Активность митохондрий

АндроВижен® система компьютерного автоматизированного анализа
спермы (САSA система) на основе метода флуоресцентного окрашивания
НОВИНКА: Сейчас также анализируется
Целостность акросомы & активность митохондрий
Впервые в истории систем CASA стало возможным анализировать не только целостность плазматической мембраны,
но также целостность акросомы и активность митохондрий. Тесты для оценки функциональности спермиев на основе
метода флуоресцентного окрашивания предлагают пользователю новые возможности в плане контроля качества в рамках
стандартизированного анализа спермы с использованием высокоточной САSA системы АндроВижен®.
В дополнение к стандартному анализу (подвижность и концентрация), Minitube предлагает также следующие возможности
флуоресцентного анализа для АндроВижен®:
Жизнеспособность:
Автоматический подсчет процентного содержания спермиев
с неповрежденной мембраной на основе метода двойного
флуоресцентного окрашивания.
Модуль Жизнеспособность Реф. : 12500/1400
:
НОВИНКАЦелостность
акросомы:
Автоматический подсчет процентного содержания спермиев
с поврежденной акросомой на базе теста на основе метода
двойного флуоресцентного окрашивания.
Модуль Целостность акросом
Реф. : 12500/1600
:
НОВИНКААктивность
митохондрий:
Автоматический подсчет процентного содержания спермиев
с активными митохондриями на основе метода двойного
флуоресцентного окрашивания.
Модуль Активность митохондрийРеф. : 12500/1700
w w w. m i n i t u b e . c o m
1
Как действует флуоресцентный анализ?
Образцы, окрашенные специальными флуоресцентными
красителями, испускают свет определенной длины волны
или конкретного цвета. Красители активируются также под
действием света определенной длины волны. Флуоресцентные
красители окрашивают конкретные структурные компоненты
спермиев, в зависимости от целостности и функционального
статуса этих структур.
Акросома
Головка
Плазменная мембрана
Ядро
Митохондрии
Средняя часть
Осевая нить
Хвост
Конечная часть
Эти различные цвета определяются и оцениваются
программным обеспечением АндроВижен®. Благодаря высокой
скорости анализа, за очень короткое время могут быть
проанализированы несколько сотен спермиев.
::::::::::::
Жизнеспособность - Целостность
плазматической мембраны
Для исследования целостности плазматической мембраны
применяется флуоресцентный метод анализа с двойным
окрашиванием с помощью красителей Hoechst 33342/PI или
SYBR14/PI.
Краситель Hoechst 33342 проникает через мембраны
и связывается непосредственно с ДНК. Все спермии
окрашиваются в синий цвет. Краситель PI (пропидия йодид)
проникает только через поврежденные мембраны. Он
перекрывает синий цвет красителя Hoechst. Спермии с
поврежденными мембранами помечаются, таким образом,
красным/фиолетовым цветом. Исходя из этого, программа
АндроВижен® определяет процентное содержание спермиев с
поврежденной и с неповрежденной мембраной.
Автоматическое выявление спермиев с поврежденной плазматической
мембраной (помечаются красным/фиолетовым цветом) при использовании
метода двойного флуоресцентного окрашивания: H33342/PI
При использовании комбинации красителей SYBR14/PI сначала
все спермии окрашиваются в зеленый цвет. Кроме того, спермии
с поврежденными мембранами помечаются красным цветом за
счет проникновения в них красителя PI.
Жизнеспособность – Зачем проводить
анализ?
Плазматическая мембрана полностью окружает клетку спермия.
Одной из ее важнейших функций является отделение содержимого
клетки от внешней среды и селекция молекул, которые проникают
извне. Любой дефект в плазматической мембране может легко
привести к гибели спермия.
