На правах рукописи - Казанская государственная академия

На правах рукописи
Пудовкин Николай Александрович
СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В ОРГАНИЗМЕ РАЗНЫХ
ВИДОВ ЖИВОТНЫХ И ПУТИ ИХ КОРРЕКЦИИ ЖЕЛЕЗО - И
СЕЛЕНСОДЕРЖАЩИМИ ПРЕПАРАТАМИ
03.03.01 – физиология
06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора биологических наук
Казань-2015
2
Работа выполнена в ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия
ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Научные консультанты:
Гарипов Талгат Валирахманович
доктор ветеринарных наук, профессор
Каримова Руфия Габдельхаевна
доктор биологических наук, доцент
Официальные оппоненты:
Алексеев Владислав Вениаминович - доктор
биологических наук, профессор кафедры «Биоэкология и
химия» ФГБОУ ВО «Чувашский государственный
педагогический университет имени И.Я. Яковлева»
Зайцев
Владимир
Владимирович
–
доктор
биологических
наук,
заведующий
кафедрой
«Биоэкология и физиология сельскохозяйственных
животных» ФГБОУ ВО «Самарская государственная
сельскохозяйственная академия»
Уразаев Дмитрий Николаевич – доктор ветеринарных
наук, профессор кафедры «Физиологии, фармакологии и
токсикологии им. А.Н. Голикова и И.Е. Мозгова»
ФГБОУ ВО «Московская государственная акдемия
ветеринарной медицины и биотехнологии – МВА имени
К.И. Скрябина»
Ведущая организация:
ФГБОУ
ВО
«Ульяновская
государственная
сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина
Защита состоится « »
20 г. в
часов на заседании диссертационного
совета Д-220.034.02 при ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной
медицины имени Н.Э.Баумана»
по адресу: 420074, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35, КГАВМ
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВО «Казанская государственная
академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана»
Автореферат разослан «
www.ksavm.senet.ru
»
Ученый секретарь диссертационного
совета доктор биологических наук,
профессор
2016 г. и размещен на сайтах www.vak.ed.gov.ru и
Р.Я. Гильмутдинов
3
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Биохимические процессы в тканях сопровождаются
образованием целого ряда реакционно-способных соединений кислорода,
которые являются продуктами метаболизма в клетках при оптимальных
условиях существования. Токсическое действие активных форм кислорода
предотвращается в результате функционирования антиоксидантной защиты,
которая обеспечивает физиологический уровень оксидантов в тканях. В
нормально функционирующем организме поддерживается определенное
равновесие окислительных процессов.
Усиление этих процессов и развитие состояния окислительного стресса
является одним из патогенетических звеньев микроэлементозов животных
(Дубинина Е.Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной
активности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические
и клинико-биохимические аспекты /Е.Е. Дубинина. – СПб.: Изд-во
Медицинская пресса, 2006. – С. 277 – 282.).
Известно, что дефицит железа и селена стимулирует увеличение
противовоспалительных цитотоксинов и активацию процессов перекисного
окисления липидов, что приводит к супрессии эритропоэза, повреждении
продукции эритропоэтина (Серебряная Н.Б. Исследование протективного
действия препарата ферровир при остром экспериментальном аллергическом
энцефаломиелите / Н.Б. Серебряная, М.Н. Карпенко, Ю.Л. Житнухин, Г.Н.
Бисага, И.Н. Абдурасулова // Цитокины и воспаление. – 2010. – Т.9. – №1. – С.
33 – 38.).
Из-за дефицита микроэлементов в компонентах окружающей среды
широко используются железо - и селенсодержащие соединения, которые часто
применяются без тщательной апробации на целевых животных.
В связи с этими особенностями протекания свободнорадикальных
процессов в организме разных видов животных, всестороннее изучение
фармакологических свойств железо- и селенсодержащих препаратов и их
влияния на состояние свободнорадикальных процессов системы организма
является актуальной задачей современной фармакологии и физиологии.
Степень разработанности темы. Теоретической базой для исследования
железо - и селенсодержащих препаратов послужили труды: В.В. Ермакова, В.В.
Ковальского (1974 – 1985), Н.А. Голубкиной, В.А. Тутельяна, (1993 – 2015),
Т.Н. Родионовой (1996 – 2015), А.Ю. Кутепова (2003 – 2013) и других ученых.
Препарат Суиферровит-А исследован Е.Б. Дунаевой (2009) на
серебристо-черных лисица с точки зрения влияния на качество волосяного
покрова и интенсивности роста и развития животных. О.П. Решетова (2011)
изучила токсические свойства препарата Суиферровит-А, установила влияние
препарата Суиферровит-А на морфологию крови поросят и качество
получаемой продукции.
В.А. Оробец, А.А. Сазонов, С.В. Новикова (2013) изучили препарат
Ферран с позиции антианемического действия на поросятах.
4
Препарат Ферранимал-75 изучал Д.Ю. Макаров (2012) с позиции влияния
на рост и среднесуточные приросты поросят. А.А. Дельцов (2011) определил
влияние препарата на некоторые показатели перекисного окисления липидов в
организме телят.
Селенорганический препарат ДАФС-25 исследован Т.Н. Родионовой
(1996 – 2015), на курах – несушках с позиции влияния на продуктивные и
мясные качества, а также некоторые обменные процессы Т.Ю. Поперечневой
(1996 – 2009) на белых крысах и мышах с позиции влияния на процессы
перекисного окисления липидов.
Однако, многие ответные реакции организма животных на процессы
перекисного окисления липидов, и состояние антиоксидантной защиты
организма, при сочетанном введении препаратов Ферран, Ферранимал-75,
Суиферровит-А с ДАФС-25 в организм животных изучены недостаточно. Не
изученным остается влияние препарата ДАФС-25 на динамику распределения и
накопления селена, и его влияние на процессы перекисного окисления липидов
в организме рыб.
Особенности протекания свободорадикальных процессов в онтогенезе у
некоторых видов пресноводных рыб и состояние процессов перекисного
окисления липидов у диких животных изучены не до конца.
Цель и задачи исследований. Цель работы – изучить особенности
свободнорадикальных и обменных процессов в организме млекопитающих и
рыб при введении железо - и селенсодержащих препаратов, определить влияние
селен- и железосодержащих веществ при сочетанном использовании на
состояние процессов перекисного окисления липидов и состояние
антиоксидантной системы защиты организма, а также дать рекомендации по
использованию препаратов для ингибирования процессов перекисного
окисления липидов в организме животных. Для достижения поставленной цели
нами были поставлены следующие задачи:
1. Установить интенсивность процессов перекисного окисления
липидов у млекопитающих и пресноводных рыб в норме и после введения
железо – и селенсодержащих препаратов.
2. Оценить реакцию антиоксидантной системы защиты организма
млекопитающих и рыб на введение изучаемых препаратов в различных дозах и
путях.
3. Изучить фармакокинетику препаратов Ферран и ДАФС-25 методом
статистических моментов.
4. Определить динамику накопления и распределения железа и селена,
содержащихся в составе препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и
ДАФС-25 при различных способах введения и дозах в органах и тканях
животных.
5. Изучить влияние селенорганического препарата ДАФС-25 на
динамику накопления и распределения селена в организме некоторых видов
пресноводных рыб.
5
6.
Установить влияние препаратов на обмен белков и железа в
организме белых крыс и поросят.
7.
Определить влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75,
Суиферровит-А на рост и развитие поросят.
Научная новизна. Впервые изучено изменение процессов ПОЛ в
организме рыб в постнатальном онтогенезе, а также состояние ПОЛ и АОС в
организме полевки, зайца русака, волка и воробьиного сыча.
Впервые предложены пути коррекции процессов свободнорадикального
окисления липидов железо и селенсодержащими препаратами.
Впервые определено влияние совместного введения препаратов ДАФС-25
и Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А на динамику накопления и
распределения селена и железа в организме поросят и состояние процессов
ПОЛ. Выяснено, что совместное введение изучаемых соединений вызывает
накопление микроэлементов в тканях организма и не вызывают сбоя в работе
АОС защиты организма.
Впервые проведена комплексная оценка физиологических реакций
организма рыб на введение в организм селенорганического препарата ДАФС25. Установлено, что препарат ДАФС-25 стимулирует антиоксидантную
систему защиты организма, ингибирует процессы перекисного окисления и
вызывает накопление селена в органах и тканях рыб до оптимального
физиологического уровня.
Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая
значимость работы состоит в том, что изучены особенности процессов
перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы в
организме некоторых видов диких животных (полевка обыкновенная, заяц
русак, волк обыкновенный и воробьиный сыч), видовые особенности процессов
свободнорадикального окисления липидов в организме рыб в зависимости от
сезона года, возраста и этологических и экологических факторов.
Практическая значимость работы состоит в том, результаты исследований
физиологически обосновывают возможность совместного применения железо и селенсодержащих препаратов в качестве антиоксидантов и для обогащения
животноводческой продукции селеном и железом.
Для обогащения рыбоводческой продукции селеном рекомендуется
добавлять в корм ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг корма, что приводит к повышению
концентрации селена в тканях организма по сравнению с контролем.
По результатам исследований установлено, что совместное введение
железо и селенсодержащих препаратов организм животных вызывает
повышение концентрации селена и железа во всех органах и тканях в 2,5 – 5 раз
и 0,5 – 2 раза соответственно, относительно контроля.
Антиоксидантная система белых крыс и поросят после введения
препаратов ДАФС-25 и «ДАФС-25+Ферран», «ДАФС-25+Ферранимал-75» и
«ДАФС-25+Суиферровит-А» отвечает повышением активности фермента
каталаза.
6
Результаты исследований внедрены в производство в КФК «Садоян»,
КФК «Демидова», ООО «Возрождение» Саратовской области.
Материалы диссертационной работы вошли в рекомендации «Анемия
животных, её лечение и профилактика» для ветеринарных врачей и
зооинженеров (Саратов, 2012).
Результаты исследований внедрены в учебный процесс в ФГБОУ ВПО
«Казанская государственная академия ветеринарной медицины» и ФГБОУ ВО
«Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова».
Методология и методы исследования. Методологическим подходом в
решении поставленных задач явилось системное изучение объектов
исследования, анализ и обобщение полученных результатов. Предметом
исследования является ответная реакция организма поросят и пресноводных
рыб на введение железосодержащих препаратов Ферран, Ферранимал-75 и
Суиферровит-А, селенорганического препарата ДАФС-25, а также их
сочетанного применения. Объектом исследования послужили поросята крупной
белой породы свиней в условиях свиноводческого комплекса ООО «РамфудПоволжье» (ЗАО «Инвест-Трейд») Калининского района Саратовской области,
а также рыба (карп, карась, линь, толстолобик) в условиях рыбоводческого
предприятия ООО «Возрождение», Энгельсского района, Саратовской области.
В работе были использованы биохимические методы исследования
тканей организма. При определении влияния препаратов на продуктивность
учитывали в динамике массу тела и показатели среднесуточного прироста
массы тела. Достоверность результатов работы подтверждена применением
методов статистической обработки Microsoft Excel. Для оценки достоверностей
различий между группами использовали метод Стьюдента.
