ИССЛЕДОВАНИЕ РЕАКЦИЙ КИСЛОРОДЗАВИСИМОГО

Вестник Челябинского государственного университета. 2013. № 7 (298).
Биология. Вып. 2. С. 133–135.
А. В. Шопова
ИССЛЕДОВАНИЕ РЕАКЦИЙ КИСЛОРОДЗАВИСИМОГО МЕТАБОЛИЗМА
ФАГОЦИТОВ РАЗЛИЧНЫХ КОМПАРТМЕНТОВ
У ПОТОМСТВА
Проведено исследование реакций клеточного метаболизма моноцитов и перитонеальных макрофагов у потомства самок крыс с экспериментальной патологией печени. Установлено угнетение метаболической активности макрофагов у потомства самок крыс с экспериментальным лекарственным
поражением печени. Результаты исследования позволяют сделать вывод о том, что у матерей с лекарственным поражением печени рождается физиологически незрелое потомство с угнетением защитных
реакций, что ведет к нарушению неспецифической резистентности организма плода.
Ключевые слова: мать, потомство, лекарственное поражение печени.
Введение. На протяжении многих десятилетий в России продолжается стойкий демографический кризис, связанный, в первую очередь, со
снижением рождаемости. При этом важным этапом его преодоления служит воспроизводство
здорового поколения, возможное лишь при наличии сохранного здоровья обоих родителей,
и особенно, здоровья матери. В связи с этим одной из актуальных проблем является влияние патологии гепатобилиарной системы на течение беременности и развитие потомства.
Многочисленными экспериментальными исследованиями было показано, что хроническая
патология печени матери различного генеза (токсического, аутоиммунного, холестатического) обусловливает нарушение становления у потомства
систем жизнеобеспечения, а именно кроветворной, иммунной, репродуктивной, макрофагальной систем [1. C. 86].
В связи с этим, целью исследования явилось
изучение влияния экспериментальной патологии
гепатобилиарной системы матери на активность
реакций кислородзависимого клеточного метаболизма в моноцитах периферической крови и перитонеальных макрофагах у потомства.
Материалы и методы исследования. В эксперименте были использованы лабораторные крысы (самки) «Вистар» из 17 пометов и их потомство на 1, 30 и 60 день постнатального развития.
Сроки исследования выбраны с учётом общепринятого подразделения возрастных периодов крыс
[2. С. 86–89].
Все экспериментальные животные были разделены на 2 группы. В первую группу вошли
животные от интактных матерей — контрольная группа (К), во вторую — потомство от самок
с лекарственным поражением печени, опытная
группа (О). Для создания модели лекарственно-
го гепатита был использован парацетамол, который вводился двукратно в дозе 2,5 г на кг массы
тела интрагастрально. Поражение печени верифицировали с помощью морфологических (центролобулярные некрозы печеночных долек, периваскулярная гиперплазия и гипертрофия купферовских клеток, расширение синусоидных
капилляров, лимфогистиоцитарная инфильтрация портальных трактов, увеличение количества
двуядерных и полиплоидных гепатоцитов), биохимических (повышение активности ферментов
АлАТ, АсАТ, ЛДГ, повышение свободного билирубина) и иммунологических (повышение титра
противопеченочных антител 1:280, 1:560) критериев.
Кислородзависимый клеточный метаболизм
оценивали по двум показателям — интегральному тесту восстановления нитросинего тетразолия (спонтанный и индуцированный НСТ-тест)
и уровню содержания в макрофагах фермента
цикла трикарбоновых кислот сукцинатдегидрогеназы. Принцип НСТ-теста основывается на восстановлении растворимого бесцветного нитросинего тетразолия в диформазан, который распределяется в цитоплазме в виде гранул, окрашивающихся в тёмно-синий цвет. Данный тест отражает степень активности кислородзависимых
механизмов бактерицидной активности фагоцитов, в основе которой лежит активация НАДФН2оксидазы. Сукцинатдегидрогеназа представляет
собой ферментативный комплекс, являющийся
одновременно компонентом дыхательной цепи
митохондрий и цикла трикарбоновых кислот
и ключевым ферментом конечного метаболического пути окислительного разрушения биологически активных веществ. Активность сукцинатдегидрогеназы позволяет судить об энергетическом потенциале клеток, функциональной
134
А. В. Шопова
с­ остоятельности и количестве активных митохондрий [3. С. 179].
Результаты и обсуждение. Нами установлено,
что наибольшее значение среднего гистохимического показателя в спонтанном НСТ-тесте у интактных крысят имеется среди моноцитов периферической крови на 30 день (1,81 ± 0,14) и среди
макрофагов брюшной полости на 60 день постнатального онтогенеза (1,64 ± 0,12). Аналогичная закономерность выявлена и у подопытных животных, у которых наибольшее значение среднего
гистохимического показателя в спонтанном НСТтесте выявлено в моноцитах периферической крови (2,08 ± 0,07) и в перитонеальных макрофагах
(1,77 ± 0,13). Обращает на себя внимание, что у подопытных животных средний гистохимический
показатель как в перитонеальных макрофагах,
так и в моноцитах периферической крови снижен
по сравнению с контролем (табл. 1).
Таким образом, данные, полученные в результате проведенного спонтанного НСТ-теста позволяют судить об угнетении кислородзависимой
метаболической активности моноцитов периферической крови и перитонеальных макрофагов у
потомства самок крыс с экспериментальным лекарственным поражением печени.
