ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ I И II ФАЗ МЕТАБОЛИЗМА

реклама
НТП: ЖИВОТНОВОДСТВО И КОРМОПРОИЗВОДСТВО
3. Рецкий М.И., Бузлама В.С., Шахов А.Г. Значение антиоксидантного статуса в адаптивной гетерогенности и иммунологической резистентности животных // Ветеринарная патология. – 2003. – №2. – С. 63–65.
4. Шакуров М.Ш. Этиопатогенетическая терапия при бронхопневмонии // Ветеринария. – 1983. – № 8. – С. 54–57.
5. Шахов А.Г., Ануфриев А.И., Сулейманов С.М. и др. Респираторные болезни телят // Комплексная экологически безопасная система ветеринарной защиты здоровья животных: методические рекомендации. – М.: ФГНУ Росинформагротех, 2000. – С. 163-186.
6. Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий. – М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина,
1997. – 36 с.
7. Бузлама В.С., Рецкий М.И., Мещеряков Н.П. и др. Методическое пособие по изучению процессов перекисного окисления
липидов и системы антиоксидантной защиты организма у животных. – Воронеж, 1997. – 35 с.
8. Гребнева О.Л., Ткачук Е.А., Чубейко В.О. Способ подсчета показателя веществ низкой и средней молекулярной массы
плазмы крови // Клин. лаб. диагностика. – 2006. – № 2. – С. 17–18.
9. Тогайбаев А.А., Кургузкин А.В., Рикун И.В. и др. Способ диагностики эндогенной интоксикации // Лаб. дело – 1988. –
№ 9. – С. 22–24.
10. Близнецова Г.Н., Ермакова Н.В., Мохаммед З.Д. и др. Спектрофотометрический метод определения метаболитов
оксида азота // Вестник ВГУ. Серия химия, биология. – 2002. – № 1. – С. 1–5.
11. Гельцер Б.И., Кривенко Л.Е., Невзорова В.А. и др. Респираторное влаговыделение и значение его исследования в
пульмонологии // Тер. арх. – 2000. – № 3. – С. 46–50.
12. Анаев Э.Х., Чучалин А.Г. Конденсат выдыхаемого воздуха в диагностике и оценке эффективности лечения болезней
органов дыхания // Пульмонология. – 2006. – № 4. – С. 12–20.
13. Хасина М.А., Двинская С.А., Белоглазова С.И. и др. Конденсат паров выдыхаемого воздуха в оценке степени нарушения
метаболизма бронхолегочной системы при неспецифических заболеваниях легких // Клин. лаб. диагн. – 2004. – № 5. – С.
15–17.
SHAKUROV NOVOCAINE BLOCK EFFECT ON BIOCHEMICAL PARAMETERS OF EXHALED BREATH
CONDENSATE AND BLOOD IN CALVES WITH BRONCHOPNEUMONIA
A.E. Chernitskiy, A.I. Zolotarev
Summary. Our object was to study the effect of Shakurov novocaine block on biochemical parameters of exhaled breath condensate (ЕВС)
and blood in calves with bronchopneumonia, and the therapeutic efficiency. It was determined that Shakurov novocaine block in addition to
antibiotic and substitution treatment of calves with bronchopneumonia allows to recover some biochemical parameters of exhaled breath
condensate, increase functional activity of the organism antioxidant protection system, reduce lipid peroxidation products in blood and
endogenous intoxication level. So, after this treatment of calves with bronchopneumonia the activity of gamma-glutamyltransferase in EBC
and the content of EBC calcium reduced by 41.0 and 14.7% (p<0.05) accordingly in comparison with the initial level (before treatment); the
activity of glutathione peroxidase increased by 40.2% (p<0.05), the content of plasma malonic dialdehyde and substances with low and
average molecular weight in calves reduced by 31.3 and 7.5% respectively in comparison with the initial level. After this complex treatment
the minute volume of EBC decreased by 18.5 (p<0.05) and reached the level like in a healthy calves. This helped to reduce the recovery
period by 0.6 days (p<0.01) and to increase the number of animals recovered after treatment by 8.4% (p<0.05) in comparison with calves
treated with means of causal and substitution therapy. In conclusion, in the present study we identified that Shakurov novocaine block
in addition to common treatment of calves with bronchopneumonia not only allows shorten calves recuperation period and to improve
treatment efficiency in general but also promotes to recover the respiratory water release and metabolic lung function.