Основные положения, выносимые на защиту:

Процессы перекисного окисления липидов в организме разных
видов рыб протекают с неодинаковой интенсивностью. В постнатальном
онтогенезе (от сеголеток до трёхгодовиков) содержание диеновых коньюгатов
(ДК) повышается. Организм сеголеток характеризуется самым низким
содержанием малонового диальдегида (МДА). Среди этой возрастной группы
самое высокое среднее содержание МДА в организме зафиксировано у плотвы
– 17,80 нмоль/г, а низкое у чехони и сазана – 17,23 и 17,24 нмоль/г
соответственно. К годовалому возрасту средний уровень малонового
диальдегида повысился до 18,56 – 19,31 нмоль/г (лещ и линь соответственно).
Уровень активности каталазы также подвержен возрастным колебаниям,
повышается с возрастом и зависит от протекания процесса перекисного
окисления липидов (ПОЛ). Самая высокая активность фермента зафиксирована
в жабрах и печени исследуемых видов рыб, что в свою очередь связано с
функциональной ролью данных органов.
Интенсивность процессов ПОЛ в организме диких животных
неодинакова и зависит от трофического уровня животного. Чем выше
трофический уровень, тем ниже интенсивность ПОЛ и активность
антиоксидантной системы (АОС).
7

Фармакокинетические характеристики препарата Ферран при
однократном внутримышечном введении в дозе 200 мг/железа/кг массы тела:
полная площадь под кривой (AUC, (мкг·ч)/мл) – 164,66±2,12; клиренс (СL, л/ч)
– 0,008±0,0007; среднее время удержания препарата в организме (MRT, ч) –
26,24±5,02; период полуэлиминации (Т1/2, ч) – 154±3,2 и фармакокинетические
характеристики препарата ДАФС-25 при однократном подкожном введении в
дозе 0,4 мг/кг: полная площадь под кривой (AUC, (мкг·ч)/мл) – 37,284±2,12;
клиренс (СL, л/ч) – 0,0636±0,003; среднее время удержания препарата в
организме (MRT, ч) – 52,5±4,02; период полуэлиминации (Т1/2, ч) – 19,6±3,3.

Совместное поступление в организм животных препаратов Ферран,
Ферранимал-75
и
Суиферровит-А
и
Диацетофенонилселенид
в
физиологических дозах сопровождается стимуляцией антиоксидантной
системы защиты, активизацией фермента каталазы в печени и торможением
процессов перекисного окисления липидов.

После введения ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг, по величине содержания
селена органы располагаются в следующем порядке (по уменьшению):
головной мозг > печень> почки > тонкий кишечник > легкие > желудок >
толстый кишечник > скелетные мышцы; после введения железосодержащих
препаратов железо в органах распределяется следующим образом (по
уменьшению): печень> селезенка> сердце > почки> желудок> ткань тонкого
отдела кишечника. После совместного применения железо и селенсодержащих
препаратов происходит повышение концентрации селена и железа во всех
органах и тканях в 2,5 – 5 раз и 0,5 – 2 раза соответственно, относительно
контроля.

Приспособительные реакции организма животных на совместное
поступление железо и селенсодержащих препаратов, в различных дозах
проявляются изменением некоторых обменных процессов, выраженным
увеличением в крови содержания общего белка и его фракций и повышением
содержания в сыворотке крови общего железа, трансферрина, ненасыщенной и
общей железосвязывающей способностей.
Апробация результатов исследования. Материалы диссертации
доложены, обсуждены и одобрены на Международной научно-практической
конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы
развития»
(Саратов,
2010);
Межрегиональной
научно-практической
конференции «Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства (Самара,
2010); Международной научно-практической конференции «Ветеринарная
медицина – теория, практика, обучение» (Санкт-Петербург, 2010);
Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы
ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» (Москва, 2011); III
Международной научно-практической конференции «Биоэлементы» (Оренбург,
2011); Международной научно-практической конференции «Аграрная наука –
основа успешного развития АПК и сохранения экосистем» (Волгоград, 2012),
Международной научно-практической конференции «Современные проблемы
ветеринарной медицины и зоотехнии» (Республика Беларусь, г. Витебск, 2012);
8
II Международном конгрессе ветеринарных фармакологов и токсикологов,
посвященного восьмидесятилетию заслуженного деятеля науки РФ, профессора
Соколова В.Д. «Эффективные и безопасные лекарственные средства в
ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2012); Международной научно-практической
конференции «Интеграция науки и производства – стратегия успешного
развития АПК в условиях вступления России в ВТО» (Волгоград, 2013);
Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы
экологии, географии и геоэкологии» (Грозный 2012); Международной
интернет-конференции «Научный поиск – животноводству России»
(Ставрополь 2013); 17-й и 18-й Международной Пущинской школыконференции молодых ученых «Биология – наука XXI века» (Пущино, 2013,
2014); VII Международной научно-практической конференции «Современные
проблемы контроля качества природной и техногенной сред» (Тамбов, 2014).
Публикации. По материалам диссертации опубликованы: монография
«Коррекция селенового статуса животных диацетофенонилселенидом» и 39
печатных работ из них 24 – в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 285
страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы,
материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения
результатов исследований и выводов. Библиографический список включает 309
источников, из них 133 – иностранных. Работа иллюстрирована 76 таблицами и
21 рисунками.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования по теме диссертации проводились в период 2009-2015
годов в лаборатории кафедры «Физиология и патофизиология» ФГБОУ ВПО
«Казанская государственная ветеринарная академия имени Н.Э. Баумана».
Научно-производственный опыт выполнен в ООО «Рамфуд-Поволжье» (ЗАО
«Инвест-Трейд») Калининского района Саратовской области. Объектом
исследования послужили поросята крупной белой породы, а также рыба (карп,
карась, линь, толстолобик) в условиях рыбоводческого предприятия ООО
«Возрождение», Энгельсского района Саратовской области.
Общая схема исследований представлена на рисунке 1.
Препарат ДАФС-25 (диацетофенонилселенид) представляет собой
сыпучий порошок от белого до светло-желтого цвета со слабым специфическим
запахом, не растворим в воде. Для введения в организм экспериментальных
животных препарат растворяли в стерильном подсолнечном масле. Раствор
готовили в день эксперимента.
Ферран (Ferran) (ЗАО Nita-Farm, Саратов) – лекарственное средство в
форме раствора для инъекций. Ферран в качестве действующего вещества в 1
см3 раствора содержит 100 мг трехвалентного железа.
Ферранимал-75 (А-БИО, Пущино) Ферранимал-75 - лекарственное
средство в форме раствора для инъекций, представляющее собой комплексное
соединение низкомолекулярного декстрана с железом (III), содержащее в 1 мл в
9
Этапы исследования
Предмет исследования
Объект
исследования
Крысы (n=114)
ДК
Изучение особенности СРО
в норме и влияния
препаратов на ПОЛ и АОС
организма
Фармакологическая
характеристика препаратов
МДА
Каталаза
Фармакокинетика
Поросята (n=51)
Рыбы (n=732)
полёвка (n=18)
заяц русак (n=10)
волк (n=4)
сыч (n=4)
Кролики(n=30)
Крысы (n=36)
Динамика накопления и
распределения селена и
железа
Железо
Селен
Выводы и
предложения
Выводы и
предложения
полёвка (n=18)
заяц русак (n=10)
волк (n=4)
сыч (n=4)
Крысы (n=152)
Поросята (n=76)
Выводы и
предложения
Рыбы (n=732)
АЛТ
АСТ
Изучение влияния
препаратов на обмен белка
Глобулины
Крысы (n=138)
Поросята (n=60)
Альбумины
Выводы и
предложения
НЖСС
Изучение влияния
препаратов на обмен
железа
Трансферрин
Крысы (n=138)
ОЖС
Поросята (n=60)
Выводы и
предложения
СЖ
Изучение влияния
препаратов на рост и
развития животных
Морфофизиологические
показатели
Поросята (n=70)
(n=36)
Рисунок 1 – Общая схема проведенных исследований
Выводы и
предложения
10
качестве действующего вещества 75 мг железа (III) и в качестве
вспомогательного вещества воду для инъекций.
Препарат Суиферровит-А (А-БИО, Пущина) представляет собой водный
раствор с добавлением витаминов группы B и железо-декстранового комплекса.
В 1 мл в качестве действующего вещества 7 мг железа (III) и в качестве
вспомогательного вещества воду для инъекций.
Фармакокинетические параметры рассчитывали при однократном
внутримышечном введении препаратов применительно к однокамерной
модели. Математическую обработку результатов по расчету интегральныхнезависимых фармакокинетических параметров проводили с использованием
метода статистических моментов (Фирсов А.А. Фармакокинетические методы в
биофармации: оценка биодоступности и пресистемная элиминация
лекарственных средств. /А.А. Фирстов, В.К. Пиотровский // Итоги науки и
техники. Фармакология. Химиотерапевтические средства. – М.: ВИНИТИ –
1984. –Т.14 – С.114 – 224.).
Содержание селена, изучено по методике флуорометрического
определения селена в органах (тканях) животных (Назаренко И.Н.
Флуорометрическое определение селена в биологическом материале с
помощью 2,3-диаминонафталина / И.Н. Назаренко, И.В. Кислова, Т.М.
Гусейнов // Журн. аналитической химии. – 1975. – Т.30. – №4. – С. 2–3.).
Интенсивность ПОЛ в организме животных оценивали по накоплению
МДА и ДК. Содержание МДА определяли тиобарбитуровым методом в
сыворотке крови и гомогенате тканей внутренних органов (Стальная И.Д.
Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой
кислоты / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии.
М.: Медицина, 1977. – С. 66 –67.).
Диеновые коньюгаты в сыворотке крови определяли спектрометрическим
(Стальная И.Д. Методы определения диеновой коньюгации ненасыщенных
высших жирных кислот / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные
методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. – С. 67–68.).
Антиоксидантную обеспеченность организма оценивали по активности
фермента каталазы в сыворотке крови и гомогенатах тканей (Королюк М.А.
Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк Л.И.Иванова,
И.Г.Майорова, В.Е. Токарева // Лаб. дело. – 1988. – № 1. – С. 16–19.).
Определение общего белка и белковых фракций проводили на
полуавтоматическом биохимическом анализаторе URIT-800 Vet.
Исследование метаболизма железа включало определение сывороточного
железа (СЖ) колометрическим методом без депротеинизации, общей и
ненасыщенной железосвязывающей способности сыворотки крови (ОЖСС и
НЖСС соответственно) колометрическим методом без осаждения (Идельсон
Л.И. К вопросу о выборе метода определения железа в сыворотке и моче / Л.И.
Идельсон, Э.Г. Радзивиловская, Л.А. Аполлонов // Проблемы гематологии и
переливания крови. – 1970. – №5. – С. – 47 – 52.), трансферрина (Аношина
М.Ю. Проницаемость эритроцитарных мембран как показатель метаболической
11
интоксикации у больных гемофилией с патологией опорно-двигательного
аппарата / М.Ю. Аношина, М.В. Суховий, Е.В.Аверьянов, М.В Яговдик //
Український журнал гематології татрансфузіології. – 2006. – № 2 (додатковий)
– С.4 – 7.) и КНТ (коэффициент насыщения трансферрина железом - по
отношению СЖ/ОЖСС).
