На правах рукописи Пудовкин Николай Александрович СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В ОРГАНИЗМЕ РАЗНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ И ПУТИ ИХ КОРРЕКЦИИ ЖЕЛЕЗО - И СЕЛЕНСОДЕРЖАЩИМИ ПРЕПАРАТАМИ 03.03.01 – физиология 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Казань-2015 2 Работа выполнена в ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» Научные консультанты: Гарипов Талгат Валирахманович доктор ветеринарных наук, профессор Каримова Руфия Габдельхаевна доктор биологических наук, доцент Официальные оппоненты: Алексеев Владислав Вениаминович - доктор биологических наук, профессор кафедры «Биоэкология и химия» ФГБОУ ВО «Чувашский государственный педагогический университет имени И.Я. Яковлева» Зайцев Владимир Владимирович – доктор биологических наук, заведующий кафедрой «Биоэкология и физиология сельскохозяйственных животных» ФГБОУ ВО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия» Уразаев Дмитрий Николаевич – доктор ветеринарных наук, профессор кафедры «Физиологии, фармакологии и токсикологии им. А.Н. Голикова и И.Е. Мозгова» ФГБОУ ВО «Московская государственная акдемия ветеринарной медицины и биотехнологии – МВА имени К.И. Скрябина» Ведущая организация: ФГБОУ ВО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина Защита состоится « » 20 г. в часов на заседании диссертационного совета Д-220.034.02 при ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана» по адресу: 420074, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35, КГАВМ С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана» Автореферат разослан « www.ksavm.senet.ru » Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор 2016 г. и размещен на сайтах www.vak.ed.gov.ru и Р.Я. Гильмутдинов 3 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Биохимические процессы в тканях сопровождаются образованием целого ряда реакционно-способных соединений кислорода, которые являются продуктами метаболизма в клетках при оптимальных условиях существования. Токсическое действие активных форм кислорода предотвращается в результате функционирования антиоксидантной защиты, которая обеспечивает физиологический уровень оксидантов в тканях. В нормально функционирующем организме поддерживается определенное равновесие окислительных процессов. Усиление этих процессов и развитие состояния окислительного стресса является одним из патогенетических звеньев микроэлементозов животных (Дубинина Е.Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические и клинико-биохимические аспекты /Е.Е. Дубинина. – СПб.: Изд-во Медицинская пресса, 2006. – С. 277 – 282.). Известно, что дефицит железа и селена стимулирует увеличение противовоспалительных цитотоксинов и активацию процессов перекисного окисления липидов, что приводит к супрессии эритропоэза, повреждении продукции эритропоэтина (Серебряная Н.Б. Исследование протективного действия препарата ферровир при остром экспериментальном аллергическом энцефаломиелите / Н.Б. Серебряная, М.Н. Карпенко, Ю.Л. Житнухин, Г.Н. Бисага, И.Н. Абдурасулова // Цитокины и воспаление. – 2010. – Т.9. – №1. – С. 33 – 38.). Из-за дефицита микроэлементов в компонентах окружающей среды широко используются железо - и селенсодержащие соединения, которые часто применяются без тщательной апробации на целевых животных. В связи с этими особенностями протекания свободнорадикальных процессов в организме разных видов животных, всестороннее изучение фармакологических свойств железо- и селенсодержащих препаратов и их влияния на состояние свободнорадикальных процессов системы организма является актуальной задачей современной фармакологии и физиологии. Степень разработанности темы. Теоретической базой для исследования железо - и селенсодержащих препаратов послужили труды: В.В. Ермакова, В.В. Ковальского (1974 – 1985), Н.А. Голубкиной, В.А. Тутельяна, (1993 – 2015), Т.Н. Родионовой (1996 – 2015), А.Ю. Кутепова (2003 – 2013) и других ученых. Препарат Суиферровит-А исследован Е.Б. Дунаевой (2009) на серебристо-черных лисица с точки зрения влияния на качество волосяного покрова и интенсивности роста и развития животных. О.П. Решетова (2011) изучила токсические свойства препарата Суиферровит-А, установила влияние препарата Суиферровит-А на морфологию крови поросят и качество получаемой продукции. В.А. Оробец, А.А. Сазонов, С.В. Новикова (2013) изучили препарат Ферран с позиции антианемического действия на поросятах. 4 Препарат Ферранимал-75 изучал Д.Ю. Макаров (2012) с позиции влияния на рост и среднесуточные приросты поросят. А.А. Дельцов (2011) определил влияние препарата на некоторые показатели перекисного окисления липидов в организме телят. Селенорганический препарат ДАФС-25 исследован Т.Н. Родионовой (1996 – 2015), на курах – несушках с позиции влияния на продуктивные и мясные качества, а также некоторые обменные процессы Т.Ю. Поперечневой (1996 – 2009) на белых крысах и мышах с позиции влияния на процессы перекисного окисления липидов. Однако, многие ответные реакции организма животных на процессы перекисного окисления липидов, и состояние антиоксидантной защиты организма, при сочетанном введении препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А с ДАФС-25 в организм животных изучены недостаточно. Не изученным остается влияние препарата ДАФС-25 на динамику распределения и накопления селена, и его влияние на процессы перекисного окисления липидов в организме рыб. Особенности протекания свободорадикальных процессов в онтогенезе у некоторых видов пресноводных рыб и состояние процессов перекисного окисления липидов у диких животных изучены не до конца. Цель и задачи исследований. Цель работы – изучить особенности свободнорадикальных и обменных процессов в организме млекопитающих и рыб при введении железо - и селенсодержащих препаратов, определить влияние селен- и железосодержащих веществ при сочетанном использовании на состояние процессов перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы защиты организма, а также дать рекомендации по использованию препаратов для ингибирования процессов перекисного окисления липидов в организме животных. Для достижения поставленной цели нами были поставлены следующие задачи: 1. Установить интенсивность процессов перекисного окисления липидов у млекопитающих и пресноводных рыб в норме и после введения железо – и селенсодержащих препаратов. 2. Оценить реакцию антиоксидантной системы защиты организма млекопитающих и рыб на введение изучаемых препаратов в различных дозах и путях. 3. Изучить фармакокинетику препаратов Ферран и ДАФС-25 методом статистических моментов. 4. Определить динамику накопления и распределения железа и селена, содержащихся в составе препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и ДАФС-25 при различных способах введения и дозах в органах и тканях животных. 5. Изучить влияние селенорганического препарата ДАФС-25 на динамику накопления и распределения селена в организме некоторых видов пресноводных рыб. 5 6. Установить влияние препаратов на обмен белков и железа в организме белых крыс и поросят. 7. Определить влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А на рост и развитие поросят. Научная новизна. Впервые изучено изменение процессов ПОЛ в организме рыб в постнатальном онтогенезе, а также состояние ПОЛ и АОС в организме полевки, зайца русака, волка и воробьиного сыча. Впервые предложены пути коррекции процессов свободнорадикального окисления липидов железо и селенсодержащими препаратами. Впервые определено влияние совместного введения препаратов ДАФС-25 и Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А на динамику накопления и распределения селена и железа в организме поросят и состояние процессов ПОЛ. Выяснено, что совместное введение изучаемых соединений вызывает накопление микроэлементов в тканях организма и не вызывают сбоя в работе АОС защиты организма. Впервые проведена комплексная оценка физиологических реакций организма рыб на введение в организм селенорганического препарата ДАФС25. Установлено, что препарат ДАФС-25 стимулирует антиоксидантную систему защиты организма, ингибирует процессы перекисного окисления и вызывает накопление селена в органах и тканях рыб до оптимального физиологического уровня. Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы состоит в том, что изучены особенности процессов перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы в организме некоторых видов диких животных (полевка обыкновенная, заяц русак, волк обыкновенный и воробьиный сыч), видовые особенности процессов свободнорадикального окисления липидов в организме рыб в зависимости от сезона года, возраста и этологических и экологических факторов. Практическая значимость работы состоит в том, результаты исследований физиологически обосновывают возможность совместного применения железо и селенсодержащих препаратов в качестве антиоксидантов и для обогащения животноводческой продукции селеном и железом. Для обогащения рыбоводческой продукции селеном рекомендуется добавлять в корм ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг корма, что приводит к повышению концентрации селена в тканях организма по сравнению с контролем. По результатам исследований установлено, что совместное введение железо и селенсодержащих препаратов организм животных вызывает повышение концентрации селена и железа во всех органах и тканях в 2,5 – 5 раз и 0,5 – 2 раза соответственно, относительно контроля. Антиоксидантная система белых крыс и поросят после введения препаратов ДАФС-25 и «ДАФС-25+Ферран», «ДАФС-25+Ферранимал-75» и «ДАФС-25+Суиферровит-А» отвечает повышением активности фермента каталаза. 