012725 - 1 - Область техники, к которой относится изобретение

012725
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится, в основном, к применению модуляторов CD3, таких как антиCD3 антитела, с целью индуцировать иммунологическую толерантность и модулировать иммунный ответ для лечения аутоиммунных заболеваний и/или воспалительных заболеваний.
Уровень техники
Иммунная система является весьма сложной и строго регулируется, с множеством альтернативных
путей, способных компенсировать дефициты в других частях системы. Однако бывают случаи, когда
иммунный ответ, будучи активированным, становится причиной болезни или других нежелательных состояний. Указанными болезнями или нежелательными состояниями являются, например, аутоиммунные
заболевания, реакция отторжения трансплантата, аллергия на безвредные антигены, псориаз, хронические воспалительные заболевания, такие как атеросклероз, и воспаление в целом. В указанных случаях и
в других случаях, в которых задействован неуместный или нежелательный иммунный ответ, существует
клиническая потребность в подавлении иммунного ответа.
Соответственно, существует потребность в композициях, которые можно использовать для лечения
заболеваний и/или расстройств, связанных с иммунной системой.
Сущность изобретения
Изобретение основано на открытии того факта, что модулирование экспрессии или активности CD3
приводит к ингибированию воспаления на модели клинического увеита у экспериментальных крыс и к
уменьшению развития атеросклеротических бляшек на модели клинического атеросклероза у экспериментальных мышей. Соответственно, изобретение относится к способам предотвращения или ингибирования воспаления в ткани организма. Воспаленная ткань, в целом, характеризуется покраснением, болью
и опуханием ткани. Увеит характеризуется снижением остроты зрения, наличием клеток и помутнения
(фибрин, денатурированные белки) в стекловидном теле (задней части глаза) и передней камере. Ткань
включает ткань глаза, например ткань сосудистой оболочки глазного яблока, или сердечную ткань, например вену, артерию иди капилляр.
Воспаление ингибируется под воздействием на клетку или ткань модулятора CD3 в количестве, которое вызывает уменьшение выработки провоспалительного цитокина, увеличение выработки противовоспалительного цитокина, или в количестве, которое вызывает иммунологическую толерантность.
Изобретение относится к способам ингибирования образования атеросклеротической бляшки посредством воздействия на клетки, экспрессирующие CD3, модулятором CD3. Атеросклеротическая
бляшка ингибируется таким образом, что количество бляшки, связанное со стенкой артерии, уменьшается после воздействия модулятора CD3, по сравнению с ранее имевшим место воздействием ингибитора
CD3.
Клетка представляет собой любую клетку, которая способная экспрессировать CD3, например лимфоцит, такой как Т-клетка. Т-клетка представляет собой циркулирующую Т-клетку, т.е. находящуюся в
крови или лимфе. Альтернативно, Т-клетка находится в ткани, например в лимфатическом узле, лимфатических протоках, лимфатических сосудах и селезенке. Ткань представляет собой воспаленную ткань
(или ткань с риском развития воспаления). Под воздействием подразумевается то, что клетка или ткань
контактирует с модулятором CD3. Клетка ткани контактирует непосредственно или опосредованно (т.е.
системно). Клетка контактирует in vivo, in vitro или ex vivo.
Изобретение относится также к способам профилактики или облегчения симптома воспалительного
расстройства путем идентификации субъекта, страдающего воспалительным расстройством или имеющего риск развития воспалительного расстройства и введения субъекту модулятора CD3.
Модулятор CD3 представляет собой соединение, которое уменьшает экспрессию или активность
CD3. Один из видов активности CD3 заключается в активации Т-клеток. Способы измерения активации
Т-клеток хорошо известны специалистам. К модуляторам CD3 относятся, например, анти-CD3 антитела.
Модуляторы CD3 вводят в отдельности или в комбинации с другим противовоспалительным агентом или
иммунодепрессантными лекарственными средствами, используемыми для лечения воспалительного расстройства. Например, модулятор CD3 вводят с кортикостероидом, статином, интерфероном-бета, нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами (NSAID), метотрексатом, циклоспорином А или модифицирующими заболевание противоревматическими лекарственными средствами
(DMARD).
Субъектом является млекопитающее, такое как человек, мышь, крыса, собака, кошка, корова, лошадь и свинья. Субъект страдает воспалительным расстройством или имеет риск развития воспалительного расстройства. Воспалительные расстройства включают сердечно-сосудистое воспаление, воспаление глаза, воспаление желудочно-кишечного тракта, воспаление печени, воспаление легких, аутоиммунные расстройства или воспаление мышц. Субъекта, страдающего воспалительным расстройством или
имеющего риск развития воспалительного расстройства, выявляют с использованием способов, известных специалистам, например макроскопического исследования ткани или выявления воспаления, связанного с тканью или кровью. Симптомы воспаления включают боль, покраснение и опухание пораженной ткани.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе,
-1-
012725
имеют общепринятое значение, понятное специалистам в той области, к которой относится настоящее
изобретение. Несмотря на то, что способы и материалы, сходные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящем документе, можно использовать в практике или испытании настоящего изобретения,
подходящие способы и материалы описаны ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие
ссылки, упомянутые в настоящем документе, целиком включены в настоящий документ в качестве ссылок. В случае конфликта настоящее описание, включая определения, будет доминировать. Кроме того,
материалы, способы и примеры являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения.
Другие признаки и преимущества изобретение будут понятны из следующего подробного описания
и формулы изобретения.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 представляет собой график, изображающий клинические и гистологические эффекты терапии с использованием анти-CD3 на модели увеита у крыс;
фиг. 2 - график, изображающий ингибирующий эффект терапии с использованием анти-CD3 в отношении развития атеросклеротических бляшек в основании аорты у мышей;
фиг. 3 - график, изображающий ингибирующий эффект терапии с использованием анти-CD3 в отношении прогрессирования уже образовавшихся атеросклеротических поражений у мышей.
Подробное описание изобретения
Изобретение основано, частично, на открытии того факта, что модулирование экспрессии или активности CD3 приводит к уменьшению иммунного ответа и к противовоспалительному эффекту. Более
конкретно введение анти-CD3 антител приводит к уменьшению признаков и симптомов, связанных с
увеитом, и к уменьшению развития атеросклеротических бляшек.
CD3 представляет собой комплекс по меньшей мере пяти связанных с мембраной полипептидов в
зрелых Т-лимфоцитах, которые связаны друг с другом и с рецептором Т-клетки нековалентной связью.
Комплекс CD3 включает в себя цепи гамма, дельта, эпсилон, зета и эта (также называемые субъединицами). Когда антиген связывается с рецептором Т-клетки, комплекс CD3 преобразовывает активирующие
сигналы для цитоплазмы Т-клетки.