Key words: Shakurov novocaine block, bronchopneumonia, calves, exhaled breath condensate, system of organism antioxidant
protection, endogenous intoxication.
УДК 619:577.121:615.28
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ I И II ФАЗ
МЕТАБОЛИЗМА КСЕНОБИОТИКОВ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ
АНТИМИКРОБНЫХ СРЕДСТВ
Э.В. БРАТЧЕНКО, аспирант
О.Ю. ФОМЕНКО, кандидат биологических наук, зав.
лабораторией
ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии
E-mail: [email protected]
Резюме. Цель нашей работы – изучение относительного уровня
экспрессии генов, кодирующих ферменты I и II фаз метаболизма
ксенобиотиков в печени крыс при использовании антимикробных
средств различных фармакологических групп (тилозина и циминаля). Эксперимент проводили на трех группах крыс по 3 гол. в
каждой. Животным двух опытных групп препараты вводили в 10-и
кратной терапевтической дозе: крысам II группы – «цидисепт-О»
(пероральная форма циминаля) внутрижелудочно 0,5 мл/100 г
массы тела, особям III группы – тилозин (антибиотик) подкожно
2,4 мг/100 г массы тела, I группа была контрольной.
Уровень экспрессии изучаемых генов (CYP1A1, CYP1A2, CYP2B1,
CYP3A1 и GST) определяли методом полимеразной цепной
Достижения науки и техники АПК, №1-2012
реакции в реальном времени. В качестве гена-нормализатора
использовался ген GAPDH. Достоверность различий определяли
методом парных сравнений с использованием t-критерия Стьюдента, при уровне значимости p≤0,05.
Применение тилозина в дозе 2,4 мг/100 г массы тела вызывало резкую индукцию генов CYP1A1 и CYP1A2. Уровень
их транскриптов в клетках печени возрастал, по сравнению
с контролем, в 3,16±0,12 и 8,06±0,4 раза. Одновременно
наблюдалось незначительное повышение уровня экспрессии генов CYP2B1 и CYP3A1 (в 1,46±0,04 и 1,82±0,09 соответственно). В группе животных, получавших циминаль,
статистически достоверных отличий уровней экспрессии от
контроля не обнаружено.
Таким образом, использование антимикробных средств на
основе циминаля не оказывает индуцирующего действия на
экспрессию генов метаболизма ксенобиотиков и не вызывает нарушения равновесия в системах микросомального и
свободно-радикального окисления.
Ключевые слова: экспрессия, антимикробные средства, печень, цитохром Р450, глутатион-S-трансфераза.
51
НТП: ЖИВОТНОВОДСТВО И КОРМОПРОИЗВОДСТВО
Огромное разнообразие ксенобиотиков, включая
Крысам II группы – «цидисепт-О» (пероральная форма
лекарственные вещества, попадая в организм животциминаля), внутрижелудочно, 0,5 мл/100 г массы тела,
ных и человека, включаются в процессы метаболизма
животным III группы – тилозин (антибиотик), подкожно
с участием специализированных ферментных систем.
2,4 мг/100 г массы тела По окончании курса введения
Наиболее важной из них считают суперсемейство
препаратов крыс забивали декапитацией и внутренние
цитохромов Р450 [1], экспрессию которых регулирует
органы использовали в дальнейшей работе.
взаимодействие цитозольных рецепторов со строСуммарную клеточную РНК из образцов тканей
го специфичными для каждого члена суперсемейпечени массой 100 мг выделяли методом фенолства лигандами низкой молекулярной массы. Такое
хлороформной экстракции с использованием гуанивзаимодействие вызывает изменение конформации
динтиоцианата. Очистку РНК проводили при помощи
рецептора, после чего лиганд попадает в ядро, где
осаждения хлоридом лития [4]. Концентрацию опресвязывается со специфическим регионом (элемент
деляли спектрофотометрически при длине волны 260
ответа на ксенобиотик, XRE), расположенным выше
нм. О степени чистоты полученных препаратов судили
соответствующего гена, и изменяет структуру ДНК
по соотношению А260/А280.
Обратную транскрипцию осуществляли с испольтаким образом, что она становится более доступной
зованием 2 мкг суммарной клеточной РНК при помощи
для ферментов транскрипции [2].