6 Результаты исследований внедрены в производство в КФК «Садоян», КФК «Демидова», ООО «Возрождение» Саратовской области. Материалы диссертационной работы вошли в рекомендации «Анемия животных, её лечение и профилактика» для ветеринарных врачей и зооинженеров (Саратов, 2012). Результаты исследований внедрены в учебный процесс в ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины» и ФГБОУ ВО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова». Методология и методы исследования. Методологическим подходом в решении поставленных задач явилось системное изучение объектов исследования, анализ и обобщение полученных результатов. Предметом исследования является ответная реакция организма поросят и пресноводных рыб на введение железосодержащих препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А, селенорганического препарата ДАФС-25, а также их сочетанного применения. Объектом исследования послужили поросята крупной белой породы свиней в условиях свиноводческого комплекса ООО «РамфудПоволжье» (ЗАО «Инвест-Трейд») Калининского района Саратовской области, а также рыба (карп, карась, линь, толстолобик) в условиях рыбоводческого предприятия ООО «Возрождение», Энгельсского района, Саратовской области. В работе были использованы биохимические методы исследования тканей организма. При определении влияния препаратов на продуктивность учитывали в динамике массу тела и показатели среднесуточного прироста массы тела. Достоверность результатов работы подтверждена применением методов статистической обработки Microsoft Excel. Для оценки достоверностей различий между группами использовали метод Стьюдента. Основные положения, выносимые на защиту: Процессы перекисного окисления липидов в организме разных видов рыб протекают с неодинаковой интенсивностью. В постнатальном онтогенезе (от сеголеток до трёхгодовиков) содержание диеновых коньюгатов (ДК) повышается. Организм сеголеток характеризуется самым низким содержанием малонового диальдегида (МДА). Среди этой возрастной группы самое высокое среднее содержание МДА в организме зафиксировано у плотвы – 17,80 нмоль/г, а низкое у чехони и сазана – 17,23 и 17,24 нмоль/г соответственно. К годовалому возрасту средний уровень малонового диальдегида повысился до 18,56 – 19,31 нмоль/г (лещ и линь соответственно). Уровень активности каталазы также подвержен возрастным колебаниям, повышается с возрастом и зависит от протекания процесса перекисного окисления липидов (ПОЛ). Самая высокая активность фермента зафиксирована в жабрах и печени исследуемых видов рыб, что в свою очередь связано с функциональной ролью данных органов. Интенсивность процессов ПОЛ в организме диких животных неодинакова и зависит от трофического уровня животного. Чем выше трофический уровень, тем ниже интенсивность ПОЛ и активность антиоксидантной системы (АОС). 7 Фармакокинетические характеристики препарата Ферран при однократном внутримышечном введении в дозе 200 мг/железа/кг массы тела: полная площадь под кривой (AUC, (мкг·ч)/мл) – 164,66±2,12; клиренс (СL, л/ч) – 0,008±0,0007; среднее время удержания препарата в организме (MRT, ч) – 26,24±5,02; период полуэлиминации (Т1/2, ч) – 154±3,2 и фармакокинетические характеристики препарата ДАФС-25 при однократном подкожном введении в дозе 0,4 мг/кг: полная площадь под кривой (AUC, (мкг·ч)/мл) – 37,284±2,12; клиренс (СL, л/ч) – 0,0636±0,003; среднее время удержания препарата в организме (MRT, ч) – 52,5±4,02; период полуэлиминации (Т1/2, ч) – 19,6±3,3. Совместное поступление в организм животных препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А и Диацетофенонилселенид в физиологических дозах сопровождается стимуляцией антиоксидантной системы защиты, активизацией фермента каталазы в печени и торможением процессов перекисного окисления липидов. После введения ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг, по величине содержания селена органы располагаются в следующем порядке (по уменьшению): головной мозг > печень> почки > тонкий кишечник > легкие > желудок > толстый кишечник > скелетные мышцы; после введения железосодержащих препаратов железо в органах распределяется следующим образом (по уменьшению): печень> селезенка> сердце > почки> желудок> ткань тонкого отдела кишечника. После совместного применения железо и селенсодержащих препаратов происходит повышение концентрации селена и железа во всех органах и тканях в 2,5 – 5 раз и 0,5 – 2 раза соответственно, относительно контроля. Приспособительные реакции организма животных на совместное поступление железо и селенсодержащих препаратов, в различных дозах проявляются изменением некоторых обменных процессов, выраженным увеличением в крови содержания общего белка и его фракций и повышением содержания в сыворотке крови общего железа, трансферрина, ненасыщенной и общей железосвязывающей способностей. Апробация результатов исследования. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (Саратов, 2010); Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства (Самара, 2010); Международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина – теория, практика, обучение» (Санкт-Петербург, 2010); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» (Москва, 2011); III Международной научно-практической конференции «Биоэлементы» (Оренбург, 2011); Международной научно-практической конференции «Аграрная наука – основа успешного развития АПК и сохранения экосистем» (Волгоград, 2012), Международной научно-практической конференции «Современные проблемы ветеринарной медицины и зоотехнии» (Республика Беларусь, г. Витебск, 2012); 8 II Международном конгрессе ветеринарных фармакологов и токсикологов, посвященного восьмидесятилетию заслуженного деятеля науки РФ, профессора Соколова В.Д. «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2012); Международной научно-практической конференции «Интеграция науки и производства – стратегия успешного развития АПК в условиях вступления России в ВТО» (Волгоград, 2013); Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы экологии, географии и геоэкологии» (Грозный 2012); Международной интернет-конференции «Научный поиск – животноводству России» (Ставрополь 2013); 17-й и 18-й Международной Пущинской школыконференции молодых ученых «Биология – наука XXI века» (Пущино, 2013, 2014); VII Международной научно-практической конференции «Современные проблемы контроля качества природной и техногенной сред» (Тамбов, 2014). Публикации. По материалам диссертации опубликованы: монография «Коррекция селенового статуса животных диацетофенонилселенидом» и 39 печатных работ из них 24 – в журналах, рекомендованных ВАК РФ. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 285 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения результатов исследований и выводов. Библиографический список включает 309 источников, из них 133 – иностранных. Работа иллюстрирована 76 таблицами и 21 рисунками. 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследования по теме диссертации проводились в период 2009-2015 годов в лаборатории кафедры «Физиология и патофизиология» ФГБОУ ВПО «Казанская государственная ветеринарная академия имени Н.Э. Баумана». Научно-производственный опыт выполнен в ООО «Рамфуд-Поволжье» (ЗАО «Инвест-Трейд») Калининского района Саратовской области. Объектом исследования послужили поросята крупной белой породы, а также рыба (карп, карась, линь, толстолобик) в условиях рыбоводческого предприятия ООО «Возрождение», Энгельсского района Саратовской области. Общая схема исследований представлена на рисунке 1. Препарат ДАФС-25 (диацетофенонилселенид) представляет собой сыпучий порошок от белого до светло-желтого цвета со слабым специфическим запахом, не растворим в воде. Для введения в организм экспериментальных животных препарат растворяли в стерильном подсолнечном масле. Раствор готовили в день эксперимента. Ферран (Ferran) (ЗАО Nita-Farm, Саратов) – лекарственное средство в форме раствора для инъекций. Ферран в качестве действующего вещества в 1 см3 раствора содержит 100 мг трехвалентного железа. Ферранимал-75 (А-БИО, Пущино) Ферранимал-75 - лекарственное средство в форме раствора для инъекций, представляющее собой комплексное соединение низкомолекулярного декстрана с железом (III), содержащее в 1 мл в 9 Этапы исследования Предмет исследования Объект исследования Крысы (n=114) ДК Изучение особенности СРО в норме и влияния препаратов на ПОЛ и АОС организма Фармакологическая характеристика препаратов МДА Каталаза Фармакокинетика Поросята (n=51) Рыбы (n=732) полёвка (n=18) заяц русак (n=10) волк (n=4) сыч (n=4) Кролики(n=30) Крысы (n=36) Динамика накопления и распределения селена и железа Железо Селен Выводы и предложения Выводы и предложения полёвка (n=18) заяц русак (n=10) волк (n=4) сыч (n=4) Крысы (n=152) Поросята (n=76) Выводы и предложения Рыбы (n=732) АЛТ АСТ Изучение влияния препаратов на обмен белка Глобулины Крысы (n=138) Поросята (n=60) Альбумины Выводы и предложения НЖСС Изучение влияния препаратов на обмен железа Трансферрин Крысы (n=138) ОЖС Поросята (n=60) Выводы и предложения СЖ Изучение влияния препаратов на рост и развития животных Морфофизиологические показатели Поросята (n=70) (n=36) Рисунок 1 – Общая схема проведенных исследований Выводы и предложения 10 качестве действующего вещества 75 мг железа (III) и в качестве вспомогательного вещества воду для инъекций. Препарат Суиферровит-А (А-БИО, Пущина) представляет собой водный раствор с добавлением витаминов группы B и железо-декстранового комплекса. В 1 мл в качестве действующего вещества 7 мг железа (III) и в качестве вспомогательного вещества воду для инъекций. Фармакокинетические параметры рассчитывали при однократном внутримышечном введении препаратов применительно к однокамерной модели. Математическую обработку результатов по расчету интегральныхнезависимых фармакокинетических параметров проводили с использованием метода статистических моментов (Фирсов А.