ИНСТРУКЦИЯ «РЕВЕРТАЗА»

ИНСТРУКЦИЯ
по применению комплекта реагентов
«РЕВЕРТАЗА»
АмплиСенс
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом 3а
Только для исследовательских и
иных немедицинских целей
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .............................................................................................. 3
НАЗНАЧЕНИЕ ................................................................................................................ 3
ОПИСАНИЕ .................................................................................................................... 3
ФОРМА ВЫПУСКА......................................................................................................... 3
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ................................................................................... 4
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, ТРЕБУЕМЫЕ ДЛЯ
ПРОВЕДЕНИЯ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ ............................................................ 5
ВЗЯТИЕ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА. ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ
ПРОБ .............................................................................................................................. 5
СОСТАВ ......................................................................................................................... 6
ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ .......................................... 6
СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ .................. 7
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ..................................... 8
Форма 1: REF R2-1; Форма 2: REF 924; Форма 3: REF 926; Форма 4: REF R2-1-2,5;
Форма 5: REF R2-1-5,0 / VER 11.02.15 / стр. 2 из 9
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
кДНК
РНК
мРНК
– комплементарная цепь дезоксирибонуклеиновой кислоты
– рибонуклеиновая кислота
– матричная рибонуклеиновая кислота
– Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
ФБУН ЦНИИ
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Эпидемиологии
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
Роспотребнадзора
потребителей и благополучия человека
НАЗНАЧЕНИЕ
Комплект реагентов «РЕВЕРТАЗА» предназначен для получения кДНК на матрице
РНК для последующего анализа методом полимеразной цепной реакции.
ОПИСАНИЕ
Реагент ревертаза (MMlv) – обратная транскриптаза, рекомбинантный фермент,
активность 200 ед/мкл, выпускается в буфере для хранения фермента (20 мМ
Тris-HCl (pH=7,5) 200 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DDT, 0,01 % NP-40, 50 %
glycerol).
Представляет
опалесценции
и
собой
посторонних
прозрачную
включений.
бесцветную
Эффективность
жидкость
синтеза
без
кДНК
составляет 20-70 %.
ФОРМА ВЫПУСКА
Комплект реагентов выпускается в 6 формах комплектации:
Форма 1 включает реагенты: ревертаза (MMlv) 10 000 ед. (1 пробирка), 5-х ОТбуфер объемом 0,5 мл (1 пробирка).
Форма 2 включает реагент ревертазу (MMlv) 6 000 ед. (1 пробирка).
Форма 3 включает реагент ревертазу (MMlv) 12 000 ед. (1 пробирка).
Форма 4 включает реагент ревертазу (MMlv) 500 000 ед. (1 пробирка).
Форма 5 включает реагент ревертазу (MMlv) 1 000 000 ед. (1 пробирка).
Форма 6 включает реагенты оптом, с маркировкой на оптовой фасовке.
Форма комплектации 6 предназначена для производственных целей для
последующей маркировки на языке заказчика.
ВНИМАНИЕ! Использование формы комплектации 6 производится только в
соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора.
ВНИМАНИЕ! Для проведения реакции обратной транскрипции необходимо
использовать дополнительные реагенты (см. «Дополнительные материалы и
оборудование, требуемые для проведения обратной транскрипции»).
Форма 1: REF R2-1; Форма 2: REF 924; Форма 3: REF 926; Форма 4: REF R2-1-2,5;
Форма 5: REF R2-1-5,0 / VER 11.02.15 / стр. 3 из 9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярнобиологические
(ПЦР)
исследования
клинического
материала
на
наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических
правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН
2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические
требования
к
обращению
с
медицинскими отходами» и методических указаний МУ 1.3.1888-04 «Организация
работы
при
исследованиях
методом
ПЦР
материала,
инфицированного
патогенными биологическими агентами III–IV групп патогенности».
При работе всегда следует выполнять следующие требования:
-
Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные,
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами
III–IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
-
Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
-
Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с требованиями
СанПиН
2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические
требования
к
обращению с медицинскими отходами».
-
Применять комплект реагентов строго по назначению, согласно данной
инструкции.
-
Допускать к работе с комплектом только специально обученный персонал.
-
Не использовать комплект по истечении срока годности.
-
Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза
во время работы с образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
-
Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте
немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской
помощью.
-
Листы безопасности материалов (MSDS – material safety data sheet) доступны
по запросу.
Форма 1: REF R2-1; Форма 2: REF 924; Форма 3: REF 926; Форма 4: REF R2-1-2,5;
Форма 5: REF R2-1-5,0 / VER 11.02.15 / стр. 4 из 9
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, ТРЕБУЕМЫЕ ДЛЯ
ПРОВЕДЕНИЯ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ
Для использования комплекта реагентов необходимы дополнительные
реактивы:
1. Деионизованная вода, свободная от РНКаз,
2. Нуклеотидтрифосфаты – 2,5 мМ смесь,
3. Затравочный
праймер
(олиго-dT,
случайные
гексануклеотиды
или
специфический праймер),
4. Ингибитор рибонуклеаз.
5. Рекомендуемый 5-кратный реакционный буфер: 250 mM Tris-HCl (pH=8,3),
375 mM KCl, 15 mM MgCl2, 50 mM DTT.
Для проведения обратной транскрипции необходимы дополнительные
материалы и оборудование:
6. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например,
«ТЕРМО 24-15», «Биоком», Россия).
7. Ламинарный
бокс
(например,
«БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2»,
«Ламинарные
системы», Россия, класс биологической безопасности II тип А).
8. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 16 тыс g (например,
MiniSpin, Eppendorf, Германия).
9. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия).
10.Отдельный набор автоматических пипеток переменного объема (например,
«Ленпипет», Россия).
11.Одноразовые полипропиленовые пробирки для ПЦР на 0,2 (0,5) мл (например,
Axygen, США).
12.Штативы для пробирок объемом 0,2 (0,5) мл.
13.Одноразовые наконечники с фильтром до 100 мкл и 200 мкл.
14.Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.
15.Отдельный халат и одноразовые перчатки.
16.Емкость с дезинфицирующим раствором.
ВЗЯТИЕ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА. ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ
ПРОБ
Перед
началом
работы
следует
ознакомиться
с
методическими
рекомендациями «Взятие, транспортировка, хранение клинического материала
для
ПЦР-диагностики»,
подготовленными
ФБУН
ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора, Москва, 2008 г.
Форма 1: REF R2-1; Форма 2: REF 924; Форма 3: REF 926; Форма 4: REF R2-1-2,5;
Форма 5: REF R2-1-5,0 / VER 11.02.15 / стр. 5 из 9
Материалом для исследования служит раствор РНК.
СОСТАВ
Форма комплектации 1 включает:
Реактив
Описание
Объем, мл
Кол-во
Ревертаза (MMlv)
Прозрачная бесцветная жидкость
0,05
1 пробирка
5х ОТ-буфер
Прозрачная бесцветная жидкость
0,5
1 пробирка
Комплект рассчитан на проведение 50 реакций обратной транскрипции, включая
контроли.
Форма комплектации 2 включает:
Реактив
Ревертаза (MMlv)
Описание
Объем, мл
Кол-во
0,03
1 пробирка
Прозрачная бесцветная жидкость
Комплект рассчитан на проведение 30 реакций обратной транскрипции, включая
контроли.
Форма комплектации 3 включает:
Реактив
Ревертаза (MMlv)
Описание
Объем, мл
Кол-во
0,06
1 пробирка
Прозрачная бесцветная жидкость
Комплект рассчитан на проведение 60 реакций обратной транскрипции, включая
контроли.
Форма комплектации 4 включает:
Реактив
Ревертаза (MMlv)
Описание
Объем, мл
Кол-во
2,5
1 пробирка
Прозрачная бесцветная жидкость
Комплект рассчитан на проведение 2500 реакций обратной транскрипции,
включая контроли.
Форма комплектации 5 включает:
Реактив
Ревертаза (MMlv)
Описание
Объем, мл
Кол-во
5,0
1 пробирка
Прозрачная бесцветная жидкость
Комплект рассчитан на проведение 5000 реакций обратной транскрипции,
включая контроли.
ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ
Протокол для синтеза первой цепи кДНК:
1. РНК (мРНК) в количестве 1-2 мкг (не более!) смешать с затравочным
праймером (олиго-dT, случайными гексануклеотидами или специфическим
праймером), объем смеси не должен превышать 15 мкл.
Форма 1: REF R2-1; Форма 2: REF 924; Форма 3: REF 926; Форма 4: REF R2-1-2,5;
Форма 5: REF R2-1-5,0 / VER 11.02.15 / стр. 6 из 9
2. Прогреть смесь при 70 °С 5 минут и охладить во льду.
3. К смеси РНК с праймером добавить:

