На правах рукописи КРИВОПУШКИН АНДРЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ НУКЛЕИНАТА НА УРОВЕНЬ ЕСТЕСТВЕННОЙ

На правах рукописи
КРИВОПУШКИН АНДРЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ
ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ НУКЛЕИНАТА НА УРОВЕНЬ ЕСТЕСТВЕННОЙ
РЕЗИСТЕНТНОСТИ И ИММУННЫЙ СТАТУС ОРГАНИЗМА ПОРОСЯТ
ПРИ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА
03.00.13 – физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание учёной степени
кандидата биологических наук
Белгород 2009
2
Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Брянская государственная сельскохозяйственная академия».
Научный руководитель:
доктор биологических наук, профессор
Крапивина Елена Владимировна
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор
Семенютин Владимир Владимрович
доктор биологических наук, профессор
Грушкин Александр Георгиевич
Ведущая организация:
ФГОУ ВПО «Орловский
государственный аграрный
университет»
Защита состоится « _09_»_декабря_2009 г. в _1300_часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 при ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Белгородская
обл., Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова, 1.
Тел./факс – (4722) 39-22-62
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия».
Автореферат разослан «______»____________________2009 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
Литвинов Ю.Н.
3
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Проблему обеспечения населения мясом практически невозможно решать без интенсивного развития свиноводства. Дальнейшее
развитие и повышение рентабельности отрасли связано с обеспечением физиологически благоприятных условий содержания поголовья свиней, при которых
наиболее полно реализуется продуктивный потенциал. Повышение устойчивости
организма к неблагоприятным факторам, вызывающим дестабилизацию гомеостаза, является важнейшим компонентом комплексной программы сохранения
здоровья и высокой продуктивноси животных. (А. Т. Мысик, А. И. Нетеса, 1984;
И.П. Шейко, В.С. Смирнов, 2005; Н. С. Гегамян, Н. В. Пономарев, 2008).
Промышленная технология производства свинины сопровождается рядом
неблагоприятных факторов, при этом большая доля питательных веществ затрачивается не на рост и производство продукции, а на пластическое и энергетическое обеспечение защитно-приспособительных реакций (А.Ф. Кузнецов,
2007). Естественная резистентность является врожденной защитной реакцией
организма против химических, физических и биологических патогенных агентов, а
также связующим звеном со специфическими иммунными реакциями, поскольку
подготавливает для их индукции антиген и его сигнализацию на В- и Т-клетки, без
чего начало активного иммунитета против тимусзависимых антигенов (их большинство), невозможно (А.М. Земсков, В.М. Земсков, Ю.В. Сергеев и др., 2002).
Практические специалисты в хозяйствах мало внимания уделяют улучшению показателей иммунной реактивности животных. Кроме того бесконтрольное применение антибиотиков и такие обязательные процедуры как иммунизация, в еще большей степени снижают уровень естественной резистентности и
иммунный статус, что делает невозможным адекватный иммунный ответ организма. В основе практически любого патологического процесса лежит нарушение функций иммунной системы, для терапии различного рода иммунодефицитов, возникающих под воздействием патогенных агентов, неблагоприятных
факторов физической или химической природы, необходимо использовать препараты, стимулирующие функциональную активность защитных систем (Ю.Н.
Федоров, 2005; Ф. Шевцов, 2007). Лептоспироз - один из самых распространенных зооантропонозов. При лептоспирозе наиболее экономичной и эффективной
мерой борьбы считают иммунизацию. Эпизоотологические данные свидетельствуют о необходимости дальнейшего совершенствования средств специфической профилактики лептоспироза животных (А.М. Панин, Ю.А. Малахов, Г.Л.
Соболева и др., 2002). Для усиления иммунного ответа на вакцину и повышения уровня естественной резистентности организма, оправдано применение
биологически активных препаратов, в частности, нуклеината натрия. До настоящего времени не совсем ясны механизмы действия натрия нуклеината на защитные системы организма, не исследовано его действие на организм поросят и, в
частности, не установлены сроки его введения относительно иммунизации, которые наиболее эффективно стимулируют иммунный ответ.
Цель и задачи исследования. Целью наших исследований являлось изучить влияния натрия нуклеината на физиологическое состояние и функциональную активность защитных механизмов организма молодняка свиней.
4
В связи с этим в задачи исследования входило:
1. Определить влияние введения низкой дозы натрия нуклеината на уровень естественной резистентности и иммунный статус организма поросят.
2. Изучить влияние натрия нуклеината при разных сроках его введения относительно иммунизации на морфологические и биохимические показатели
крови, уровень естественной резистентности и иммунный статус организма молодняка свиней.
3. Установить оптимальную схему применения натрия нуклеината, обеспечивающую повышение функциональной активности защитных механизмов организма молодняка свиней при введении антигенов лептоспир с целью выработки иммунитета.
Научная новизна. Впервые изучено влияние различных режимов применения натрия нуклеината, на активность защитных механизмов, морфологические и биохимические показатели крови поросят. Исследовано влияние препарата
на уровень активности оксидазных механизмов микробицидности
нейтрофилов крови у поросят и адаптационный резерв этого защитного механизма. Установлены: адаптационный резерв поглотительной функции нейтрофилов крови молодняка свиней; коэффициент метаболической активации; показатель резерва оксидазной способности и реактивности нейтрофилов крови молодняка свиней в поствакцинальный период. Дана оценка влияния малой дозы
натрия нуклеината на механизмы естественной резистентности и иммунной защиты организма молодняка свиней, в том числе и на фоне введения антигенов.
Исследовано влияние натрия нуклеината на уровень Т- и В-лимфоцитов, степень дифференцировки лимфоцитов, а также уровень специфических антител в
крови у поросят после введения антигенов лептоспир.
Практическая значимость работы заключается в том, что на основе физиолого-биохимических исследований был определен оптимальный режим
применения натрия нуклеината, способствующий активизации защитных систем организма молодняка свиней и созданию более напряженного иммунитета
после иммунизации против лептоспироза.
Результаты исследований используются в учебном процессе Брянской
ГСХА при изучении дисциплин: физиология, патологическая физиология, эпизоотология.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Препарат натрия нуклеинат оказывает стимулирующее влияние на уровень естественной резистентности организма молодняка свиней 3-х месячного
возраста.
2. Для повышения естественной резистентности в поствакцинальный период наиболее эффективно двукратное применение натрия нуклеината в дозе
0,01 мл/кг живой массы.
3. Введение натрия нуклеината оказывает активирующее влияние на иммунную систему организма молодняка свиней, повышая напряженность иммунитета.
4. Внутримышечное введение 0,2% раствора натрия нуклеината оказывает
положительное влияние на белковый и углеводный обмен в организме поросят.
5
5. Двукратное введение 0,2% раствора натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг
за 8 суток до иммунизации и одновременно с ней оказало антистрессорное влияние на организм молодняка свиней.
