинической эмбриологии, что является абсолютным требованием
при подборе персонала для новой лаборатории.
При найме эмбриологов также следует учитывать личностные качества,
например, честность, перфекционизм, умение работать в команде и др.
В обязанности эмбриолога входит контроль стабильности окружающей среды
и процессов в лаборатории, а также отсутствия токсичных веществ и
инфекционных возбудителей. Должны поддерживаться параметры среды,
оптимальные для гамет и эмбрионов. Помимо того, что эмбриолог должен
уметь выполнять все процедуры ЭКО, он несет ответственность за плановые
проверки оборудования, расходных материалов и микроклиматических
условий.
19
Gianaroli L, Plachot M, Van Kooij R, Al Hasani S, Dawson K, DeVos, Magli MC,
Mandelbaum J, Selva J and Van Inzen W. Guidelines for good practice in IVF
laboratories. Hum.Reprod. 2000; 15: 2241-2246
19
Все нанимаемые сотрудники должны пройти официальное обучение по
выполнению всех процедур с применением модели на мышах. Оно должно
проводиться одновременно с организацией эмбриологической лаборатории.
Цель обучения — улучшение навыков и понимания методических и
физиологических основ процедур. Должен быть сделан акцент на точном
выполнении стандартных операционных процедур (СОП).
После прохождения соответствующего обучения все эмбриологи, которые
будут работать с человеческими эмбрионами, должны получить лицензию
соответствующего государственного контролирующего органа. Эмбриологам
необходимо дать возможность совершенствовать свои знания и
профессиональные навыки посредством участия в конференциях,
практикумах и программах непрерывного образования (Alper и соавт., 2002 г.).
Количество персонала в лаборатории должно быть достаточным для
выполнения всех процедур. Недоукомплектованность будет приводить к
неполному следованию стандартным операционным процедурам,
недовольству персонала и беспорядку в лаборатории.
Alper MM, Brinsden PR, Fischer R, Wikland M. Is your IVF programme good? Hum
Reprod. 2002; 17: 8-10
В каждой лаборатории должно быть руководство, в котором подробно
описываются все выполняемые в ней процедуры. В него должны входить
следующие процедуры: оценка сперматозоидов и их подготовка к ИКСИ или
ЭКО путем инсеминации, получение ооцитов, культивирование ооцитов,
оплодотворение путем инсеминации (ЭКО), ИКСИ, контроль оплодотворения,
культивирование эмбрионов, подготовка чашек с культурой эмбрионов, выбор
эмбрионов, перенос эмбрионов, криоконсервация гамет и эмбрионов и др.
Протоколы лаборатории должны быть преобразованы в стандартные
операционные процедуры (СОП). Все виды деятельности, выполняемые в
лаборатории ВРТ, должны быть четко и подробно описаны в виде методик
(Kastrop, 2003 г.).
Все СОП должны быть подписаны, датированы и помещены в доступное для
всего персонала место. Персоналу необходимо точно выполнять СОП.
Отклонения от СОП должны рассматриваться со всей строгостью — на них
нельзя закрывать глаза.
При выполнении процедур образец пациента должен идентифицироваться как
минимум двумя способами. Следует использовать имя и какой-либо второй
идентификатор, например, идентификационный номер. Для всех пациентов
необходимо регистрировать номера партий всех расходных материалов и
питательных сред.
Kastrop P. Quality management in the ART laboratory. Reprod. Biomed. Online
2003;7: 691-694.
21
При выполнении процедур ЭКО чрезвычайно важно двойное
освидетельствование. Эта мера предосторожности используется во многих
лабораториях и позволяет убедиться в том, что не происходит перемешивания
образцов пациентов.
Принадлежность проб должна быть подтверждена в письменной форме как
минимум двумя лицами (Pool, 1997 г.).
Освидетельствование также требуется на различных этапах подготовки
сперматозоидов при переносе образцов.
При заборе ооцитов подтверждение соответствия пациентки и образцов, с
которыми выполняются манипуляции, требует двойного освидетельствования.