Активность аминотрансфераз в сыворотке крови была определена
модифицированным методом Райтмана-Френкеля в модификации Т.С.
Пасхиной (Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике:
справочник /В.В. Меньшиков. – М.: Медицина. – 1987. – 156 с.).
Эвтаназия достигалась путем декапитации согласно рекомендациям по
деонтологии
медико-биологического
эксперимента
(Матюшин
А.И.
Деонтология медико-биологического эксперимента / А.И. Матюшин, B.C.
Осняч, Т.Н. Павлова. – М.: МЗ РСФСР, 1987. – С. 18.).
Все эксперименты проведены в трёх повторностях.
Цифровой материал подвергался статистической обработке с вычислением
критерия Стьюдента на персональном компьютере с использованием
стандартной программы вариационной статистики Microsoft Excel.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Содержание селена и особенности свободорадикальных процессов
у некоторых видов диких животных
Исследования проведены на 18 полёвках обыкновенных, 10 зайцах
русаках, на 4 волках обыкновенных и 4 сычах воробьиных обитающих в
условиях степной экосистемы Саратовской области.
Результаты исследований представлены на рисунке 2.
Рисунок 2 – Концентрация селена в тканях диких животных, (мкг/г)
Степная растительность Саратовского Заволжья представлена типчаковоковыльно-пырейной ассоциацией. Установлено, что содержание селена в
пастбищных травах составляет 0,031-0,051 мкг/г сухой массы. Установлено, что
содержание селена в тканях травоядных животных несколько выше, чем в
растительности, которую они употребляют.
12
В организме полёвки обыкновенной наибольшее количество селена,
определено в почках (0,071±0,003 мкг/г) и печени (0,069±0,007 мкг/г), а
наименьшее – в сердечной мышце (0,039±0,004 мкг/г) (рисунок 2). Высокое
содержание селена, установлено также в печени (0,073±0,008 мкг/г) и почках
(0,065±0,003 мкг/г) зайца, а низкое внутреннем жире (0,043±0,005 мкг/г).
Концентрация микроэлемента в ткани печени волка составляет 0,059±0,004
мкг/г, в ткани почек – 0,053±0,002 мкг/г, в миокарде – 0,035±0,003 мкг/г. в
мышечной ткани - 0,042±0,004 мкг/г, во внутреннем жире - 0,037±0,004 мкг/г, в
легких - 0,046±0,003 мкг/г.
Установлено, что концентрация селена в печени сыча составляет
(0,089±0,007 мкг/г), миокарде (0,086±0,004 мкг/г), легких (0,088±0,003 мкг/г), в
скелетной мускулатуре (0,050±0,002 мкг/г). В тканях тонкого и толстого
отделов кишечника содержание селена равнялось 0,066±0,004мкг/г и 0,060
мкг/г соответственно, в стенке желудка - 0,071 мкг/г.
Установлено, что в плазме крови полевки обыкновенной и зайца русака
содержание МДА (показатель состояния перекисного окисления липидов)
составляет соответственно 9,04±0,61 нмоль/г и 11,52±0,83 нмоль/г; в ткани
печени – 15,83±0,95 нмоль/г и 16,41±1,03 нмоль/г; в ткани почек – 14,61±0,85
нмоль/г и 14,32±0,57 нмоль/г; в ткани легких – 13,81±0,49 нмоль/г и 11,50±0,66
нмоль/г; в ткани головного мозга – 14,26±1,31 нмоль/г и 12,69±0,63 нмоль/г; в
миокарде – 8,02±0,49 нмоль/г и 8,40±0,27 нмоль/г; в скелетной мускулатуре
7,82±0,08 нмоль/г и 7,97±0,57 нмоль/г; в ткани желудка – 9,06±0,74 нмоль/г и
8,73±0,16 нмоль/г; в ткани тонкого отдела кишечника – 8,51±0,44 нмоль/г и
8,07±0,50 нмоль/г; в ткани толстого отдела кишечника – 8,62±0,28 нмоль/г
7,92±0,42 нмоль/г.
Концентрация МДА в ткани печени волка составляет 10,45±0,42 нмоль/г,
почек - 8,99±0,08 нмоль/г, в скелетной мускулатуре - 9,59±0,33 нмоль/г, в
миокарде - 8,55±0,62 нмоль/г, в тканях легкого - 10,33±0,29 нмоль/г.
В ткани печени сыча воробьиного концентрация МДА составила
8,03±0,12 нмоль/г, в миокарде - 12,83±0,11 нмоль/г, в скелетных мышцах –
6,16±0,45 нмоль/г, желудке - 8,23±0,61 нмоль/г, в кишечнике - 11,76±0,12
нмоль/г.
По активности каталазы все ткани и органы полевки обыкновенной
можно расположить в следующем порядке (убыванию): печень (75,73±2,05
ммоль/л)> почки (68,91±1,84 ммоль/л)> легкие (46,08±2,14 ммоль/л)> головной
мозг (39,81±0,94 ммоль/л)> скелетная мускулатура (36,74±1,49 ммоль/л)>
сердце (32,67±0,86)> плазма крови (24,07±1,00 ммоль/л)> стенка желудка
(22,84±0,75 ммоль/л)> стенка толстого отдела кишечника (22,63±0,62 ммоль/л)>
стенка тонкого отдела кишечника (20,69±0,53 ммоль/л).
В тканях зайца русака самая высокая активность фермента установлена в
печени (69,75±2,81 ммоль/л) и почках (62,81±2,74 ммоль/л), а низкая - в тонком
отдел кишечника – 23,75±1,64 ммоль/л. толстом отделе кишечника – 24,62±1,30
ммоль/л, в ткани желудка – 24,52±1,06 ммоль/л, плазме крови – 28,74±0,39
ммоль/л. В легких – 39,80±2,26 ммоль/л, головного мозга – 42,01±2,64 ммоль/л,
13
сердечной мышце – 34,78±0,84 ммоль/л и скелетной мускулатуре – 37,05±1,08
ммоль/л.
В ткани печени волка активность каталазы составила 33,05±0,89 ммоль/л,
почек - 24,55±0,89ммоль/л, легких – 19,01±0,43 ммоль/л, в печени сыча 98,54±2,12 ммоль/л, в мышцах - 44,23±1,02 ммоль/л, в миокарде - 33,15±1,33
ммоль/л, в желудке - 44,36±1,04 ммоль/л и кишечнике - 47,20±1,67 ммоль/л
соответственно.
3.2. Фармакокинетика действующего вещества (железа) препарата Ферран
и действующего вещества (селен) препарата ДАФС-25 в организме
животных
Исследования проведены на 36 беспородных белых крысах массой 180 –
190 г и на 18 кроликах массой 2,4 – 2,6 кг.
Результаты исследования содержания железа в организме крыс
представлены на рисунке 3 и таблице 1.
Рисунок 3 – Динамика концентрации железа в сыворотке крови белых крыс при
внутримышечном введении препарата Феррана
Кривая «концентрация – время» характеризует собой непрерывный
фармакокинетический процесс.
Фармакокинетические параметры рассчитывали при однократном
внутримышечном введении Феррана в дозе 70 мг/железа/кг массы тела (по ДВ)
применительно к однокамерной модели. Использован математический принцип
расчета кинетических параметров, основанный на вычислении статистических
моментов кинетических кривых.
Анализ результатов, помещенных в таблице 1, показывает, что полная
площадь под кривой зависимости концентрация-время равна 20,238±2,12
мкг·ч/мл. Величина AUC связана с другими фармакокинетическими
параметрами - объемом распределения, общим клиренсом и дозой препарата,
поступающей в организм. AUC обратно пропорциональна общему клиренсу и
пропорциональна дозе препарата.
14
Таблица 1 – Фармакокинетические (ФК) показатели препарата Ферран при
внутримышечном введении крысам в дозе 70 мг/железа/кг массы тела (по ДВ)
№ п/п
Название
Символ
Размерность
Величина ФК
показателей
1
Полная площадь под кривой AUC
(мкг·ч)/мл
20,238±2,12
«концентрация – время»
2
Среднее время удержания
MRT
Ч
24,26±4,02
3.
Клиренс
СL
л/ч
0,049±0,003
4.
Период полуэлиминации
Т1/2
Ч
14,90±3,3
5.
6.
7.
Стационарная концентрация
С
Периферический
объем V
распределения
Константа
скорости Kel
элиминации
мкг/мл
Л
7,50±0,005
12,80±0,03
1/ч
0,0047±0,001
Общий клиренс (CL) составил 0,049±0,003 л/ч.
Концентрация железа в сыворотки крови кроликов представлена на
рисунке 4 и таблице 2.
Рисунок 4 – Динамика концентрации железа в сыворотки крови кроликов при
внутримышечном введении препарата
Установлено, что максимальная концентрация железа в сыворотки крове
кроликов возрастает в течение 150 часов после введения Феррана в дозе 200
мг/железа/кг массы тела (по ДВ), далее происходит постепенное снижение.
Таблица 2 - Фармакокинетические параметры Феррана при внутримышечном
введении кроликам в дозе 200 мг/железа/кг массы тела (по ДВ).
№ п/п
Название
Символ
Размерность
Величина ФК
показателей
1
Полная площадь под кривой AUC
(мкг·ч)/мл
164,6579±2,12
«концентрация – время»
2
Среднее время удержания
MRT
Ч
26,24±5,02
3.
Клиренс
СL
л/ч
0,008±0,0007
4.
Период полуэлиминации
Т1/2
Ч
154±3,2
5.
Стационарная концентрация
С
мкг/мл
56,192
6.
Периферический
объем V
Л
1,841
распределения
15
Период полуэлиминации препарата Ферран у кроликов составил 154 часа.
Стационарная концентрация – 56,192 мкг/мл (таблица 2).
Результаты исследований фармакокинетических параметров ДАФС-25
представлены в таблице 3.
Установлено, что переферический объем распределения селена
составляет 24,8±0,03 л.
Полная площадь под кривой зависимости «концентрация-время» равна
37,284±2,12 мкг·ч/мл.
Общий клиренс (CL) составляет 0,0636±0,003 л·ч, среднее время
удержания (MRT) селена - 52,5±4,02 часа, стационарная концентрация селена в
крови - 0,33±0,005 мкг/мл, период полуэминации препарата - 19,6±3,3 ч,
константа скорости элиминации - 0,0018±0,001 часа (таблица 3).
№
п/п
1
2
3
4
5
6
7
Таблица 3 – Фармакокинетические параметры с ДАФС-25 при
внутримышечном введении кроликам в дозе 0,4 мг/кг
Название
Символ
Размерность
Величина ФК
показателей
Полная
площадь
под
кривой АUC
мкг·ч/мл
37,284±2,12
«концентрация – время»
Среднее время удержания
MRT
Ч
52,5±4,02
Клиренс
CL
л/ч
0,0636±0,003
Период полуэлиминации
Т½
Ч
19,6±3,3
Стационарная концентрация
С
мкг/мл
0,33±0,005
Периферический
объем V
Л
24,80±0,03
распределения
Константа скорости элиминации
Kel
1/ч
0,0018±0,001
3.3. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А в
различных дозах на процессы перекисного окисления липидов в организме
животных при совместном введении с препаратом ДАФС-25
3.3.1. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и
ДАФС-25 на содержание диеновых коньюгатов в организме поросят
Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А на
процессы перекисного окисления липидов на состояние антиоксидантной
системы использовано 48 поросят в возрасте 3 суток. Средняя масса поросенка
составила 1,51±0,06 кг. Препараты Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А
вводили в дозах 20, 30, 70, 130 и 200 мг/железа/кг, ДАФС-25 – 0,2 мг/кг массы
тела.