Апробация работы. Основные теоретические положения и практические
результаты диссертации доложены на Международной научно-практической конференции «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества» (Брянск, 2007); 23 научной конференции студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии «Научные и практические аспекты
совершенствования технологии производства продукции животноводства, профилактики и лечения сельскохозяйственных животных» (Брянск, 2007); 25 научной
конференции студентов и аспирантов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии «Проблемы производства продукции животноводства, профилактики
и лечения болезней животных» (Брянск, 2009).
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации
опубликовано 7 научных статей в научных журналах и сборниках региональных и межвузовских научно-практических конференций.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 131 странице и
состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, материалов и методов собственных исследований, их результатов и обсуждения, выводов, практических предложений. Содержит 7 таблиц, 10 рисунков и 3 приложения. Список литературы включает 213 литературных источников, в том числе 52 иностранных авторов.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Для решения поставленных задач в период с 2006 по 2009 гг. были проведены научно-хозяйственный опыт и производственная апробация на молодняке
свиней.
Экспериментальная часть работы выполнена в условиях хозяйств Брянской
области: СПК-Агрофирма «Культура» и ОАО «Новый путь». Схема исследований приведена на рисунке 1.
Анализы проб крови проводили в лаборатории кафедры нормальной и патологической морфологии и физиологии животных Брянской ГСХА, лаборатории иммунологии ВНИИ экспериментальной ветеринарии и Брянской межобластной ветеринарной лаборатории.
При формировании групп по принципу аналогов, проводили подбор животных с учетом породности, возраста, живой массы, идентичности физиологического состояния. Научно-хозяйственный опыт проводили в СПК-Агрофирма
«Культура», Брянского района, Брянской области. Из поросят крупной белой породы в период отъема сформировали три группы по 12 голов в каждой: 1 группа
- контрольная, 2 и 3 – опытные. Содержание подопытных животных соответствовало ветеринарно-зоогигиеническим требованиям, им скармливали одинаковый рацион, который был составлен с учетом живой массы и сбалансирован по
основным компонентам питания в соответствии с нормами кормления животных
(А.П. Калашников, В.И. Фисинин, В.В. Щеглов и др., 2003).
6
7
В 3-месячном возрасте животных иммунизировали поливалентной вакциной
«ВГНКИ» против лептоспироза серогрупп: помона, иктерогеморрагия, тарассови.
За 8 суток до этого поросятам 3 группы внутримышечно ввели по 0,01 мл/кг живой
массы (ЖМ) натрия нуклеината. Животным 1 и 2 групп в это время внутримышечно вводили физраствор в той же дозе. Во время иммунизации, животным 1-й группы вводили плацебо, 2 и 3 группам - натрия нуклеинат по 0,04 и 0,01 мл/кг ЖМ соответственно. Кровь для анализов брали из хвостовой вены у 5 животных из группы до утреннего кормления перед началом опыта, через 8 суток (день иммунизации), и спустя 14 и 22 суток после неё.
Производственную апробацию проводили в ОАО «Новый Путь» с. Глинищево Брянского района Брянской области. Было сформировано 2 группы по
20 голов в каждой, контрольная и опытная. Животным опытной группы за 8
суток до иммунизации и в момент нее вводили натрия нуклеинат в дозе 0,01
мл/кг ЖМ. Кровь исследовали у 8 животных из каждой группы.
В крови определяли: количество лейкоцитов и эритроцитов в крови
подсчитывали в камере Горяева, лейкоцитарную формулу – методом Филипченко, СОЭ - микрометром Панченкова, гематокрит – с помощью микроцентрифуги, гемоглобин - гемиглобинцианидным методом.
Фагоцитарный показатель (ФП, %) рассчитывали как процент нейтрофилов, способных к поглощению частиц латекса, фагоцитарный индекс (ФИ, у.е.)
- среднее число частиц латекса, поглощенных одним активным нейтрофилом,
абсолютный фагоцитоз крови (АФ, 109/л) – общее количество частиц латекса,
поглощаемое нейтрофилами в литре крови. Фагоцитарное число (ФЧ, у.е.) рассчитывали как среднее количество частиц латекса, приходящееся на один
нейтрофил (В.Е. Чумаченко, А.М. Высоцкий, Н.А. Сердюк и др., 1990).
Микробицидную способность нейтрофилов периферической крови оценивали по активности их кислородозависимых (оксидазных механизмов) и содержанию катионных белков, осуществляющих киллинг независимо от наличия
кислорода. Кислородозависимую микробицидную активность нейтрофилов
определяли с помощью НСТ-теста (М.Г. Шубич, В.Г. Медникова, 1978; М.Г.
Шубич, И.В. Нестерова, В.М. Старченко, 1980). Индекс активации нейтрофилов
(ИАН) вычисляли согласно инструкции "Риакомплекс" по использованию НСТтест набора. Поглотительную способность нейтрофилов (ФП, %, ФИ, у.е., ФЧ,
у.е., АФ, 109/л) и активность их оксидазных систем (+НСТ, %, ИАН) оценивали в
двух состояниях: базальном (баз.) - в свежевзятой крови, стабилизированной гепарином, и стимулированном (стим.) - после внесения в пробы крови зимозана
(Р.Б. Хаитов, Б.В. Пинегин, Х.И. Истамов, 1995). Показатель резерва оксидазной
способности нейтрофилов периферической крови (ПР) и коэффициент их метаболической активации (К) рассчитывали по И.А. Пахмутову, М.С. Ульяновой,
1984. Кислородонезависимую микробицидность нейтрофилов периферической
крови оценивали по содержанию в них катионных белков по методу В.И. Жибинова,1983, рассчитывая средний цитохимический коэффициент (СЦК) по формуле, предложенной Н.А.Макаревичем, 1988.
Содержание популяции Т-лимфоцитов (Е-РОЛ %) определяли с помощью
реакции розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана, В-лим-
8
фоцитов (М-РОЛ, %) - с эритроцитами мыши (И.Д. Понякина, К.А. Лебедев,
М.И. Васенович и др., 1984). Субпопуляции иммунорегуляторных Тлимфоцитов, обладающих преимущественно хелперной (Е-РОЛтр, %) и супрессорной (Е-РОЛтч %) активностью, - в тесте с теофиллином (Р.В. Петров, Р.М.
Хаитов, Б.В. Пинегин и др., 1989). Содержание иммуноглобулинов определено
в лаборатории иммунологии и биотехнологии ВНИИ экспериментальной ветеринарии по Манчини (Э. Бэм, 1987). Обратный титр специфических антител к
лептоспирозу определяли по реакции микроагглютинации (РМА).
В сыворотке крови определяли концентрацию общего белка (рефрактометрический метод), активность AcAT и АлAT (динитрофенилгидразоновый метод
Рейтмана-Френкеля), концентрацию глюкозы глюкозооксидазным методом.