Подтверждение соответствия пациентки, которой выполняется перенос
эмбрионов, и переносимых эмбрионов требует двойной проверки.
Двойное освидетельствование также необходимо при криоконсервации во
время замораживания и размораживания гамет и эмбрионов.
Процесс заверения заключается в том, что два человека регистрируют в карте
пациента различные этапы соответствующей процедуры.
Pool TB Practices contributing to quality performance in the embryo laboratory and
the status of laboratory regulation in the US. Hum. Reprod. 1997; 12: 2591-2593.
Обязанностью лаборатории является предоставление обслуживания
неизменно в соответствии с высокими стандартами. В комплекс процедур
контроля качества входит обязательный ежедневный мониторинг и
регистрация следующих параметров.
Температура и уровни CO2 в инкубаторах ежедневно измеряются с помощью
откалиброванной термопары и анализатора содержания CO2, соответственно.
Для проверки уровня рН в уравновешенной питательной среде в инкубаторе
применяются датчики рН-метров. Кроме того, ежедневно отмечается уровень
CO2 в криохранилищах.
С помощью откалиброванного термометра измеряется температура нагретого
основания ламинарного шкафа и бокса биологической безопасности.
Следует проверять и регистрировать температуру нагревательных предметных
столиков микроскопов.
Ежедневно регистрируется температура в медицинском холодильнике (Mayer,
2003 г.) и проверяются колебания температуры по данным регистрирующего
устройства холодильника.
Mayer JF, Jones EL, Lacey DD, Nehchiri F, Muasher SJ, Gibbons WE, Oehninger
SC. Total quality improvement in the IVF laboratory: choosing indicators of quality
Reprod.Biomed.Online 2003; 7: 695-699.
Поскольку лаборатория ЭКО является продолжением операционной,
необходимо прилагать все усилия для поддержания в ней стерильности.
Необходима строгая дисциплина в отношении мытья рук и поддержания
параметров среды в лаборатори.
В лаборатории необходимо ежедневно выполнять уборку. В конце дня следует
протирать все поверхности. Жидкости, пролитые в ходе выполнения процедур,
следует протирать салфеткой, смоченной дистиллированной водой, и затем
вытирать сухой салфеткой. При работе с ооцитами и эмбрионами спирт в
качестве чистящего средства использовать нельзя. Такие отходы, как
семенная жидкость, фолликулярная жидкость и т. п., необходимо убирать
сразу после завершения процедуры.
Для всего критически важного оборудования должен быть составлен план
обслуживания. Он может быть составлен в виде договора на техническое
обслуживание. Самое важное оборудование лаборатории, инкубаторы,
должны проходить обслуживание два раза в год. Обслуживание всего
остального оборудования, а именно микроскопов, ламинарных шкафов,
медицинских холодильников, сухожаровых шкафов, центрифуг и аспираторов
ооцитов, должно выполняться один раз в год. Один раз в год необходимо
проводить перекалибровку термопары, предназначенной для измерения
температуры, рН-метра и анализатора CO2. Все эти проверки имеют
критическое значение для воспроизводимости результатов.
В заключение следует отметить, что лаборатория ВРТ играет ключевую роль в
лечении пар с бесплодием, и создание такой лаборатории является непростой
задачей.
Основные усилия при создании качественной лаборатории ВРТ следует
сосредоточить на трех главных вопросах. Основной целью при создании
лаборатории следует ставить создание безопасных и надежных условий с
поддержанием параметров среды, оптимальных для развития эмбрионов.
Необходимо подобрать эмбриологов, обладающих большим опытом и
высоким мастерством, способных обеспечить постоянство результатов
работы.
Для поддержания постоянства и воспроизводимости всех методов необходимо
следовать стандартам качества. Процедуры и процессы должны быть четко
описаны, а протоколы храниться в доступном для персонала месте.
Для успешного проведения программ ВРТ в лаборатории ВРТ должен быть
введен и регулярно выполняться строгий контроль качества.
26
27
28