Модуляторы CD3.
Модулятор CD3 относится к агенту, который модулирует экспрессию или активность CD3. Под модулированием подразумевается, что агент способствует, увеличивает, уменьшает или нейтрализует экспрессию или активность CD3. Активность CD3 включает, например, преобразование сигнала активации
Т-клетки. Активация Т-клеток определяется увеличением количества кальций-опосредованного внутриклеточного цГМФ или увеличением количества клеточных поверхностных рецепторов для IL-2. Например, повышение активации Т-клеток характеризуется уменьшением количества кальцийопосредованного внутриклеточного цГМФ или уменьшением количества рецепторов для IL-2 в присутствии соединения, по сравнению с отсутствием соединения. Внутриклеточный цГМФ измеряют, например, посредством конкурентного иммуноанализа или сцинтилляционного анализа с использованием
имеющихся в продаже тест-наборов. Клеточные поверхностные рецепторы для IL-2 измеряют, например,
посредством определения связывания с антителом против рецепторов IL-2, таким как РС61 антитело.
Модулятор CD3 включает, например, анти-CD3 антитела или их фрагменты. Необязательно, антиCD3 антитело представляет собой анти-CD3 антитело с одной цепью, биспецифичное анти-CD3 антитело
или гетероконъюгат анти-CD3 антитела. Антитело представляет собой активирующее анти-CD3 антитело, таким образом, оно индуцирует активность CD3. Альтернативно, антитело представляет собой нейтрализующее анти-CD3 антитело, таким образом, оно уменьшает активность CD3.
Анти-CD3 антитела хорошо известны специалистам. Примеры анти-CD3 антител включают, без ограничения, ОКТ3, G4.18, 145-2С11, Leu4, HIT3a, BC3, SK7, SP34, RIV-9 и UCHT1. Предпочтительно анти-CD3 антитело связывается с теми же эпитопами, что и ОКТ3, G4.18, 145-2С11, Leu4, HIT3a, BC3,
SK7, SP34, RIV-9 и UCHT1. Предпочтительно антитело является гуманизированным или эквинизированным с целью уменьшения иммунного ответа хозяина на антитело.
Специалистам будет понятно, что возможно определить, без излишнего экспериментирования, имеет ли антитело те же эпитопы, что и анти-CD3 антитело ОКТ3, G4.18, 145-2С11, Leu4, HIT3a, ВС3, SK7,
SP34, RIV-9 и UCHT1, выяснив, предотвращают ли первые связывание последних с антигенным полипептидом CD3 или другим антигенным полипептидом поверхности Т-клетки. Антигенный полипептид
CD3 представляет собой, например, полипептид CD3-эпсилон, комплексированный с другой полипептидной субъединицей CD3 (например, с цепью гамма, дельта, эпсилон, зета или эта). Если испытуемое
антитело конкурирует с антителом по настоящему изобретению, что показывает уменьшение связывания
с антителом по настоящему изобретению, то два антитела связываются с одним и тем же или близкородственным эпитопом. Другим способом определить, обладает ли антитело специфичностью, свойственной
антителу по настоящему изобретению, является предварительная инкубация антитела по настоящему
изобретению с антигенным полипептидом CD3 или с поверхностным антигенным полипептидом Тклетки, с которым он в норме взаимодействует, а затем добавление испытуемого антитела, чтобы определить, ингибируется ли способность испытуемого антитела связываться с CD3 или с поверхностным
антигенным полипептидом Т-клетки. Если испытуемое антитело ингибируется, то, по всей вероятности,
-2-
012725
оно обладает той же или функционально эквивалентной эпитопной специфичностью, что и антитело по
настоящему изобретению.
Используемый в настоящем документе термин «антитело» относится к молекулам иммуноглобулинов и к иммунологически активным частям молекул иммуноглобулинов (Ig), т.е. к молекулам, которые
содержат сайт связывания антигена, который специфичным образом связывается (вступает в иммунологическую реакцию) с антигеном. Указанные антитела включают поликлональные, моноклональные, химерные, одноцепочечные, Fab, Fab' и F(ab')2 фрагменты и библиотеку экспрессии Fab. Предпочтительно антитело представляет собой полностью человеческое антитело. Под «специфическим связыванием» или
«иммунологическим взаимодействием» подразумевается, что антитело взаимодействует с одной или более антигенными детерминантами желательного антигена и не взаимодействует (т.е. не связывается) с
другими полипептидами или связывается с другими полипептидами с гораздо более низким сродством
(Kd>10-6).
Используемый в настоящем документе термин «эпитоп» включает любую белковую детерминанту,
способную специфичным образом связываться с иммуноглобулином, scFv или рецептором Т-клетки.
Термин «эпитоп» включает любую белковую детерминанту, способную специфичным образом связываться с иммуноглобулином или рецептором Т-клетки. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи сахаров, и обычно имеют специфичные пространственные структурные характеристики а также специфичные характеристики зарядов. Вышеупомянутое антитело специфичным образом связывается с антигеном, когда постоянная диссоциации составляет ≤1 мкМ, предпочтительно ≤100 нМ и наиболее предпочтительно ≤10 нМ.
Используемые в настоящем документе термины «иммунологическое связывание» и «свойства иммунологического связывания» относятся к нековалентным взаимодействиям того типа, который наблюдается между молекулой иммуноглобулина и антигеном, по отношению с которому иммуноглобулин
является специфичным. Сила или аффинность взаимодействий иммунологического связывания можно
выразить на основе константы диссоциации (Kd) взаимодействия, где Kd представляет более сильную
аффинность. Свойства иммунологического связывания выбранных полипептидов определяют количественно, с использованием способов, хорошо известных специалистам. Один подобный способ заключается в измерении скоростей формирования и диссоциации комплекса сайт связывания антигена/антиген,
где указанные скорости зависят от концентраций партнеров комплекса, аффинности взаимодействия и
геометрических параметров, который в равной степени влияют на скорость в обоих направлениях. Таким
образом, «коэффициент кинетики формирования» (Kon) и «коэффициент кинетики диссоциации» (Koff)
можно определить путем расчета концентраций и истинных скоростей ассоциации и диссоциации, (см.
Nature 361:186-87 (1993)). Соотношение Koff/Kon делает возможным аннулирование всех параметров, не
связанных с аффинностью, и равно константе диссоциации Kd. (См., в общих чертах, Davies et al. (1990)
Annual Rev. Biochem. 59:439-437). Антитело по настоящему изобретению, как полагают, специфичным
образом связывается с эпитопом CD3, когда постоянная диссоциации составляет ≤1 мкМ, предпочтительно ≤100 нМ, более предпочтительно ≤10 нМ и наиболее предпочтительно от ≤100 пМ до 1 рМ, по
результатом таких анализов, как анализ радиолигандного связывания или сходные исследования, известные специалистам.