В качестве значений физиологической нормы принимали интервалы соответствующих показателей, приведенные в литературе (И.М. Карпуть, 1986;
В.Е. Чумаченко, А.М. Высоцкий, Н.А. Сердюк и др., 1990; I.R. Tizard, 2000).
Статистическую обработку материалов эксперимента проводили с использованием компьютерной техники. При определении достоверности разницы между показателями контрольной и опытных групп был использован критерий Стьюдента (Н.А. Плохинский, 1961). Результаты рассматривались как достоверные, начиная со значения p≤0,05.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1.1. Влияние времени и дозы введения натрия нуклеината поросятам при иммунизации на гемограмму
Одним из важнейших исследованных показателей эффективности применения биокорректора является гемограмма подопытных животных (табл. 1.).
Как видно из таблицы 1, у животных 3 группы отсутствуют существенные изменения в гемограмме через 8 суток после введения натрия нуклеината в
дозе 0,01 мл/кг ЖМ, следовательно, однократное его применение не оказало
существенного влияния.
Через 14 суток после введения антигенов лептоспир у животных третьей
группы установлено достоверно значимое, в пределах нормативных значений, увеличение числа эозинофилов в крови по сравнению с животными контрольной группы (на 50,64%, p<0,05), что может быть связано со снижением функциональной активности коры надпочечников (А.А.Кудрявцев, Л.А.Кудрявцева, 1974;
Д.А.Устинов, 1976; Ч.Вейсс и др., 1986).
Введение поросятам натрия нуклеината как только при иммунизации, так
и двукратно, интенсифицировало переход моноцитов из кровяного русла в ткани через 14 суток после введения антигенов лептоспир и препятствовало снижению уровня лимфоцитов в крови через 22 суток после иммунизации. Уровень моноцитов в крови у животных контрольной группы через 14 и 22 суток
после введения антигенов лептоспир существенно не изменялся. У поросят 2
группы отмечено снижение содержания моноцитов в крови: через 14 суток после иммунизации на 49,49% (p>0,05) и через 22 суток – на 70,71% (p<0,05) по
сравнению с начальным периодом. Относительное количество моноцитов в
крови у животных 3 группы через 14 суток после иммунизации также снижалось (на 75,71%, p>0,05) по сравнению с начальным периодом, но через 22 су-
9
ток после неё, в отличие от поросят 2 группы, повышалось на 488,24% (p<0,05)
по сравнению с предыдущим периодом исследования. При этом содержание
моноцитов через 22 суток после введения антигенов лептоспир в крови у животных 3 группы было достоверно выше (на 244,83%), чем у поросят 2 группы.
Группа,
n=5
Таблица 1 - Влияние режима введения натрия нуклеината поросятам при иммунизации на гемограмму.
Показатели
Перед началом При вакцина- Через 14 суток Через 22 суток
опыта
ции (через 8 после вакцина- после вакцинасуток опытного
ции
ции
периода)
Гемоглобин, 1
114,83 ± 3,85 113,54 ± 3,62 131,20 ± 9,85 102,07 ± 1,34
г/л
2
114,19 ± 3,08 111,36 ± 4,54 112,50 ± 5,15 101,85 ± 3,03
3
116,52 ± 2,60 113,72 ± 4,87 120,24 ± 3,02 105,44 ± 3,08
Эритроциты, 1
6,50 ± 0,84
5,74 ± 0,15
5,99 ± 0,28
6,24 ± 0,27
12
10 /л
2
6,47 ± 0,84
5,36 ± 0,13
5,32 ± 0,13
6,09 ± 0,32
3
5,42 ± 0,36
5,36 ± 0,13
5,08 ± 0,42
6,31 ± 0,36
Лейкоциты,
1
29,03 ± 1,71
23,93 ± 2,21
25,90 ± 2,67
18,86 ± 1,04
109/л
2
22,35 ± 2,65
23,28 ± 0,89
21,48 ± 1,98
25,56 ± 2,87
3
30,16 ± 2,87
22,17 ± 2,34
24,11 ± 1,21
18,10 ± 2,72
Нейтрофилы 1
1,60 ± 0,21
1,16 ± 0,06
1,57 ± 0,19
1,57 ± 0,24
палочкоядер- 2
1,65 ± 0,11
1,12 ± 0,06
1,50 ± 0,16
1,29 ± 0,08
ные, %
3
1,30 ± 0,10
1,17 ± 0,09
1,54 ± 0,12
1,70 ± 0,19
Нейтрофилы 1
28,73 ± 3,51
25,68 ± 0,82
29,17 ± 1,59
32,26 ± 2,57
сегменто2
29,32 ± 3,8
22,51 ± 4,02
26,73 ± 3,21
26,90 ± 1,49
ядерные, %
3
20,43 ± 2,12
30,70 ± 3,56
27,50 ± 1,80
28,33 ± 2,44
Сумма
1
30,33 ± 3,46
26,83 ± 0,88
30,73 ± 1,67
33,83 ± 2,74
нейтрофи2
30,97 ± 3,85
23,63 ± 4,08
28,23 ± 3,27
28,19 ± 1,43
лов,%
3
21,73 ± 2,11
31,87 ± 3,51
29,04 ± 1,89
30,03 ± 2,42
Эозинофи1
5,54 ± 1,08
5,13 ± 1,14
3,93 ± 0,69
5,53 ± 0,93
лы,%
2
2,47 ± 0,59
3,37 ± 0,95
4,60 ± 0,53
5,02 ± 0,88
3
4,07 ± 1,00
4,73 ± 0,50
5,92 ± 0,30*
5,53 ± 0,93
1
0,45 ± 0,06
0,48 ± 0,04
0,56 ± 0,23
0,38 ± 0,08
Базофилы, % 2
0,31 ± 0,07
0,27 ± 0,04
0,40 ± 0,15
0,25 ± 0,08
3
0,20 ± 0,06*
0,27 ± 0,11
0,21 ± 0,03
0,27 ± 0,11
Моноциты,
1
1,18 ± 0,18
0,46 ± 0,11
0,50 ± 0,15
0,63 ± 0,16
%
2
0,99 ± 0,23
0,93 ± 0,19
0,50 ± 0,20
0,29 ± 0,06
3
0,70 ± 0,24
0,63 ± 0,18
0,17 ± 0,07
1,00 ± 0,25•
Лимфоциты, 1
62,50 ± 4,14
67,10 ± 1,66
64,27 ± 1,78
59,63 ± 1,90
%
2
65,27 ± 4,08
71,80 ± 4,96
66,27 ± 4,00
66,25 ± 1,81
3
73,30 ± 2,79
62,49 ± 2,96
64,67 ± 2,15
63,17 ± 2,86
Лимфоциты, 1
18,15 ± 1,55
16,20 ± 1,61
16,63 ± 1,68
11,20 ± 0,50
9
10 /л
2
14,67 ± 2,10
16,68 ± 1,26
14,12 ± 1,26
16,86 ± 1,79
3
22,16 ± 2,38
13,86 ± 1,66
15,66 ± 1,20
11,28 ± 1,70
Примечание - * •- здесь и далее разница достоверна по отношению: * - p<0,05 к
животным 1 группы; • - p<0,05 к животным 2 группы.