А. Фармакокинетические методы в биофармации: оценка биодоступности и пресистемная элиминация лекарственных средств. /А.А. Фирстов, В.К. Пиотровский // Итоги науки и техники. Фармакология. Химиотерапевтические средства. – М.: ВИНИТИ – 1984. –Т.14 – С.114 – 224.). Содержание селена, изучено по методике флуорометрического определения селена в органах (тканях) животных (Назаренко И.Н. Флуорометрическое определение селена в биологическом материале с помощью 2,3-диаминонафталина / И.Н. Назаренко, И.В. Кислова, Т.М. Гусейнов // Журн. аналитической химии. – 1975. – Т.30. – №4. – С. 2–3.). Интенсивность ПОЛ в организме животных оценивали по накоплению МДА и ДК. Содержание МДА определяли тиобарбитуровым методом в сыворотке крови и гомогенате тканей внутренних органов (Стальная И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. – С. 66 –67.). Диеновые коньюгаты в сыворотке крови определяли спектрометрическим (Стальная И.Д. Методы определения диеновой коньюгации ненасыщенных высших жирных кислот / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. – С. 67–68.). Антиоксидантную обеспеченность организма оценивали по активности фермента каталазы в сыворотке крови и гомогенатах тканей (Королюк М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк Л.И.Иванова, И.Г.Майорова, В.Е. Токарева // Лаб. дело. – 1988. – № 1. – С. 16–19.). Определение общего белка и белковых фракций проводили на полуавтоматическом биохимическом анализаторе URIT-800 Vet. Исследование метаболизма железа включало определение сывороточного железа (СЖ) колометрическим методом без депротеинизации, общей и ненасыщенной железосвязывающей способности сыворотки крови (ОЖСС и НЖСС соответственно) колометрическим методом без осаждения (Идельсон Л.И. К вопросу о выборе метода определения железа в сыворотке и моче / Л.И. Идельсон, Э.Г. Радзивиловская, Л.А. Аполлонов // Проблемы гематологии и переливания крови. – 1970. – №5. – С. – 47 – 52.), трансферрина (Аношина М.Ю. Проницаемость эритроцитарных мембран как показатель метаболической 11 интоксикации у больных гемофилией с патологией опорно-двигательного аппарата / М.Ю. Аношина, М.В. Суховий, Е.В.Аверьянов, М.В Яговдик // Український журнал гематології татрансфузіології. – 2006. – № 2 (додатковий) – С.4 – 7.) и КНТ (коэффициент насыщения трансферрина железом - по отношению СЖ/ОЖСС). Активность аминотрансфераз в сыворотке крови была определена модифицированным методом Райтмана-Френкеля в модификации Т.С. Пасхиной (Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник /В.В. Меньшиков. – М.: Медицина. – 1987. – 156 с.). Эвтаназия достигалась путем декапитации согласно рекомендациям по деонтологии медико-биологического эксперимента (Матюшин А.И. Деонтология медико-биологического эксперимента / А.И. Матюшин, B.C. Осняч, Т.Н. Павлова. – М.: МЗ РСФСР, 1987. – С. 18.). Все эксперименты проведены в трёх повторностях. Цифровой материал подвергался статистической обработке с вычислением критерия Стьюдента на персональном компьютере с использованием стандартной программы вариационной статистики Microsoft Excel. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Содержание селена и особенности свободорадикальных процессов у некоторых видов диких животных Исследования проведены на 18 полёвках обыкновенных, 10 зайцах русаках, на 4 волках обыкновенных и 4 сычах воробьиных обитающих в условиях степной экосистемы Саратовской области. Результаты исследований представлены на рисунке 2. Рисунок 2 – Концентрация селена в тканях диких животных, (мкг/г) Степная растительность Саратовского Заволжья представлена типчаковоковыльно-пырейной ассоциацией. Установлено, что содержание селена в пастбищных травах составляет 0,031-0,051 мкг/г сухой массы. Установлено, что содержание селена в тканях травоядных животных несколько выше, чем в растительности, которую они употребляют. 12 В организме полёвки обыкновенной наибольшее количество селена, определено в почках (0,071±0,003 мкг/г) и печени (0,069±0,007 мкг/г), а наименьшее – в сердечной мышце (0,039±0,004 мкг/г) (рисунок 2). Высокое содержание селена, установлено также в печени (0,073±0,008 мкг/г) и почках (0,065±0,003 мкг/г) зайца, а низкое внутреннем жире (0,043±0,005 мкг/г). Концентрация микроэлемента в ткани печени волка составляет 0,059±0,004 мкг/г, в ткани почек – 0,053±0,002 мкг/г, в миокарде – 0,035±0,003 мкг/г. в мышечной ткани - 0,042±0,004 мкг/г, во внутреннем жире - 0,037±0,004 мкг/г, в легких - 0,046±0,003 мкг/г. Установлено, что концентрация селена в печени сыча составляет (0,089±0,007 мкг/г), миокарде (0,086±0,004 мкг/г), легких (0,088±0,003 мкг/г), в скелетной мускулатуре (0,050±0,002 мкг/г). В тканях тонкого и толстого отделов кишечника содержание селена равнялось 0,066±0,004мкг/г и 0,060 мкг/г соответственно, в стенке желудка - 0,071 мкг/г. Установлено, что в плазме крови полевки обыкновенной и зайца русака содержание МДА (показатель состояния перекисного окисления липидов) составляет соответственно 9,04±0,61 нмоль/г и 11,52±0,83 нмоль/г; в ткани печени – 15,83±0,95 нмоль/г и 16,41±1,03 нмоль/г; в ткани почек – 14,61±0,85 нмоль/г и 14,32±0,57 нмоль/г; в ткани легких – 13,81±0,49 нмоль/г и 11,50±0,66 нмоль/г; в ткани головного мозга – 14,26±1,31 нмоль/г и 12,69±0,63 нмоль/г; в миокарде – 8,02±0,49 нмоль/г и 8,40±0,27 нмоль/г; в скелетной мускулатуре 7,82±0,08 нмоль/г и 7,97±0,57 нмоль/г; в ткани желудка – 9,06±0,74 нмоль/г и 8,73±0,16 нмоль/г; в ткани тонкого отдела кишечника – 8,51±0,44 нмоль/г и 8,07±0,50 нмоль/г; в ткани толстого отдела кишечника – 8,62±0,28 нмоль/г 7,92±0,42 нмоль/г. Концентрация МДА в ткани печени волка составляет 10,45±0,42 нмоль/г, почек - 8,99±0,08 нмоль/г, в скелетной мускулатуре - 9,59±0,33 нмоль/г, в миокарде - 8,55±0,62 нмоль/г, в тканях легкого - 10,33±0,29 нмоль/г. В ткани печени сыча воробьиного концентрация МДА составила 8,03±0,12 нмоль/г, в миокарде - 12,83±0,11 нмоль/г, в скелетных мышцах – 6,16±0,45 нмоль/г, желудке - 8,23±0,61 нмоль/г, в кишечнике - 11,76±0,12 нмоль/г. По активности каталазы все ткани и органы полевки обыкновенной можно расположить в следующем порядке (убыванию): печень (75,73±2,05 ммоль/л)> почки (68,91±1,84 ммоль/л)> легкие (46,08±2,14 ммоль/л)> головной мозг (39,81±0,94 ммоль/л)> скелетная мускулатура (36,74±1,49 ммоль/л)> сердце (32,67±0,86)> плазма крови (24,07±1,00 ммоль/л)> стенка желудка (22,84±0,75 ммоль/л)> стенка толстого отдела кишечника (22,63±0,62 ммоль/л)> стенка тонкого отдела кишечника (20,69±0,53 ммоль/л). В тканях зайца русака самая высокая активность фермента установлена в печени (69,75±2,81 ммоль/л) и почках (62,81±2,74 ммоль/л), а низкая - в тонком отдел кишечника – 23,75±1,64 ммоль/л. толстом отделе кишечника – 24,62±1,30 ммоль/л, в ткани желудка – 24,52±1,06 ммоль/л, плазме крови – 28,74±0,39 ммоль/л. В легких – 39,80±2,26 ммоль/л, головного мозга – 42,01±2,64 ммоль/л, 13 сердечной мышце – 34,78±0,84 ммоль/л и скелетной мускулатуре – 37,05±1,08 ммоль/л. В ткани печени волка активность каталазы составила 33,05±0,89 ммоль/л, почек - 24,55±0,89ммоль/л, легких – 19,01±0,43 ммоль/л, в печени сыча 98,54±2,12 ммоль/л, в мышцах - 44,23±1,02 ммоль/л, в миокарде - 33,15±1,33 ммоль/л, в желудке - 44,36±1,04 ммоль/л и кишечнике - 47,20±1,67 ммоль/л соответственно. 3.2. Фармакокинетика действующего вещества (железа) препарата Ферран и действующего вещества (селен) препарата ДАФС-25 в организме животных Исследования проведены на 36 беспородных белых крысах массой 180 – 190 г и на 18 кроликах массой 2,4 – 2,6 кг. Результаты исследования содержания железа в организме крыс представлены на рисунке 3 и таблице 1. Рисунок 3 – Динамика концентрации железа в сыворотке крови белых крыс при внутримышечном введении препарата Феррана Кривая «концентрация – время» характеризует собой непрерывный фармакокинетический процесс. Фармакокинетические параметры рассчитывали при однократном внутримышечном введении Феррана в дозе 70 мг/железа/кг массы тела (по ДВ) применительно к однокамерной модели. Использован математический принцип расчета кинетических параметров, основанный на вычислении статистических моментов кинетических кривых. Анализ результатов, помещенных в таблице 1, показывает, что полная площадь под кривой зависимости концентрация-время равна 20,238±2,12 мкг·ч/мл. Величина AUC связана с другими фармакокинетическими параметрами - объемом распределения, общим клиренсом и дозой препарата, поступающей в организм. AUC обратно пропорциональна общему клиренсу и пропорциональна дозе препарата. 14 Таблица 1 – Фармакокинетические (ФК) показатели препарата Ферран при внутримышечном введении крысам в дозе 70 мг/железа/кг массы тела (по ДВ) № п/п Название Символ Размерность Величина ФК показателей 1 Полная площадь под кривой AUC (мкг·ч)/мл 20,238±2,12 «концентрация – время» 2 Среднее время удержания MRT Ч 24,26±4,02 3. Клиренс СL л/ч 0,049±0,003 4. Период полуэлиминации Т1/2 Ч 14,90±3,3 5. 