После одновременного введения ДАФС-25 и Ферран концентрация
диеновых коньюгатов в крови возросла на 3,5…18,6 % в зависимости от
введенной дозы. После введения препаратов ДАФС-25 и Суиферровит-А в
дозах 20, 30, 70, 130 и 200 мг/железа/кг массы тела концентрация ДК в
сыворотке крови повысилась на 6,4 %, 15,1 %, 16,2 %, 4,0 % и 13,2 %
соответственно, относительно первоначального уровня.
Результаты исследований представлены в таблице 4.
16
Таблица 4 – Содержание диеновых коньюгатов в сыворотке крови поросят при
комплексном введении железа и селенсодержащих соединений
Доза, мг
ДАФС-25 и
ДАФС-25 и
ДАФС-25 и
Феррана
Суиферровит-А
Ферранимал-75
Контроль
9,15±0,48
9,15±0,48
9,15±0,48
20
9,94±0,74
9,74±0,95
9,84±0,52
30
10,84±0,06*
10,53±0,52*
10,42±0,82*
70
9,47±0,63
10,63±0,61
10,83±0,77*
130
10,53±0,87*
9,52±0,63*
10,74±0,68*
200
10,85±0,39*
10,36±0,33*
10,63±0,41*
Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05
После введения ДАФС-25 и Ферранимал-75 в дозах от 20 до 200
мг/железа/кг массы тела содержание ДК в сыворотке крови возросло на 3,6 –
18,4 % по сравнению с контролем. Повышение концентрации уровня ДК, в
сыворотке крови свидетельствует об активизации процессов перекисного
окисления липидов.
3.3.2. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и
ДАФС-25 на содержание малонового диальдегида в организме поросят
Содержание малонового диальдегида и активность каталазы определяли в
сыворотке крови и тканях 114 белых крыс и 51 поросенка при
внутримышечном введении препаратов Ферран, Ферранимал-75, СуиферровитА (100 мг/железа/кг массы тела) и ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг массы тела.
Результаты исследований представлены в таблице 5.
Таблица 5 – Содержание малонового диальдегида (нмоль/г) в сыворотке крови и
тканях внутренних органов поросят при совместном введении ДАФС-25 и
железосодержащих препаратов
Препарат
ДАФС-25
ДАФС-25 и ДАФС-25
и ДАФС-25
и
Показатель
Контроль
Ферран
Ферранимал- Суиферровит75
А
Сывор. крови 7,59±0,38 5,93±0,63*
6,96±0,70
7,41±0,40
7,79±0,26
Голов. мозг
11,06±0,64 8,15±0,58*
9,63±0,57
10,05±0,32
9,59±0,73*
Легкие
13,97±0,82 13,74±1,02
14,01±0,84
15,39±1,13
14,85±0,37*
Почки
13,71±1,00 10,84±0,89* 12,79±1,01
13,59±0,43
13,14±0,04
Печень
14,15±0,62 11,62±0,68* 13,37±0,32
14,05±0,37
13,22±0,45
Сердце
8,01±0,35 6,97±0,25*
7,13±0,67
7,36±0,17
8,06±0,81
Мышцы
5,50±0,58 5,84±0,63
5,99±0,48
6,06±0,59
6,15±0,67
Толс. кишеч.
7,92±0,85 7,42±0,61
8,40±0,41
9,79±0,85*
8,95±0,16*
Тонк. кишеч.
6,46±0,40 4,76±0,42*
6,59±0,25
7,09±0,11*
6,06±0,15
Желудок
8,96±0,92 8,58±0,82
8,69±0,59
7,68±0,26*
8,33±0,53
Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05
После введения препарата ДАФС-25 уровень МДА в сыворотке крови
поросят понизился на 21,9 % , после комплексного применения ДАФС-25 и
17
Ферран – на 8,3 %, ДАФС-25 и Ферранимал-75 – на 2,4 %, однако, после
применения ДАФС-25 и Суиферровит-А содержание МДА в сыворотке крови
повысилось на 2,6% относительно контроля.
В ткани головного мозга происходит снижение изучаемого показателя на
26,3 % (после введения ДАФС-25); на 12,9 % (ДАФС-25 и Ферран); на 9,1 %
(ДАФС-25 и Ферранимал-75) и 13,5 % (ДАФС-25 и Суиферровит-А). В ткани
легких содержание малонового диальдегида изменяется незначительно
относительно контроля. В ткани почек концентрация МДА понизилась на 0,87 –
6,7 %, после применения ДАФС-25 - на 20,9 %. В печени самое значительное
снижение концентрации малонового диальдегида произошло после
использования ДАФС-25 (на 17,8 %), а после применения ДАФС-25 и Ферран,
ДАФС-25 и Ферранимал-75 и ДАФС-25 и Суиферровит-А на 5,5 %, 0,7 % и 6,6
% соответственно, относительно контроля. В миокарде, после совместного
применения препаратов уровень МДА понизился на 11,0 %, после введения
только ДАФС-25 - на 13,0 %. В толстом отделе кишечника содержание
малонового диальдегида повысилось на 6,1 %, 23,6 % и 13,0 %, соответственно,
после введения в организм ДАФС-25 и Ферран, ДАФС-25 и Ферранимал-75 и
ДАФС-25 и Суиферровит-А. в тонком отделе кишечника после введения
ДАФС-25 уровень МДА понизился на 26,3 %, однако, после комплексного
применения изучаемых соединений содержание МДА колебалось, как в
сторону уменьшения, так и в сторону увеличения. В стенке желудка уровень
МДА понизился от 3,0 % до 14,2 %, после введения ДАФС-25 – на 4,2 %
относительно контроля.
3.3.3. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А и
ДАФС-25 на активность каталазы в организме поросят
Активность каталазы определяли в сыворотки крови и тканях внутренних
органов 114 белых крыс и 51 поросят при внутримышечном введении
препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А, а также при
комплексном применении с ДАФС-25 в различные сроки наблюдения.
Препараты Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А вводили в дозе 100
мг/железа/кг массы тела, препарат ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг массы тела.
Влияние совместного введения препарата ДАФС-25 и препаратов
Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А на активность каталазы изучено в
сыворотке крови и тканях органов поросят. Результаты исследований
представлены в таблице 6.
После совместного введения ДАФС-25 и Ферранимал-75 и ДАФС-25 и
Суиферровит-А активность каталазы возросла на 10,7 % и 6,0 %
соответственно. В ткани головного мозга и скелетной мускулатуре активность
каталазы после применения комплексов препаратов практически не
изменилась, а после введения в организм ДАФС-25 возросла на 18,0 % и 19,3 %
соответственно, относительно контроля.
В легких произошло повышение активности фермента на 2,1…12,0 % по
сравнению с первоначальным уровнем.
18
Таблица 6 – Активность каталазы (ммоль/л) в сыворотке крови и тканях
внутренних органов поросят при совместном введении ДАФС-25 и препаратов Ферран,
Ферранимал-75 и Суиферровит-А
После
После
После
После
введения
введения
введения
введения
№
Ткань
Контроль ДАФС-25
ДАФС-25 и ДАФС-25 и ДАФС-25
и
п/п
Ферран
Ферранимал СуиферровитА
1
Сывор.крови 25,96±1,63 30,05±1,42* 26,05±1,23
28,75±1,36* 27,52±0,15*
2
Голов. Мозг
16,64±0,81 19,63±0,64* 16,35±0,41
16,92±0,67
15,63±0,66
3
Легкие
45,53±1,17 56,38±1,53* 51,01±2,63* 47,74±1,61* 46,48±1,50
4
Почки
66,06±1,95 77,83±2,35* 76,52±3,05* 74,15±2,15* 75,63±3,03*
5
Печень
69,72±2,03 84,91±2,83* 78,53±1,98* 77,94±1,06* 75,67±1,53*
6
Сердце
26,49±0,92 35,48±1,36* 36,75±1,05* 35,29±1,40* 34,73±1,18*
7
Мышцы
36,67±1,03 43,74±1,38* 37,07±1,06
36,42±1,16
35,91±1,05
8
Толс. кишеч. 16,47±0,69 27,20±0,59* 28,75±0,84* 27,06±1,44* 25,03±0,62*
9
Тонк. кишеч. 18,59±1,05 28,04±1,74* 27,06±0,70* 25,84±1,07* 25,41±1,05*
10 Желудок
19,43±1,48 27,97±0,60* 26,87±1,49* 25,95±1,51* 26,07±1,53*
Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05
Одно из самых значительных повышений активности произошло в ткани
почек. После введения препаратов ДАФС-25 и Ферран, ДАФС-25 и
Ферранимал-75 и ДАФС-25 и Суиферровит-А активность каталазы повысилась
соответственно на 15,8 %, 12,2 % и 14,5 % от первоначального уровня. В ткани
печени активность каталазы повысилась на 8,5…15,8 %. В ткани толстого,
тонкого отделов кишечника и стенке желудка активность фермента возросла на
52,0 – 74,6 %, 36,7 – 45,6 % и 33,6 – 38,3 % соответственно по сравнению с
контролем.
3.4. Динамика накопления и распределения селена и железа в
организме животных после введения препаратов Ферран, Ферранимал-75,
Суиферровит-А и ДАФС-25
Исследования проведены на 97 белых крысах и 76 поросятах. Препарат
ДАФС-25 вводили в дозе 0,2 мг/кг массы тела подкожно, препараты Ферран,
Ферранимал-75 и Суиферровит-А в дозах 70 мг/железа/кг массы тела белым
крысам и 100 мг/железа/кг массы тела (по ДВ) поросятам (внутримышечно).
После введения препарата Ферран место инъекции становилось
гиперемированным и болезненным, а при применении других препаратов
местные реакции были менее выраженными.
Результаты исследований представлены в таблицах 7 и 8.
Установлено, что после введения препарата ДАФС-25 концентрация
селена во всех органах достоверно повышается. По содержанию селена органы
поросят располагаются в следующем порядке (по возрастанию): скелетная
мускулатура> сыворотка крови> сердечная мышца> легочная ткань> почки>
головной мозг> печень (таблица 7).