10
Увеличение относительного количества нейтрофилов в крови при сниженном содержании лимфоцитов у животных контрольной группы расценивается как следствие развития в организме стрессорной реакции, которая сопровождается на первых этапах ее развития увеличением в крови уровня глюкокортикоидов и снижением числа эозинофилов в лейкограмме (Ч. Вейсс, Г. Антонии, Э. Вицлеб и др., 1986; Л.Х. Гаркави, Е.Б. Квакина, М.А. Уколова, 1990;
К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, 1990; В.С. Бузлама, 1996).
Таким образом, двукратное введение натрия нуклеината по 0,01 мл/кг
(за 8 суток до введения антигенов и во время него) оказало через 14 суток
антистрессорное воздействие и вызвало оптимизацию уровня моноцитов в
крови через 22 суток после иммунизации.
3.1.2. Влияние времени и дозы введения натрия нуклеината поросятам при иммунизации на способность нейтрофилов крови поглощать
чужеродный материал
У поросят контрольной и с однократным введением препарата в дозе 0,04
мл/кг групп фагоцитарный показатель в стимулированных условиях существенно
не отличался от аналогичных показателей в базальных условиях на протяжении
опытного периода, что свидетельствует об отсутствии адаптационного резерва
нейтрофилов крови способных к поглощению чужеродного материала (табл. 2.).
У группы животных с двукратным введением натрия нуклеината в дозе
0,01 мл/кг, напротив, и через 14, и через 22 суток после введения антигенов
лептоспир фагоцитарный показатель в стимулированных условиях был значительно выше (на 74,34% и 119,86% соответственно), чем в базальных условиях.
Этот показатель у поросят 3 группы через 22 суток после иммунизации был достоверно выше, чем у животных 1 и 2 групп на 290,42% и 280,19% соответственно, что указывает на активизацию поглотительной способности нейтрофилов и появление под влиянием двукратного введения натрия нуклеината у
поросят в поствакцинальный период адаптационного резерва клеток, способных к поглощению чужеродного материала.
У поросят 3 группы через 8 суток увеличился фагоцитарный индекс в
стимулированных условиях на 34,08% (p<0,05) по сравнению с начальным периодом и был достоверно выше на 23,27%, чем в базальных условиях, что свидетельствует о появлении под влиянием натрия нуклеината адаптационного резерва этого защитного механизма.
Введенный двукратно натрия нуклеинат обусловил предотвращение
прогрессивного снижения фагоцитарного числа в базальных условиях у поросят через 22 суток после введения антигенов лептоспир и увеличение фагоцитарного числа в стимулированных условиях на протяжении всего опытного периода, что привело к достоверно более высокому фагоцитарному
числу у животных 3 группы по сравнению с поросятами 1 и 2 групп (на
360,42% и 380% соответственно) к 22 суткам опытного периода.
Следовательно, двукратное введение натрия нуклеината поросятам обусловило наличие у них в поствакцинальный период адаптационного резерва поглотительной функции нейтрофилов крови.
11
Показатели
Сумма нейтрофилов, 109/л
ФП баз., %
ФП стим., %
ФИ баз., у.е.
ФИ стим., у.е.
ФЧ баз., у.е.
ФЧ стим., у.е.
АФ баз., 109/л
АФ стим., 109/л
Группа,
n=5
При этом в период после введения антигенов только у поросят 3 группы отмечена тенденция к более высоким значениям абсолютного фагоцитоза в стимулированных условиях по сравнению с базальными.
Таблица 2 – Влияние режима введения натрия нуклеината на способность
нейтрофилов крови поглощать чужеродный материал при иммунизации.
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Перед началом При вакцина- Через 14 суток Через 22 суток
опыта
ции (через 8 су- после вакцина- после вакцинаток опытного
ции
ции
периода)
8,84 ± 1,17
6,44 ± 0,69
8,05 ± 1,18
6,45 ± 0,82
6,81 ± 1,09
5,52 ± 1,03
6,16 ± 0,94
7,25 ± 1,00
6,50 ± 0,81
7,09 ± 1,05
6,94 ± 0,34
5,49 ± 0,91
46,65 ± 3,86
43,57 ± 6,41
26,60 ± 2,42
19,90 ± 2,28
47,53 ± 3,29
41,90 ± 4,69
28,80 ± 4,98
13,60 ± 2,68
31,53 ± 2,68*• 34,40 ± 5,34
18,20 ± 2,34
18,33 ± 4,78
41,17 ± 2,59
51,93 ± 8,67
25,90 ± 4,59
10,33 ± 1,38
33,83 ± 3,75
52,00 ± 5,38
32,77 ± 5,14
10,60 ± 1,67
25,27 ± 3,70 *
48,50 ± 5,78
31,73 ± 3,71 40,30 ± 4,91*•
5,05 ± 0,26
5,29 ± 0,42
3,89 ± 0,22
4,59 ± 0,62
4,59 ± 0,15
4,73 ± 0,31
4,15 ± 0,18
4,11 ± 0,21
4,63 ± 0,24
4,34 ± 0,27
3,95 ± 0,28
5,89 ± 0,91
4,14 ± 0,11
4,69 ± 0,43
4,04 ± 0,22
4,50 ± 0,30
4,46 ± 0,20
4,56 ± 0,26
3,97 ± 0,10
4,29 ± 0,41
3,99 ± 0,31
5,35 ± 0,20
4,19 ± 0,24
5,37 ± 0,42
2,34 ± 0,20
2,40 ± 0,46
1,03 ± 0,12
0,92 ± 0,19
2,18 ± 0,17
1,99 ± 0,27
1,21 ± 0,24
0,57 ± 0,12
1,46 ± 0,15 *•
1,54 ± 0,33
0,71 ± 0,10
1,06 ± 0,26
1,72 ± 0,14
2,58 ± 0,56
1,05 ± 0,19
0,48 ± 0,09
1,53 ± 0,23
2,40 ± 0,37
1,32 ± 0,23
0,46 ± 0,09
1,04 ± 0,23
2,61 ± 0,34
1,34 ± 0,19
2,21 ± 0,43*•
20,75 ± 3,53
14,85 ± 2,90
8,36 ± 1,48
6,43 ± 2,05
14,34 ± 1,60
10,17 ± 1,23
7,93 ± 1,95
3,66 ± 0,34
9,92 ± 2,33
11,23 ± 3,02
4,98 ± 0,80
5,55 ± 1,69
14,75 ± 1,65
15,76 ± 3,42
7,90 ± 1,25
2,97 ± 0,44
11,41 ± 3,33
14,52 ± 5,22
7,71 ± 1,73
3,56 ± 1,24
7,39 ± 2,71
18,95 ± 4,05
9,50 ± 1,79
13,23 ± 4,14
Следовательно, двукратное введение натрия нуклеината препятствовало в
поствакцинальный период появлению ареактивных нейтрофилов в условиях стимуляции нейтрофилов крови зимозаном и способствовало развитию тенденции к
повышению адаптационного резерва абсолютного фагоцитоза в крови у животных.
