Метод изучения влияния смеси гусениц на половую активность

Кафедра фармакологии
Пятигорской государственной
фармацевтической академии
Заведующий кафедрой
доктор медицинских наук
профессор М.Н. Ивашев
_________________________
«_____» _______________2009г.
ОТЧЕТ
О ВЛИЯНИИ КУРСОВОГО ВВЕДЕНИЯ
АЛФЛУТОПА И ГЛЮКОЗАМИНА НА
ПОЛОВУЮ АКТИВНОСТЬ КРЫС
Пятигорск 2009
Исполнители:
руководитель работы
доктор биологических наук
профессор кафедры фармакологии
А.В. Сергиенко
исполнитель
аспирант кафедры фармакологии
И.А. Савенко
2
Содержание:
ВВЕДЕНИЕ
4
АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
4
Цель работы
6
Задачи исследования
6
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
7
ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
7
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ
7
СПОСОБ ВВЕДЕНИЯ И ДОЗЫ
7
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛОВОЙ АКТИВНОСТИ КРЫС-САМЦОВ
8
СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА ДАННЫХ
9
ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
10
ВЛИЯНИЕ
КУРСОВОГО
ВВЕДЕНИЯ
АЛФЛУТОПА
ГЛЮКОЗАМИНА НА СЕКСУАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ КРЫС
И
10
ВЫВОДЫ
12
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
13
3
ВВЕДЕНИЕ
АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Длительное введение алфлутопа и глюкозаминогликана применяется в
клинической практике при воспалительно-дегенеративных заболеваниях
костно-мышечной системы.
Алфлутоп – комплексный препарат, предназначенный для длительной
фармакотерапии
воспалительно-дегенеративных
заболеваний
костно-
мышечной системы. Препарат комплексный, в состав его входят экстракт из
4 видов морских рыб, что объясняет его уникальный эффект за счет
комплекса биологически активных веществ животного происхождения и
олигоэлементов.
Состав экстракта 1 ампула содержит биоактивный концентрат морских
организмов 10mg:
-
Гликозаминогликаны
–
гиалуроновая
кислотата,
хондроитин–6-
сульфат, хондроитин-4-сульфат, дерматансульфат, кератансульфат.
- Аминокислоты и низкомолекулярные пептиды.
-
Микроэлементы - Na, K, Fe, Са, Mg, Cu, Zn.
-
Стабилизаторы и консерванты.
и глюкозамин – биологически активные соединения
Алфлутоп проявляет следующие виды фармакологической активности,
установленные
в
условиях
клинического
и
доклинического
(экспериментального) исследования:
• стимулирует активность хондроцитов и регулирует их пролиферацию;
• стимулирует биосинтез гиалуроновой кислоты и коллагена II типа;
• подавляет
активность
гиалуронидазы
и
других
ферментов,
принимающих участие в разрушении межклеточного матрикса;
• тормозит
биосинтез
медиаторов
воспаления,
включая
провоспалительные цитокины;
4
• оказывает антиоксидантное действие за счет стимуляции активности
супероксидисмутазы
Рациональный комплекс, применяемый в практической медицине, это
комбинирование алфлутопа и глюкозамина (стопартроза) в виде сульфата,
либо гидрохлорида.
Показания к применению глюкозамина сульфата следующие:
• профилактика дегенеративно-дистрофических заболеваний суставов у
лиц старше 40 лет,
• пациентам с факторами риска: с интенсивными, длительными
физическими нагрузками.
• дегенеративно-дистрофические заболевания суставов и позвоночника
в составе комплексной терапии.
• пациентам, длительно принимающих НПВС по поводу заболеваний
суставов.
Гликозаминокгликаны представляют собой повторяющиеся соединения
2 молекул- сахара и аминосахаров:
хондроитин-сульфат
(глюкуроновая
кислоты + N-ацетилгалактозамин) и кератан-сульфат ( галактозы +
N-
ацетиглюкозамин). Поскольку гликозаминогликаны – компонент, входящий
в состав соединительной, эпителиальной и нервной ткани. Это крупная
молекула, способная одна удержать несколько тысяч молекул воды рядом с
собой. В организме человека в среднем содержится 15 г гиалуроновой
кислоты, принимает самое активное участие не только в увлажнении, но и в
процессах заживления, повышает иммунитет и снимает воспаление. С
возрастом
количество
гликозаминогликан)
в
гиалуроновой
тканях
кислоты
сокращается,
(несульфатированный
вызывая
недомогания
и
физическое старение. В возрасте 50 лет люди имеют в 2 раза меньше
гиалуроновой кислоты, чем в молодости. Снижение гиалуроновой кислоты
считают одним из основных факторов старения всего организма в целом и
таких его признаков, как уменьшение подвижности суставов, изменение
внешнего вида кожи, различных заболеваний сердечно-сосудистой системы и
5
возрастных изменений зрения. Практически все гликозаминогликаны
ковалентно связаны с белком в молекуле протеогликанов.