19
Таблица 7 – Накопление селена (мкг/г) в сыворотке крови и тканях внутренних
органов поросят после комплексного введения препаратов Ферран, Ферранимал-75,
Суиферровит-А и ДАФС-25
После
После
После
После
введения
введения
введения
введения
Показатель
Контроль
ДАФС-25
ДАФС-25 и ДАФС-25 и ДАФС-25
и
Ферран
ФерраниСуиферровитмал-75
А
Сывор.крови 0,059±0,004 0,117±0,004* 0,107±0,003* 0,106±0,004* 0,116±0,008*
Печень
0,084±0,003 0,138±0,007 * 0,126±0,004 * 0,133±0,009* 0,127±0,008*
Почки
0,079±0,003 0,129±0,06 *
0,120±0,005 * 0,117±0,006* 0,127±0,003*
Сердце
0,044±0,001 0,118±0,005 * 0,108±0,004 * 0,106±0,003* 0,112±0,008*
Гол. Мозг
0,049±0,004 0,131±0,004 * 0,127±0,004 * 0,119±0,006* 0,121±0,005*
Мышцы
0,042±0,002 0,109±0,005 * 0,100±0,09 *
0,112±0,009* 0,106±0,001*
Легкие
0,050±0,003 0,122±0,006 * 0,116±0,004 * 0,113±0,005* 0,110±0,003*
Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05
После
введения
препаратов
«ДАФС-25+Ферран»,
«ДАФС25+Ферранимал-75» и «ДАФС-25+Суиферровит-А» содержание селена в
печени повысилось на 50,0 %, 58,3 % и 51,2 % соответственно, относительно
исходного уровня. В ткани почек - на 48,1 % - 60,8 %. В сыворотке крови
концентрация микроэлемента после применения «ДАФС-25+Ферран» и
«ДАФС-25+Ферранимал-75» повысилась на 81,4% и 79,7% соответственно,
однако своих максимальных концентрация она достигает после использования
«ДАФС-25+Суиферровит-А», где содержание селена, повысилось на 96,6%. В
миокарде, скелетной мускулатуре, ткани головного мозга и легких, после
введения изучаемых препаратов повысилась в 2 раза.
При изучении содержания железа после введения комплексов препаратов
«ДАФС-25+Ферран», «ДАФС-25+Ферранимал-75» и «ДАФС-25+СуиферровитА» было установлено следующее (таблица 8).
Таблица 8 – Содержание железа (мкг/г) в сыворотке крови и тканях внутренних
органов поросят после комплексного введения препаратов Ферран, Ферранимал-75,
Суиферровит-А и ДАФС-25
Ткань
Контроль ДАФС-25
ДАФС-25
и ДАФС-25
и ДАФС-25
и
Феррана
Ферранимал-75 Суиферровит-А
Печень
Почки
Сердце
Легкие
Желудок
Селезенка
Тонкий
кишечник
4,27±0,66
1,92±0,73
2,81±0,74
1,10±0,33
1,71±0,66
3,33±0,41
1,23±0,27
4,89±0,33
1,84±0,41
2,95±0,63
1,07±0,27
1,53±0,41
3,52±0,52
1,82±0,50
10,04±0,51*
8,52±0,21*
9,05±0,31*
6,14±0,42*
8,06±0,58*
11,63±0,06*
5,74±0,31*
10,85±0,36*
7,63±0,40*
10,01±1,00*
6,94±0,57*
7,93±0,40*
10,69±0,53*
5,05±0,73*
9,94±0,06*
8,39±0,18*
9,83±0,59*
6,73±0,67*
9,00±1,00*
9,95±0,59*
6,51±0,39*
Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05
20
Содержание железа в печени поросят, после введения «ДАФС25+Ферран», «ДАФС-25+Ферранимал-75»
и «ДАФС-25+Суиферровит-А»
повысилось в 2,4 раза, 2,5 раза и 2,3 раза, в почках – 4,4; 4,0 и 4,4 раз, в
сердечной мышце – в 3,2; 3,6 и 3,5 раз, в легочной ткани – 5,6; 6,3 и 6,1 раз, в
стенке желудка – в 4,7; 4,6 и 5,3 раз, в ткани селезенки – 3,5; 3,2 и 3,0 раз и в
стенке тонкого отдела кишечника в – 4,7; 4,1 и 5,3 раз, соответственно
относительно контроля.
При изучении динамики накопления и распределения микроэлементов в
организме крыс была установлена аналогичная картина.
3.5. Накопление селена и состояние процессов перекисного окисления
липидов в организме пресноводных рыб при применении ДАФС-25
Исследования проведены на 13 видах рыб обитающих в искусственных
прудах и на воле.
В автореферате приведены только 4 вида рыб (таблица 9). При кормлении
рыб в течение 7 дней использовали корма, содержащие различные дозы ДАФС25.
Таблица 9 – Концентрация селена, (мкг/г), в тканях различных видов рыб при
введении в рацион ДАФС-25 в дозах от 0,02 до 0,2 мг/кг корма
Контроль
Доза ДАФС-25
Наименование
органа
0,02
0,05
0,1
0,2
Карась
Жабры
0,113±0,009 0,132±0,022* 0,155±0,023* 0,163±0,025* 0,189±0,013*
Кишечник
0,096±0,010 0,113±0,010 0,134±0,019* 0,139±0,013* 0,156±0,025*
Гонады
0,136±0,019 0,139±0,022 0,158±0,027* 0,171±0,009* 0,201±0,029*
Мышцы
0,103±0,013 0,119±0,014 0,139±0,017* 0,172±0,015* 0,195±0,010*
Печень
0,124±0,020 0,130±0,019 0,172±0,023* 0,188±0,021* 0,213±0,031*
Карп
Жабры
0,121±0,016 0,137±0,026 0,162±0,024* 0,176±0,020* 0,221±0,019*
Кишечник
0,118±0,020 0,124±0,014 0,137±0,013* 0,143±0,015* 0,156±0,017*
Гонады
0,133±0,014 0,141±0,015 0,142±0,022 0,141±0,011* 0,214±0,008*
Мышцы
0,112±0,012 0,149±0,017* 0,158±0,018* 0,169±0,016* 0,193±0,020*
Печень
0,130±0,013 0,157±0,020 0,167±0,021* 0,174±0,013* 0,196±0,016*
Толстолобик
Жабры
0,130±0,023 0,145±0,023 0,154±0,023* 0,176±0,007* 0,219±0,024*
Кишечник
0,124±0,019 0,137±0,018 0,148±0,016* 0,180±0,013* 0,198±0,017*
Гонады
0,141±0,033 0,139±0,016 0,157±0,010* 0,194±0,021* 0,225±0,023*
Мышцы
0,100±0,016 0,114±0,013 0,128±0,015* 0,168±0,013* 0,206±0,019*
Печень
0,126±0,018 0,117±0,017 0,136±0,021 0,169±0,009* 0,210±0,022*
Линь
Жабры
0,102±0,011 0,116±0,003 0,163±0,020* 0,170±0,020* 0,200±0,012*
Кишечник
0,098±0,016 0,100±0,016 0,119±0,013 0,147±0,022* 0,198±0,013*
Гонады
0,118±0,025 0,136±0,023 0,149±0,011* 0,198±0,019* 0,227±0,021*
Мышцы
0,108±0,023 0,122±0,019 0,162±0,017* 0,190±0,015* 0,206±0,015*
Печень
0,126±0,019 0,148±0,018 0,157±0,013* 0,198±0,016* 0,200±0,014*
Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05
21
Установлено, что у контрольных рыб наибольшее количество селена
установлено в организме карпа (0,123±0,015 мкг/г) и толстолобика (0,124±0,022
мкг/г).
Содержание селена в организме рыб дозозависимо увеличивается.
Наибольшее накопление микроэлемента происходит в жабрах что, повидимому, связано с интенсивным кровообращением данного органа.
В кишечнике всех исследованных видов рыб содержание селена при
увеличении дозы возрастает.
В гонадах при содержании рыб на рационе с ДАФС-25 в дозах 0,02 мг/кг,
0,05 мг/кг 0,1 мг/кг и 0,2 мг/кг концентрация микроэлемента у карася
увеличилась на 2,2%; 16,2%; 25,7% и 47,8%, у карпа на 6,0%; 6,8%; 6,0% и
60,9%, у линя на 15,3%; 26,3%; 67,8% и 92,4% соответственно. Коэффициент
корреляции составил 0,99; 0,91 и 0,97 соответственно (р≤0,05). В гонадах
толстолобика содержание селена остается примерно на одном уровне при
добавлении препарата в интервале от 0,02 до 0,05 мг/кг. Далее концентрация
повышается и достигает своего максимального значения при дозе 0,2 мг/кг.
Нами изучена активность процессов перекисного окисления липидов в
организме рыб до и после кормления кормами с селенсодержащим препаратом
ДАФС-25 в дозах 0,02 мг/кг, 0,05 мг/кг, 0,1 мг/кг и 0,2 мг/кг. Результаты
исследований представлены в таблице 10.
Таблица 10 – Концентрация малонового диальдегида, (нмоль/г), в тканях рыб
Наименование
Наименование вида
органа
Контроль
0,02
0,05
0,1
0,2
Карась
Жабры
26,07±1,33 24,32±2,13
25,34±1,62
24,56±1,83
23,84±1,64
Печень
25,90±2,00 23,67±1,12
23,01±1,06
23,91±2,01
22,18±1,66*
Мышцы
24,83±1,87 22,14±0,97
22,31±1,04*
22,52±1,79
21,89±1,04
Кишечник
24,56±2,36 23,41±1,00
23,60±1,65
23,06±2,13
22,98±0,86
Карп
Жабры
28,89±1,70
27,13±0,98
27,78±1,74
26,95±1,84
26,82±1,56
Печень
30,04±2,16
28,96±1,26
26,96±0,79*
26,09±0,76* 25,81±1,80*
Мышцы
27,81±2,75
25,71±2,01
24,98±1,43*
24,75±2,03* 23,90±1,00*
Кишечник
28,04±1,06
26,70±1,85
25,81±1,83*
24,73±1,75* 23,76±0,96*
Толстолобик
Жабры
30,72±1,83
28,94±1,73
28,57±1,70
27,98±1,59* 27,01±1,79*
Печень
31,13±0,95
30,84±2,16
29,86±1,46
28,74±1,70* 27,98±1,62*
Мышцы
29,85±1,76
28,21±2,36
27,81±1,64
27,94±0,66
27,04±1,08
Кишечник
28,99±1,79
28,85±1,97
27,95±0,98
28,00±1,00
27,58±1,76
Линь
Жабры
27,61±1,62
27,96±1,32
26,74±1,82
25,06±1,23
24,14±1,11*
Печень
29,75±2,13
28,63±1,98
27,00±1,64*
26,65±1,06
25,74±2,01*
Мышцы
26,60±1,05
25,86±0,83
25,13±1,73
24,96±1,27
24,24±1,50
Кишечник
25,98±0,68
24,81±1,00
24,33±1,66
24,41±1,84
23,90±1,31
Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05
Установлено, что концентрация малонового диальдегида в ткани печени
карася понижается на 8,3 % ... 16,8 %; карпа – 15,1% … 16,4 %; линя –11,6 %
22
… 15,6 % соответственно, при введении в рацион ДАФС-25 в дозах 0,1 мг/кг и
0,2 мг/кг (таблица 10).
В мышечной ткани установлено одна из самых низких концентраций
МДА. По содержанию МДА в организме исследованные виды рыб можно
расположить в следующем порядке (по возрастанию): карась> линь> карп>
толстолобик.
Учитывая важную роль в деятельности организма фермента каталазы
нами проведены исследования по изучению ее активности в организме рыб.