5 мкл 5х ОТ-буфера,

5 мкл нуклеотидтрифосфатов,

25 единиц ингибитора рибонуклеаз,

200 единиц ревертазы (MMlv) (обратной транскриптазы),

деионизованной воды до конечного объема 25 мкл.
4. Аккуратно перемешать и инкубировать смесь при 37 °С 60 минут.
Готовый препарат кДНК можно хранить при температуре не выше минус
16 °С в течение 1 нед или при температуре не выше минус 68 °С в течение
года.
СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 9 месяцев. Комплект реагентов с истекшим сроком годности
применению не подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку
годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции
не указано иное.
Хранение. Комплект реагентов хранить при температуре от минус 24 С до минус
16 С.
Транспортирование. Комплект реагентов транспортировать при температуре от
2 до 8 °С не более 5 сут.
Рекламации на качество комплекта реагентов «РЕВЕРТАЗА» направлять в
отдел рекламаций, организации обучения и контроля качества по адресу 115035,
г. Москва, ул. Садовническая, д. 20/13, стр. 2 (тел. (495) 664-28-84, факс (495) 66428-89, e-mail: cs@ilslab.ru)1.
1
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
Форма 1: REF R2-1; Форма 2: REF 924; Форма 3: REF 926; Форма 4: REF R2-1-2,5;
Форма 5: REF R2-1-5,0 / VER 11.02.15 / стр. 7 из 9
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
Номер в каталоге
Осторожно!
Обратитесь к
сопроводительной
документации
Код партии
Максимальное
число тестов
Только для
исследовательских и
иных немедицинских
целей
Использовать до
Дата изменения
Обратитесь к
руководству по
эксплуатации
Ограничение
температуры
Не допускать
попадания
солнечного света
Производитель
Дата изготовления
Форма 1: REF R2-1; Форма 2: REF 924; Форма 3: REF 926; Форма 4: REF R2-1-2,5;
Форма 5: REF R2-1-5,0 / VER 11.02.15 / стр. 8 из 9
Лист вносимых изменений
Редакция
Место внесения
изменений
Титульный лист
Суть вносимых изменений
Символ
заменен на
с надписью «Только
для исследовательских и иных немедицинских
целей». Добавлен символ
адрес производителя
04.02.15
ME
11.02.15
BO
Символы,
используемые в
печатной продукции
Срок годности.
Условия
транспортирования
и хранения
Срок годности.
Условия
транспортирования
и хранения
, наименование и
Символ
заменен на
с надписью «Только
для исследовательских и иных немедицинских
целей»
Изменен адресат для направления рекламаций
Удален подраздел «Условия отпуска»
Форма 1: REF R2-1; Форма 2: REF 924; Форма 3: REF 926; Форма 4: REF R2-1-2,5;
Форма 5: REF R2-1-5,0 / VER 11.02.15 / стр. 9 из 9