Желательным является модифицировать антитело по настоящему изобретению с учетом эффекторной функции, таким образом, чтобы повысить эффективность антитела для лечения заболеваний, связанных с иммунной системой. Например, в область Fc можно ввести остаток (остатки) цистеина, что позволяет образоваться межцепьевой дисульфидной связи в данной области. Гомодимерное антитело, образованное таким образом, может иметь улучшенную интернализационную способность и/или повышенную
способность комплемент-опосредованного уничтожения клеток и антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC). (См. Caron et al., J. Exp. Med., 176: 1191-1195 (1992) и Shopes, J. Immunol., 148:
2918-2922 (1992)). Альтернативно, с помощью генной инженерии можно получить антитело, которое
имеет двойные области Fc и может, таким образом, усиливать комплементный лизис и возможности
ADCC. (См. Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3: 219-230 (1989)).
Антитела очищают общеизвестными способами, такими как аффинная хроматография, с использованием белка А или белка G, которые преимущественно составляют фракцию IgG в иммунной сыворотке. Затем или альтернативно, специфичный антиген, который является мишенью искомого иммуноглобулина, или его эпитоп, можно иммобилизовать на колонке, чтобы выделить иммуноспецифичное антитело путем иммуноаффинной хроматографии. Выделение иммуноглобулинов обсуждается, например, D.
Wilkinson (The Scientist, опубликовано The Scientist, Inc., Philadelphia PA, Vol. 14, № 8 (17 апреля 2000 г.),
стр. 25-28).
Терапевтические способы.
Воспаление ингибируют воздействием, например контактированием ткани или клетки, экспрессирующей CD3, с модулятором CD3, например анти-CD3 антителом. Клетка, экспрессирующая CD3, представляет собой, например, лимфоцит, такой как Т-клетка. Т-клетки включают в себя цитотоксические Т-3-
012725
клетки, Т-клетки - хелперы (например, Th1 и Th2) и Т-клетки - натуральные киллеры. Ткани, на которые
воздействуют, включают ткань желудочно-кишечного тракта, например ткань кишечника, сердечную
ткань, например вену, артерию или капилляр, легочную ткань, ткань кожи, ткань глаза, например радужную оболочку, ресничное тело или сосудистую оболочку, или печеночную ткань.
Ингибирование воспаления можно охарактеризовать уменьшением красноты, боли и опухания ткани, на которую воздействовали, по сравнению с тканью, которая не была в контакте с модулятором CD3.
Альтернативно, что касается увеита, ингибирование воспаления характеризуется повышением остроты
зрения и уменьшением количества клеток и помутнения (фибрин, денатурированные белки) в стекловидном теле (т.е. в задней части глаза) и передней камере глаза. Ткани или клетки непосредственно контактируют с модулятором CD3. Альтернативно, модулятор CD3 вводят системно. Модуляторы CD3 вводят
в количестве, достаточном для уменьшения (например, ингибирования) выработки провоспалительных
цитокинов. Провоспалительный цитокин представляет собой цитокин, который индуцирует воспалительный ответ. Провоспалительный цитокин включает, например, интерлейкин (IL)-1, фактор некроза
опухолей (TNF), IL-17, IL-8 и воспалительный белок-1-альфа макрофагов (MIP-1-альфа). Альтернативно,
модуляторы CD3 вводят в количестве, достаточном для увеличения (например, ускорения) выработки
противовоспалительных цитокинов. Противовоспалительный цитокин представляет собой цитокин, который уменьшает воспалительный ответ. Более конкретно противовоспалительный цитокин контролирует ответ провоспалительных цитокинов для регуляции иммунного ответа. Противовоспалительные цитокины включают, например, антагонист рецепторов интерлейкина (IL)-1, TGFβ, IL-4, IL-6, IL-10, IL-11 и
IL-13. Цитокины выявляют, например, в сыворотке, плазме или ткани. Выработку цитокинов измеряют
способами, известными специалистам. Например, выработку цитокинов определяют с использованием
иммунологического анализа, специфичного для провоспалительного цитокина или противовоспалительного цитокина.
Воспалительный ответ оценивают морфологически, путем осмотра повреждения ткани, локализованного покраснения, опухания пораженной области, наличия клеток и помутнения в стекловидном теле
и передней камере глаза. Альтернативно, воспалительный ответ оценивают путем измерения среактивного белка или IL-1 в ткани, сыворотке или плазме. Возвращение к исходному содержанию лейкоцитов также показывает уменьшение воспаления.
Альтернативно, воспаление уменьшают воздействием на ткань или клетку, экспрессирующую CD3,
модулятором CD3 в количестве, достаточном для перераспределения и/или устранения комплекса CD3рецептор Т-клетки или комплекса CD3 на поверхности клетки, например лимфоцита. Например, на клетку, экспрессирующую CD3, воздействуют модулятором CD3 в количестве, достаточном для модулирования, например уменьшения, контакта между клетками, экспрессирующими CD3. Под уменьшением
уровня экспрессии на поверхности клеток или активности TcR на клетке подразумевают, что количество
или функция TcR уменьшается. Под модулированием уровня экспрессии на поверхности клеток или активности CD3 подразумевают, что количество CD3 на поверхности клеток или функция CD3 изменяется,
например уменьшается. Количество CD3 или TcR, экспрессируемых на плазматической мембране клетки, уменьшается, например, путем интернализации CD3 или TcR после контакта клетки с модулятором
CD3. Альтернативно, после контакта клетки с модулятором CD3, CD3 маскируется. Перераспределение
и/или устранение комплекса CD3-рецептор Т-клетки на поверхности клетки приводит к иммунологическому подавлению или иммунологической толерантности. Иммунологическое подавление представляет
собой неспособность проявлять общий иммунный ответ на все антигены, что приводит к облегчению
одного или более симптомов аутоиммунного расстройства или к уменьшению воспалительного ответа.
Иммунологическое подавление является обратимым, если лечение модулятором CD3 прекратить. Таким
образом, иммунологическое подавление является особенно подходящим для лечения или облегчения
симптома острого воспалительного расстройства. Напротив, иммунологическая толерантность представляет собой неспособность проявлять иммунный ответ на конкретный антиген, что приводит к облегчению одного или более симптомов аутоиммунного расстройства или к уменьшению воспалительного ответа, которые сохраняются длительное время после прекращения лечения. Иммунологическая толерантность сохраняется в течение по меньшей мере 1 недели, 1 месяца, 3 месяцев, 6 месяцев, 1 года, 2 лет или
5 или более лет после прекращения лечения. Таким образом, иммунологическая толерантность является
особенно подходящей для лечения или облегчения симптома хронического воспалительного расстройства. Долгосрочной иммунологической толерантности можно добиться через гуморальные механизмы,
такие как цитокины, и через непосредственный контакт клеток, в котором принимают участие, без ограничения, гранзим А, гранзим В и/или перфорин.