Другим показателем активности внутриклеточного кислородзависимого метаболизма явля-
ется стимулированный НСТ-тест, для проведения
которого использовали инертные частицы латекса диаметром 1,2 мкм (из расчёта 100 частиц на
1 кариоцит).
Установлено, что у интактных крысят наибольшее значение среднего гистохимического показателя индуцированного НСТ-теста выявлено
на 60-й день исследования в мононуклеарах изучаемых компартментов и составляет в моноцитах
периферической крови 2,07 ± 0,14, а в перитонеальных макрофагах 2,19 ± 0,3 (табл. 2).
Одновременно с этим, у подопытных животных средний гистохимический показатель как
в перитонеальных макрофагах, так и в моноцитах периферической крови снижен по сравнению
с контролем на всех сроках исследования.
Вместе с тем, нельзя не отметить тот факт, что
наибольшее увеличение среднего гистохимического показателя в стимулированном НСТ-тесте
по сравнению со спонтанным НСТ-тестом выявляется в контрольной группе. Одновременно с
этим, при изучении среднего гистохимического
показателя стимулированного НСТ-теста в опытной группе во всех случаях отмечается лишь незначительное его повышение.
В ходе работы по изучению среднего гистохимического показателя сукцинатдегидрогеназы
нами было установлено, что максимальные значеТаблица 1
Средний гистохимический показатель в спонтанном НСТ-тесте
в клетках системы мононуклеарных фагоцитов
в различные периоды постнатального развития
Группа
Моноциты периферической крови
Перитонеальные макрофаги
1
30
60
1
30
60
К
1,48 ± 0,11
1,81 ± 0,14
1,76± 0,09
1,5 ± 0,15
1,79 ± 0,06
2,08 ± 0,07
О
1,22 ± 0,16
1,29 ± 0,05*
1,64 ± 0,12
1,14 ± 0,02*
1,43 ± 0,11*
1,77 ± 0,13
* результаты статистически достоверны (р < 0,05)
Таблица 2
Средний гистохимический показатель в индуцированном НСТ-тесте
в клетках системы мононуклеарных фагоцитов
в различные периоды постнатального развития
Группа
Моноциты периферической крови
Перитонеальные макрофаги
1
30
60
1
30
60
К
1,87 ± 0,12
2,04 ± 0,19
2,07 ± 0,14
1,94 ± 0,02
2,11 ± 0,18
2,19 ± 0,3
О
1,25 ± 0,18*
1,28 ± 0,15*
1,71 ± 0,13
1,15 ± 0,11*
1,46 ± 0,07*
1,8 ± 0,04
* результаты статистически достоверны (р < 0,05)
Исследование реакций кислородзависимого метаболизма фагоцитов различных компартментов у потомства...
2,5
2,
1,5
1
0,5
0
135
К
О
1
30
60
Моноциты
периферической
крови
1
30
60
Перитонеальные
макрофаги
Активность сукцинатдегидрогеназы в клетках системы мононуклеарных фагоцитов
в различные периоды постнатального развития
ния характерны для моноцитов периферической
крови и перитонеальных макрофагов на 60 день
постнатального онтогенеза как у опытных, так и
у интактных крысят (рис.). При этом отмечается,
что у подопытных животных активность сукцинатдегидрогеназы как в перитонеальных макрофагах, так и в моноцитах периферической крови
снижена по сравнению с контролем.
Выводы и заключение. Оценивая результаты
проведенного исследования, можно отметить, что
кислородзависимая метаболическая активность
перитонеальных макрофагов и моноцитов периферической крови, изучаемая с помощью спонтанного и индуцированного НСТ-теста, а также с
помощью фермента сукцинатдегидрогеназы, существенно снижена у потомства самок крыс с экспериментальным лекарственно-индуцированным
поражением печени в различные периоды постнатального онтогенеза по сравнению с потомством
интактных крыс. Выявленное изменение среднего гистохимического показателя при стимулированном НСТ-тесте в сравнении со спонтанным в
группе с лекарственным поражением гепатобилиарной системы, позволяет судить о несовершенстве кислородзависимых клеточных механизмов,
которые по своей сути являются одним из показа-
телей жизнеобеспечения клетки. Недостаточное
по сравнению с контролем повышение среднего
гистохимического показателя в опыте говорит об
извращении реакций кислородзависимого метаболизма и выражается в нарушении иммунной и
неспецифической резистентности [4. С. 324].
Список литературы
1. Брюхин, Г. В. Сравнительный анализ субпопуляционного состава тимоцитов и Т-лимфоцитов
периферической крови потомства самок крыс с
хроническим экспериментальным поражением
печени различного генеза // Иммунология. 2004.
№ 2. С. 83–86.
2. Западнюк, И. П. Лабораторные животные.
Разведение, содержание, использование в эксперименте : учеб. пособие / И. П. Западнюк, В. И. За­
паднюк, Е. А. Захария, Б. В. Западнюк. 3-е изд.,
перераб., доп. Киев : Вища шк., 1983. 383 с.
3. Сапожников, А. Г. Гистологическая микроскопическая техника : руководство / А. Г. Са­пож­
ников, А. Е. Доросевич. Смоленск : САУ, 2000.
475 с.
4. Маянский, А. Н. Очерки о нейтрофиле и
макрофаге / А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский.
Новосибирск : Наука : Сиб. отд-ние, 1989. 341 с.