Результаты проведены в таблице 11.
Таблица 11 – Концентрация каталазы, (ммоль/л), в тканях рыб
Наименование вида
Контроль
0,02
0,05
0,1
0,2
Карась
Жабры
42,30±2,89 61,95±3,00* 70,33±3,41*
69,83±2,86* 79,00±1,63*
Печень
43,16±2,91 72,71±2,66* 71,63±2,72*
60,66±2,81* 59,59±2,13*
Мышцы
38,95±1,72 67,08±1,78* 76,55±2,53*
76,15±2,06* 75,14±2,00*
Кишечник
37,98±2,00 66,84±2,01* 65,80±1,56*
75,00±1,69* 74,86±1,70*
Карп
Жабры
43,76±2,59
62,81±1,69* 62,01±2,43*
69,30±2,48* 66,68±3,00*
Печень
43,00±1,05
61,96±2,03* 60,59±1,63*
60,01±1,86* 69,53±2,13*
Мышцы
40,26±0,93
69,60±1,95* 69,03±0,97*
65,73±2,63* 77,94±1,46*
Кишечник
39,95±1,53
68,55±0,62* 68,41±2,00*
67,80±1,96* 76,00±1,80*
Толстолобик
Жабры
46,85±1,67
65,87±3,29* 64,95±3,13*
72,92±1,53* 62,95±1,86*
Печень
47,21±2,81
70,25±3,01* 65,82±3,13*
65,92±2,97* 73,80±2,07*
Мышцы
44,61±2,00
63,91±2,85* 73,01±1,73*
63,98±1,06* 65,63±1,84*
Кишечник
43,99±1,33
63,03±1,99* 68,00±1,05*
72,84±2,75* 61,33±0,86*
Линь
Жабры
44,91±1,74
63,67±3,84* 62,90±1,84*
72,36±1,72* 69,75±1,73*
Печень
43,96±2,06
72,98±1,04* 71,72±2,80*
69,42±3,00* 70,91±1,63*
Мышцы
42,21±2,80
63,84±3,95* 69,00±1,86*
70,85±2,62* 71,89±1,04*
Кишечник
42,83±1,98
64,45±1,73* 69,95±2,57*
79,25±1,06* 69,92±1,33*
Примечание: достоверность различий относительно контроля: * – р≤0,05
Наименование
органа
Установлено, что ДАФС-25 повышает активность фермента каталазы
(таблица 11), тем самым ингибирует процессы перекисного окисления липидов.
Наивысшая активность фермента, у контрольных животных установлена в
печени, а самая низкая – в кишечнике.
После скармливания препарата ДАФС-25 с кормом, в дозах 0,02 мг/кг,
0,05 мг/кг, 0,1 мг/кг и 0,2 мг/кг активность каталазы в жаберных лепестках
карася повышается соответственно дозам на 46,5 %, 66,3 %, 65,1 % и 86,8 %;
карпа – 43,5 %, 41,9 %, 58,4 % и 52,4 %; толстолобика – 40,6 %, 38,6 %, 55,6 %
и 34,4 %; линя – 41,8 %, 40,1 %, 61,1 % и 55,3 %.
Активность каталазы в кишечнике карася колеблется в интервале от 65,80
ммоль/л до 75,00 ммоль/л; карпа – от 67,80 ммоль/л до 76,00 ммоль/л;
толстолобика от 63,03 ммоль/л до 72,84 ммоль/л и линя от 64,45 ммоль/л до
79,25 ммоль/л.
23
Процессы перекисного окисления липидов в организме разных видов рыб
протекают с неодинаковой интенсивностью. Самое низкое содержание
малонового диальдегида в организме изучаемых видов рыб определено у
сеголеток, а самое высокое – у трёхгодовиков. Высокие уровни МДА
установлены в тканях жабр и печени.
Уровень активности каталазы также подвержен возрастным колебаниям,
повышается с возрастом и зависит от протекания процесса ПОЛ. Самая высокая
активность фермента зафиксирована в жабрах и печени, что в свою очередь
связано с функциональной ролью данных органов.
3.6. Содержание белка и его фракций у млекопитающих при
внутримышечном введении в их организм ДАФС-25 на фоне действия
препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А
Исследования проведены на 12-ти трёхсуточных суточных поросятах и
24-х половозрелых белых крысах. Препараты вводили внутримышечно в дозах
70 мг/железа/кг массы тела (Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А) и 0,2
мг/кг массы тела (ДАФС-25) крысам и 100 мг/железа/кг массы тела (Ферран,
Ферранимал-75, Суиферровит-А) и 0,2 мг/кг массы тела (ДАФС-25) поросятам.
Результаты приведены на рисунке 5.
Установлено, что последовательное введение Феррана и ДАФС-25 в
организм животных вызывает повышение уровня общего белка повысился на
27,4 %, альбуминов – на 11,8 %, глобулинов – на 22,7 % (α-глобулинов – на 14,1
%, β-глобулинов – на 8,8 % и γ-глобулинов – на 23,0 %), относительно
контрольных значений (рисунок 5).
Рисунок 5 – Содержание общего белка, его фракций (α, β, γ) в сыворотке крови
поросят через 10 дней после введения препаратов Ферран, Ферранимал-75,
Суиферровит-А и ДАФС-25
При введении ДАФС-25 и Ферранимала-75 в сыворотке крови
повышается общий белок – на 29,6%, альбумины – на 15,8%, глобулины – на
20,9% (α-глобулины – на 16,1%, β-глобулины – на 7,3% и γ-глобулины – на
27,3%).
24
После введения препаратов ДАФС-25 и Суиферровит-А уровень общего
белка повышается на 29,0%, концентрация глобулинов на 15,2%, глобулинов –
на 22,1%
Возрастание уровня белка в сыворотке крови поросят после применения
новых обогащенных железосодержащих соединений можно объяснить
наличием в их составе водорастворимых витаминов B6 и В12 которые
активизируют процессы биологического синтеза белка. Наши результаты
согласуются с сообщениями других авторов, что широкий спектр макро- и
микроэлементов повышает в организме содержание общего белка и усиливает
защитные свойства организма (Савинков А.В. Влияние препарата «Силимикс»
на показатели белкового и углеводного обменов в период технологических
перегруппировок // Ветеринарная патология. – 2011. – №3. – С.70 – 73.).
3.7. Изучение влияния препаратов Ферран, Ферранимал-75 и
Суиферровит-А на обмен железа в организме поросят
При изучении влияния препаратов Ферран, Ферранимал-75 и
Суиферровит-А на организм целевых животных были использованы 48 поросят
в возрасте 3 суток. Средняя масса поросенка составила 1,51±0,06 кг. Препараты
вводили в дозах 20, 30, 70, 130 и 200 мг/железа/кг массы тела (по ДВ).
Установлено, что уровень сывороточного железа (СЖ) у контрольных
животных составляет 32,43±3,04 мкмоль/л, препарат Ферран вызвал повышение
уровень СЖ на 33,55 %, 35,71 %, 38,79 %, 40,02 % и 39,75 % относительно
контроля (р≤0,05). При этом общая железосвязывающая способность
сыворотки крови повысилась на 6,14 – 9,77 % (58,32±2,65…60,67±2,78
мкмоль/л), относительно контроля (54,74±3,01мкмоль/л), при р≤0,05. Уровень
трансферрина увеличился на 20,07 – 36,26 %. Коэффициент насыщения
трансферрина – 73 – 76 %.
На введение препарата Ферранимал-75, в дозах 30 и 70 мг, организм
поросят
отвечает
повышением
ненасыщенной
железосвязывающей
способности сыворотки крови (НЖСС) до 22,45±1,45 мкмоль/л (+ 14,43%) и
22,87±1,04 мкмоль/л (+ 19,05%), при норме - 19,21±1,01 мкмоль/л. Ферранимал75 в дозе 200 мг/железа/кг массы тела вызывает возрастание уровня НЖСС до
24,01±2,65 мкмоль/л, что на 20% выше контроля (р≤0,05).
Суиферровит-А в зависимости от дозы (20 – 200 мг/железа на кг массы
тела) вызывает повышение НЖСС крови от 25,45±2,76 до 26,32±3,01 мкмоль/л,
трансферрина - от 32,94±2,12 до 35,43±2,04 мкмоль/л, ОЖСС - от 58,03±2,87до
59,87±3,32 мкмоль/л, (р≤0,05).
3.8. Влияние препаратов Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А
на рост и развитие поросят
Клинические испытания проведены на 70 поросятах – сосунах
трёхдневного возраста. Препараты задавали в дозе 100 мг/кг массы тела через
каждые 10 дней до 4-х месячного возраста.
Результаты исследований представлены в таблице 12.
25
№
п/п
1
2
3
4
5
Таблица 12 – Влияние препаратов железа на динамику живой
массы поросят, (кг) при внутримышечном введении препаратов в дозе 100
мг/железа/кг массы тела (по ДВ)
Сроки исследования
Препараты
Ферран
Суиферровит-А Ферранимал-75
Новорожденные
1,360±0,05
1,355±0,04
1,357±0,05
Отъемыши
8,15±0,028*
8,18±0,03
8,13±0,02
2 месячные
16,83±0,01
16,82±0,02
16,59±0,01
4 месячные
42,18±0,17
42,17±0,15
42,10±0,15
Среднесуточный
0,352±0,007
0,351±0,008
0,351±0,007
прирост
Примечание: M ± m − среднее значение и его ошибка
Установлено, что поросята во всех группах развивались с одинаковой
интенсивностью. При рождении масса поросенка составляла 1,360±0,05 кг. К
двум месяцам этот показатель вырос до 16,59±0,01 - 16,83±0,01 кг.
Среднесуточные привесы во всех исследуемых группах находились примерно
на одном уровне (0,351±0,008 – 0,352±0,007 кг).
Влияние изучаемых препаратов на морфофизиологические параметры
свиней представлено в таблице 13.
№
п/п
1
2
3
4
5
6
Таблица 13 – Влияние препаратов железа на морфофизиологические показатели
свиней в 4 месячном возрасте
Морфофизиологические
Используемые препараты
параметры
Ферран
Суиферровит-А
Ферранимал-75
Длина туловища, см
82,7±0,12
82,2±0,10
82,6±0,16
Высота в крестце, см
49,6±0,17
49,3±0,19
49,5±0,15
Высота в холке, см
44,7±0,12
44,4±0,14
43,9±0,13
Обхват груди, см
72,1±0,13
72,1±0,12
72,1±0,18
Полуобхват зада ,см
49,5±0,11
48,6±0,20
48,8±0,16
Индекс сбитости, %
87,11
87,62
87,19
Примечание: M ± m − среднее значение и его ошибка
Полученные результаты (таблица 13) свидетельствуют, что все
железосодержащие препараты оказывают примерно одинаковое влияние на
рост и развитие поросят.
4. ВЫВОДЫ
1.
Интенсивность процессов ПОЛ в организме диких животных
неодинакова и зависит от трофического уровня животного. Чем выше
трофический уровень, тем ниже интенсивность ПОЛ и активность АОС.