ревертазы M-MuLV, RNase H- (СибЭнзим) в течение
На генах цитохромов Р450 обычно расположены
60 мин. при 42 °С. В качестве затравки использовали
сайты связывания для множества факторов, соответолигонуклеотид (dT)18. Для предотвращения деградаственно их экспрессию контролируют несколько сиции матриц РНК в реакционную смесь вносили 20 ед.
стем ответа. Индукция Р450 – нежелательный эффект
ингибитора РНКаз IRNasine.
действия фармакологических субстанций, так как это
Количественный ПЦР-анализ выполняли с примеможет приводить к ускоренному метаболизму сонением флуоресцентного красителя SYBR Green I [5]
вместно принимаемых лекарств, которые могут быть
и использованием набора реактивов фирмы «Синтол»
субстратами для активированных форм цитохромов
на приборе Rotor Gene 6000. Для проведения реакР450. Кроме того, из-за активации или подавления
ции брали кДНК, полученную с использованием 200
экспрессии генов других микросомальных ферменнг суммарной клеточной РНК. Определяли относитов (в первую очередь глутатион-S-трансферазы)
тельный уровень экспрессии генов CYP1A1, CYP1A2,
может происходить синтез более токсичных метабоCYP2B1, CYP3A1 и GST. Нормирование проводили по
литов поступающих в организм ксенобиотиков или
гену GAPDH. Представленность транскриптов в конзамедление их детоксикации [3]. Поэтому крайне
трольной группе принимали за единицу. Праймеры для
важно выяснить может ли действующее вещество
проведения полимеразной цепной реакции в реальном
служить индуктором ферментов метаболизма ксевремени разработаны с использованием программного
нобиотиков. Такого рода исследования особенно
обеспечения Primer3 [6]. Амплификацию фрагментов
актуальны на начальной стадии разработки новых
генов метаболизации ксенобиотиков проводили по
терапевтических агентов.
схеме двухшаговой полимеразной цепной реакции по
В связи с тем, что широкое использование антибиопрограмме: денатурация 95 °С – 5 мин; циклирование:
тиков приводит к возникновению и распространению
отжиг праймеров и элонгация цепей 60 °С – 45 сек.,
устойчивых штаммов микроорганизмов, нарушению
денатурация 95° – 15 сек. Число циклов – 45.
состава микрофлоры желудочно-кишечного тракта
Значения пороговых циклов определяли автоматии, как следствие, дисбактериозам, сегодня повычески при помощи программного обеспечения Rotor
шенное внимание уделяют разработке новых лекарGene 6000 Series Software 1.8.17.5. Определение отственных средств, не являющихся антибиотиками, к
носительного уровня экспрессии исследуемых генов
числу которых относится – циминаль – пара-нитро-αRосуществляли с применением 2-ΔΔCt-метода [7].
хлоркоричный альдегид, обладающий подавляющим
Поиск последовательностей, гомологичных генам
действием на грамположительную и грамотрицательферментов I и II фаз метаболизма ксенобиотиков, и
ную микрофлору.
их анализ проводили с использованием программы
Целью нашей работы – изучение относительного
BLAST [8].
уровня экспрессии генов, кодирующих ферменты I и
Для статистической обработки полученных резульII фаз метаболизма ксенобиотиков в печени при истатов применяли пакет программного обеспечения
пользовании антимикробных средств.
Statistica 6.0. Достоверность различий относительно
Условия, материалы и методы. Исследования
контрольной группы определяли методом парных
проводили на половозрелых самцах белых беспородсравнений с использованием t-критерия Стьюдента,
ных лабораторных крыс в возрасте 6 мес. с массой тела
при уровне значимости p≤0,05.
300…350 г. Животных содержали на общевиварном
рационе при свободном доТаблица 1. Праймеры для мРНК ферментов метаболизма ксенобиотиков
ступе к воде. Для изучения
Ген
5’ → 3’ последовательность
Ампликон, п.о.
уровня экспрессии генов миCYP1A1 прямой: GAAGAAGCTAATCAAAGAGCACTACAGG
кросомального окисления по
обратный: CAATGCTCAATGAGGCTGTCTG
81
принципу пар-аналогов было CYP1A2 прямой: TCCACATTCCCAAGGAGTGCT
сформировано 3 группы по 3
обратный: TAAGAAACCGCTCTGGGCG
105
гол. в каждой. I группа была CYP2B1 прямой: GGCTCACACCGGCTACCAA
обратный: TGAAAACCTCTGAATCTCGTGGATA
84
контрольной – в нее вхоCYP3A1
прямой:
GTAAAATACTTGAGGCAAGAGAAAGGC
дили интактные животные.