3.1.3. Влияние времени и дозы введения натрия нуклеината поросятам при иммунизации на микробицидную активность нейтрофилов крови
В результате исследований было установлено, что иммунизация поросят
против лептоспироза вызвала в поствакцинальный период (через 14 и 22 суток
12
Показатели
Группа,
n=5
после неё) исчезновение адаптационного резерва кислородозависимой микробицидности нейтрофилов крови.
Об исчезновении адаптационного резерва кислородозависимой микробицидности нейтрофилов крови свидетельствует снижение (p<0,05) через 14 суток после
введения антигенов лептоспир уровня НСТ-позитивных нейтрофилов крови в стимулированных условиях по сравнению с предыдущим периодом исследования. У
поросят 1, 2 и 3 групп это снижение произошло на 62,58%, 55,96% и 73,45% соответственно, при этом он не превышал значений аналогичных показателей в базальных
условиях, что, видимо, связано с переходом части нейтрофилов в ареактивное состояние под действием высокой антигенной нагрузки (при иммунизации) и свидетельствует об отсутствии в этот период адаптационного резерва обладающих оксидазной
активностью нейтрофилов у поросят всех подопытных групп. Через 22 суток после
введения антигенов лептоспир, по сравнению с предыдущим периодом исследования, у животных 1 и 2 групп отмечена тенденция к повышению на 26,77% и 29,74%
числа НСТ-позитивных нейтрофилов крови в стимулированных зимозаном условиях, а у поросят 3 группы – достоверно значимое увеличение на 247,57%.
Таблица 3 – Влияние режима введения натрия нуклеината поросятам при
иммунизации на микробицидную активность нейтрофилов крови.
1
+НCT баз.,
2
%
3
1
2
3
1
∆ НCT, % 2
3
1
ИАН баз. 2
3
1
ИАН стим. 2
3
1
2
К
3
1
2
ПР
3
1
2
СЦК
3
+НCT
стим., %
Перед началом опыта
При вакцинации (через 8
суток опытного периода)
10,30 ± 0,93
12,93 ± 1,93
16,53 ± 5,42
47,73 ± 4,18
49,03 ± 2,46
40,77 ± 9,37
37,43 ± 4,80
36,10 ± 1,82
25,03 ± 7,76
0,16 ± 0,02
0,20 ± 0,04
0,33 ± 0,09
0,74 ± 0,09
0,78 ± 0,07
0,70 ± 0,17
0,77 ± 0,04
0,74 ± 0,03
0,50 ± 0,16
4,88 ± 0,80
4,06 ± 0,48
4,33 ± 2,55
1,13 ± 0,04
1,27 ± 0,09
1,34 ± 0,05*
17,17 ± 8,71
12,80 ± 5,36
13,40± 3,95
55,50 ± 5,84
44,50 ± 3,08
38,80± 1,75 *
38,33 ± 8,95
31,70 ± 5,20
25,40 ± 5,06
0,32 ± 0,20
0,26 ± 0,06
0,18 ± 0,06
0,93 ± 0,12
0,70 ± 0,06
0,58 ± 0,05*
0,70 ± 0,13
0,72 ± 0,11
0,64 ± 0,12
7,33 ± 3,14
6,99 ± 2,98
4,16 ± 1,17
1,32 ± 0,03
1,36 ± 0,04
1,40 ± 0,05
Через 14 суток Через 22 суток
после вакципосле вакцинации
нации
15,30 ± 7,69
12,57 ± 3,30
11,20 ± 2,11
20,77 ± 3,61
19,60 ± 2,14
10,30 ± 1,51*•
7,57 ± 2,69
7,30 ± 2,21
1,80 ± 1,15
0,22 ± 0,12
0,17 ± 0,05
0,18 ± 0,03
0,28 ± 0,07
0,29 ± 0,03
0,15 ± 0,04•
0,44 ± 0,16
0,39 ± 0,15
0,14 ± 0,09
2,43 ± 0,66
2,67 ± 1,22
1,04 ± 0,24
1,52 ± 0,01
1,49 ± 0,06
1,49 ± 0,06
17,27 ± 8,17
6,93 ± 1,52
3,20± 0,30
26,33 ± 5,06
25,43 ± 4,53
35,80 ± 4,7
10,63 ± 3,37
18,50 ± 4,45
32,60 ± 4,51*
0,30± 0,15
0,12 ± 0,03
0,05 ± 0,01•
0,44 ± 0,08
0,44 ± 0,10
0,61 ± 0,08
0,48 ± 0,14
0,70 ± 0,09
0,91 ± 0,01*
2,91 ± 1,2 0
4,94 ± 1,71
11,19 ± 1,04*•
1,31 ± 0,08
1,33 ± 0,06
1,36 ± 0,05
13
При этом у животных 2 и 3 групп уровень НСТ-позитивных нейтрофилов
крови в стимулированных условиях был выше (p<0,05), чем в базальных (на
266,96% и 1018,75% соответственно), что указывает на появление у поросят этих
групп адаптационного резерва таких клеток.
В норме большинство нейтрофилов пребывает в инертном, покоящемся
состоянии (А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский, 1989). Только двукратное использование натрия нуклеината обусловило создание условий в организме поросят,
которые привели к элиминации через 22 суток после введения антигенов лептоспир факторов, активирующих нейтрофилы крови, о чем свидетельствует то,
что уровень НСТ-позитивных нейтрофилов крови в базальных условиях по
сравнению с начальным периодом у животных 1 группы был выше на 67,67
(p>0,05), а 2 и 3 групп – ниже на 46,40% (p>0,05) и 80,64% (p<0,05). Также на
это указывает то, что через 22 суток после иммунизации у животных 1 и 2
групп индекс активации нейтрофилов крови в базальных условиях существенно
не изменялся по сравнению с предыдущим периодом исследования, а у поросят
3 группы – снизился на 72,22% (p<0,05) до нормативных значений.
Достоверное увеличение до нормативных значений коэффициента метаболической активации нейтрофилов крови и показателя резерва оксидазной
способности нейтрофилов крови как по отношению к предыдущему периоду
исследования, так и к контролю отмечено только у группы поросят с двукратным введением натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг. Следовательно, двукратное введение натрия нуклеината обусловило через 22 суток после иммунизации
повышение коэффициента метаболической активации и показателя резерва оксидазной способности нейтрофилов крови до оптимальных значений.