6. 7. Стационарная концентрация С Периферический объем V распределения Константа скорости Kel элиминации мкг/мл Л 7,50±0,005 12,80±0,03 1/ч 0,0047±0,001 Общий клиренс (CL) составил 0,049±0,003 л/ч. Концентрация железа в сыворотки крови кроликов представлена на рисунке 4 и таблице 2. Рисунок 4 – Динамика концентрации железа в сыворотки крови кроликов при внутримышечном введении препарата Установлено, что максимальная концентрация железа в сыворотки крове кроликов возрастает в течение 150 часов после введения Феррана в дозе 200 мг/железа/кг массы тела (по ДВ), далее происходит постепенное снижение. Таблица 2 - Фармакокинетические параметры Феррана при внутримышечном введении кроликам в дозе 200 мг/железа/кг массы тела (по ДВ). № п/п Название Символ Размерность Величина ФК показателей 1 Полная площадь под кривой AUC (мкг·ч)/мл 164,6579±2,12 «концентрация – время» 2 Среднее время удержания MRT Ч 26,24±5,02 3. Клиренс СL л/ч 0,008±0,0007 4. Период полуэлиминации Т1/2 Ч 154±3,2 5. Стационарная концентрация С мкг/мл 56,192 6. Периферический объем V Л 1,841 распределения 15 Период полуэлиминации препарата Ферран у кроликов составил 154 часа. Стационарная концентрация – 56,192 мкг/мл (таблица 2). Результаты исследований фармакокинетических параметров ДАФС-25 представлены в таблице 3. Установлено, что переферический объем распределения селена составляет 24,8±0,03 л. Полная площадь под кривой зависимости «концентрация-время» равна 37,284±2,12 мкг·ч/мл. Общий клиренс (CL) составляет 0,0636±0,003 л·ч, среднее время удержания (MRT) селена - 52,5±4,02 часа, стационарная концентрация селена в крови - 0,33±0,005 мкг/мл, период полуэминации препарата - 19,6±3,3 ч, константа скорости элиминации - 0,0018±0,001 часа (таблица 3). № п/п 1 2 3 4 5 6 7 Таблица 3 – Фармакокинетические параметры с ДАФС-25 при внутримышечном введении кроликам в дозе 0,4 мг/кг Название Символ Размерность Величина ФК показателей Полная площадь под кривой АUC мкг·ч/мл 37,284±2,12 «концентрация – время» Среднее время удержания MRT Ч 52,5±4,02 Клиренс CL л/ч 0,0636±0,003 Период полуэлиминации Т½ Ч 19,6±3,3 Стационарная концентрация С мкг/мл 0,33±0,005 Периферический объем V Л 24,80±0,03 распределения Константа скорости элиминации Kel 1/ч 0,0018±0,001 3.3. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А в различных дозах на процессы перекисного окисления липидов в организме животных при совместном введении с препаратом ДАФС-25 3.3.1. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и ДАФС-25 на содержание диеновых коньюгатов в организме поросят Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А на процессы перекисного окисления липидов на состояние антиоксидантной системы использовано 48 поросят в возрасте 3 суток. Средняя масса поросенка составила 1,51±0,06 кг. Препараты Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А вводили в дозах 20, 30, 70, 130 и 200 мг/железа/кг, ДАФС-25 – 0,2 мг/кг массы тела. После одновременного введения ДАФС-25 и Ферран концентрация диеновых коньюгатов в крови возросла на 3,5…18,6 % в зависимости от введенной дозы. После введения препаратов ДАФС-25 и Суиферровит-А в дозах 20, 30, 70, 130 и 200 мг/железа/кг массы тела концентрация ДК в сыворотке крови повысилась на 6,4 %, 15,1 %, 16,2 %, 4,0 % и 13,2 % соответственно, относительно первоначального уровня. Результаты исследований представлены в таблице 4. 16 Таблица 4 – Содержание диеновых коньюгатов в сыворотке крови поросят при комплексном введении железа и селенсодержащих соединений Доза, мг ДАФС-25 и ДАФС-25 и ДАФС-25 и Феррана Суиферровит-А Ферранимал-75 Контроль 9,15±0,48 9,15±0,48 9,15±0,48 20 9,94±0,74 9,74±0,95 9,84±0,52 30 10,84±0,06* 10,53±0,52* 10,42±0,82* 70 9,47±0,63 10,63±0,61 10,83±0,77* 130 10,53±0,87* 9,52±0,63* 10,74±0,68* 200 10,85±0,39* 10,36±0,33* 10,63±0,41* Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05 После введения ДАФС-25 и Ферранимал-75 в дозах от 20 до 200 мг/железа/кг массы тела содержание ДК в сыворотке крови возросло на 3,6 – 18,4 % по сравнению с контролем. Повышение концентрации уровня ДК, в сыворотке крови свидетельствует об активизации процессов перекисного окисления липидов. 3.3.2. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и ДАФС-25 на содержание малонового диальдегида в организме поросят Содержание малонового диальдегида и активность каталазы определяли в сыворотке крови и тканях 114 белых крыс и 51 поросенка при внутримышечном введении препаратов Ферран, Ферранимал-75, СуиферровитА (100 мг/железа/кг массы тела) и ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг массы тела. Результаты исследований представлены в таблице 5. Таблица 5 – Содержание малонового диальдегида (нмоль/г) в сыворотке крови и тканях внутренних органов поросят при совместном введении ДАФС-25 и железосодержащих препаратов Препарат ДАФС-25 ДАФС-25 и ДАФС-25 и ДАФС-25 и Показатель Контроль Ферран Ферранимал- Суиферровит75 А Сывор. крови 7,59±0,38 5,93±0,63* 6,96±0,70 7,41±0,40 7,79±0,26 Голов. мозг 11,06±0,64 8,15±0,58* 9,63±0,57 10,05±0,32 9,59±0,73* Легкие 13,97±0,82 13,74±1,02 14,01±0,84 15,39±1,13 14,85±0,37* Почки 13,71±1,00 10,84±0,89* 12,79±1,01 13,59±0,43 13,14±0,04 Печень 14,15±0,62 11,62±0,68* 13,37±0,32 14,05±0,37 13,22±0,45 Сердце 8,01±0,35 6,97±0,25* 7,13±0,67 7,36±0,17 8,06±0,81 Мышцы 5,50±0,58 5,84±0,63 5,99±0,48 6,06±0,59 6,15±0,67 Толс. кишеч. 7,92±0,85 7,42±0,61 8,40±0,41 9,79±0,85* 8,95±0,16* Тонк. кишеч. 6,46±0,40 4,76±0,42* 6,59±0,25 7,09±0,11* 6,06±0,15 Желудок 8,96±0,92 8,58±0,82 8,69±0,59 7,68±0,26* 8,33±0,53 Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05 После введения препарата ДАФС-25 уровень МДА в сыворотке крови поросят понизился на 21,9 % , после комплексного применения ДАФС-25 и 17 Ферран – на 8,3 %, ДАФС-25 и Ферранимал-75 – на 2,4 %, однако, после применения ДАФС-25 и Суиферровит-А содержание МДА в сыворотке крови повысилось на 2,6% относительно контроля. В ткани головного мозга происходит снижение изучаемого показателя на 26,3 % (после введения ДАФС-25); на 12,9 % (ДАФС-25 и Ферран); на 9,1 % (ДАФС-25 и Ферранимал-75) и 13,5 % (ДАФС-25 и Суиферровит-А). В ткани легких содержание малонового диальдегида изменяется незначительно относительно контроля. В ткани почек концентрация МДА понизилась на 0,87 – 6,7 %, после применения ДАФС-25 - на 20,9 %. В печени самое значительное снижение концентрации малонового диальдегида произошло после использования ДАФС-25 (на 17,8 %), а после применения ДАФС-25 и Ферран, ДАФС-25 и Ферранимал-75 и ДАФС-25 и Суиферровит-А на 5,5 %, 0,7 % и 6,6 % соответственно, относительно контроля. В миокарде, после совместного применения препаратов уровень МДА понизился на 11,0 %, после введения только ДАФС-25 - на 13,0 %. В толстом отделе кишечника содержание малонового диальдегида повысилось на 6,1 %, 23,6 % и 13,0 %, соответственно, после введения в организм ДАФС-25 и Ферран, ДАФС-25 и Ферранимал-75 и ДАФС-25 и Суиферровит-А. в тонком отделе кишечника после введения ДАФС-25 уровень МДА понизился на 26,3 %, однако, после комплексного применения изучаемых соединений содержание МДА колебалось, как в сторону уменьшения, так и в сторону увеличения. В стенке желудка уровень МДА понизился от 3,0 % до 14,2 %, после введения ДАФС-25 – на 4,2 % относительно контроля. 3.3.3. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и ДАФС-25 на активность каталазы в организме поросят Активность каталазы определяли в сыворотки крови и тканях внутренних органов 114 белых крыс и 51 поросят при внутримышечном введении препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А, а также при комплексном применении с ДАФС-25 в различные сроки наблюдения. Препараты Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А вводили в дозе 100 мг/железа/кг массы тела, препарат ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг массы тела. Влияние совместного введения препарата ДАФС-25 и препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А на активность каталазы изучено в сыворотке крови и тканях органов поросят. Результаты исследований представлены в таблице 6. После совместного введения ДАФС-25 и Ферранимал-75 и ДАФС-25 и Суиферровит-А активность каталазы возросла на 10,7 % и 6,0 % соответственно. В ткани головного мозга и скелетной мускулатуре активность каталазы после применения комплексов препаратов практически не изменилась, а после введения в организм ДАФС-25 возросла на 18,0 % и 19,3 % соответственно, относительно контроля. В легких произошло повышение активности фермента на 2,1…12,0 % по сравнению с первоначальным уровнем. 18 Таблица 6 – Активность каталазы (ммоль/л) в сыворотке крови и тканях внутренних органов поросят при совместном введении ДАФС-25 и препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А После После После После введения введения введения введения № Ткань Контроль ДАФС-25 ДАФС-25 и ДАФС-25 и ДАФС-25 и п/п Ферран Ферранимал СуиферровитА 1 Сывор.крови 25,96±1,63 30,05±1,42* 26,05±1,23 28,75±1,36* 27,52±0,15* 2 Голов. Мозг 16,64±0,81 19,63±0,64* 16,35±0,41 16,92±0,67 15,63±0,66 3 Легкие 45,53±1,17 56,38±1,53* 51,01±2,63* 47,74±1,61* 46,48±1,50 4 Почки 66,06±1,95 77,83±2,35* 76,52±3,05* 74,15±2,15* 75,63±3,03* 5 Печень 69,72±2,03 84,91±2,83* 78,53±1,98* 77,94±1,06* 75,67±1,53* 6 Сердце 26,49±0,92 35,48±1,36* 36,75±1,05* 35,29±1,40* 34,73±1,18* 7 Мышцы 36,67±1,03 43,74±1,38* 37,07±1,06 36,42±1,16 35,91±1,05 8 Толс. кишеч. 