Образование атеросклеротической бляшки в артерии, т.е. на стенке артерии, уменьшается или предотвращается введением субъекту модулятора CD3. Бляшка представляет собой комбинацию холестерина, других жировых материалов, кальция и компонентов крови, которые накапливаются в выстилке артериальной стенки. Уменьшение атеросклеротической бляшки определяется уменьшением сужения просвета сосуда, т.е. расширением просвета сосуда. Ширина просвета сосуда измеряется способами, известными специалистам, такими как контрастная ангиография и анализ динамики формы волны Допплера.
Способы являются пригодными для облегчения симптомов ряда воспалительных расстройств или
-4-
012725
аутоиммунных заболеваний. Воспалительное расстройство является острым или хроническим. Воспалительные расстройства включают воспаление в сердечно-сосудистой системе (например, атеросклероз,
инсульт), воспаление в желудочно-кишечном тракте, воспалительные расстройства печени, воспаление
легких (например, астму, повреждение легких в результате искусственной вентиляции), воспаление почки, воспаление глаза (например, увеит), воспаление поджелудочной железы, воспаление мочеполовых
путей, нейровоспалительные расстройства (например, рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера), аллергию (например, аллергический ринит/синусит, кожные аллергии и расстройства (например, крапивница,
ангионевротический отек, атопический дерматит, контактный дерматит, псориаз), пищевые аллергии,
лекарственные аллергии, аллергии на насекомых, мастоцитоз), воспаление опорно-двигательного аппарата (например, артрит, остеоартрит, ревматоидный артрит, спондилоартропатии), инфекцию (например,
бактериальные или вирусные инфекции), воспалительные расстройства ротовой полости (например, пародонтит, гингивит или стоматит) и трансплантацию (например, отторжение аллотрансплантата или ксенотрансплантата или толерантность мать-плод).
Аутоиммунные заболевания включают, например, синдром приобретенного иммунодефицита
(СПИД, который представляет собой вирусное заболевание с аутоиммунным компонентом), гнездную
алопецию, анкилозирующий спондилит, антифосфолипидный синдром, аутоиммунную болезнь Аддисона, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, аутоиммунную болезнь внутреннего уха (AIED), аутоиммунный лимфопролиферативный синдром (ALPS), аутоиммунную тромбоцитопеническую пурпуру (АТР), болезнь Бехчета, кардиомиопатию, целиакию-спру, герпетиформный дерматит, синдром хронической усталости - иммунной дисфункции (CFIDS), хроническую воспалительную
демиелинизирующую полиневропатию (CIPD), рубцовый пемфигоид, простудную аглютининовую болезнь, гребешковый синдром, болезнь Крона, болезнь Дего, ювенильный дерматомиозит, дискоидную
красную волчанку, эссенциальную смешанную криоглобулинемию, фибромиалгию-фибромиозит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, тиреоидит Хашимото, идиопатический пневмосклероз, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ITP), IgA нефропатию, инсулинзависимый сахарный диабет,
ювенильный хронический артрит (болезнь Стилла), ювенильный ревматоидный артрит, болезнь Меньера, смешанную болезнь соединительной ткани, рассеянный склероз, астенический бульбарный паралич,
пернациозную анемию, узелковый полиартериит, полихондрит, полигландулярные синдромы, ревматическую полимиалгию, полимиозит и дерматомиозит, первичную агаммаглобулинемию, первичный билиарный цирроз, псориаз, псориатический артрит, феномены Рейно, синдром Рейтера, ревматический полиартрит, ревматоидный артрит, саркоидоз, склеродермию (прогрессивный системный склероз (PSS),
известный также как системный склероз (SS)), синдром Шегрена, stiff-man синдром, системную красную
волчанку, артериит Такаясу, височный артериит/гигантоклеточный артериит, язвенный колит, увеит,
витилиго и гранулематоз Вегенера.
Способы, описанные в настоящем документе, приводят к уменьшению тяжести или к облегчению
одного или более симптомов воспалительного расстройства или аутоиммунного заболевания, такого как
расстройства или заболевания, описанные в настоящем документе. Эффективность лечения определяется
в связи с любым известным способом диагностики или лечения конкретного воспалительного расстройства. Облегчение одного или более симптомов воспалительного расстройства или аутоиммунного заболевания показывает, что соединение обеспечивает клинический благоприятный эффект. Воспалительные
расстройства и аутоиммунные расстройства диагностируют и/или мониторируют обычно силами лечащего врача или ветеринара, с использованием стандартных методик.
Увеит.
Увеит определяется как воспаление сосудистой оболочки глаза. Сосудистая оболочка глаза состоит
из трех структур: радужной оболочки, ресничного тела и хориоида. Радужная оболочка представляет
собой окрашенную структуру, окружающую зрачок, который виден во фронтальной поверхности глаза.
Ресничное тело представляет собой структуру, содержащую мышцу, и расположено позади радужной
оболочки, которая фокусирует линзу. Хориоид представляет собой слой, содержащий кровеносные сосуды, которые выстилают заднюю часть глаза и располагаются между сетчаткой и склерой. Симптомы
увеита включают снижение остроты зрения, наличие клеток и помутнения (фибрин, денатурированные
белки) в стекловидном теле и передней камере глаза, и воспаление сосудов сетчатки. Радужная оболочка
может прилипать к капсуле хрусталика (задней синехии) или, реже, к периферической роговице (передней синехии). Кроме того, могут наблюдаться грануломатозные узлы в строме радужной оболочки.
Внутриглазное давление в пораженном глазе первоначально уменьшено в силу секреторной гипотонии
ресничного тела. Однако поскольку реакция персистирует, побочные продукты воспаления могут накапливаться в трабекуле. Если указанные остатки накапливаются в значительном количестве и если ресничное тело продолжает свою обычную секрецию, давление может резко повыситься, что приводит к вторичной увеитической глаукоме.
Диагноз увеита ставят по результатам офтальмологического исследования, которое проводит врач
или ветеринар.
Васкулит.
Васкулит представляет собой воспаление кровеносных сосудов. Воспаление представляет собой со-5-
012725
стояние, при котором ткань повреждается клетками крови, проникающими в ткани. Это, в основном,
лейкоциты, которые циркулируют в крови и служат нашей главной защитой против инфекции. Обычно
лейкоциты разрушают бактерии и вирусы. Однако они также могут повреждать нормальную ткань, если
они проникают в нее. Васкулит может поражать очень маленькие кровеносные сосуды (капилляры), кровеносные сосуды средних размеров (артериолы или венулы) или крупные кровеносные сосуды (артерии
и вены).