Гликозаминогликаны как основные скрепляющие вещества связаны с
компонентами, входящими в структуру костей, межклеточного матрикса,
соединительной ткани. Они служат смягчающим и смазочным материалом
для разного рода тканей. Столь разносторонняя биологическая активность
гликозаминогликанов в сочетании с алфлутопом способна обеспечить
биостимулярующую активность на лабораторных животных, установленных
в предыдущих экспериментальных исследованиях.
В
литературе
имеются
сведения
о
стимулирующем
влиянии
морепродуктов на половую активность у людей (устрицы, морской конек и
др.)
Экспериментально
обоснованного
рандомизированного
фармакологического исследования по влиянию комплекса алфлутоп и
глюкозамина сульфата на половую активность крыс-самцов не проводилось.
В этом заключается теоретическая и практическая значимость проведенного
исследования.
Цель работы
Фармакологическое исследование комплекса алфлутоп и глюкозамина
сульфат по влиянию на половую активность крыс-самцов.
Задачи исследования
Для достижения поставленной цели в работе определены задачи:
1.
Определить на крысах-самцах влияние курсового введения в
течение 4х недель алфлутопа и глюкозамина сульфата на половое
поведение крыс-самцов;
2.
Исследовать на крысах действие алфлутопа и глюкозамина на
половые охоты и половые контакты крыс-самцов;
3.
Сравнить полученные результаты с контрольной группой
животных, получавших физиологический раствор.
6
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В эксперименте использовали зарегистрированные препараты:
- Алфлутоп, состав препарата: 1 ампула содержит биоактивный
концентрат морских организмов 10 mg, фенол макс 0,005 g. вода для
инъекций до 1 ml., производства «Биотехнос С.А.», г. Бухарест,
Румыния. Серия № 08,02,0113;
- Глюкозамина сульфат (биологически активная добавка к пище стопартроз) в виде порошка.
В эксперименте использовались: раствор физиологический (0,9%
раствор натрия хлорида), раствор Рингера-Локка для теплокровных
животных 1 , и другие биохимические реактивы для растворения препаратов.
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ
Эксперименты проводили in vivo на белых половозрелых крысах самцах
линии Wistar, массой 240±20г (24 животных), и крысы-самки возрастом 2
месяца, весом 175±5,0г из одного помета. Животные не участвовали ранее в
эксперименте, прошли 2-х недельный карантин [8].
Животные выращены в питомнике ПятГФА, (г. Пятигорск), содержались
на стандартном режиме вивария: температура окружающего воздуха 22±2 0С,
12-часовой синхронизированный световой режим, комбинированный корм и
вода ad libitum [10, 9].
СПОСОБ ВВЕДЕНИЯ И ДОЗЫ
Согласно аннотации на препарат, алфлутоп следует человеку вводить по
1 ампуле в день (10мг). Учитывая среднюю массу человека 70кг, это
составляет 0,14мг на 1кг.
При переносе доз с человека на белых крыс и обратно используется
коэффициент межвидового переноса доз, который составляет 5,9 в случае
1
состав: натрия хлорида 8,0 г, калия хлорида 0,2 г, натрия гидрокарбоната 0,1 г, глюкозы 1,0 г, воды
дистиллированной до 1000 мл
7
использования
в
эксперименте
крыс.
Стандартная
экстрополяция
(коэффициент) дозировок лекарственных средств с человека на животных
представлена в руководстве по экспериментальному (доклиническому)
изучению новых фармакологических веществ, изданному в г.Москве в 2000г.
под редакцией профессора В.П.Фисенко, страница 105 [10, 4].
В этом случае экспериментальная доза препарата составляет 0,84мг/кг
веса крысы. Для достижения этой дозировки ампулу 1мл с содержанием 10мг
экстракта растворяли в 10мл воды. Этого раствора вводили 0,8мл на 100г
веса тела крысы.
Глюкозамина сульфат вводили в виде раствора, приготовленного ex
tempore.