Среднее содержание МДА в организме полевки обыкновенной составляет
7,82±0,08 нмоль/г (скелетная мускулатура) – 15,83±0,95 нмоль/г (печени); зайца
русака - 7,92±0,42 нмоль/г (стенка толстого отдела кишечника) - 16,41±1,03
нмоль/г (печень); волка обыкновенного – 8,55±0,62 нмоль/г (миокард) –
10,45±0,42 нмоль/г (печень); сыча воробьиного - 6,16±0,45 нмоль/г (скелетные
мышцы) – 12,83±0,11 нмоль/г (миокард).
Средняя активность каталазы в организме полевки обыкновенной
составила - 20,69±0,53 ммоль/л (стенка тонкого отдела кишечника) …
26
75,73±2,05 ммоль/л (печень); зайца русака – 37,05±1,08 ммоль/л (скелетная
мускулатура) … 69,75±2,81 ммоль/л (печень); волка обыкновенного 25,45±0,49 ммоль/л (миокард) … 33,05±0,89 ммоль/л (печень); сыча
воробьиного - 33,15±1,33(миокард) … 98,54±2,12 ммоль/л (печень).
В организме полёвки обыкновенной наибольшее количество селена,
определено в почках и печени, а наименьшее – в сердечной мышце. Высокое
содержание селена, установлено также в печени и почках зайца, а низкие в
стенке пищевода и внутреннем жире. Концентрация микроэлемента в ткани
печени волка составляет 0,059±0,004 мкг/г, в ткани почек – 0,053±0,002 мкг/г.
Наименьшая концентрация - в миокарде – 0,035±0,003 мкг/г. Фоновые
показатели содержания селена в степной растительности составляют от 0,031 ±
0,002 мкг/г (тонконог гребенчатый) до 0,051 ± 0, 003 мкг/г (полынь
австрийская).
2.
Фармакокинетика Феррана при однократном внутримышечном
введении в дозе 200 мг/железа/кг массы тела характеризуется: полная площадь
под кривой (AUC, (мкг·ч)/мл) – 164,66±2,12; клиренс (СL, л/ч) – 0,008±0,0007;
среднее время удержания препарата в организме (MRT, ч) – 26,24±5,02; период
полуэлиминации (Т1/2, ч) – 154±3,2; ДАФС-25 при однократном подкожном
введении в дозе 0,4 мг/кг: полная площадь под кривой (AUC, (мкг·ч)/мл) –
37,284±2,12; клиренс (СL, л/ч) – 0,0636±0,003; среднее время удержания
препарата в организме (MRT, ч) – 52,5±4,02; период полуэлиминации (Т1/2, ч) –
19,6±3,3.
3.
Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А в дозах от 20 до 200
мг/железа кг массы тела (по ДВ) повышает концентрацию диеновых
коньюгатов в организме поросят на 1,9% – 26,4%; 6,3% – 27,1% и 3,6% – 39,0%
соответственно, относительно контроля (9,15±0,48 мкмоль/мл).
Препараты
Ферран,
Ферранимал-75
и
Суиферровит-А
при
внутримышечном введении в дозах 20, 30,70, 130 и 200 мг/железа/кг и
последующим подкожным введением ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг массы тела
повышают уровень ДК в сыворотке крови поросят на 3,5…18,6%, 3,6…18,4% и
6,4…13,2% относительно контроля.
4.
Концентрация малонового диальдегида в тканях внутренних
органов белых крыс после внутримышечного введения препаратов Ферран,
Ферранимал-75 и Суиферровит-А в среднем повышается на 1,1% – 31,5%, 6,5%
–32,5% и 7,6% – 34,5% соответственно относительно контрольных значений.
Наибольшее накопление МДА происходит в тканях печени и головного мозга.
После последовательного введения ДАФС-25 и Ферран, ДАФС-25 и
Ферранимал-75, ДАФС-25 и Суиферровит-А максимальное накопление МДА
происходит в скелетной мускулатуре.
После введения препарата ДАФС-25 уровень МДА в сыворотке крови
поросят понизился на 21,9 % , после введения ДАФС-25 и Ферран – на 8,3 %,
ДАФС-25 и Ферранимал-75 – на 2,4 %. В ткани головного мозга уровень МДА
снизился на 26,3 % (после введения ДАФС-25); на 12,9 % (ДАФС-25 и Ферран);
на 9,1 % (ДАФС-25 и Ферранимал-75) и 13,5 % (ДАФС-25 и Суиферровит-А). В
27
ткани почек концентрация МДА понизилась на 0,87 – 6,7 %, после применения
ДАФС-25 - на 20,9 %, в печени – на 17,8 % после введения ДАФС-25.
4.1. В норме уровень МДА в тканях рыб зависит от возраста. Самое
низкое содержание малонового диальдегида в организме изучаемых видов рыб
установлено у сеголеток, а самое высокое – у трёхгодовиков. При внутреннем
введении с кормом препарата ДАФС-25 в дозах 0,02, 0,05, 0,1 и 0,2 мг/кг корма,
наивысшая концентрация МДА установлена в жабрах и печени, а низкая в
кишечнике. По средней величине содержания МДА в организме, до и после
применения ДАФС-25, все виды рыб располагаются в следующем порядке:
карась> линь> карп> толстолобик.
5.
После введения ДАФС-25 все исследуемые ткани и органы поросят
по возрастанию активности каталазы располагаются в следующем порядке:
головной мозг> тонкий кишечник> толстый кишечник> желудок> сыворотка
крови> сердце> скелетные мышцы> легкие> почки> печень. После
внутримышечного введения поросятам «ДАФС-25 + Ферран», «ДАФС-25 +
Ферранимал-75» и «ДАФС-25 + Суиферровит-А» активность каталазы в
сыворотке крови повышается на 15,2%, 25,7% и 19,2%; в головном мозге –
39,9%; 57,0% и 37,4%; в легких – 12,8%, 20,5% и 14,6%; в почках – 19,6%,
18,5% и 20,1%; в печени – 21,0%; 22,5% и 24,4%; в сердечной мышце – 33,9%,
42,6% и 27,3%; в скелетной мускулатуре – 14,6%, 11,4% и 7,8%; в стенке
толстого отдела кишечника – 48,7%, 14,3% и 17,0%; в стенке тонкого отдела
кишечника – 15,4%, 9,6% и 8,9%; в стенке желудка – 8,8%, 15,0% и 10,2%
соответственно.
6.
После подкожного введения ДАФС-25 поросятам в дозе 0,2 мг/кг,
по величине содержания селена ткани, и органы располагаются в следующем
порядке: головной мозг > печень> почки > тонкий кишечник > легкие >
желудок > толстый кишечник > скелетные мышцы. После внутримышечного
введения железосодержащих соединений по величине содержания железа
органы располагаются в следующем порядке: печень> селезенка> сердце >
почки> желудок> ткань тонкого отдела кишечника, а при сочетанном
применении железа и селенсодержащих препаратов концентрация селена и
железа во всех органах и тканях повышается в 2,5 – 5 раз и 0,5 – 2 раза
соответственно, относительно контроля.
6.1. При введении в организм разных видов рыб (карась, карп,
толстолобик, линь) препарата ДАФС-25 с кормом в дозе 0,2 мг/кг корма
достоверно повышается концентрация селена в тканях организма по сравнению
с контролем. Наибольшее накопление селена у рыб установлено в печени,
гонадах и чешуе, а наименьшее – в тканях кишечника и скелетных мышцах, при
фоновых показателях микроэлемента в воде прудов от 0,079±0,005 до
0,095±0,006 мкг/мл.
7. Функциональная система, обеспечивающая постоянство белкового
состава крови на введение препаратов Ферран, Ферранимал-75 и СуиферровитА отвечает увеличением общего белка в сыворотке крови на 11,2 – 22,3%, 12,7
– 21,6% и 11,3 – 17,2%, альбуминов на 21,1 – 24,7%, 21,9 – 32,9% и 3,3 – 13,9%
28
и глобулинов на 5,9 – 11,9%, 1,4 – 11,4% и 6,1 – 8,6% соответственно.
Повышение концентрации белка в сыворотке крови имеет дозозависимый
характер. Совместное применение ДАФС-25 и Феррана, ДАФС-25 и
Ферранимал-75, ДАФС-25 и Суиферровит-А содержание общего белка в
сыворотке крови повышается на 22,8%, 22,4% и 22,6% соответственно,
глобулиновые фракции белков возрастают на 62% 16,6%, 17,1 и 15,7%, что
указывает на повышение общей резистентности организма.
8.
Ферран в дозах 20, 30, 70, 130 и 200 мг/железа/кг массы тела
повышает в крови поросят уровень СЖ на 33,55%, 35,71%, 38,79%, 40,02% и
39,75% соответственно, ОЖС на 6,14 – 9,77%, уровень трансферрина на 20,07 –
36,26%. КНТ в среднем составил – 73 – 76%. Ферранимал-75 повышает НЖСС
на 14,43% … 20%, ОСЖ – 6,0%...9,4%, СЖ – 7,5%...11,1%, трансферрин –
15,4%...24,14% относительно контроля. Суиферровит-А увеличивает НЖСС в
среднем на 7,11 мкмоль/л. Уровень трансферрина возрос на 6,89 г/л. ОЖСС
увеличилась на 5,04 мкмоль/л.
9.
Однократное внутримышечное введение препаратов Ферран,
Ферранимал-75 и Суиферровит-А в дозе 70 мг/железа/кг массы тела повышает
среднесуточные приросты на 191,3 г, 189,8 г и 204,1 г; сохранность поросят на
91,67%, 90,91% и 90,00% соответственно. Ферран, Ферранимала-75 и
Суиферровита-А в дозе 100 мг/железа/кг массы тела обеспечивают
среднесуточные приросты поросят на уровне 338,0 г, 363,0 г и 367,0 г
соответственно.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1.
На основании анализа и обобщения экспериментальных данных,
апробации их в производственных условиях для нормализации обменных
процессов и повышения среднесуточных приростов предлагаем использовать
препараты Ферран, Ферранимал-75 и Суиферровит-А в дозе 100 мг/железа/кг
массы тела (по ДВ).
2.
Для ингибирования процессов перекисного окисления липидов, в
организме поросят, рекомендуется вводить сочетано ДАФС-25 в дозе 0,2мг/кг
массы тела и Ферран, ДАФС-25 и Ферранимал-75 в дозе 100 мг/железа/кг
массы тела.
3.
ДАФС-25, в дозе 0,2 мг/кг, рекомендуется в рыбоводческих
хозяйствах с целью обогащения селеном рыбоводческой продукции, а также с
целью повышения продуктивности товарной рыбы.
4.
С целью нормализации обмена белка и обмена железа, в организме
поросят, рекомендуется вводить препараты ДАФС-25, в дозе 0,2 мг/кг массы
тела или препараты Ферран, Ферранимал-75, Суиферровит-А в дозе 100
мг/железа/кг массы тела.
5.
По материалам диссертации подготовлены методические
рекомендации «Анемия животных, её лечение и профилактика», которые
используются в учебном процессе в ФГБОУ ВПО «Казанская государственная
академия ветеринарной медицины» и ФГБОУ ВО «Саратовский
государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова».
29
6.