Введение натрия нуклеината не оказало заметного влияния на кислородонезависимую микробицидность нейтрофилов крови у животных.
3.1.4. Влияние времени и дозы введения натрия нуклеината при иммунизации на иммунный статус организма у поросят
Нуклеинат натрия обладает способностью стимулировать первичный иммунный ответ благодаря адъювантному действию, в механизме которого принимает участие пролиферация лимфоидной ткани, в том числе плазматизация и
увеличение числа митозирующих клеток селезенки, активации фагоцитов, миграции стволовых клеток и кооперация Т- и В-лимфоцитов. При этом, по мнению А.М. Земскова, следует комбинировать малые дозы антигена и стимулятора и наоборот (А.М. Земсков, А.В. Караулов, В.М. Земсков, 1994).
Введение натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг однократно обусловило через 8 суток оптимизацию (табл.4) абсолютного содержания лимфоцитов в крови у поросят путем снижения (на 37,45%, p<0,05) до нормативных значений
при увеличении относительного количества в крови Т-лимфоцитов (на 30,40%,
p<0,05), В-лимфоцитов (на 21,07%) и повышении степени дифференцировки
лимфоцитов - достоверно значимое снижение числа 0-лимфоцитов на 54,20%
по сравнению с началом опыта.
Двукратное применение натрия нуклеината (по 0,01 мл/кг за 8 суток до
введения антигенов лептоспир и во время него) через 14 суток после иммунизации обусловило более интенсивный переход в ткани теофиллинрезистентных
14
Показатель
Лимфоциты,
109/л
Е-РОЛ, %
Е-РОЛтр, %
Е-РОЛтч, %
М-РОЛ, %
О-Л, %
Ig M
Ig G
Обратный титр к
L.Icterohaemorrh
agiae
Обратный титр к
L. Pomona
Обратный титр к
L. Tarassovi
Группа,
n=5
Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов для формирования иммунного ответа, о чем
свидетельствует достоверное снижение в крови уровня Т-лимфоцитов у животных на 53,74% и уровня В-лимфоцитов на 34,45%.
Таблица 4 - Влияние режима введения натрия нуклеината при иммунизации на иммунный статус организма у поросят.
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Перед началом При вакцина- Через 14 суток Через 22 суток
опыта
ции (через 8
после вакцина- после вакцинасуток опытного ции
ции
периода)
Клеточный иммунитет
18,15 ± 1,55
16,20 ± 1,61
14,67 ± 2,10
16,68 ± 1,26
22,16 ± 2,38
13,86 ± 1,66
41,75 ± 1,36
46,54 ± 5,11
41,60 ± 1,72
48,62 ± 2,61
44,25 ± 3,26
57,7 0± 2,54
48,25 ± 1,46
53,30 ± 5,57
49,60 ± 4,24
53,73 ± 3,20
50,80 ± 1,39
58,43 ± 5,81
0±0
2,07 ± 1,39
0,6 0± 0,60
0±0
0,40 ± 0,4 0
5,8 ± 3,3
25 ,00± 1,87
20,33 ± 1,92
28 ,00± 2,77
24,60 ± 1,18
23,4 0± 2,27
28,33 ± 1,92*
33,25 ± 2,96
33,13 ± 5,73
30,4 0± 3,08
26,78 ± 3,73
30,50± 3,80
13,97 ± 4,21*
Гуморальный иммунитет
23,20 ± 1,08
25,50 ± 0,50
24,70 ± 0,41
23,00 ± 0,42
24,00 ± 1,79
24,30 ± 1,14
2,2 0± 0,08
2,23 ± 0,06
2,21 ± 0,07
2,20 ± 0,08
2,33 ± 0,14
2,18 ± 0,05
150,00 ± 68,92 220,00 ± 145,43
180,00 ± 64,42
190,00 ± 85,73
90,00 ± 78,10
80,00 ± 30,00
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
16,63 ± 1,68
14,12 ± 1,26
15,66 ± 1,20
21,70 ± 6,20
16,63 ± 1,81
20,47 ± 2,41
19,53 ± 5,92
16,50 ± 2,66
6,95 ± 1,61•
3,77 ± 1,24
2,00 ± 1,46
13,52 ± 3,31*•
21,77 ± 2,39
15,29 ± 4,36
18,57 ± 2,01
56,53 ± 8,42
65,58 ± 5,94
60,97 ± 3,35
11,20 ± 0,50
16,86 ± 1,79*
11,28 ± 1,70
18,20 ± 2,28
24,67 ± 4,83
27,07 ± 2,11*
24,70 ± 4,42
26,40 ± 4,21
23,93 ± 3,12
0±0
3,60 ± 3,60
5,33 ± 3,11
18,47 ± 1,92
9,00 ± 1,90*
30,93 ± 2,16*•
63,33 ± 2,14
66,33 ± 3,34
42,00 ± 2,46*•
24,06 ± 1,12
25,40 ± 1,53
25,20 ± 1,55
2,30 ± 0,13
2,34 ± 0,19
2,50 ± 0,16
110,00 ± 24,49
200,00 ± 0,00*
230,00 ± 73,48
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
23,52 ± 0,45
23,84 ± 0,83
24,58 ± 0,80
2,14 ± 0,02
2,78 ± 0,30
2,68 ± 0,27
100,00 ± 27,39
100,00 ± 27,39
200,00 ± 0,00*•
80,00 ± 80,00
20,00 ± 20,00
100 ,00± 44,72
0±0
0±0
0±0
15
Через 22 суток после иммунизации у животных установлено повышение
числа этих клеток в крови на 32,24% и 66,56% (p<0,05) соответственно, что может означать окончание процесса миграции лимфоцитов у поросят 3 группы.
В этот же период отмечен более высокий уровнь специфических антител
к L. Icterohaemorrhagiae и повышение степени дифференцировки лимфоцитов.
Аналогичные данные получены А.М. Земсковым, 1977 в опытах на мышах.
Введение натрия нуклеината в дозе 0,04 мл/кг однократно при иммунизации предотвращало угнетение синтеза специфических антител к L.
Icterohaemorrhagiae через 14 суток после введения антигенов лептоспир и способствовало сохранению высокого уровня абсолютного количества лейкоцитов
и лимфоцитов в крови у поросят через 22 суток после, но, главным образом, за
счет 0-лимфоцитов.
3.1.5. Влияние сроков введения и дозы натрия нуклеината при иммунизации против лептоспироза на биохимические характеристики гомеостаза поросят
Проведенные нами исследования показали (табл.6.), что однократное
внутримышечное введение 0,2% раствора натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг
обусловило через 8 суток повышение на 2,92% в крови у животных уровня
глюкозы (в пределах нормативных значений) по сравнению с животными контрольной группы.