Васкулит может вызывать множество различных симптомов, в зависимости от того, какие ткани
поражены, и от тяжести повреждения тканей. Некоторые пациенты не являются больными и замечают
время от времени пятна на коже. Другие пациенты очень больны и имеют системные симптомы и большое повреждение органов. Симптомы включают лихорадку, плохое самочувствие (чувствуют себя больными), боль в мышцах и суставах, плохой аппетит, снижение массы тела, утомляемость, петехии, пурпуру, области некротизированной кожи могут проявляться как язвы (особенно, вокруг локтей), ноющие
боли в суставах и очевидный артрит, сопровождающийся болью, опуханием и жжением в суставах, головные боли, расстройства поведения, спутанность сознания, припадки, инсульты, чувства онемения и
покалывания. Диагноз васкулита ставят на основании анамнеза, имеющихся у пациента симптомов, полного физикального обследования и результатов специализированных лабораторных анализов. Отклонения от нормы по крови, которые часто наблюдаются при васкулите, включают повышенную скорость
оседания эритроцитов, анемию, лейкоцитоз и тромбоцитоз. Анализы крови также можно использовать
для идентификации иммунных комплексов или антител, которые вызывают васкулит при циркуляции по
сосудам, и для определения отклонений уровней комплемента в крови.
Атеросклероз.
Атеросклероз вызывает отложение жировых веществ, холестерина, отходов жизнедеятельности
клеток и кальция на внутренней выстилке артерии (т.е., образование бляшки) и имеет значительный воспалительный компонент. Со временем указанная жировая ткань может эродировать стенку артерии,
уменьшить ее эластичность (растяжимость) и создавать препятствие для кровотока. Бляшки также могут
разрываться, в результате чего остатки мигрируют в артерии по течению крови. Это является распространенной причиной сердечных приступов и инсульта. Вокруг бляшечных отложений также могут образовываться кровяные сгустки, еще более препятствующие кровотоку и создающие дополнительную
опасность в случае своего отрыва и миграции в сердце, легкие или головной мозг.
Атеросклероз часто не имеет симптомов до тех пор, пока кровеносный сосуд не будет серьезно поражен. Типичные симптомы атеросклероза включают боль в груди, когда поражена коронарная артерия,
или боль в ноге, когда поражена артерия ноги. Иногда симптомы наблюдаются только при физической
нагрузке. У некоторых людей, однако, они могут иметь место в состоянии покоя.
Факторы риска включают курение, диабет, ожирение, высокое содержание холестерина в крови,
питание с высоким содержанием жиров, а также сердечное заболевание в персональном или семейном
анамнезе. Цереброваскулярная болезнь, болезнь периферических сосудов, высокое артериальное давление и заболевание почек, требующее проведения диализа, также представляют собой расстройства, которые могут быть связаны с атеросклерозом.
Терапевтическое введение.
Изобретение включает введение субъекту, например человеку или лошади, композиции, включающей модулятор CD3 (далее в настоящем документе называемый «терапевтическим соединением»).
Эффективное количество терапевтического соединения предпочтительно составляет приблизительно от 0,1 до 150 мг/кг. Эффективные дозы варьируют, что понятно специалистам, в зависимости от пути
введения, использования наполнителя и совместного введения с другими терапевтическими средствами,
включая использование других противовоспалительных агентов или терапевтических агентов для лечения, профилактики или облегчения симптома конкретного воспалительного расстройства. Терапевтический режим осуществляют путем идентификации млекопитающего, например человека или лошади,
страдающего воспалительным расстройством (или имеющего риск развития воспалительного расстройства) или аутоиммунными расстройствами, с использованием стандартных методик.
Фармацевтическое соединение вводят указанному индивидууму способами, известными специалистам. Предпочтительно соединения вводят перорально, ректально, назально, местно или парентерально,
например подкожно, интраперитонеально, внутримышечно и внутривенно. Соединение вводят профилактически или после выявления воспалительного события, такого как приступ астмы или аллергическая
реакция. Соединение, необязательно, изготавливают как компонент смеси терапевтических лекарственных средств для лечения воспалительных расстройств. Примеры композиций, подходящих для парентерального введения, включают водные растворы активного агента в изотоническом солевом растворе, 5%
растворе глюкозы или в другом стандартном фармацевтически приемлемом наполнителе. Стандартные
солюбилизирующие агенты, такие как PVP или циклодекстрины, также используют в качестве фармацевтических наполнителей для доставки терапевтических соединений.
Терапевтические соединения, описанные в настоящем документе, изготавливают в виде композиций для других путей введения, с использованием обычных способов. Например, терапевтическое соединение - ингибитор изготавливают в виде капсулы или таблетки для перорального введения. Капсулы
-6-
012725
могут содержать любые стандартные фармацевтически приемлемые материалы, такие как желатин или
целлюлоза. Таблетки можно изготавливать в соответствии с обычными технологиями, путем прессования смесей терапевтического соединения с твердым носителем и смазывающим агентом. Примеры твердых носителей включают крахмал, сахар и бентонит. Соединение вводят в форме покрытой твердой оболочкой таблетки или капсулы, содержащей связующий агент, например лактозу или маннит, обычный
наполнитель и таблетирующий агент. Другие композиции включают мазь, суппозиторий, пасту, спрей,
пластырь, крем, гель, рассасывающуюся губку или пену. Указанные композиции изготавливают с использованием способов, хорошо известных специалистам.
Терапевтические соединения является эффективными при прямом контакте соединения с пораженной тканью. Соответственно, соединение вводят местно. Например, для лечения контактного дерматита
соединение наносят на область пораженной кожи. Альтернативно, терапевтическое соединение вводят
системно. Кроме того, соединения вводят путем имплантирования (непосредственно в орган, такой как
кишка или печень, или подкожно) твердой или рассасывающейся основы, которая медленно высвобождает соединение в прилегающие и окружающие ткани субъекта.
Например, для лечения воспалительных расстройств желудочно-кишечного тракта соединение вводят системно или локально, непосредственно в ткань желудка. При системном введении соединение вводят внутривенно, ректально или перорально. Для местного применения пластину или рассасывающуюся
губку, импрегнированную соединением, помещают в непосредственный контакт с тканью желудка. Соединение или смесь соединений медленно высвобождаются in vivo путем диффузии лекарственного
средства из пластины и эрозии полимерной основы.
Воспаление печени (т.е. гепатит) лечат, например, инфузией в сосудистое русло печени раствора,
содержащего соединение. Интраперитонеальная инфузия или лаваж является пригодной для уменьшения
генерализованного интраперитонеального воспаления или для профилактики воспаления после хирургического вмешательства.
Для лечения неврологического воспаления соединение вводят внутривенно или интратекально (т.е.