обратный: TCGGGTTGTTGAGGGAATCA
124
Особям остальных опытных GST
прямой: GCGTGGTATCACCCAAACAGGGACC
групп в течение 5 дней ввообратный: ACTCCATTCTACCCCGGGCCTCA
120
прямой: TGCCCGTGACAGCCAACACAGGAGC
дили препараты в 10-и крат- GAPDH
обратный: TCTGAGGTCGGGTCCGTCGCCC
104
ной терапевтической дозе.
52
Достижения науки и техники АПК, №1-2012
НТП: ЖИВОТНОВОДСТВО И КОРМОПРОИЗВОДСТВО
Результаты и обсуждение. Для амплификации
фрагментов соответствующих мРНК мы использовали
специфические праймеры, разработанные на основе
публично доступных баз нуклеотидных последовательностей (см. табл.).
При внутрижелудочном введении «Цидисепта-О»
усиления экспрессии всех изученных генов не наблюдали (см. рисунок). Наоборот, отмечено незначительное снижение их активности, кроме CYP1A1. Это
может свидетельствовать о стабилизации процессов
свободно-радикального и микросомального окисления
в печени. Наблюдаемый эффект, вероятно, обусловлен химическим составом препарата. Известно, что
фосфолипидные компоненты мембран сорбируют
пара-нитро-αR-хлоркоричный альдегид, что снижает их
биодоступность для активных форм кислорода, а следовательно, и интенсивность свободно-радикального
окисления.
Рисунок. Экспрессия генов метаболизма ксенобиотиков
в печени крыс: – контроль; – цидисепт-О; – тилозин.
Введение тилозина вызывало резкую индукцию
генов CYP1A1 и CYP1A2. Уровень их транскриптов в
клетках печени увеличивался, по сравнению с контролем, в 3,16±0,12 и 8,06±0,4 раза соответственно.
В норме экспрессия гена CYP1A1 в клетках печени
практически отсутствует. Однако при воздействии на
организм таких полициклических планарных углево-
дородов, как диоксины и бензопирен его активность
резко возрастает [9]. Индукция транскрипции этого
гена опосредована через цитозольный арилуглеводородный рецептор (AhR) и вовлекает в себя диссоциацию белка теплового шока hsp90 AhR, ассоциацию
с ядерный фактором транскрипции arnt и последующее связывание образовавшегося гетеродимерного
комплекса с элементами ответа на ксенобиотики,
фланкирующими ген CYP1A1 [10]. Ген CYP1A2 – конститутивно экспрессирующийся, повышение уровня
его транскриптов в клетке может свидетельствовать
об усилении процессов I фазы метаболизма ксенобиотиков. Цитохром CYP2B1 метаболизирует разнообразные липофильные лекарственные средства и
стероиды. Его экспрессию индуцирует фенобарбитал
[11]. В нашем опыте тилозин вызвал увеличение количества транскриптов этого гена, по сравнению с
контрольной группой, в 1,46±0,04 раза. Механизмы
регуляции экспрессии гена CYP3A1 еще во многом не
ясны, но известно, что его индукцию вызывают синтетические глюкокортикоиды. Обнаруженное увеличение уровня экспрессии этого гена в 1,82±0,09 раза
может быть связано с активацией элементов ответа
на ксенобиотики либо непосредственно молекулами
тилозина, либо его метаболитами. Статистически достоверных различий в уровнях экспрессии гена GST,
который кодирует глутатион-S-трансферазу, между
животными I и III групп не обнаружено . Это, вероятно,
свидетельствует о том, что препарат в использованных дозах не вызывает активации процессов II фазы
утилизации ксенобиотиков.
Выводы. Применение тилозина в дозе 2,4 мг/100
г массы тела вызывает резкую индукцию экспрессии
цитохромов CYP1A1 и CYP1A2 (в 3,16±0,12 и 8,06±0,4
раза соответственно) и незначительное повышение
уровней транскриптов CYP2B1 и CYP3A1 (в 1,46±0,04 и
1,82±0,09 раза соответственно), что может приводить
к развитию патологий печени при ошибочном использовании повышенных доз препарата.