16,47±0,69 27,20±0,59* 28,75±0,84* 27,06±1,44* 25,03±0,62* 9 Тонк. кишеч. 18,59±1,05 28,04±1,74* 27,06±0,70* 25,84±1,07* 25,41±1,05* 10 Желудок 19,43±1,48 27,97±0,60* 26,87±1,49* 25,95±1,51* 26,07±1,53* Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05 Одно из самых значительных повышений активности произошло в ткани почек. После введения препаратов ДАФС-25 и Ферран, ДАФС-25 и Ферранимал-75 и ДАФС-25 и Суиферровит-А активность каталазы повысилась соответственно на 15,8 %, 12,2 % и 14,5 % от первоначального уровня. В ткани печени активность каталазы повысилась на 8,5…15,8 %. В ткани толстого, тонкого отделов кишечника и стенке желудка активность фермента возросла на 52,0 – 74,6 %, 36,7 – 45,6 % и 33,6 – 38,3 % соответственно по сравнению с контролем. 3.4. Динамика накопления и распределения селена и железа в организме животных после введения препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и ДАФС-25 Исследования проведены на 97 белых крысах и 76 поросятах. Препарат ДАФС-25 вводили в дозе 0,2 мг/кг массы тела подкожно, препараты Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А в дозах 70 мг/железа/кг массы тела белым крысам и 100 мг/железа/кг массы тела (по ДВ) поросятам (внутримышечно). После введения препарата Ферран место инъекции становилось гиперемированным и болезненным, а при применении других препаратов местные реакции были менее выраженными. Результаты исследований представлены в таблицах 7 и 8. Установлено, что после введения препарата ДАФС-25 концентрация селена во всех органах достоверно повышается. По содержанию селена органы поросят располагаются в следующем порядке (по возрастанию): скелетная мускулатура> сыворотка крови> сердечная мышца> легочная ткань> почки> головной мозг> печень (таблица 7). 19 Таблица 7 – Накопление селена (мкг/г) в сыворотке крови и тканях внутренних органов поросят после комплексного введения препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и ДАФС-25 После После После После введения введения введения введения Показатель Контроль ДАФС-25 ДАФС-25 и ДАФС-25 и ДАФС-25 и Ферран ФерраниСуиферровитмал-75 А Сывор.крови 0,059±0,004 0,117±0,004* 0,107±0,003* 0,106±0,004* 0,116±0,008* Печень 0,084±0,003 0,138±0,007 * 0,126±0,004 * 0,133±0,009* 0,127±0,008* Почки 0,079±0,003 0,129±0,06 * 0,120±0,005 * 0,117±0,006* 0,127±0,003* Сердце 0,044±0,001 0,118±0,005 * 0,108±0,004 * 0,106±0,003* 0,112±0,008* Гол. Мозг 0,049±0,004 0,131±0,004 * 0,127±0,004 * 0,119±0,006* 0,121±0,005* Мышцы 0,042±0,002 0,109±0,005 * 0,100±0,09 * 0,112±0,009* 0,106±0,001* Легкие 0,050±0,003 0,122±0,006 * 0,116±0,004 * 0,113±0,005* 0,110±0,003* Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05 После введения препаратов «ДАФС-25+Ферран», «ДАФС25+Ферранимал-75» и «ДАФС-25+Суиферровит-А» содержание селена в печени повысилось на 50,0 %, 58,3 % и 51,2 % соответственно, относительно исходного уровня. В ткани почек - на 48,1 % - 60,8 %. В сыворотке крови концентрация микроэлемента после применения «ДАФС-25+Ферран» и «ДАФС-25+Ферранимал-75» повысилась на 81,4% и 79,7% соответственно, однако своих максимальных концентрация она достигает после использования «ДАФС-25+Суиферровит-А», где содержание селена, повысилось на 96,6%. В миокарде, скелетной мускулатуре, ткани головного мозга и легких, после введения изучаемых препаратов повысилась в 2 раза. При изучении содержания железа после введения комплексов препаратов «ДАФС-25+Ферран», «ДАФС-25+Ферранимал-75» и «ДАФС-25+СуиферровитА» было установлено следующее (таблица 8). Таблица 8 – Содержание железа (мкг/г) в сыворотке крови и тканях внутренних органов поросят после комплексного введения препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и ДАФС-25 Ткань Контроль ДАФС-25 ДАФС-25 и ДАФС-25 и ДАФС-25 и Феррана Ферранимал-75 Суиферровит-А Печень Почки Сердце Легкие Желудок Селезенка Тонкий кишечник 4,27±0,66 1,92±0,73 2,81±0,74 1,10±0,33 1,71±0,66 3,33±0,41 1,23±0,27 4,89±0,33 1,84±0,41 2,95±0,63 1,07±0,27 1,53±0,41 3,52±0,52 1,82±0,50 10,04±0,51* 8,52±0,21* 9,05±0,31* 6,14±0,42* 8,06±0,58* 11,63±0,06* 5,74±0,31* 10,85±0,36* 7,63±0,40* 10,01±1,00* 6,94±0,57* 7,93±0,40* 10,69±0,53* 5,05±0,73* 9,94±0,06* 8,39±0,18* 9,83±0,59* 6,73±0,67* 9,00±1,00* 9,95±0,59* 6,51±0,39* Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05 20 Содержание железа в печени поросят, после введения «ДАФС25+Ферран», «ДАФС-25+Ферранимал-75» и «ДАФС-25+Суиферровит-А» повысилось в 2,4 раза, 2,5 раза и 2,3 раза, в почках – 4,4; 4,0 и 4,4 раз, в сердечной мышце – в 3,2; 3,6 и 3,5 раз, в легочной ткани – 5,6; 6,3 и 6,1 раз, в стенке желудка – в 4,7; 4,6 и 5,3 раз, в ткани селезенки – 3,5; 3,2 и 3,0 раз и в стенке тонкого отдела кишечника в – 4,7; 4,1 и 5,3 раз, соответственно относительно контроля. При изучении динамики накопления и распределения микроэлементов в организме крыс была установлена аналогичная картина. 3.5. Накопление селена и состояние процессов перекисного окисления липидов в организме пресноводных рыб при применении ДАФС-25 Исследования проведены на 13 видах рыб обитающих в искусственных прудах и на воле. В автореферате приведены только 4 вида рыб (таблица 9). При кормлении рыб в течение 7 дней использовали корма, содержащие различные дозы ДАФС25. Таблица 9 – Концентрация селена, (мкг/г), в тканях различных видов рыб при введении в рацион ДАФС-25 в дозах от 0,02 до 0,2 мг/кг корма Контроль Доза ДАФС-25 Наименование органа 0,02 0,05 0,1 0,2 Карась Жабры 0,113±0,009 0,132±0,022* 0,155±0,023* 0,163±0,025* 0,189±0,013* Кишечник 0,096±0,010 0,113±0,010 0,134±0,019* 0,139±0,013* 0,156±0,025* Гонады 0,136±0,019 0,139±0,022 0,158±0,027* 0,171±0,009* 0,201±0,029* Мышцы 0,103±0,013 0,119±0,014 0,139±0,017* 0,172±0,015* 0,195±0,010* Печень 0,124±0,020 0,130±0,019 0,172±0,023* 0,188±0,021* 0,213±0,031* Карп Жабры 0,121±0,016 0,137±0,026 0,162±0,024* 0,176±0,020* 0,221±0,019* Кишечник 0,118±0,020 0,124±0,014 0,137±0,013* 0,143±0,015* 0,156±0,017* Гонады 0,133±0,014 0,141±0,015 0,142±0,022 0,141±0,011* 0,214±0,008* Мышцы 0,112±0,012 0,149±0,017* 0,158±0,018* 0,169±0,016* 0,193±0,020* Печень 0,130±0,013 0,157±0,020 0,167±0,021* 0,174±0,013* 0,196±0,016* Толстолобик Жабры 0,130±0,023 0,145±0,023 0,154±0,023* 0,176±0,007* 0,219±0,024* Кишечник 0,124±0,019 0,137±0,018 0,148±0,016* 0,180±0,013* 0,198±0,017* Гонады 0,141±0,033 0,139±0,016 0,157±0,010* 0,194±0,021* 0,225±0,023* Мышцы 0,100±0,016 0,114±0,013 0,128±0,015* 0,168±0,013* 0,206±0,019* Печень 0,126±0,018 0,117±0,017 0,136±0,021 0,169±0,009* 0,210±0,022* Линь Жабры 0,102±0,011 0,116±0,003 0,163±0,020* 0,170±0,020* 0,200±0,012* Кишечник 0,098±0,016 0,100±0,016 0,119±0,013 0,147±0,022* 0,198±0,013* Гонады 0,118±0,025 0,136±0,023 0,149±0,011* 0,198±0,019* 0,227±0,021* Мышцы 0,108±0,023 0,122±0,019 0,162±0,017* 0,190±0,015* 0,206±0,015* Печень 0,126±0,019 0,148±0,018 0,157±0,013* 0,198±0,016* 0,200±0,014* Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05 21 Установлено, что у контрольных рыб наибольшее количество селена установлено в организме карпа (0,123±0,015 мкг/г) и толстолобика (0,124±0,022 мкг/г). Содержание селена в организме рыб дозозависимо увеличивается. Наибольшее накопление микроэлемента происходит в жабрах что, повидимому, связано с интенсивным кровообращением данного органа. В кишечнике всех исследованных видов рыб содержание селена при увеличении дозы возрастает. В гонадах при содержании рыб на рационе с ДАФС-25 в дозах 0,02 мг/кг, 0,05 мг/кг 0,1 мг/кг и 0,2 мг/кг концентрация микроэлемента у карася увеличилась на 2,2%; 16,2%; 25,7% и 47,8%, у карпа на 6,0%; 6,8%; 6,0% и 60,9%, у линя на 15,3%; 26,3%; 67,8% и 92,4% соответственно. Коэффициент корреляции составил 0,99; 0,91 и 0,97 соответственно (р≤0,05). В гонадах толстолобика содержание селена остается примерно на одном уровне при добавлении препарата в интервале от 0,02 до 0,05 мг/кг. Далее концентрация повышается и достигает своего максимального значения при дозе 0,2 мг/кг. Нами изучена активность процессов перекисного окисления липидов в организме рыб до и после кормления кормами с селенсодержащим препаратом ДАФС-25 в дозах 0,02 мг/кг, 0,05 мг/кг, 0,1 мг/кг и 0,2 мг/кг. Результаты исследований представлены в таблице 10. Таблица 10 – Концентрация малонового диальдегида, (нмоль/г), в тканях рыб Наименование Наименование вида органа Контроль 0,02 0,05 0,1 0,2 Карась Жабры 26,07±1,33 24,32±2,13 25,34±1,62 24,56±1,83 23,84±1,64 Печень 25,90±2,00 23,67±1,12 23,01±1,06 23,91±2,01 22,18±1,66* Мышцы 24,83±1,87 22,14±0,97 22,31±1,04* 22,52±1,79 21,89±1,04 Кишечник 24,56±2,36 23,41±1,00 23,60±1,65 23,06±2,13 22,98±0,86 Карп Жабры 28,89±1,70 27,13±0,98 27,78±1,74 26,95±1,84 26,82±1,56 Печень 30,04±2,16 28,96±1,26 26,96±0,79* 26,09±0,76* 25,81±1,80* Мышцы 27,81±2,75 25,71±2,01 24,98±1,43* 24,75±2,03* 23,90±1,00* Кишечник 28,04±1,06 26,70±1,85 25,81±1,83* 24,73±1,75* 23,76±0,96* Толстолобик Жабры 30,72±1,83 28,94±1,73 28,57±1,70 27,98±1,59* 27,01±1,79* Печень 31,13±0,95 30,84±2,16 29,86±1,46 28,74±1,70* 27,98±1,62* Мышцы 29,85±1,76 28,21±2,36 27,81±1,64 27,94±0,66 27,04±1,08 Кишечник 28,99±1,79 28,85±1,97 27,95±0,98 28,00±1,00 27,58±1,76 Линь Жабры 27,61±1,62 27,96±1,32 26,74±1,82 25,06±1,23 24,14±1,11* Печень 29,75±2,13 28,63±1,98 27,00±1,64* 26,65±1,06 25,74±2,01* Мышцы 26,60±1,05 25,86±0,83 25,13±1,73 24,96±1,27 24,24±1,50 Кишечник 25,98±0,68 24,81±1,00 24,33±1,66 24,41±1,84 23,90±1,31 Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05 Установлено, что концентрация малонового диальдегида в ткани печени карася понижается на 8,3 % ... 