прямой инфузией в спинномозговую жидкость). Для местного применения пластину или рассасывающуюся губку, импрегнированную соединением, помещают в непосредственный контакт с тканью ЦНС.
Соединение или смесь соединений медленно высвобождаются in vivo путем диффузии лекарственного
средства из пластины и эрозии полимерной основы. Альтернативно, соединение вводят инфузией в головной мозг или спинномозговую жидкость, используя известные способы. Например, используют кольцевое отверстие с катетером в качестве входного отверстия для инфузии, совпадающего с просверленным в черепе отверстием. Доступ в резервуар с жидкостью, соединенный с катетером, обеспечивают иглой или стилетом, вставленным через перегородку, расположенную в верхней части кольцевого отверстия. Катетерное устройство (например, устройство, описанное в патенте США № 5954687) обеспечивает
путь для истечения жидкости, подходящий для переноса жидкости в выбранное место или из выбранного
места на головном мозге, вблизи от головного мозга или внутри головного мозга, что позволяет вводить
лекарственное средство в течение определенного периода времени.
Для лечения воспаления сердца соединение доставляют, например, к ткани сердца посредством
прямой интракоронарной инъекции через грудную стенку или с использованием стандартных методик с
чрескожным катетером под рентгеноскопическим контролем для прямой инъекции в ткань, такую как
миокард, или посредством инфузии ингибитора из стента или катетера, установленного в просвете определенного органа. Любой вариант коронарного катетера или перфузионного катетера используют для
введения соединения. Альтернативно, соединение наносят на стент или импрегнируют стент, который
помещают в коронарный сосуд.
Воспаление легких лечат, например, введением соединения путем ингаляции. Соединения доставляют в форме аэрозольного распыления из контейнера или дозатора под давлением, который содержит
подходящий пропеллент, например газ, такой как диоксид углерода, или из небулайзера.
Воспаление глаза лечат, например, введением соединения местно в глаз. Соединения доставляют,
например, в форме геля, жидкости или мази. Мази, гели или жидкости для закапывания можно доставлять с использованием систем доставки, известных как аппликаторы или пипетки. Альтернативно, соединения доставляют в полимерном имплантате, который помещают под конъюнктиву глаза. Необязательно, соединения доставляют системно.
Васкулит лечат через путь, специфичный для обрабатываемой области. Обычно васкулит лечат системно путем внутривенного введения модулятора CD3.
Модуляторы CD3 также вводят в сочетании с одним или более дополнительных терапевтических
соединений, таких как противовоспалительный агент или иммунодепрессант. Например, модулятор CD3
вводят в комбинации с любым из множества лекарственных средств для лечения аутоиммунных заболеваний и/или воспалительных расстройств. Подходящие лекарственные средства для лечения аутоиммунных заболеваний и/или воспалительных расстройств для использования в способах по настоящему изобретению включают, без ограничения, метотрексат, циклоспорин А (включая, например, микроэмульсию
циклоспорина и такролимус), кортикостероиды, статины, интерферон-бета, нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAID) и модифицирующие заболевание противоревматические
-7-
012725
лекарственные средства (DMARD). Дополнительное лекарственное средство вводят до, после или одновременно с введением модулятора CD3.
Благоприятный эффект комбинации включает, без ограничения, совместное фармакокинетическое
или фармакодинамическое действие, которое обеспечивается комбинацией терапевтических агентов.
Введение указанных терапевтических агентов в комбинации обычно осуществляют в течение определенного периоды времени (обычно в течение минут, часов, дней или недель, в зависимости от выбранной
комбинации). «Комбинированная терапия» может включать, хотя обычно не включает, введение двух
или более указанных терапевтических агентов в качестве части отдельных схем монотерапии, в результате которых попутно и произвольно получаются комбинации по настоящему изобретению. Понятие
«комбинированная терапия» охватывает введение указанных терапевтических агентов в последовательном порядке, т.е. когда каждый терапевтический агент вводят в различные моменты времени, а также
практически одновременное введение указанных терапевтических агентов или по меньшей мере двух
терапевтических агентов. Практически одновременное введение можно осуществлять, например, введением субъекту одной капсулы, содержащей фиксированное соотношение каждого терапевтического
агента, или нескольких отдельных капсул для каждого из терапевтических агентов.
Терапевтические агенты можно вводить одним и тем же путем или различными путями. Например,
первый терапевтический агент выбранной комбинации можно вводить путем внутривенной инъекции, в
то время как остальные терапевтические агенты комбинации можно вводить перорально. Альтернативно,
например, все терапевтические агенты можно вводить перорально или все терапевтические агенты можно вводить путем внутривенной инъекции. Последовательность, в которой вводят терапевтические агенты, не является критически важной. Понятие «комбинированная терапия» также может охватывать введение терапевтических агентов, как описано выше, в дополнительной комбинации с другими биологически активными ингредиентами и нелекарственными средствами лечения (например, хирургическим
вмешательством или лучевой терапией). В случае, когда комбинированная терапия дополнительно включает нелекарственное средство лечения, нелекарственное средство лечения можно осуществлять в любое
удобное время, если при этом достигается благоприятный эффект от совместного действия комбинации
терапевтических агентов и нелекарственного средства лечения. Например, в соответствующих случаях,
благоприятный эффект все равно достигается, даже если нелекарственное средство лечения на время
отменяет введение терапевтических агентов, возможно, в течение дней или даже недель.
Для того чтобы оценить благоприятное воздействие на пациента от введения анти-CD3 антитела,
как в отдельности, так и в комбинации, следует изучить симптомы и/или иммунный ответ пациента количественно и сравнить симптомы и/или иммунный ответ пациента до и после лечения антителом. Например, симптом пациента можно определить измерением конкретного симптома или ряда симптомов до
и после лечения aнти-CD3 антителом. Например, можно измерять и мониторировать такие симптомы как
лихорадка, боль в суставах, мышечная слабость, используя любые из стандартных методик измерения,
известных специалистам. При успешном лечении состояния пациента будет улучшаться (т.е. величина
измерения будет уменьшаться или время до стойкого прогрессирования расстройства будет увеличиваться).
Например, при лечении увеита анти-CD3 антитела можно вводить в сочетании, например, с кортикостероидами, метотрексатом, циклоспорином А, циклофосфамидом и/или статинами. Подобно этому,
пациентов, страдающих таким заболеванием как болезнь Крона или псориаз, можно лечить комбинацией
анти-CD3 антитела по настоящему изобретению и ремикаида (Remicaid) (инфликсимаба) и/или гумиры
(Humira) (адалимумаба).