Показатели
Гематокрит, %
Общий белок, г/л
Глюкоза,
моль/л
АлАТ, Е/л
АсАТ, Е/л
Группа,
n=5
Таблица 6 - Влияние режима введения натрия нуклеината при иммунизации против
лептоспироза на биохимические характеристики гомеостаза у поросят.
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Перед началом опыта
36,00 ± 0,55
35,00 ± 0,63
34,20 ± 0,73
64,02 ± 1,09
66,58 ± 1,35
63,82 ± 1,26
4,72 ± 0,38
5,81 ± 0,24
5,81 ± 0,57
18,45 ± 0,35
20,39 ± 1,03
18,72 ± 0,6
22,35 ± 1,22
25,25 ± 0,48
19,85 ± 0,51•
При вакцинации (через 8
суток опытного периода)
31,80 ± 2,99
35,40 ± 0,68
36,80 ± 0,49
74,15 ± 0,88
66,80 ± 3,24
71,62 ± 0,96
4,65 ± 0,25
4,99 ± 0,53
5,98 ± 0,41*
18,4 ± 0,40
18,97 ± 0,77
18,47 ± 0,27
25,12 ± 2,01
25,51 ± 2,11
20,85 ± 0,93
Через 14 суток после вакцинации
Через 22 суток после вакцинации
35,40 ± 0,87
31,20 ± 1,93
34,60 ± 1,03
н/и
н/и
н/и
5,21 ± 0,31
5,33 ± 0,28
5,78 ± 0,36
22,93 ± 1,04
25,72 ± 1,55
24,18 ± 1,29
23,72 ± 0,36
24,59 ± 0,42
23,34 ± 0,97
33,00 ± 0,45
32,20 ± 0,86
33,20 ± 1,39
78,82 ± 2,90
73,88 ± 1,60
74,80 ± 2,63
3,77 ± 0,16
4,88 ± 0,48
4,88 ± 0,35*
20,64 ± 1,40
19,47 ± 0,60
18,72 ± 0,4
25,02 ± 1,09
20,22 ± 0,71*
21,68 ± 1,28
Двукратное введение поросятам 0,2% раствора натрия нуклеината (по 0,01
мл/кг за 8 суток до введения антигенов лептоспир и во время него) способствовало через 22 суток после иммунизации оптимизации гомеостаза глюкозы в ор-
16
ганизме, так как содержание глюкозы в крови у животных 3 группы было на
29,44% (p<0,05) выше, чем у поросят 1 группы.
Однократное введение поросятам 0,2% раствора натрия нуклеината в дозе
0,04 мл/кг при введении антигенов лептоспир, вероятно, обусловило снижение интенсивности катаболических процессов, о чем свидетельствует более низкая, чем у
поросят 1 группы (на 19,18%, p<0,05) активность АсАТ в сыворотке крови. При
этом активность АсАТ у животных 3 группы существенно не отличалась от таковой
у поросят 2 группы.
3.2. Производственная апробация
Производственная апробация двукратного введения 0,2% раствора натрия
нуклеината в дозе 0,01 мл/кг ЖМ за 8 суток до и в момент иммунизации, подтвердила полученные в первом эксперименте результат (табл. 7).
Из таблицы 7 видно, что через 14 суток после иммунизации обратный титр
специфических антител к серогруппе Icterohaemorrhagiae у животных второй
группы был выше на 69,23% (p>0,05), чем у животных первой группы, а обратные
титры специфических антител к лептоспирам серогруппы Pomona между группами существенно не различались.
Группа,
n=8
Таблица 7 - Влияние двукратного введения натрия нуклеината на уровень специфических антител к лептоспирам в крови поросят.
Серогруппы
Обратные титры антител,
лептоспир
сроки исследования
Перед началом
Через 14 суток
Через 22 суток
опыта
после вакцинации после вакцинации
1
0±0
25,00 ± 13,36
31,25 ± 16,19
Icterohaemorrhagiae
Pomona
Tarassovi
2
1
2
1
2
0±0
0±0
0±0
0±0
0±0
81,25 ± 23,02
37,50 ± 12,50
31,25 ± 13,15
0±0
0±0
81,25 ± 21,00
25,00 ± 9,45
50,00 ± 13,36
0±0
0±0
Через 22 суток после иммунизации по сравнению с предыдущим периодом,
уровень специфических антител к L. Icterohaemorrhagiae в крови у животных 1
группы имел тенденцию к увеличению, а у животных второй группы остался на
прежнем уровне. При этом уровень специфических антител к L.
Icterohaemorrhagiae у животных опытной группы превышал аналогичный показатель в контрольной на 61,54%.
В это же время титр антител к лептоспирам серогрупп Pomona в крови у животных первой группы снизился на 33,33% (p>0,05), а у животных второй группы,
напротив, увеличился на 37,50% (p>0,05). При этом уровень специфических антител к L. Pomona в крови у животных опытной группы превышал аналогичный показатель в контрольной на 50,00% (p>0,05). Следовательно, двукратное введение
натрия нуклеината обусловило в крови у поросят более высокий, чем у животных
контрольной группы, уровень антител к L. Pomona и L. Icterohaemorrhagiae через 22
суток после введения антигенов лептоспир, а также более раннее образование и
длительное поддержание последнего к L. Icterohaemorrhagiae на высоком уровне.
17
Специфические антитела в крови у подопытных животных к лептоспирам
серогруппы Tarassovi не обнаружились ни через 14 суток после иммунизации, ни
через 22 суток. Причины запаздывания иммунного ответа организма поросят на
лептоспиры серогруппы Tarassovi, введенные с вакциной, нуждаются в дополнительных исследованиях.
При двукратном инъецировании 0,2% раствора натрия нуклеината в дозе
0,01 мл/кг расходуется в два раза меньше препарата, чем при однократном введении в дозе 0,04 мл/кг.
Выводы
1. Введение антигенов лептоспир поросятам вызывает негативный эффект в виде исчезновения адаптационного резерва кислородозависимой микробицидности нейтрофилов крови.
2. Внутримышечное введение нуклеината натрия поросятам обусловило
повышение уровня естественной резистентности и иммунного статуса с высокой степенью зависимости процессов от использованной дозы и кратности введения, модулируя напряженность иммунного ответа. При этом двукратное использование препарата в дозе 0,01 мл/кг ЖМ за 8 суток до иммунизации и во
время неё, эффективнее режима, рекомендованного наставлением - 0,04 мл/кг
ЖМ однократно.
3. Введение натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг ЖМ обусловило повышение (через 8 суток после инъекции) в стимулированных зимозаном условиях:
фагоцитарного показателя (на 91,93% против 26,14% контроля), фагоцитарного
индекса (на 34,09% против 13,29% контроля) и фагоцитарного числа (150,96%
против 50% контроля), по сравнению с их интактным состоянием. Это привело
к появлению адаптационного резерва интенсивности поглощения чужеродного
материала у нейтрофилов крови и способствовало развитию выраженной тенденции к увеличению потенциального абсолютного фагоцитоза.