16,8 %; карпа – 15,1% … 16,4 %; линя –11,6 % 22 … 15,6 % соответственно, при введении в рацион ДАФС-25 в дозах 0,1 мг/кг и 0,2 мг/кг (таблица 10). В мышечной ткани установлено одна из самых низких концентраций МДА. По содержанию МДА в организме исследованные виды рыб можно расположить в следующем порядке (по возрастанию): карась> линь> карп> толстолобик. Учитывая важную роль в деятельности организма фермента каталазы нами проведены исследования по изучению ее активности в организме рыб. Результаты проведены в таблице 11. Таблица 11 – Концентрация каталазы, (ммоль/л), в тканях рыб Наименование вида Контроль 0,02 0,05 0,1 0,2 Карась Жабры 42,30±2,89 61,95±3,00* 70,33±3,41* 69,83±2,86* 79,00±1,63* Печень 43,16±2,91 72,71±2,66* 71,63±2,72* 60,66±2,81* 59,59±2,13* Мышцы 38,95±1,72 67,08±1,78* 76,55±2,53* 76,15±2,06* 75,14±2,00* Кишечник 37,98±2,00 66,84±2,01* 65,80±1,56* 75,00±1,69* 74,86±1,70* Карп Жабры 43,76±2,59 62,81±1,69* 62,01±2,43* 69,30±2,48* 66,68±3,00* Печень 43,00±1,05 61,96±2,03* 60,59±1,63* 60,01±1,86* 69,53±2,13* Мышцы 40,26±0,93 69,60±1,95* 69,03±0,97* 65,73±2,63* 77,94±1,46* Кишечник 39,95±1,53 68,55±0,62* 68,41±2,00* 67,80±1,96* 76,00±1,80* Толстолобик Жабры 46,85±1,67 65,87±3,29* 64,95±3,13* 72,92±1,53* 62,95±1,86* Печень 47,21±2,81 70,25±3,01* 65,82±3,13* 65,92±2,97* 73,80±2,07* Мышцы 44,61±2,00 63,91±2,85* 73,01±1,73* 63,98±1,06* 65,63±1,84* Кишечник 43,99±1,33 63,03±1,99* 68,00±1,05* 72,84±2,75* 61,33±0,86* Линь Жабры 44,91±1,74 63,67±3,84* 62,90±1,84* 72,36±1,72* 69,75±1,73* Печень 43,96±2,06 72,98±1,04* 71,72±2,80* 69,42±3,00* 70,91±1,63* Мышцы 42,21±2,80 63,84±3,95* 69,00±1,86* 70,85±2,62* 71,89±1,04* Кишечник 42,83±1,98 64,45±1,73* 69,95±2,57* 79,25±1,06* 69,92±1,33* Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05 Наименование органа Установлено, что ДАФС-25 повышает активность фермента каталазы (таблица 11), тем самым ингибирует процессы перекисного окисления липидов. Наивысшая активность фермента, у контрольных животных установлена в печени, а самая низкая – в кишечнике. После скармливания препарата ДАФС-25 с кормом, в дозах 0,02 мг/кг, 0,05 мг/кг, 0,1 мг/кг и 0,2 мг/кг активность каталазы в жаберных лепестках карася повышается соответственно дозам на 46,5 %, 66,3 %, 65,1 % и 86,8 %; карпа – 43,5 %, 41,9 %, 58,4 % и 52,4 %; толстолобика – 40,6 %, 38,6 %, 55,6 % и 34,4 %; линя – 41,8 %, 40,1 %, 61,1 % и 55,3 %. Активность каталазы в кишечнике карася колеблется в интервале от 65,80 ммоль/л до 75,00 ммоль/л; карпа – от 67,80 ммоль/л до 76,00 ммоль/л; толстолобика от 63,03 ммоль/л до 72,84 ммоль/л и линя от 64,45 ммоль/л до 79,25 ммоль/л. 23 Процессы перекисного окисления липидов в организме разных видов рыб протекают с неодинаковой интенсивностью. Самое низкое содержание малонового диальдегида в организме изучаемых видов рыб определено у сеголеток, а самое высокое – у трёхгодовиков. Высокие уровни МДА установлены в тканях жабр и печени. Уровень активности каталазы также подвержен возрастным колебаниям, повышается с возрастом и зависит от протекания процесса ПОЛ. Самая высокая активность фермента зафиксирована в жабрах и печени, что в свою очередь связано с функциональной ролью данных органов. 3.6. Содержание белка и его фракций у млекопитающих при внутримышечном введении в их организм ДАФС-25 на фоне действия препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А Исследования проведены на 12-ти трёхсуточных суточных поросятах и 24-х половозрелых белых крысах. Препараты вводили внутримышечно в дозах 70 мг/железа/кг массы тела (Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А) и 0,2 мг/кг массы тела (ДАФС-25) крысам и 100 мг/железа/кг массы тела (Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А) и 0,2 мг/кг массы тела (ДАФС-25) поросятам. Результаты приведены на рисунке 5. Установлено, что последовательное введение Феррана и ДАФС-25 в организм животных вызывает повышение уровня общего белка повысился на 27,4 %, альбуминов – на 11,8 %, глобулинов – на 22,7 % (α-глобулинов – на 14,1 %, β-глобулинов – на 8,8 % и γ-глобулинов – на 23,0 %), относительно контрольных значений (рисунок 5). Рисунок 5 – Содержание общего белка, его фракций (α, β, γ) в сыворотке крови поросят через 10 дней после введения препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и ДАФС-25 При введении ДАФС-25 и Ферранимала-75 в сыворотке крови повышается общий белок – на 29,6%, альбумины – на 15,8%, глобулины – на 20,9% (α-глобулины – на 16,1%, β-глобулины – на 7,3% и γ-глобулины – на 27,3%). 24 После введения препаратов ДАФС-25 и Суиферровит-А уровень общего белка повышается на 29,0%, концентрация глобулинов на 15,2%, глобулинов – на 22,1% Возрастание уровня белка в сыворотке крови поросят после применения новых обогащенных железосодержащих соединений можно объяснить наличием в их составе водорастворимых витаминов B6 и В12 которые активизируют процессы биологического синтеза белка. Наши результаты согласуются с сообщениями других авторов, что широкий спектр макро- и микроэлементов повышает в организме содержание общего белка и усиливает защитные свойства организма (Савинков А.В. Влияние препарата «Силимикс» на показатели белкового и углеводного обменов в период технологических перегруппировок // Ветеринарная патология. – 2011. – №3. – С.70 – 73.). 3.7. Изучение влияния препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А на обмен железа в организме поросят При изучении влияния препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А на организм целевых животных были использованы 48 поросят в возрасте 3 суток. Средняя масса поросенка составила 1,51±0,06 кг. Препараты вводили в дозах 20, 30, 70, 130 и 200 мг/железа/кг массы тела (по ДВ). Установлено, что уровень сывороточного железа (СЖ) у контрольных животных составляет 32,43±3,04 мкмоль/л, препарат Ферран вызвал повышение уровень СЖ на 33,55 %, 35,71 %, 38,79 %, 40,02 % и 39,75 % относительно контроля (р≤0,05). При этом общая железосвязывающая способность сыворотки крови повысилась на 6,14 – 9,77 % (58,32±2,65…60,67±2,78 мкмоль/л), относительно контроля (54,74±3,01мкмоль/л), при р≤0,05. Уровень трансферрина увеличился на 20,07 – 36,26 %. Коэффициент насыщения трансферрина – 73 – 76 %. На введение препарата Ферранимал-75, в дозах 30 и 70 мг, организм поросят отвечает повышением ненасыщенной железосвязывающей способности сыворотки крови (НЖСС) до 22,45±1,45 мкмоль/л (+ 14,43%) и 22,87±1,04 мкмоль/л (+ 19,05%), при норме - 19,21±1,01 мкмоль/л. Ферранимал75 в дозе 200 мг/железа/кг массы тела вызывает возрастание уровня НЖСС до 24,01±2,65 мкмоль/л, что на 20% выше контроля (р≤0,05). Суиферровит-А в зависимости от дозы (20 – 200 мг/железа на кг массы тела) вызывает повышение НЖСС крови от 25,45±2,76 до 26,32±3,01 мкмоль/л, трансферрина - от 32,94±2,12 до 35,43±2,04 мкмоль/л, ОЖСС - от 58,03±2,87до 59,87±3,32 мкмоль/л, (р≤0,05). 3.8. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А на рост и развитие поросят Клинические испытания проведены на 70 поросятах – сосунах трёхдневного возраста. Препараты задавали в дозе 100 мг/кг массы тела через каждые 10 дней до 4-х месячного возраста. Результаты исследований представлены в таблице 12. 25 № п/п 1 2 3 4 5 Таблица 12 – Влияние препаратов железа на динамику живой массы поросят, (кг) при внутримышечном введении препаратов в дозе 100 мг/железа/кг массы тела (по ДВ) Сроки исследования Препараты Ферран Суиферровит-А Ферранимал-75 Новорожденные 1,360±0,05 1,355±0,04 1,357±0,05 Отъемыши 8,15±0,028* 8,18±0,03 8,13±0,02 2 месячные 16,83±0,01 16,82±0,02 16,59±0,01 4 месячные 42,18±0,17 42,17±0,15 42,10±0,15 Среднесуточный 0,352±0,007 0,351±0,008 0,351±0,007 прирост Примечание: M ± m − среднее значение и его ошибка Установлено, что поросята во всех группах развивались с одинаковой интенсивностью. При рождении масса поросенка составляла 1,360±0,05 кг. К двум месяцам этот показатель вырос до 16,59±0,01 - 16,83±0,01 кг. Среднесуточные привесы во всех исследуемых группах находились примерно на одном уровне (0,351±0,008 – 0,352±0,007 кг). Влияние изучаемых препаратов на морфофизиологические параметры свиней представлено в таблице 13. № п/п 1 2 3 4 5 6 Таблица 13 – Влияние препаратов железа на морфофизиологические показатели свиней в 4 месячном возрасте Морфофизиологические Используемые препараты параметры Ферран Суиферровит-А Ферранимал-75 Длина туловища, см 82,7±0,12 82,2±0,10 82,6±0,16 Высота в крестце, см 49,6±0,17 49,3±0,19 49,5±0,15 Высота в холке, см 44,7±0,12 44,4±0,14 43,9±0,13 Обхват груди, см 72,1±0,13 72,1±0,12 72,1±0,18 Полуобхват зада ,см 49,5±0,11 48,6±0,20 48,8±0,16 Индекс сбитости, % 87,11 87,62 87,19 Примечание: M ± m − среднее значение и его ошибка Полученные результаты (таблица 13) свидетельствуют, что все железосодержащие препараты оказывают примерно одинаковое влияние на рост и развитие поросят. 