Цитокиновые рецепторы лимфоцитов крови при бронхиальной

Материалы X Конгресса педиатров России
И.А. Громов (специальная премия)
Научный центр здоровья детей РАМН
Цитокиновые рецепторы лимфоцитов
крови при бронхиальной астме у детей
ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ОСОБЕННОСТЕЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ЦИТОКИНАМ У ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ НАМИ ПРО:
ВЕДЕНО ИССЛЕДОВАНИЕ МЕМБРАННЫХ РЕЦЕПТОРОВ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ К ИНТЕРФЕРОНУ (ИФН) γ, ИНТЕРЛЕЙКИНУ
(ИЛ) 2, ИЛ 4, ИЛ 5, ИЛ 8 И ИЛ 10. ОБСЛЕДОВАНО 30 ДЕТЕЙ В ВОЗРАСТЕ ОТ 5 ДО 17 ЛЕТ С АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ
АСТМОЙ (ЛЁГКОГО И СРЕДНЕТЯЖЁЛОГО ПЕРСИСТИРУЮЩЕГО ТЕЧЕНИЯ, В ПЕРИОДЕ РЕМИССИИ). ГРУППУ СРАВНЕНИЯ
СОСТАВИЛИ 10 ДЕТЕЙ БЕЗ АТОПИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОВЕДЕНЫ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТО:
ФЛЮОРОМЕТРИИ В ПРЯМОЙ РЕАКЦИИ С МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ К ПЕРЕЧИСЛЕННЫМ РЕЦЕПТОРАМ. УСТА:
НОВЛЕНО, ЧТО У ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ ОТМЕЧАЛСЯ ПОВЫШЕННЫЙ УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ К
ИЛ 2 (ЗА СЧЕТ ВЫСОКОАФФИННОЙ ЕДИНИЦЫ CD122), ИЛ 5; ОТМЕЧАЕТСЯ ТЕНДЕНЦИЯ К ПОВЫШЕНИЮ УРОВНЯ КЛЕ:
ТОК С РЕЦЕПТОРАМИ К ИЛ 4 И ИЛ 8. В ТО ЖЕ ВРЕМЯ У ДАННОЙ ГРУППЫ ДЕТЕЙ ИМЕЕТСЯ СНИЖЕНИЕ УРОВНЯ ЭКСПРЕС:
СИИ РЕЦЕПТОРА К ИФН γ И ОТМЕЧАЕТСЯ ТЕНДЕНЦИЯ К ПОНИЖЕНИЮ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРА К ИЛ 10
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: БРОНХИАЛЬНАЯ АСТМА, ДЕТИ, ИНТЕРФЕРОН γ, ИНТЕРЛЕЙКИНЫ.
64
Контактная информация:
Громов Иван Александрович,
врач:педиатр Консультативно:
диагностического центра
Научного центра здоровья детей РАМН
Адрес: 119991, Москва,
Ломоносовский проспект, дом 2/62,
тел. (495) 967:14:20
Бронхиальная астма (БА) — одно из наиболее распространённых заболеваний
в мире. В основе заболевания лежит хроническое аллергическое воспаление
бронхов, сопровождающееся их гиперреактивностью и периодически возника:
ющими приступами затруднённого дыхания или удушья в результате бронхиаль:
ной обструкции, обусловленной бронхоконстрикцией, гиперсекрецией слизи,
отёком стенки бронхов [1, 2]. В настоящее время важнейшая роль в регуляции
иммунного ответа отводится растворимым медиаторам, которые называют в
зависимости от клеток, их продуцирующих, лимфо: и монокинами (медиаторы
лимфоцитарного или моноцитарного происхождения), интерлейкинами (медиа:
торами, осуществляющими все взаимодействия между различными лейкоцита:
ми) или цитокинами (любые растворимые медиаторы, независимо от их клеточ:
ного источника) [3]. Особенности цитокинового статуса больных бронхиальной
астмой обсуждаются в литературе достаточно широко, однако публикуемые
данные в основном касаются определения концентрации цитокинов в перифе:
рической крови, тогда как экспрессия мембранных рецепторов к цитокинам
изучена мало [4, 5].