4. Введение натрия нуклеината (вне зависимости от режима) способствовало восстановлению через 22 суток после иммунизации адаптационного резерва нейтрофилов крови, способных к проявлению оксидазной активности
(при двукратном введении разница с контролем достоверна). При этом только
двукратное использование этого препарата обусловило создание условий в организме поросят, которые привели к элиминации через 22 суток после введения
антигенов лептоспир факторов, активирующих нейтрофилы крови (в базальных
условиях +НСТ. - 3,2% против 17,27% у контрольных), повышению коэффициента метаболической активации (0,91 против 0,48 у контрольных) и показателя
резерва оксидазной способности нейтрофилов крови (11,14 против 2,91 у контрольных) до оптимальных значений.
5. Двукратное введение натрия нуклеината предотвращало в базальных
условиях снижение в крови числа нейтрофилов, способных к поглощению чужеродного материала и интенсивности поглощения. В стимулированных зимозаном условиях показано увеличение фагоцитарного показателя и фагоцитарного числа. Это привело к увеличению у поросят адаптационного резерва
нейтрофилов крови, способных к проявлению поглотительной способности, и
18
вызвало тенденцию к повышению потенциального абсолютного фагоцитоза
нейтрофилов крови в поствакцинальный период.
Использование натрия нуклеината в дозе 0,04мл/кг при иммунизации животных не вызывало аналогичных изменений.
6. Двукратное введение натрия нуклеината интенсифицирует переход в
ткани теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов, а также В-лимфоцитов для формирования иммунного ответа на введенные антигены лептоспир, что проявилось через 22 суток после неё на 100% более высоким уровнем специфических
антител к L. Icterohaemorrhagiae, повышением степени дифференцировки лимфоцитов на 33,68% и увеличением на 48,74% в крови у животных уровня Тлимфоцитов и на 67,46% В-лимфоцитов.
Однократное введение натрия нуклеината при иммунизации предотвращало угнетение синтеза специфических антител через 14 суток после введения
антигенов лептоспир и способствовало сохранению высокого уровня абсолютного количества лимфоцитов в крови у поросят через 22 суток после неё.
7. Однократное внутримышечное введение 0,2% раствора натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг обусловило через 8 суток повышение (в пределах нормативных значений) в крови у животных уровня глюкозы (5,98 моль/л против 4,65
моль/л контрольных).
Предложения к производству
1. С целью повышения уровня естественной резистентности поросят 3месячного возраста рекомендуется однократная внутримышечная инъекция
0,2% раствора натрия нуклеината в дозе 0,01 мл/кг.
2. Для предотвращения развития стрессорных реакций, повышения уровня естественной резистентности, иммунного статуса и создания более напряженного иммунного ответа на введенные с целью иммунизации антигены лептоспир, рекомендуется применять 0,2% раствор натрия нуклеината двукратно в
дозе 0,01 мл/кг. Первое внутримышечное введение необходимо осуществлять
за 8 суток до применения антигенов, повторное – одновременно с ним.
Список опубликованных работ по теме диссертации
1. Крапивина Е.В. Влияние на поствакцинальный иммунный статус организма
у поросят натрия нуклеината / Крапивина Е.В., Кривопушкин А.В., Федоров Ю.Н. //
Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения её качества: Сб. науч. тр. международной научно-практической конференции.- Брянск: Из-во
Брянской ГСХА, 2007.- С. 446-450.
2. Кривопушкин А.В. Антителостимулирующая способность натрия нуклеината. / Кривопушкин А.В. // Проблемы производства продукции животноводства, профилактики и течения болезней животных. Сборник XXV научной конференции студентов и аспирантов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии Брянской
ГСХА. - Брянск. Издательство Брянской ГСХА, 2009. – С. 6-12.
3. Кривопушкин, А.В. Влияние сроков введения и дозы натрия нуклеината при
вакцинации против лептоспироза на биохимические характеристики гомеостаза поросят / Кривопушкин А.В., Крапивина Е.В., Кривопушкина Е.А.// Экологические и селекционные проблемы племенного животноводства: Научные труды Проблемного
Совета МАНЭБ «Экология и селекция в племенном животноводстве» - Брянск: Издательство БГСХА, 2009. - В.1. С. 79-81.
19
4. Крапивина Е.В. Влияние времени и дозы введения натрия нуклеината поросятам при вакцинации на микробицидную активность нейтрофилов крови/ Крапивина
Е.В., Кривопушкин А.В.// Экологические и селекционные проблемы племенного животноводства: Научные труды Проблемного Совета МАНЭБ «Экология и селекция в
племенном животноводстве»/Брянск: Издательство БГСХА, 2009. - В.1. С. 87-90.
5. Кривопушкин, А.В. Влияние внутримышечного введения натрия нуклеината
на гемограмму у поросят. / Кривопушкин А.В. // Экологические и селекционные проблемы племенного животноводства: Научные труды Проблемного Совета МАНЭБ
«Экология и селекция в племенном животноводстве». - Брянск: Издательство БГСХА,
2009. - В.1. С. 90-93.
6. Кривопушкин, А.В. Влияние инъецирования нуклеината натрия при вакцинации на некоторые гематологические показателив поросят / Кривопушкин А.В.,
Крапивина Е.В.// Научные и практические аспекты совершенствования технологии
производства продукции животноводства, профилактики и лечения сельскохозяйственных животных. Материалы XXIII научной конференции студентов и аспирантов. - Брянск. Издательство Брянской ГСХА, 2007. - С. 56-58.
7. Кривопушкин, А.В. Иммунный статус у поросят в зависимости от времени и
дозы введения нуклеината натрия при вакцинации./ Кривопушкин А.В., Крапивина
Е.В., Федоров Ю.Н.// Сельскохозяйственная биология - 2009, № 4, с. 93-98.
Список сокращений
+НСТ – относительное число нейтрофилов,
К – коэффициент метаболической активации
проявляющее оксидазную активность, восстанейтрофилов
навливая нитросиний тетрозолий в диформаМ-РОЛ - В-лимфоциты, образующие розетки с
зан;
эритроцитами мыши;
АлАТ – Аланинаминотрансфераза;
ПР – показатель резерва оксидазной способноАсАТ – Аспартатаминотрансфераза;
сти нейтрофилов;
АФ – абсолютный фагоцитоз;
СЦК – средний цитохимический коэффициент;
Е-РОЛ – Т-лимфоциты, образующие розетки с
ФИ – фагоцитарный индекс;
эритроцитами барана;
ФП – фагоцитарный показатель;
ИАН – индекс активации нейтрофилов;
ФЧ – фагоцитарное число.