4. ВЫВОДЫ 1. Интенсивность процессов ПОЛ в организме диких животных неодинакова и зависит от трофического уровня животного. Чем выше трофический уровень, тем ниже интенсивность ПОЛ и активность АОС. Среднее содержание МДА в организме полевки обыкновенной составляет 7,82±0,08 нмоль/г (скелетная мускулатура) – 15,83±0,95 нмоль/г (печени); зайца русака - 7,92±0,42 нмоль/г (стенка толстого отдела кишечника) - 16,41±1,03 нмоль/г (печень); волка обыкновенного – 8,55±0,62 нмоль/г (миокард) – 10,45±0,42 нмоль/г (печень); сыча воробьиного - 6,16±0,45 нмоль/г (скелетные мышцы) – 12,83±0,11 нмоль/г (миокард). Средняя активность каталазы в организме полевки обыкновенной составила - 20,69±0,53 ммоль/л (стенка тонкого отдела кишечника) … 26 75,73±2,05 ммоль/л (печень); зайца русака – 37,05±1,08 ммоль/л (скелетная мускулатура) … 69,75±2,81 ммоль/л (печень); волка обыкновенного 25,45±0,49 ммоль/л (миокард) … 33,05±0,89 ммоль/л (печень); сыча воробьиного - 33,15±1,33(миокард) … 98,54±2,12 ммоль/л (печень). В организме полёвки обыкновенной наибольшее количество селена, определено в почках и печени, а наименьшее – в сердечной мышце. Высокое содержание селена, установлено также в печени и почках зайца, а низкие в стенке пищевода и внутреннем жире. Концентрация микроэлемента в ткани печени волка составляет 0,059±0,004 мкг/г, в ткани почек – 0,053±0,002 мкг/г. Наименьшая концентрация - в миокарде – 0,035±0,003 мкг/г. Фоновые показатели содержания селена в степной растительности составляют от 0,031 ± 0,002 мкг/г (тонконог гребенчатый) до 0,051 ± 0, 003 мкг/г (полынь австрийская). 2. Фармакокинетика Феррана при однократном внутримышечном введении в дозе 200 мг/железа/кг массы тела характеризуется: полная площадь под кривой (AUC, (мкг·ч)/мл) – 164,66±2,12; клиренс (СL, л/ч) – 0,008±0,0007; среднее время удержания препарата в организме (MRT, ч) – 26,24±5,02; период полуэлиминации (Т1/2, ч) – 154±3,2; ДАФС-25 при однократном подкожном введении в дозе 0,4 мг/кг: полная площадь под кривой (AUC, (мкг·ч)/мл) – 37,284±2,12; клиренс (СL, л/ч) – 0,0636±0,003; среднее время удержания препарата в организме (MRT, ч) – 52,5±4,02; период полуэлиминации (Т1/2, ч) – 19,6±3,3. 3. Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А в дозах от 20 до 200 мг/железа кг массы тела (по ДВ) повышает концентрацию диеновых коньюгатов в организме поросят на 1,9% – 26,4%; 6,3% – 27,1% и 3,6% – 39,0% соответственно, относительно контроля (9,15±0,48 мкмоль/мл). Препараты Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А при внутримышечном введении в дозах 20, 30,70, 130 и 200 мг/железа/кг и последующим подкожным введением ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг массы тела повышают уровень ДК в сыворотке крови поросят на 3,5…18,6%, 3,6…18,4% и 6,4…13,2% относительно контроля. 4. Концентрация малонового диальдегида в тканях внутренних органов белых крыс после внутримышечного введения препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А в среднем повышается на 1,1% – 31,5%, 6,5% –32,5% и 7,6% – 34,5% соответственно относительно контрольных значений. Наибольшее накопление МДА происходит в тканях печени и головного мозга. После последовательного введения ДАФС-25 и Ферран, ДАФС-25 и Ферранимал-75, ДАФС-25 и Суиферровит-А максимальное накопление МДА происходит в скелетной мускулатуре. После введения препарата ДАФС-25 уровень МДА в сыворотке крови поросят понизился на 21,9 % , после введения ДАФС-25 и Ферран – на 8,3 %, ДАФС-25 и Ферранимал-75 – на 2,4 %. В ткани головного мозга уровень МДА снизился на 26,3 % (после введения ДАФС-25); на 12,9 % (ДАФС-25 и Ферран); на 9,1 % (ДАФС-25 и Ферранимал-75) и 13,5 % (ДАФС-25 и Суиферровит-А). В 27 ткани почек концентрация МДА понизилась на 0,87 – 6,7 %, после применения ДАФС-25 - на 20,9 %, в печени – на 17,8 % после введения ДАФС-25. 4.1. В норме уровень МДА в тканях рыб зависит от возраста. Самое низкое содержание малонового диальдегида в организме изучаемых видов рыб установлено у сеголеток, а самое высокое – у трёхгодовиков. При внутреннем введении с кормом препарата ДАФС-25 в дозах 0,02, 0,05, 0,1 и 0,2 мг/кг корма, наивысшая концентрация МДА установлена в жабрах и печени, а низкая в кишечнике. По средней величине содержания МДА в организме, до и после применения ДАФС-25, все виды рыб располагаются в следующем порядке: карась> линь> карп> толстолобик. 5. После введения ДАФС-25 все исследуемые ткани и органы поросят по возрастанию активности каталазы располагаются в следующем порядке: головной мозг> тонкий кишечник> толстый кишечник> желудок> сыворотка крови> сердце> скелетные мышцы> легкие> почки> печень. После внутримышечного введения поросятам «ДАФС-25 + Ферран», «ДАФС-25 + Ферранимал-75» и «ДАФС-25 + Суиферровит-А» активность каталазы в сыворотке крови повышается на 15,2%, 25,7% и 19,2%; в головном мозге – 39,9%; 57,0% и 37,4%; в легких – 12,8%, 20,5% и 14,6%; в почках – 19,6%, 18,5% и 20,1%; в печени – 21,0%; 22,5% и 24,4%; в сердечной мышце – 33,9%, 42,6% и 27,3%; в скелетной мускулатуре – 14,6%, 11,4% и 7,8%; в стенке толстого отдела кишечника – 48,7%, 14,3% и 17,0%; в стенке тонкого отдела кишечника – 15,4%, 9,6% и 8,9%; в стенке желудка – 8,8%, 15,0% и 10,2% соответственно. 6. После подкожного введения ДАФС-25 поросятам в дозе 0,2 мг/кг, по величине содержания селена ткани, и органы располагаются в следующем порядке: головной мозг > печень> почки > тонкий кишечник > легкие > желудок > толстый кишечник > скелетные мышцы. После внутримышечного введения железосодержащих соединений по величине содержания железа органы располагаются в следующем порядке: печень> селезенка> сердце > почки> желудок> ткань тонкого отдела кишечника, а при сочетанном применении железа и селенсодержащих препаратов концентрация селена и железа во всех органах и тканях повышается в 2,5 – 5 раз и 0,5 – 2 раза соответственно, относительно контроля. 6.1. При введении в организм разных видов рыб (карась, карп, толстолобик, линь) препарата ДАФС-25 с кормом в дозе 0,2 мг/кг корма достоверно повышается концентрация селена в тканях организма по сравнению с контролем. Наибольшее накопление селена у рыб установлено в печени, гонадах и чешуе, а наименьшее – в тканях кишечника и скелетных мышцах, при фоновых показателях микроэлемента в воде прудов от 0,079±0,005 до 0,095±0,006 мкг/мл. 7. Функциональная система, обеспечивающая постоянство белкового состава крови на введение препаратов Ферран, Ферранимал-75 и СуиферровитА отвечает увеличением общего белка в сыворотке крови на 11,2 – 22,3%, 12,7 – 21,6% и 11,3 – 17,2%, альбуминов на 21,1 – 24,7%, 21,9 – 32,9% и 3,3 – 13,9% 28 и глобулинов на 5,9 – 11,9%, 1,4 – 11,4% и 6,1 – 8,6% соответственно. Повышение концентрации белка в сыворотке крови имеет дозозависимый характер. Совместное применение ДАФС-25 и Феррана, ДАФС-25 и Ферранимал-75, ДАФС-25 и Суиферровит-А содержание общего белка в сыворотке крови повышается на 22,8%, 22,4% и 22,6% соответственно, глобулиновые фракции белков возрастают на 62% 16,6%, 17,1 и 15,7%, что указывает на повышение общей резистентности организма. 8. Ферран в дозах 20, 30, 70, 130 и 200 мг/железа/кг массы тела повышает в крови поросят уровень СЖ на 33,55%, 35,71%, 38,79%, 40,02% и 39,75% соответственно, ОЖС на 6,14 – 9,77%, уровень трансферрина на 20,07 – 36,26%. КНТ в среднем составил – 73 – 76%. Ферранимал-75 повышает НЖСС на 14,43% … 20%, ОСЖ – 6,0%...9,4%, СЖ – 7,5%...11,1%, трансферрин – 15,4%...24,14% относительно контроля. Суиферровит-А увеличивает НЖСС в среднем на 7,11 мкмоль/л. Уровень трансферрина возрос на 6,89 г/л. ОЖСС увеличилась на 5,04 мкмоль/л. 9. Однократное внутримышечное введение препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А в дозе 70 мг/железа/кг массы тела повышает среднесуточные приросты на 191,3 г, 189,8 г и 204,1 г; сохранность поросят на 91,67%, 90,91% и 90,00% соответственно. Ферран, Ферранимала-75 и Суиферровита-А в дозе 100 мг/железа/кг массы тела обеспечивают среднесуточные приросты поросят на уровне 338,0 г, 363,0 г и 367,0 г соответственно. 5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. На основании анализа и обобщения экспериментальных данных, апробации их в производственных условиях для нормализации обменных процессов и повышения среднесуточных приростов предлагаем использовать препараты Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А в дозе 100 мг/железа/кг массы тела (по ДВ). 2. Для ингибирования процессов перекисного окисления липидов, в организме поросят, рекомендуется вводить сочетано ДАФС-25 в дозе 0,2мг/кг массы тела и Ферран, ДАФС-25 и Ферранимал-75 в дозе 100 мг/железа/кг массы тела. 3. ДАФС-25, в дозе 0,2 мг/кг, рекомендуется в рыбоводческих хозяйствах с целью обогащения селеном рыбоводческой продукции, а также с целью повышения продуктивности товарной рыбы. 4. С целью нормализации обмена белка и обмена железа, в организме поросят, рекомендуется вводить препараты ДАФС-25, в дозе 0,2 мг/кг массы тела или препараты Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А в дозе 100 мг/железа/кг массы тела. 5. По материалам диссертации подготовлены методические рекомендации «Анемия животных, её лечение и профилактика», которые используются в учебном процессе в ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины» и ФГБОУ ВО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова». 29 6. Результаты исследований внедрены в производство в КФК «Садоян», КФК «Демидова», ООО «Возрождение» Саратовской области. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Кутепов А.Ю. Влияние ДАФС-25 на биологическую обеспеченность овец селеном / А.Ю. Кутепов, Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, О.И. Бирюков, И.Ю. Кутепова// Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Сб. мат. Международной науч.-практ. конф. – Саратов: ИЦ «Наука», 2010 – С. 36 – 37. 2. Пудовкин, Н.А. Влияние токсических доз ДАФС-25 на антиоксидантную систему защиты организма /Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Сб. мат. Международной науч.