Результаты исследований внедрены в производство в КФК
«Садоян», КФК «Демидова», ООО «Возрождение» Саратовской области.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
1. Кутепов А.Ю. Влияние ДАФС-25 на биологическую обеспеченность
овец селеном / А.Ю. Кутепов, Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, О.И.
Бирюков, И.Ю. Кутепова// Ветеринарная медицина. Современные проблемы и
перспективы развития: Сб. мат. Международной науч.-практ. конф. – Саратов:
ИЦ «Наука», 2010 – С. 36 – 37.
2. Пудовкин, Н.А. Влияние токсических доз ДАФС-25 на
антиоксидантную систему защиты организма /Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов,
Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Ветеринарная медицина. Современные
проблемы и перспективы развития: Сб. мат. Международной науч.-практ. конф.
– Саратов: ИЦ «Наука», 2010 – С. 60 – 64.
3.
Пудовкин, Н.А. Влияние препарата ферран на процессы
перекисного окисления липидов у белых крыс /Н.А.Пудовкин, Т.Ю.
Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Актуальные проблемы ветеринарии и
животноводства: Сб. мат. Межрегион науч.-практ. конф. – Самара, 2010. – С.
254 – 257.
4.
Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на процессы
перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы
защиты организма белых крыс при хронической интоксикации / Н.А.
Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вопросы нормативно –
правового регулирования в ветеринарии. – 2010. - №4. – С.100 – 102.
5.
Поперечнева, Т.Ю. Физиологическое и токсическое влияние
различных доз ДАФС-25 на антиоксидантную систему защиты организма
белых крыс / Т.Ю. Поперечнева, Н.А. Пудовкин, И.Ю. Кутепова //
Вопросы нормативно – правового регулирования в ветеринарии. – 2010. №4. – С.110 – 113.
6.
Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на процессы
перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы
защиты организма белых крыс / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю.
Кутепова // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова.
– 2010. - №12. – С. 32 – 35.
7.
Пудовкин, Н.А. Ферментативная активность антиоксидантная
системы при применении препарата Ферран / Н.А. Пудовкин, Т.Ю.
Поперечнева, И.Ю. Кутепова, А.А. Сазонов // Ученые записки Казанской
государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. –
2011. – Т.208. – С. 119 – 123.
8.
Пудовкин, Н.А. Фармакокинетические параметры препарата
Ферран / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вестник
Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. – 2011. - №8. – С. 20
– 23.
30
9.
Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на белковый обмен
животных / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Вестник
ветеринарии. – 2011. - №59 (4/2011). – С. 146 – 148.
10. Пудовкин, Н.А. Ферментативная антиоксидантная активность,
как критерий оценки эффективности применения железосодержащего
препарата / Н.А. Пудовкин // Вестник ветеринарии. – 2011. - №59 (4/2011). –
С. 148 – 150.
11. Пудовкин, Н.А. Кинетика продуктов обмена железа и процессов
перекисного
окисления
липидов
при
введении
в
организм
железосодержащего препарата / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю.
Кутепова // Вестник Оренбургского государственного университета. – 2011.
- №15 (134). – С. 107 – 110.
12. Пудовкин, Н.А. Динамика накопления и распределения селена в
органах и тканях кроликов при введении селенсодержащих препаратов / Н.А.
Пудовкин, Д.А. Чебанов // Аграрная наука – основа успешного развития АПК и
сохранения экосистем: Сб. мат. Международной науч.- практ. конф. –
Волгоград: Изд-во «Волгоградский ГАУ», 2012. – Т.2. – С. 196 – 198.
13. Пудовкин, Н.А. Коррекция селенового статуса кроликов,
обусловленная биогеохимическими особенностями Саратовского Заволжья /
Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов, Д.А. Чебанов // Ветеринария
сельскохозяйственных животных. – 2012. - №3. – С. 45 – 48.
14. Пудовкин, Н.А. Особенности динамики трансфераз сыворотки
крови при применении препарата Ферран / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев //
Мат. II Междунар. конгресса ветеринарных фармакологов и токсикологов,
посвященного восьмидесятилетию заслуженного деятеля науки РФ, профессора
Соколова В.Д. – СПб.: Изд-во «ФГБОУ ВПО СПбГАВМ», 2012. – С.225 – 227.
15. Панфилова, М.Н. Коррекция селенового статуса животных
диацетофенонилселенидом / М.Н. Панфилова, Т.Ю. Поперечнева, Н.А.
Пудовкин. - Саратов: Формат. – 2012. – 200с.
16. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на обмен железа
лабораторных животных / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю.
Кутепова // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова.
– 2012. - №7. – С. 41 – 43.
17. Пудовкин, Н.А. Ферран и его влияние на некоторые показатели
белкового обмена / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, И.Ю. Кутепова //
Ветеринария сельскохозяйственных животных. – 2012. - №8. – С. 47 – 49.
18. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Ферран на обмен железа в
организме кроликов / Н.А. Пудовкин // Ученые записки учреждения
образования «Витебская государственная академия ветеринарной медицины. –
Т.47. – В.2. – Ч.1. – С. 195 – 196.
19. Кутепов, А.Ю. Селен в агроэкосистеме Романовского района
Саратовской области / А.Ю. Кутепов, Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева,
И.Ю. Кутепова, Л.В. Константинова // Российский журнал «Проблемы
ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». – 2012. - №2 (8). – С.69 – 71.
31
20. Пудовкин, Н.А. Экологическое обоснование и комплексные
приемы коррекции эссенциальных микроэлементов в системе почварастение – животное / Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов, Т.Ю. Поперечнева,
И.Ю. Кутепова // Российский журнал «Проблемы ветеринарной санитарии,
гигиены и экологии». – 2012. - №2 (8). – С.67 – 69.
21. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Суйферровит –А на
процессы перекисного окисления липидов в организме кроликов / Н.А.
Пудовкин // Ученые записки Казанской государственной академии
ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. – 2013. – Т.213. – С. 220 – 225.
22. Пудовкин, Н.А. Биологические аспекты перекисного окисления
липидов в организме щуки обыкновенной / Н.А. Пудовкин, Т.Ю.
Поперечнева, И.Ю. Кутепова // Ученые записки Казанской
государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. –
2013. – Т.213. – С. 225 – 229.
23. Кутепов, А.Ю. Селен в наземных компонентах экосистеме
Саратовской области / А.Ю.Кутепов, Н.А. Пудовкин, И.Ю. Кутепова //
Современные проблемы геологии, географии и геоэкологии: Сб. мат.
Всероссийской науч.- практ. конф. – Махачкала: Изд-во «АЛЕФ», 2013. – С.
261 – 263.
24. Мубаракшин, Р.Ш. Корреляционная связь железа в почвах и
растениях экологических сообществ г. Саратова / Р.Ш. Мубаракшин, Н.А.
Пудовкин, А.Ю. Кутепов. И.Ю. Кутепова // Интеграция науки и производства стратегия устойчивого развития АПК России в ВТО: Сб. мат. Международной
науч.- практ. конф. – Волгоград: Изд-во «Волгоградский ГАУ», 2013. – Т.2. – С.
35 – 38.
25. Пудовкин, Н.А. Особенности функционирования антиоксидантной
системы Волка обыкновенного (Canis Lupus, Linnaeus, 1758) / Н.А. Пудовкин,
П.В. Смутнев // Биология – наука 21 века: 17-я Междунар. Пущинская школаконференция молодых ученых. – Пущино, 2013. – С. 145 – 146.
26. Пудовкин, Н.А. Состояние окислительно-антиоксидантной
системы у пресноводных рыб / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев, А.Ю.
Кутепов. И.Ю. Кутепова // Вестник ветеринарии. – 2013. - №65 (2/2013). – С.
53 – 56.
27. Пудовкин, Н.А. Молекулярные биомаркеры антиоксидантной
системы семейства карповых рыб бассейна реки Волга Саратовской
области / Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов. И.Ю. Кутепова // Вестник
Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. – 2013. - №6. – С. 39
– 41.
28. Пудовкин, Н.А. Особенности процессов перекисного окисления
липидов в организме сыча воробьиного (Glaudium Passerinum, L.,1758) / Н.А.
Пудовкин, П.В. Смутнев // Биология – наука 21 века: 18-я Междунар.
Пущинская школа-конференция молодых ученых. – Пущино, 2014. – С. 154 –
155.
32
29. Пудовкин, Н.А. Влияние железосодержащих препаратов на
морфофизиологические показатели растущих свиней / Н.А. Пудовкин //
Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной
медицины имени Н.Э. Баумана. – 2014. – Т.217. – С. 221 – 224.
30. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Суиферровит-А на
динамику распределения и накопления железа / Н.А. Пудовкин // Ученые
записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины
имени Н.Э. Баумана. – 2014. – Т.217. – С. 224 – 227.
31. Пудовкин, Н.А. Особенности антиоксидантной защиты
организма свиней в онтогенезе / Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев, Е.Н.
Зеленцова // Вестник ветеринарии. – 2014. - №69 (2/2014). – С. 63 – 66.
32. Vasilev V., Food quality pond carp at use diet selenium-containing
preporat Selenolin / V. Vasilev, D. Krivenko, N.Pudovkin // British Journal of
Science, Education and Cultire. - 2014. - London University Press. - №1(5). - Р. 224-228.
33. Пудовкин, Н.А. Особенности накопления и распределения
селена в воде, донных отложениях и макрофитах Бассейна Средней Волги /
Н.А. Пудовкин, П.В. Смутнев // Вестник Тамбовского государственного
университета (серия Естественные науки), 2014. – Т.19. – В.5. – С.1721 –
1723.
34. Пудовкин, Н.А. Перекисное окисление липидов в организме
рыб // Н.А. Пудовкин, Т.В. Гарипов // Вестник ветеринарии. – 2014. - №71
(4/2014). – С. 50 – 52.
35. Пудовкин, Н.А. Обмен железа в организме поросят и пути его
коррекции /Н.А. Пудовкин, Т.В. Гарипов, П.В. Смутнев // Вестник
Алтайского государственного аграрного университета, 2015. - №2. – С.49 –
54.
36. Пудовкин, Н.А. Влияние препарата Суиферровит-А на
некоторые показатели белкового обмена/ Н.А. Пудовкин, Т.В. Гарипов //
Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной
медицины имени Н.Э. Баумана. – 2015. – Т.221. - №1. – С. 181 – 183.
37. Пудовкин, Н.А. Обмен железа в организме поросят и пути его
коррекции / Н.А. Пудовкин, Т.В. Гарипов, П.В. Смутнев // Аграрный
научный журнал. – 2015. - №6. – С. 32 - 34.
38. Pudovkin, N. The use of selenium-containing drugs in rabbit breeding as
a way of enriching selenium rabbit meat / N.Pudovkin, P.Smutnev // Proceedings of
the XIV International Academic Congress «Fundamental and Applied Studies in the
Modern World». – 2015. - London Oxford University Press. – V. II. - Р. - 135-140.
39. Пудовкин, Н.А. Накопление и распределение селена в органах и
тканях некоторых видов диких животных / Н.А. Пудовкин, Р.Г. Каримова,
Т.В. Гарипов // Аграрный научный журнал. – 2015. - №9. – С. 29 - 31.