Анализ жизнеспособности используется в основном для
контроля качества выдерживаемых образцов свежей спермы
или оттаянных образцов замороженной спермы. Тест на
определение жизнеспособности может помочь обнаружить
проблемы с фертильностью отдельных животных-доноров
или выявить эякуляты плохого качества до продажи спермы,
чтобы в дальнейшем не столкнуться с проблемой низкой
оплодотворяющей способности сперматозоидов.
w w w. m i n i t u b e . c o m
Автоматическое выявление спермиев с поврежденной плазматической
мембраной (помечаются красным цветом) при использовании метода
двойного флуоресцентного окрашивания: SYBR14/PI
2
::::::::::::
Целостность акросомы
Для исследования целостности акросомы применяется
флуоресцентный метод анализа с двойным окрашиванием
с помощью H333342/FITC-PNA. Все спермии окрашиваются в
синий цвет (H33342). Поврежденные акросомы этих клеток
помечаются зеленым цветом (FITC-PNA).
На основе этого, АндроВижен® определяет процентное
содержание спермиев с поврежденной и с неповрежденной
акросомой.
Автоматическое выявление спермиев с дефектной акросомой (выделяется
красным цветом) при использовании метода двойного флуоресцентного
окрашивания: H33342/FITC-PNA
Целостность акросомы – зачем проводить анализ?
Возможные стресс-факторы – повреждение,
вызванное некорректной обработкой:
• Слишком быстрое охлаждение
• Слишком быстрое или слишком медленное оттаивание
• Измерения уровня pH
Реакция акросомы является ключевым этапом успеха
оплодотворения. Она позволяет спермию проникнуть в
яйцеклетку. Необходимая предпосылка: неповрежденная
плазматическая и акросомальная мембраны. Наличие
различных стресс-факторов во время обработки спермы
может привести к повреждению мембраны акросомы или
спровоцировать преждевременную реакцию акросомы.
Вследствие этого успешное оплодотворение становится
невозможным.
w w w. m i n i t u b e . c o m
• Измерения осмотического давления
• Вещества, токсичные для спермы
• Старение
3
::::::::::::
Активность митохондрий
Для оценки активности митохондрий применяется
флуоресцентный метод анализа с двойным окрашиванием с
помощью H33342/Rhodamin123. Все спермии окрашиваются
в синий цвет (H33342). Кроме того, средняя часть спермия с
активными митохондриями маркируется зеленым цветом
(Rhodamin 123).
На основе этого, АндроВижен® определяет процентное
содержание спермиев с высокой активностью митохондрий.
Митохондрии
Внутренняя оболочка акросомы
Содержимое акросомы
Наружная оболочка акросомы
Плазматическая мембрана
Автоматическое выявление спермиев с активными митохондриями
(окрашивание зеленым цветом) с использованием метода двойного
флуоресцентного окрашивания: H33342/ Rhodamin123
Активность митохондрий – зачем проводить 4.
анализ?
Aнализ активности митохондрий является тестом для оценки
энергетического метаболизма cперматозоида.
Активность митохондрий также необходима для:
• Поддержания подвижности:
• Способности спермия к капацитации (созревание)
• Поддержания основных функций клетки
Спермии с высокой активностью митохондрий
Изменения и ошибки не в счёт. Изображения - аналогично.
REF. : 30000/10496 | 08/2015
::::::::::::
Наборы для окрашивания, необходимые
для проведения флуоресцентного анализа
Hoechst 33342/Pl - Целостность мембраны
(Жизнеспособность)
до 100 тестов Реф. : 15407/0009
SYBR14/Pl Pl - Целостность мембраны
(Жизнеспособность)
до 100 тестов Реф. : 15407/0001
Hoechst 33342/FITC-PNA Целостность акросомы
до 100 тестов Реф. : 15407/0011
Hoechst 33342/Rhodamin 123 Активность митохондрий
до 100 тестов Реф. : 15407/0012
M i n i t ü b G m b H | m i n i t u b e @ m i n i t u b e . c o m | w w w. m i n i t u b e . c o m