-практ. конф. – Саратов: ИЦ «Наука», 2010 – С. 60 – 64. 3. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата ферран на процессы перекисного окисления липидов у белых крыс /Н.А.Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства: Сб. мат. Межрегион науч.-практ. конф. – Самара, 2010. – С. 254 – 257. 4. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на процессы перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы защиты организма белых крыс при хронической интоксикации / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вопросы нормативно – правового регулирования в ветеринарии. – 2010. - №4. – С.100 – 102. 5. Поперечнева, Т.Ю. Физиологическое и токсическое влияние различных доз ДАФС-25 на антиоксидантную систему защиты организма белых крыс / Т.Ю. Поперечнева, Н.А. Пудовкин, И.Ю. Кутепова // Вопросы нормативно – правового регулирования в ветеринарии. – 2010. №4. – С.110 – 113. 6. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на процессы перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы защиты организма белых крыс / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. – 2010. - №12. – С. 32 – 35. 7. Пудовкин, Н.А. Ферментативная активность антиоксидантная системы при применении препарата Ферран / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова, А.А. Сазонов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2011. – Т.208. – С. 119 – 123. 8. Пудовкин, Н.А. Фармакокинетические параметры препарата Ферран / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. – 2011. - №8. – С. 20 – 23. 30 9. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на белковый обмен животных / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вестник ветеринарии. – 2011. - №59 (4/2011). – С. 146 – 148. 10. Пудовкин, Н.А. Ферментативная антиоксидантная активность, как критерий оценки эффективности применения железосодержащего препарата / Н.А. Пудовкин // Вестник ветеринарии. – 2011. - №59 (4/2011). – С. 148 – 150. 11. Пудовкин, Н.А. Кинетика продуктов обмена железа и процессов перекисного окисления липидов при введении в организм железосодержащего препарата / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вестник Оренбургского государственного университета. – 2011. - №15 (134). – С. 107 – 110. 12. Пудовкин, Н.А. Динамика накопления и распределения селена в органах и тканях кроликов при введении селенсодержащих препаратов / Н.А. Пудовкин, Д.А. Чебанов // Аграрная наука – основа успешного развития АПК и сохранения экосистем: Сб. мат. Международной науч.- практ. конф. – Волгоград: Изд-во «Волгоградский ГАУ», 2012. – Т.2. – С. 196 – 198. 13. Пудовкин, Н.А. Коррекция селенового статуса кроликов, обусловленная биогеохимическими особенностями Саратовского Заволжья / Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов, Д.А. Чебанов // Ветеринария сельскохозяйственных животных. – 2012. - №3. – С. 45 – 48. 14. Пудовкин, Н.А. Особенности динамики трансфераз сыворотки крови при применении препарата Ферран / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев // Мат. II Междунар. конгресса ветеринарных фармакологов и токсикологов, посвященного восьмидесятилетию заслуженного деятеля науки РФ, профессора Соколова В.Д. – СПб.: Изд-во «ФГБОУ ВПО СПбГАВМ», 2012. – С.225 – 227. 15. Панфилова, М.Н. Коррекция селенового статуса животных диацетофенонилселенидом / М.Н. Панфилова, Т.Ю. Поперечнева, Н.А. Пудовкин. - Саратов: Формат. – 2012. – 200с. 16. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на обмен железа лабораторных животных / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. – 2012. - №7. – С. 41 – 43. 17. Пудовкин, Н.А. Ферран и его влияние на некоторые показатели белкового обмена / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Ветеринария сельскохозяйственных животных. – 2012. - №8. – С. 47 – 49. 18. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на обмен железа в организме кроликов / Н.А. Пудовкин // Ученые записки учреждения образования «Витебская государственная академия ветеринарной медицины. – Т.47. – В.2. – Ч.1. – С. 195 – 196. 19. Кутепов, А.Ю. Селен в агроэкосистеме Романовского района Саратовской области / А.Ю. Кутепов, Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова, Л.В. Константинова // Российский журнал «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». – 2012. - №2 (8). – С.69 – 71. 31 20. Пудовкин, Н.А. Экологическое обоснование и комплексные приемы коррекции эссенциальных микроэлементов в системе почварастение – животное / Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Российский журнал «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». – 2012. - №2 (8). – С.67 – 69. 21. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Суйферровит –А на процессы перекисного окисления липидов в организме кроликов / Н.А. Пудовкин // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2013. – Т.213. – С. 220 – 225. 22. Пудовкин, Н.А. Биологические аспекты перекисного окисления липидов в организме щуки обыкновенной / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2013. – Т.213. – С. 225 – 229. 23. Кутепов, А.Ю. Селен в наземных компонентах экосистеме Саратовской области / А.Ю.Кутепов, Н.А. Пудовкин, И.Ю. Кутепова // Современные проблемы геологии, географии и геоэкологии: Сб. мат. Всероссийской науч.- практ. конф. – Махачкала: Изд-во «АЛЕФ», 2013. – С. 261 – 263. 24. Мубаракшин, Р.Ш. Корреляционная связь железа в почвах и растениях экологических сообществ г. Саратова / Р.Ш. Мубаракшин, Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов. И.Ю. Кутепова // Интеграция науки и производства стратегия устойчивого развития АПК России в ВТО: Сб. мат. Международной науч.- практ. конф. – Волгоград: Изд-во «Волгоградский ГАУ», 2013. – Т.2. – С. 35 – 38. 25. Пудовкин, Н.А. Особенности функционирования антиоксидантной системы Волка обыкновенного (Canis Lupus, Linnaeus, 1758) / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев // Биология – наука 21 века: 17-я Междунар. Пущинская школаконференция молодых ученых. – Пущино, 2013. – С. 145 – 146. 26. Пудовкин, Н.А. Состояние окислительно-антиоксидантной системы у пресноводных рыб / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев, А.Ю. Кутепов. И.Ю. Кутепова // Вестник ветеринарии. – 2013. - №65 (2/2013). – С. 53 – 56. 27. Пудовкин, Н.А. Молекулярные биомаркеры антиоксидантной системы семейства карповых рыб бассейна реки Волга Саратовской области / Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов. И.Ю. Кутепова // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. – 2013. - №6. – С. 39 – 41. 28. Пудовкин, Н.А. Особенности процессов перекисного окисления липидов в организме сыча воробьиного (Glaudium Passerinum, L.,1758) / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев // Биология – наука 21 века: 18-я Междунар. Пущинская школа-конференция молодых ученых. – Пущино, 2014. – С. 154 – 155. 32 29. Пудовкин, Н.А. Влияние железосодержащих препаратов на морфофизиологические показатели растущих свиней / Н.А. Пудовкин // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2014. – Т.217. – С. 221 – 224. 30. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Суиферровит-А на динамику распределения и накопления железа / Н.А. Пудовкин // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2014. – Т.217. – С. 224 – 227. 31. Пудовкин, Н.А. Особенности антиоксидантной защиты организма свиней в онтогенезе / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев, Е.Н. Зеленцова // Вестник ветеринарии. – 2014. - №69 (2/2014). – С. 63 – 66. 32. Vasilev V., Food quality pond carp at use diet selenium-containing preporat Selenolin / V. Vasilev, D. Krivenko, N.Pudovkin // British Journal of Science, Education and Cultire. - 2014. - London University Press. - №1(5). - Р. 224-228. 33. Пудовкин, Н.А. Особенности накопления и распределения селена в воде, донных отложениях и макрофитах Бассейна Средней Волги / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев // Вестник Тамбовского государственного университета (серия Естественные науки), 2014. – Т.19. – В.5. – С.1721 – 1723. 34. Пудовкин, Н.А. Перекисное окисление липидов в организме рыб // Н.А. Пудовкин, Т.В. Гарипов // Вестник ветеринарии. – 2014. - №71 (4/2014). – С. 50 – 52. 35. Пудовкин, Н.А. Обмен железа в организме поросят и пути его коррекции /Н.А. Пудовкин, Т.В. Гарипов, П.В. Смутнев // Вестник Алтайского государственного аграрного университета, 2015. - №2. – С.49 – 54. 36. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Суиферровит-А на некоторые показатели белкового обмена/ Н.А. Пудовкин, Т.В. Гарипов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2015. – Т.221. - №1. – С. 181 – 183. 37. Пудовкин, Н.А. Обмен железа в организме поросят и пути его коррекции / Н.А. Пудовкин, Т.В. Гарипов, П.В. Смутнев // Аграрный научный журнал. – 2015. - №6. – С. 32 - 34. 38. Pudovkin, N. The use of selenium-containing drugs in rabbit breeding as a way of enriching selenium rabbit meat / N.Pudovkin, P.Smutnev // Proceedings of the XIV International Academic Congress «Fundamental and Applied Studies in the Modern World». – 2015. - London Oxford University Press. – V. II. - Р. - 135-140. 39. Пудовкин, Н.А. Накопление и распределение селена в органах и тканях некоторых видов диких животных / Н.А. Пудовкин, Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Аграрный научный журнал. – 2015. - №9. – С. 29 - 31.