Применение антимикробных средств неантибиотической природы на основе циминаля не оказывает
индуцирующего действия на экспрессию генов метаболизма ксенобиотиков и таким образом, не вызывает
нарушения равновесия в системах микросомального и
свободно-радикального окисления.
Литература.
1. Guengerich F.P. Reactions and significance of cytochrome P-450 enzymes // The Journal of Biological Chemistry. – 1991. –
v. 266. – p. 10019-10022.
2. Zhu B.T. On the general mechanism of selective induction of cytochrome P450 enzymes by chemicals: some theoretical considerations // Expert opinion on drug metabolism and toxicology. – 2010. – v. 6, № 4. – p. 483-494.
3. Hayes J.D., Pulford D.J. The glutathione S-transferase supergene family: regulation of GST and the contribution of the izoenzymes to cancer chemoprotection and drug resistance // Clinical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology. – 1995. – v. 30. –
p. 445-600.
4. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction
// Analytical Biochemistry. – 1987. – vol. 162. – pp. 156-159.
5. Karlsen F., Steen H.B., Nesland J.M. SYBR green I DNA staining increases the detection sensitivity of viruses by polymerase
chain reaction // Journal of virological methods. – 1995. – v. 55, № 1. – p. 153-156.
6. Rozen S., Skaletsky H. Primer3 on the WWW for general users and for biologist programmers // Methods in Molecular Biology.
– 2000. – vol. 132. – pp. 365–386.
7. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCt method //
Methods. – 2001. – v. 25. – p. 402-408.
8. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search /S.F. Altschul, T.L. Madden, A.A. Schaffer, J.
Zhang, Z. Zhang, W. Miller, D.J. Lipman // Nucleic Acids Research.- 1997. –v. 25.- p. 3389-3402.
9. Purification and characterization of liver microsomal cytochromes P450: electrophoretic, spectral, catalytic and immunochemical
properties and inducibility of eight isozymes isolated from rats treated with Phenobarbital or β-naphtoflavone / F.P. Guengerich [et al.]
//Biochemistry. – 1982. – v. 21. – p. 6019-6030.
10. Okey A.B., Riddick D.S., Harper P.A. Molecular biology of the aromatic hydrocarbon (dioxin) receptor // Trends in Pharmacological sciences. – 1994. – v. 15, № 7. – p. 226-232.
11. Waxman D.J., Azaroff L. Phenobarbital induction of cytochrome P-450 gene expression // The Biochemical Journal. – 1992.
– v. 281. – p. 577-592.
Достижения науки и техники АПК, №1-2012
53
НТП: ЖИВОТНОВОДСТВО И КОРМОПРОИЗВОДСТВО
EXPRESSION OF XENOBIOTIC METABOLISM PHASES I AND II ENZYMES
DURING ANTIVICROBIAL DRUGS ADMINISTRATION
E.V. Bratchenko, O.Yu. Fomenko
Summary. The aim of this work was to study the relative expression levels of xenobiotic metabolism phases I and II enzymes in rat liver
during administration of antimicrobial agents of different pharmacological groups (tylosin and tsiminal).
Expression level of the genes of interest was determined using real time polymerase chain reaction. GAPDH was used as house-keeping
gene. Differences reliability was determined by pairwise comparisons using Student’s t-test (p ≤ 0,05).
It was shown that the usage of tylosin at a dose of 2.4 mg per 100 g of body weight cause a significant induction of CYP1A1 and CYP1A2
genes. The level of their transcripts in the liver was 3,16 ± 0,12 and 8,06 ± 0,4 fold than in the control group. In this case also there was
a slight increase in expression of CYP2B1 and CYP3A1 genes (in 1,46 ± 0,04 and 1,82 ± 0,09, respectively). There were no statistically
significant differences in expression levels between control group and rats treated with «Tsidisept-O».
We can conclude that in contrast to tylosin, the administration of antimicrobial agents based on tsiminal did not exert an inducing effect
on xenobiotics metabolism gene expression patterns and did not lead to imbalance in microsomal and free radical oxidation systems.
Key words: expression, antimicrobial drugs, liver, cytochrome P450, glutathione-S-transferase.