Согласно аннотации, порошка глюкозамина следует принимать в дозе
1200 мг. На 1 кг человек получает 17,14 мг. С учетом коэффициента
межвидового переноса доз с организма человека на организм крысы доза
составляет 101,14 мг/кг/сут. Крыса на каждые 100г веса получала 10,11мг
глюкозамина сульфата. Для этого 1 саше глюкозамина сульфата (1200 мг)
растворяли в 60 мл теплой воды и вводили этого раствора крысам по 0,5 мл
на 100 г веса.
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛОВОЙ АКТИВНОСТИ КРЫССАМЦОВ
Для проведения опыта была использована установка, состоящая из
общей открытой площадки 60х45 см, в углах которой находились отсеки
(домики) для крыс, вход в которые прикрыт шторками. В один домик
помещался самец, а в другой самка. Для приближения к самке самцу было
необходимо проделать некоторую работу: отодвинуть шторку, пройти
расстояние по открытой площадке и пробраться в отсек (домик) самки. В
ходе эксперимента отмечались следующие параметры: время первого выхода
и количество выходов самца из своего домика, количество и время первого
подхода к самке, количество охот и половых контактов. Количество охот
8
определялось по тактильным контактам: обнюхивание, касание языком
(облизывание самки), контакт лапками. При переносе таких параметров с
организма крыс на организм человека охота определяет либидо с
характерными жестами: объятие, поцелуй. Половые контакты оценивались
как продуктивное состоявшееся сексуальное действие.
СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА ДАННЫХ
В таблицах и рисунках диссертации данные представлены в виде
средних арифметических и ошибки среднеквадратичного отклонения.
Статистическую
обработку
полученных
результатов
производили
с
использованием t-критерия Стьюдента для независимых рядов. Результаты
опытов сравнивали с исходными показателями, с животными, получившими
воду [1]. Расчёты результатов проводились в пакете компьютерной
программы Microsoft Excel 2000 [2]. Изменения исследуемых показателей
считались статистически значимыми при p<0,05 [3,4,4].
9
ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ВЛИЯНИЕ
КУРСОВОГО
ВВЕДЕНИЯ
АЛФЛУТОПА
И
ГЛЮКОЗАМИНА НА СЕКСУАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ КРЫС
Проводилось определение половой активности крыс самцов при
курсовом применении алфлутопа и глюкозамина в течение 4 недель, (группа
состояла из 6 животных). Перед проведением эксперимента крысы-самцы
опытной группы, и контрольной группы, были изолированы от самок в
течение 1 месяца. Самки участвовали в эксперименте интактные. Для
приведения крыс-самок к единому гормональному статусу использовались в
эксперименте молодые 2-месячные самки из одного помета, весом 170-180г,
не участвовавшие ранее в эксперименте.
Время эксперимента составляло 15 минут, что при экстраполяции с
организма крысы на организм человека составляет ориентировочно 10 часов.
Результаты представлены в таблицах. См. Таблица1, Таблица 2.
Таблица1
СЕКСУАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ КРЫС- САМЦОВ, НЕ ПОЛУЧАВШИХ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА (КОНТРОЛЬНАЯ ГРУППА)
Параметр
количество
Латентное время
Выход самца из домика
Подход к самке
Половые охоты (либидо)
Половые контакты (секс)
2,5+0,086
9,25+0,265
10+0,205
3,75+0,037
1′05′′+0,087
1′40′′+0,089
3′20′′+0,017
5′25′′+0,028
Таблица 2
ВЛИЯНИЕ АЛФЛУТОПА И ГЛЮКОЗАМИНА НА СЕКСУАЛЬНУЮ
АКТИВНОСТЬ КРЫС- САМЦОВ (ОПЫТНАЯ ГРУППА)
Параметр
Выход самца из домика
Подход к самке
Половые охоты (либидо)
Половые контакты (секс)
количество
3,25+0,089 +30%
10,5+0,171 +13,51%
14,25+0,067 +42,5%
5,25+0,086 +40,0%
Латентное время
0′50′′+0,095 -23,08%
1′30′′+0,065 -10,0%
2′15′′+0,076 -32,5%
2′45′′+0,068 -49,23%
10
Сравнительная характеристика сексуальной активности опытной и
контрольной группы животных продемонстрировала, что по количеству
параметров сексуальной активности курсовое введение алфлутопа и
гликозамина сульфата увеличивает количество действий сексуального
характера и снижает латентный период практически всех параметров.