Для выявления особенностей чувствительности к цитокинам у детей с БА нами
проведено исследование мембранных рецепторов к интерферону:γ (ИФНγ),
интерлейкинам:2, 4, 5, 8, 10 (ИЛ 2, 4, 5, 8, 10) на мембране лимфоцитов крови.
Обследовано 30 детей в возрасте от 5 до 17 лет с атопической БА (лёгкого и
среднетяжёлого персистирующего течения, в период ремиссии). В качестве груп:
пы сравнения обследованы 10 детей без атопических заболеваний.
Исследования проведены методом проточной цитометрии в прямой реакции с
моноклональными антителами к перечисленным рецепторам по общепринятой
методике иммунного фенотипирования лимфоцитов, выделенных на градиенте
плотности фиколл–верографина. Использовано оборудование и реактивы
фирмы BD Biosciences, США: лазерный анализатор FASC Calibur, программа Cell
Quest [6, 7].
I.A. Gromov
Scientific Center of Children' s Health, Russian Academy
of Medical Sciences, Moscow
Cytokine receptors of blood
lymphocytes in children
with bronchial asthma
BLOOD LYMPHOCYTE MEMBRANE RECEPTORS TO IFNγ, IL 2, IL 4, IL 5, IL 8 AND
IL 10 HAVE BEEN INVESTIGATED TO ASSESS CYTOKINE SENSITIVITY VARIA:
TIONS IN CHILDREN WITH ASTHMA. THIRTY CHILDREN AGED 5–17 WITH
REMISSION OF ATOPIC BRONCHIAL ASTHMA RANGING FROM MILD TO MODE:
RATE PERSISTENT FORMED THE STUDY GROUP. TEN CHILDREN WITHOUT ANY
ATOPIC DISORDERS FORMED THE GROUP OF CONTROLS. THE FLOW CYTOME:
TRY WITH DIRECT REACTION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO THE MENTION:
ED ABOVE CYTOKINE RECEPTORS HAS BEEN USED. AN INCREASED EXPRES:
SION OF IL 2 (DUE TO HIGH AFFINITY CD122 SUBUNIT) AND IL 5 RECEPTORS
HAS BEEN REGISTERED IN CHILDREN WITH ASTHMA, AND SO A NUMBERS OF
CELLS BEARING IL 4 AND IL 8 RECEPTORS THAT HAS TRENDED TO BE HIGHER.
AT THE SAME TIME, THERE HAS BEEN A DECREASE OF IFNγ RECEPTOR EXPRES:
SION AN A TREND TO LOWER EXPRESSION OF IL 10 RECEPTOR IN THESE
CHILDREN.
KEY WORDS: BRONCHIAL ASTHMA, CHILDREN, INTERFERONγ , INTER
LEUKINS.
Рис. 1. Экспрессия рецептора к ИФНγ у детей с БА
показатели для рецептора к ИЛ 10 составили 20,8±2% и
27,2±3,9% соответственно; особенностью последнего
рецептора является слабая интенсивность флюоресцент:
ной метки, что создаёт ряд трудностей при проведении
исследований. Полученные данные суммированы
в табл. 1.
Таким образом, на лимфоцитах крови детей с БА повыше:
на экспрессия рецепторов к таким патогенетически важ:
ным цитокинам, как ИЛ 2 (за счёт высокоаффинной едини:
цы CD122), ИЛ 5; прослеживается тенденция к повышению
количества клеток с рецепторами к ИЛ 4 и ИЛ 8. В то же
время у данной группы детей понижена частота экспрес:
сии рецептора к ИФНγ и отмечается тенденция к уменьше:
нию экспрессии рецептора к ИЛ 10.
Данные изменения, сохраняющиеся в период ремиссии,
являются дополнительным доказательством оправданно:
сти проведения длительной патогенетической терапии у
детей с БА.