УДК 619: 579.252.55: 578.81: 615.28
ФОРМИРОВАНИЕ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
И ВОССТАНОВЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ
К КОМПЛЕКСНОМУ АНТИМИКРОБНОМУ ПРЕПАРАТУ
ДИОКСИНОР
Л.Ю. САШНИНА, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник
ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии
E-mail: [email protected]
Резюме. Одно из направлений предотвращения формирования
устойчивости микроорганизмов к антибиотикам или снижения
степени ее развития – применение при бактериальных инфекциях
комплексных препаратов. Цель наших исследований – изучение
формирования резистентности и восстановления чувствительности у эшерихий, сальмонелл, золотистого стафилококка и
пастерелл к препарату диоксинор, разработанному на основе диоксидина и норфлоксацина и рекомендованному для применения в
качестве этиотропного средства при желудочно-кишечных и респираторных болезнях молодняка сельскохозяйственных животных.
Исследования проводили путем культивирования перечисленных
микроорганизмов в мясо-пептонном бульоне (МПБ), содержащем
возрастающие суббактериостатические концентрации препарата.
У пассируемых культур степень устойчивости к препарату оценивали по коэффициенту резистентности (отношению максимальной,
не препятствующей росту бактерий концентрации, к исходной).
Стабильность приобретенной устойчивости и восстановление
чувствительности к диоксинору изучали путем последовательных
пассажей микроорганизмов в МПБ, не содержащем препарат.
Минимальная бактериостатическая концентрация диоксинора
для эшерихий и сальмонелл составила 0,39 мкг/мл, золотистого
стафилококка – 1,56 мкг/мл, пастерелл – 0,78 мкг/мл. Формирование резистентности микроорганизмов к препарату происходило
медленно, ее коэффициент у эшерихий и сальмонелл был равен
8 (через 40 пассажей), золотистого стафилококка и пастерелл
– 4 (через 30 пассажей). Приобретенная микроорганизмами
устойчивость нестабильна, и восстановление их чувствительности к препарату происходит относительно быстро: у эшерихий
и сальмонелл через 60 пассажей, у золотистого стафилококка и
пастерелл – после 50 пассажей. Полученные результаты обосновывают целесообразность включения диоксидина и норфлоксацина
в состав комплексного препарата диоксинор.
Ключевые слова: диоксинор, диоксидин, норфлоксацин,
резистентность, эшерихии, сальмонеллы, золотистый стафилококк, пастереллы.
На крупных животноводческих комплексах
желудочно-кишечные и респираторные болезни мо-
54
лодняка, как правило, протекают по типу смешанных
инфекций, в возникновении и развитии которых принимают участие несколько возбудителей, в том числе
антибиотикорезистентные бактерии [3, 7, 9].
В связи с этим для терапии больных животных
разрабатывают комплексные препараты с широким
спектром антимикробного действия [1, 6, 8].
Добиться такого эффекта можно при рациональном
подборе сочетаний антибактериальных веществ, которые одновременно позволяют снизить минимальную
ингибирующую концентрацию благодаря синергизму,
уменьшить побочный эффект, по сравнению с монопрепаратами, и при наличии разных механизмов воздействия на микроорганизмы уменьшить вероятность
развития резистентности [2, 4].
В качестве этиотропного средства при желудочнокишечных и респираторных болезнях молодняка сельскохозяйственных животных перспективно использование комплексного препарата диоксинор, созданного
на основе норфлоксацина и диоксидина [5].
Цель нашего исследования – изучить формирование
резистентности и восстановления чувствительности у
эшерихий, сальмонелл, золотистого стафилококка и
пастерелл к диоксинору.
Условия, материалы и методы. Материалом для
исследования служили референтные штаммы микроорганизмов Escherichia coli 866, Salmonella cholerae
suis, Staphylococcus aureus 209 Р, Pasteurella multocida
В14, комплексный препарат диоксинор и его составляющие – норфлоксацин и диоксидин. Изучение формирования резистентности у микроорганизмов проводили
путем культивирования их в мясо-пептонном бульоне
(МПБ), содержащем возрастающие суббактериостатические концентрации перечисленных препаратов. После
каждых десяти пассажей определяли антимикробную
активность диоксинора, норфлоксацина и диоксидина
в отношении указанных микроорганизмов.
При изучении антимикробной активности препаратов минимальную бактериостатическую концентрацию
Достижения науки и техники АПК, №1-2012
Скачать