Для лечения ревматоидного артрита анти-CD3 антитела вводят совместно с кортикостероидами,
метотрексатом, циклоспорином А, статинами, ремикадом (Remicade) (инфликсимабом), энбрелом
(Enbrel) (этанерцептом) и/или гумирой (Humira) (адалимумабом).
Пациенты с рассеянным склерозом могут получать комбинацию анти-CD3, например, с ацетатом
глатирамера (Glatiramer acetate) (Copaxone), интерфероном бета-1a (Anovex), интерфероном бета-1a (Rebif), интерфероном бета-1b (Betaseron или Betaferon), митоксантроном (Novantrone), дексаметазоном
(Decadron), метилпреднизолоном (Depo-Medrol), и/или преднизоном (Deltasone), и/или статинами.
Пациентам, страдающим диабетом типа I или латентным аутоиммунным диабетом взрослых
(LADA), также вводят второй агент, такой как, например, GLP-1 или соединение покоя бета-клеток (т.е.
соединение, которое уменьшает или как-либо по-другому ингибирует высвобождение инсулина, такое
как агент, открывающий калиевые каналы).
Кроме того, модуляторы CD3 вводят пациенту как с профилактической целью (т.е. до начала аутоиммунного заболевания и/или воспалительного расстройства), так и с терапевтической целью (т.е., во
время течения аутоиммунного заболевания и/или воспалительного расстройства).
В способах по настоящему изобретению модуляторы вводят в терапевтически эффективном количестве. «Терапевтически эффективное количество» модулятора CD3 относится к количеству, необходимому для достижения терапевтической цели, такой как лечение аутоиммунного заболевания и/или воспалительного расстройства или облегчение симптома, связанного с аутоиммунным заболеванием и/или
воспалительным расстройством.
-8-
012725
Все публикации и патентные документы, процитированные в настоящем документе, включены в
настоящий документ в качестве ссылок, как если бы каждая указанная публикация или документ были
бы конкретно и индивидуально обозначены как включенные в настоящий документ в качестве ссылки.
Цитирование публикаций и патентных документов не должно истолковываться как допущение того, что
какой бы то ни было из них является прототипом, а также не является допущением, что содержание или
данные указанных документов являются прототипами. Изобретение далее описывается с использованием
письменного описания, специалистам будет понятно, что изобретение можно осуществлять на практике с
использованием ряда вариантов осуществления и что предшествующее описание и примеры, приведенные ниже, служат только иллюстративным целям и не ограничивают формулу изобретения, которая будет приведена ниже.
Примеры
Пример 1. Анти-CD3 антитела для лечения увеита.
Анти-CD3 антитела по настоящему изобретению включают в себя любые из ряда моноклональных
антител (mAb), которые распознают CD3, такие как, например, OKT3, SP34, UCHTI или 64.1. (См., например, June, et al., J. Immunol. 136:3945-3952 (1986); Yang, et al., J. Immunol. 137:1097-1100 (1986) и
Hayward, et al., Immunol. 64:87-92 (1988)).
Очищенное мышиное антикрысиное CD3 моноклинальное антитело (BD Pharmingen), называемое
антителом G4.18, испытывали на индуцируемой крысиной модели увеита, как описано, например, в
Wildner G., Diedrichs-Mohring M., Thurau S.R., Eur. J. Immunol. 32(1):299-306 (2002) и в Wildner G., Diedrichs-Mohring M., Int. Immunol. 15(8):927-35 (2003). Антитело G4.18 взаимодействует с клеточным поверхностным антигеном CD3, связанным с рецептором Т-клетки, который обнаруживают в тимоцитах,
периферических Т-лимфоцитах и дендритических эпидермальных Т-клетках. (См., например, Nicolls
M.R., et al., Transplantation 55: 459-468 (1993); Nelson, D.J., et al., J. Exp. Med. 179:203-212 (1994); Morris
D.L. и W.J. Komocsar. J. Pharmacol. Toxicol. Methods 37:37-46 (1997).
Для оценки влияния лечения с использованием анти-CD3 на увеит у крыс индуцировали экспериментальный аутоиммунный увеит (EAU), с использованием процесса интраперитонеального (и/п) переноса Т-клеток. В частности, на день 0 самки крыс Lewis (с массой тела около 140 г каждая), n=3 крысы в
группе, получали и/п инъекцию 2,4×106 клеток L37, трансфектированных PDSAg-2/3, полученным из
аутоантигена сетчатки S-антигена (SAg).
За 30 мин до и через 1, 2 и 3 дня после переноса трансгенных Т-клеток для индуцирования EAU,
крысы получали и/п инъекции 300 мкл физиологического раствора с фосфатным буфером (PBS) (группа
1) или антитело G4.18 в 300 мкл PBS (группа 2). За каждой группой осуществляли ежедневное наблюдение на предмет клинических признаков увеита. Критерии клинической классификации, используемые в
данном исследовании, оценивали только степень воспаления в передней части глаза с использованием
офтальмоскопа, как описано, например, в de Smet et al., J. Autoimmun., vol. 6: 587 (1993). Критерии клинической классификации, которые использовали в описанных в настоящем документе экспериментах,
показаны ниже, в табл. А.
Таблица А
Критерии клинической классификации
* гипопион = седиментация лейкоцитов на дне передней камеры, т.е., «белое озеро»
На день 12 эксперимент заканчивали и производили гистологическую оценку поражения сетчатки у
каждой крысы. Гистологические критерии, описанные в настоящем документе, учитывали только поражение сетчатки, по оценке криосрезов, полученных на день 9 после лечения, как описано, например, в de
Smet et al., J. Autoimmun., vol. 6: 587 (1993). Критерии гистологической классификации, которые использовали в описанных в настоящем документе экспериментах, показаны ниже, в табл. В.
-9-
012725
Таблица В
Критерии гистологической классификации
Клинические признаки увеита начинали появляться на день 3 эксперимента, описанного в настоящем документе. Фиг. 1 представляет собой график, изображающий клинические и гистологические эффекты (по определению с использованием критериев классификации, описанных выше в табл. А и В) на
прогрессирование увеита у крыс, которые получали PBS (т.е. группа 1) и у крыс, которые получали антиCD3 антитело (т.е. группа 2). Результаты, представленные в настоящем документе, представляют собой
среднее от максимального количества баллов по всем глазам в группе за все время наблюдения.
Пример 2. Анти-CD3 антитела для лечения атеросклероза.
Эффекты анти-CD3 антител для лечения атеросклероза оценивали с использованием антимышиного
CD3 антитела хомячков. Эксперименты, описанные в настоящем документе, оценивали влияние терапии
анти-CD3 на развитие атеросклеротических бляшек, а также влияние терапии анти-CD3 на прогрессирование уже имеющихся атеросклеротических повреждений.