Таблица 1. Экспрессия рецепторов к цитокинам у пациентов с БА и детей без признаков атопии
Частота экспрессия рецепторов, %
ИФНγγ
CD25
CD122
ИЛ4
ИЛ5
ИЛ8
ИЛ10
Дети с бронхиальной
астмой
61,8±1,8
9,08±0,3
21,6±1,5
5,3±0,8
9,6±1,3
29,9±2,1
20,8±2
Дети без атопических
заболеваний
67±2,6
9,2±2,1
16,25±1,5
3,7±0,6
5,3±1,1
24,3±3,6
27,2±3,9
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Балаболкин И.И., Намазова Л.С., Ковальчук и др. //
Иммунология. — 1994. — № 1. — С. 33–36.
2. Огородова Л.М., Кобякова О.С., Фрейдин М.Б. и др. Роль
интерлейкина–5 в патогенезе бронхиальной астмы //
Аллергология. — 1999. — № 4. — С. 32–36.
3. Студеникин М.Я., Балаболкин И.И., Баканов М.И. и др. //
Аллергические болезни у детей. — М.: Медицина, 1998. —
С. 70–78.
4. Janossy G., Contreras M., Navarrete C. Intracellular Cytokine Pro:
file of Cord and Adult Blood Lymphocytes // Blood. — 1998. — V. 92,
№ 1 (July 1). — P. 11–18.
5. Shiota Y., Arikita H., Horita N. Intracellular Il:5 and T:lymphocyte
subsets in atopic and nonatopic bronchial asthma // J Allergy Clin
Immunol. — 2002. — V. 109 (2). — P. 294–298.
6. Winterrowd G.E., Chin J.E. Flow cytometric detection of antigen:
specific cytokine responses in lung T cells in a murine model of pul:
monary inflammation //J Immunol Methods. — 1999. — 226
(1–2). — P. 105–118.
7. Bonifase S., Koscher V., Mamessier E.. Assesment of T lymphocyte
cytokine production in induced sputum from astmatics: a flow cytom:
etry study // Clin Exp Allergy. — 2003. — V. 33. — P. 1238–1243.
65
ПЕДИАТРИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ/ №2/ 2006
Для исследования использовали венозную кровь, взятую
в пробирку с ЭДТА (Becton Dickinson VACUTAINER
Systems); лимфоциты выделяли с помощью центрифугиро:
вания на градиенте плотности с фиколл–верографином
при 1500 об/мин в течение 30 мин при температуре 4 °С.
Выделенные лимфоциты отмывали раствором Cell Wash
центрифугированием при 1200 об/мин при температуре
4 °С в течение 10 мин. Затем полученные лимфоциты
метили моноклональными антителами (Simultest Imk Plus,
Becton Dickinson). Клетки инкубировали в темноте при
комнатной температуре в течение 15 мин, затем отмыва:
ли центрифугированием с 2 мл Cell Wash и ресуспензиро:
вали в 0,5 мл Cell Wash. Анализ образцов проводили на
проточном цитометре. Для сбора данных использовали
программу Simulset. Исследовали лимфоцитарное окно,
согласно типичному расположению популяций лимфоци:
тов, выявленному по светорассеянию и флюоресцентной
метке LeukoGate (CD 45/14).
Максимальный уровень экспрессии отмечен для рецепто:
ра к ИФНγ — он выявлен на 61,8±1,8% клеток лимфоидно:
го региона у больных и на 67±2,6% лимфоцитов детей
группы сравнения (рис. 1)
У детей с БА отмечено повышение экспрессии рецептора
к ИЛ 2, в основном за счёт высокоаффинной единицы —
CD122, количество лимфоцитов с этим рецептором
составило 21,6±1,5%, что статистически значимо выше
референтного уровня 16,25±1,5%. В то же время низко:
аффинная единица рецептора к ИЛ 2 — CD25 у детей с БА
была выявлена на 9,08±0,3% лимфоцитов, что статисти:
чески значимо не отличается от референтного уровня
9,2±2,1%. Количество лимфоцитов, экспрессирующих
рецептор к ИЛ 4, у детей с БА составило 5,3±0,8%, в то
время как в группе сравнения этот показатель составил
3,7±0,6%. Экспрессия рецептора к ИЛ 5 составила
9,6±1,3% у больных, а в группе сравнения этот показа:
тель равнялся 5,3±1,1%.
Рецептор к ИЛ 8 экспрессировали 29,9±2,1% лимфоцитов
больных, в группе сравнения — 24,3±3,6%, аналогичные