Продолжительность времени от начала эксперимента до проявления какоголибо вида действия достоверно уменьшается. Так, время от начала
эксперимента до выхода самца, получившего курс алфлутопа и глюкозамина
из камеры на 23,08% меньше, чем в контрольной группе. Подход к самке
наступал на 10 секунд раньше, чем в контроле, и этот показатель на 10%.
Демонстрация либидо (половые охоты) наступали в опытной группе через 2
минуты 15 секунд, тогда как в контрольной группе через 3 минуты 20 секунд,
что различалось в 1,5 раза (на 32,5%). Время от начала эксперимента до
первого сексуального контакта опытной группы составляло 2 минут 45
секунд, тогда как в контрольной группе через 5 минут 25 секунд, это
различалось в 1,97 раза, т.е. достоверно на 49,23%.
Таблица 3
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СЕКСУАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЖИВОТНЫХ,
ПОЛУЧИВШИХ КУРС АЛФЛУТОПА И ГЛЮКОЗАМИНА И КОНТРОЛЬНЫХ
ЖИВОТНЫХ (КРЫСЫ- САМЦЫ, N=6)
параметр
количество
%к
kк
контролю
контролю
Выход самца из 30%
1,3
домика
Подход к самке 13,51%
1,135
Половые охоты 42,5%
1,425
(либидо)
Половые
40,0%
1,4
контакты
(секс)
Примечание: контроль принят за 100 %.
Латентное время
% к контролю k к
контролю
-23,08%
0,77
-10,0%
-32,5%
0,90
0,68
-49,23%
0,51
11
Из результатов, представленных в таблицах следует, что курсовое
введение алфлутопа совместно с глюкозамином существенно влияет на
сексуальное поведение животных, производя стимулирующий эффект.
Отмечено, что животные из опытной группы, относительно контрольной
группы животных проявляли повышенный интерес к самкам. Самцы
опытной группы более охотно шли на контакт в сравнении в контролем.
Таким образом, в результате проведенной серии эксперимента следует
отметить стимулирующее действие биологически активных компонентов,
входящих в алфлутоп и глюкозамин на половую активность крыс-самцов.
ВЫВОДЫ
1. Курсовое
4х
недельное
введение
алфлутопа
совместно
с
глюкозамина сульфатом (стопартрозом) крысам-самцам оказало
стимулирующее влияние на половое поведение крыс-самцов;
2. Курсовое
введение
алфлутопа
и
гликозамина
сульфата
увеличивает количество действий сексуального характера и
снижает латентный период практически всех параметров: подход к
самке на 10%, демонстрация либидо (половые охоты) наступали
на 32,5% раньше, чем в контроле;
3. Время от начала эксперимента до первого сексуального контакта
опытной группы наступало раньше на 49,23%. раньше, чем в
контроле.
12
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.
Стрелков Р.Б. Статистические таблицы для ускоренной оценки
фармакологического эффекта. // Фармакология и токсикология. - 1986.№4-С.100-104.
2.
Макарова, Н.В. Статистика в Excel / Макарова Н.В., Трофимец В.Я. –
М.: Финансы и статистика, 2002. – 368 с.
3.
Боровиков, В.П. Statistica: искусство анализа данных на компьютере /
В.П. Боровиков – СПб.: Питер, 2001. – 239 с.
4.
Платонов, А.Е. Статистический анализ данных в медицине и биологии:
задачи, терминология, логика, компьютерные методы / А.Е. Платонов
– М.: Изд-во РАМН, 2000. – 354 с.
5.
Сернов,
Л.Н.
Элементы
экспериментальной
фармакологии.
/
Л.Н.Сернов, В.В.Гацура, - М.,2000. – С.318-319.
6.
Реброва,
О.Ю.
Статистический
анализ
медицинских
данных.
Применение пакета прикладных программ Statistica / Реброва О.Ю. –
М.: МедиаСфера, 2003. – 312 с.
7.
Горбунов, Н.С. Сухожильный остов мужского полового члена / Н.С.
Горбунов, П.А. Самотесов, Е.О. Помилуйкова // Морфология. 2002. т.
121. №2-3. С.42.
8.
Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии. / Сернов
Л.Н., Гацура В.В., - М.,2000. –351с.
9.
Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому)
изучению новых фармакологических веществ. – Москва. - 2005г. –
458c.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых
фармакологических веществ. Под редакцией В.П. Фисенко. – Москва. 2000г. – 398c.
13