Для оценки эффектов терапии с использованием анти-CD3 использовали клеточную линию, продуцирующую фрагменты F(ab')2 моноклонального антитела 1452С11 хомячка, которое связывается с мышиным CD3ε (т.е. с эпсилон-цепью мышиного комплекса CD3). 10-Недельных самцов мышей LDLR-/C57BL/6 использовали в качестве модели атеросклероза in vivo. Для гистологического анализа и анализа
развития атеросклеротических бляшек, а также для анализа пролиферации и цитокинов, однопометным
мышам давали корм с высоким содержанием холестерина (1,25% холестерина, 0% холата) в течение 13
недель или 24 недель. Анти-CD3 F(ab')2 (50 мкг на мышь в день) вводили внутривенно (в/в) в течение 5
дней подряд, начиная с первой недели до (n=5) (т.е. для оценки влияния анти-CD3 антитела на развитие
атеросклеротических бляшек) или через 13 недель (n=9) после начала кормления с высоким содержанием
холестерина (т.е. для оценки влияния анти-CD3 антитела на прогрессирование уже имеющихся атеросклеротических повреждений). Контрольным мышам (n=5 для 13-недельной диеты; n=6 для 24недельной диеты) параллельно инъецировали PBS.
Атеросклеротические повреждения с торако-абдоминальной аорте и аортальном синусе анализировали с использованием окрашивания Суданом IV на жировые отложения (фиг. 2 и 3). Среднее жировое
отложение для каждой аорты рассчитывали по 6 срезам (5 мкм), отделенных друг от друга интервалами в
50 мкм. Количественное определение жирового отложения осуществляли компьютерным визуализи- 10 -
012725
рующим анализом с использованием компьютерной программы MetaMorph6 (Zeiss). Результаты, представленные в настоящем документе, выражены как среднее ± стандартная ошибка среднего (s.e.m.). Разницы между величинами считали достоверными при Р<0,05, с использованием двустороннего Ткритерия Стьюдента.
Как показано на фиг. 2, терапия с использованием анти-CD3 ингибировала развитие атеросклеротических бляшек у мышей. Кроме того, фиг. 3 показывает, что терапия с использованием анти-CD3 также
уменьшала (т.е. ингибировала) прогрессирование развития атеросклеротических бляшек в уже имеющихся поражениях.
Другие варианты осуществления настоящего изобретения
В то время как изобретение было описано в сочетании с подробным описанием, указанное описание
предназначено для иллюстрации и не ограничивает объем изобретения, который определяется объемом
прилагаемой формулы изобретения. Другие особенности, преимущества и модификации находятся в
пределах объема следующей формулы изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Применение анти-CD3 антитела для изготовления лекарственного средства для лечения или облегчения симптома воспалительного расстройства, где указанным воспалительным расстройством является увеит, васкулит или атеросклероз.
2. Применение по п.1, где указанное анти-CD3 антитело ингибирует экспрессию воспалительного
цитокина или увеличивает экспрессию противовоспалительного цитокина.
3. Применение по п.1, где указанное анти-CD3 антитело индуцирует иммунологическую супрессию.
4. Применение по п.1, где указанное анти-CD3 антитело индуцирует иммунологическую толерантность.
5. Применение по п.1, где указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.
6. Применение по п.5, где указанное моноклональное антитело представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело.
7. Применение по п.1, где указанное лекарственное средство предназначено для лечения человека
или лошади.
8. Применение по п.1, где указанное лекарственное средство дополнительно включает противовоспалительный агент или иммунодепрессант.
9. Применение по п.8, где указанный противовоспалительный агент или иммунодепрессант представляет собой кортикостероид, статин, интерферон бета, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), метотрексат, циклоспорин А или модифицирующее заболевание противоревматическое лекарственное средство (DMARD).
10. Применение по п.9, где циклоспорин А представляет собой микроэмульсию циклоспорина или
такролимус.
11. Применение анти-CD3 антитела для изготовления лекарственного средства для уменьшения образования атеросклеротической бляшки в артерии.
12. Применение по п.11, где указанное анти-CD3 антитело ингибирует экспрессию воспалительного
цитокина или увеличивает экспрессию противовоспалительного цитокина в указанной артериальной
ткани.
13. Применение по п.12, где указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.
14. Применение по п.13, где указанное моноклональное антитело представляет собой полностью
человеческое моноклональное антитело.
15. Применение анти-CD3 антитела для изготовления лекарственного средства для ингибирования
воспаления ткани, предназначенного для приведения в непосредственный контакт с воспаленной тканью,
где указанная ткань представляет собой ткань сосуда или ткань глаза.
16. Применение по п.15, где указанное анти-CD3 антитело ингибирует экспрессию воспалительного
цитокина или увеличивает экспрессию противовоспалительного цитокина в указанной воспаленной ткани.
17. Применение по п.15, где указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.
18. Применение по п.17, где указанное моноклональное антитело представляет собой полностью
человеческое моноклональное антитело.
19. Способ лечения или облегчения симптома воспалительного расстройства, включающий идентификацию субъекта, страдающего от воспалительного расстройства или имеющего риск развития указанного воспалительного заболевания, и введение указанному субъекту анти-CD3 антитела, где указанное воспалительное заболевание представляет собой увеит, васкулит или атеросклероз.
20. Способ снижения образования атеросклеротической бляшки в артерии, включающий введение
субъекту анти-CD3 антитела.
21. Способ ингибирования воспаления ткани, включающий воздействие на воспаленную ткань анти-CD3 антителом, где указанной тканью является ткань сосуда или глаза.
- 11 -
012725
22. Способ по любому из пп.19-21, где указанное антитело является моноклональным антителом.
23. Способ по п.22, где указанное моноклональное антитело представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело.
24. Способ по п.19, где указанное лечение или облегчение симптома воспалительного расстройства
дополнительно включает введение субъекту противовоспалительного агента или иммунодепрессанта.
25. Способ по п.24, где указанный противовоспалительный агент или иммунодепрессант представляет собой кортикостероид, статин, интерферон бета, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), метотрексат, циклоспорин А или модифицирующее заболевание противоревматическое лекарственное средство (DMARD).
26. Способ по п.25, где циклоспорин А представляет собой микроэмульсию циклоспорина или такролимус.
27. Способ по любому из пп.19-21, где указанное анти-CD3 антитело ингибирует экспрессию воспалительного цитокина или увеличивает экспрессию противовоспалительного цитокина.
28. Способ по любому из пп.19-21, где указанное анти-CD3 антитело индуцирует иммунологическую супрессию.
29. Способ по любому из пп.19-21, где указанное анти-CD3 антитело индуцирует иммунологическую толерантность.
30. Способ по любому из пп.19-20, где указанным субъектом является человек или лошадь.
Фиг. 1
Фиг. 2
Фиг. 3
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
- 12 -