ИНФЕКТОЛОГИЯ
advertisement
Иммунопатология, аллергология, инфектология Immunopathology, allergology, infectology 2011, №4:4853 ИНФЕКТОЛОГИЯ УДК 616.98:579.834.114:577.27:616.155 Пролиферативный ответ и продукция иммуноцитокинов мононуклеарными клетками периферической крови у больных иксодовым клещевым боррелиозом Е.Н. Ильинских, А.Г. Семенов, И.Н. Ильинских, Е.А. Чередникова Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск, Российская Федерация Proliferative and cytokine responses of peripheral blood mononuclear cells in Lymeborreliosis patients E.N. Ilyinskikh, A.G. Semenov, I.N. Ilyinskikh, E.A. Cherednikova Siberian State Medical University, Tomsk, Russian Federation Аннотация Summary Цель настоящей работы заключалась в изучении особен ностей реакции бластной трансформации (РБТЛ) и про g (ИФg g ) и интерлейкина4 (ИЛ4) в дукции интерферонаg культурах мононуклеарных клеток периферической кро ви, стимулированных живыми и инактивированными Borrelia garinii у больных ИКБ в разные периоды клини ческого течения заболевания. Установлено, что стимуля ция антигеном боррелий культур, полученных от боль ных в острый и хронический периоды заболевания, при водила к существенному росту числа бласттрансформиро g , но ванных лимфоцитов, активно продуцирующих ИФg не ИЛ4, по сравнению соответствующими показателями в контроле и в группе реконвалесцентов. При этом живые боррелии оказались более мощными индукторами секреции g , чем инактивированный корпускулярный антиген. ИФg Наиболее выраженные повышения значений спонтанной g , при одновре и стимулированной РБТЛ и секреции ИФg менном подавлении стимулированной продукции ИЛ4, были отмечены у больных хроническим ИКБ, что может свидетельствовать о роли Тхелпер типа 1подобного от вета в формировании хронического течения ИКБ. The object of this work was to study the peculiarities of g ) and lymphocyte transformation, gamma interferon (IFNg interleukin4 (IL4) production in response to live or inactivated Borrelia garinii antigens stimulation of peripheral blood mononuclear cells in patients with different clinical variants of Lyme borreliosis. It was found that borrelia antigen stimulation of mononuclear cells in early and chronic patients induced increased lymphocyte transformation with g , but not IL4, compared to upregulated production of IFNg control and convalescent groups. Stimulation of the cultures g than with live borrelia induced higher concentrations of IFNg inactivated borrelia antigen. Significant increases in spontaneous and stimulated lymphocyte transformation and g production as well as a depression in antigenstimulated IFNg IL4 production were detected in the cultures obtained from chronic Lyme borreliosis patients, which can point to a significant role of T helper type 1like response in chronic clinical outcome. Ключевые слова Key words Иксодовый клещевой боррелиоз, реакция бластной транс g , ин формации лейкоцитов, Borrelia garinii, интерферонg терлейкин4 Lyme borreliosis, lymphocyte transformation test, Borrelia g , interleukin4 garinii, interferong Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) – острое инфекционное трансмиссивное природноочаговое заболевание, имеющее тенденцию к хроническому и рецидивиру ющему течению, поражающее различные органы и системы. Возбудители ИКБ – бор 48 Immunopathology, Allergology, Infectology 2011 N°4 Инфектология: Функциональная активность лимфоцитов при иксодовом клещевом боррелиозе релии, относящиеся к комплексу Borrelia burgdorferi sensu lato (s. l.), объединяющему 12 геновидов этих спирохет [1], из которых на территории Западной Сибири наиболее распространены B. garinii и B. afzelii [2]. Известно, что в клиническом течении ИКБ выделяют острый, подострый и хрони ческий периоды, которые соответствуют трем патогенетическим стадиям заболева ния: локализованной (очаговой) инфекции, характеризующейся появлением мигриру ющей эритемы на месте присасывания кле ща, стадии ранней диссеминированной ин фекции, сопровождающейся появлением признаков поражения опорнодвигатель ного аппарата и внутренних органов, а так же стадии персистентной поздней диссеми нированной инфекции [3]. Патогенетичес кие механизмы хронизации ИКБ до сих пор остаются малоизученными. В отличие от других грамотрицательных микроорганизмов, боррелии не имеют в составе своей клеточной стенки липополи сахарида [4]. В настоящее время показано, что триггерными факторами, запускающи ми иммунный ответ на возбудитель явля ются Ospбелки (от англ. – outer surface protein), представляющие собой липопро теины наружной мембраны клеточной стенки боррелий [5]. Установлено, что Osp белки являются активаторами макрофа гов, дендритных клеток, Т и Влимфоцитов и индукторами продукции провоспали тельных цитокинов [6–8]. Известно, что выраженный пролифератив ный ответ Тклеток на боррелии с доминирова нием ответа Тхелперов типа 1 и гиперпродук цией интерферонаg (ИФg) в острый период заболевания имеет важное значение для эради кации возбудителя [9, 10]. Однако, для благо приятного исхода заболевания, необходимо ограничение воспалительного процесса, обус ловленное переключением на преобладание гу морального иммунного ответа и снижением числа реактивных клеток [9]. Поэтому цель настоящей работы заключа лась в изучении особенностей реакции бласт ной трансформации (РБТЛ) и продукции цито кинов в культурах мононуклеарных клеток пе риферической крови в ответ на стимуляцию инактивированным боррелиозным антигеном или живыми боррелиями у больных в разные периоды клинического течения заболевания, а также их возможное значение для исхода ИКБ. Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2011 N°4 Материал и методы Обследовано 11 больных с диагнозом серо позитивного варианта острого ИКБ, госпита лизированных в клинику инфекционных бо лезней СибГМУ на 23 неделе заболевания (группа I), а также 10 пациентов из этой же группы в период реконвалесценции через 3 месяца после эффективного курса антибио тикотерапии (группа II). Выздоровление боль ных было подтверждено отсутствием клини ческой симптоматики и отрицательными ре зультатами серологического обследования в течение одного года диспансерного наблюде ния. Для исключения сопутствующего кле щевого энцефалита и лабораторного под тверждения диагноза ИКБ использовался ме тод твердофазного иммуноферментного ана лиза (ИФА). Из анамнеза у этих групп паци ентов было выяснено, что никто из них ранее не болел ИКБ или другими клещевыми ин фекциями и не подвергался укусам клещей в течение последних 5 лет. Кроме того, нами было обследовано 11 больных хроническим ИКБ в стадии субкомпенсации заболевания, с преимущественными поражением опорнодви гательного аппарата (группа III). Контрольная группа состояла из 14 здоро вых лиц, не подвергавшихся ранее укусам кле щей, не болевших иксодовым клещевым борре лиозом и не имевшим в крови специфических антител к антигенам боррелий (группа IV). При поступлении в стационар до назначения антибиотиков у всех обследованных лиц в про бирки с гепарином было взято 10 мл венозной крови. Мононуклеарные клетки были выделены с помощью центрифугирования в градиенте плотности FicollPaque («Pharmacia», Швеция). Клетки инкубировали во флаконах (около 1х106 клеток/мл) в среде RPMI1640 («ПанЭко», г. Москва) с добавлением антибиотиков (100 мкг/мл стрептомицина и 100 МЕ/мл пеницилли на) в течение 120 ч для РБТЛ или 24 ч для изу чения концентрации цитокинов в супернатан тах при 37оС и в присутствии 5% СО2. Для сти муляции культур клетки смешивали с инакти вированным корпускулярным антигеном B. garinii или с живыми боррелиями в соотноше нии 1:20 [11]. Инактивированный корпускулярный анти ген B. garinii был получен из коллекции штам мов боррелий отдела разработки и эксперимен тального производства препаратов НПО «Ви рион» филиала ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ в г. Томске. 49 Е.Н. Ильинских, А.Г. Семенов, И.Н. Ильинских и др. Для получения культур живых боррелий в качестве посевного материала использовали го могенат клещей Ixodes persulcatus, отловленных вблизи г. Томска. По 5 особей клещей гомоге низировали в среде BarbourStoennerKellyН (BSK Н, Sigma), хитиновые оболочки осаждали центрифугированием, а надосадочную жид кость добавляли в пробирки со средой. Пробы инкубировали 15 суток при 32 оС, после чего культуры ещё дважды через каждые 2 недели пересевали на свежую среду BSK Н [2]. Культи вирование в общей сложности проводили в те чение 45 дней на базе бактериологической лабо ратории клиник СибГМУ (г. Томск). В экспери ментах был использован 3ой пассаж боррелий. Боррелии были несколько раз промыты в сте рильном фосфатном буфере и подсчитаны с помощью темнопольной микроскопии. Макси мальная концентрация боррелий в пробах со ставила около 2х10 7 спирохет/мл. Выделение боррелий было подтверждено с помощью ПЦР с использованием набора «РеалБест ДНК Borrelia burgdorferi sensu lato» (ЗАО Вектор Бест, Кольцово). Для оценки РБТЛ в 120часовых культурах стимулированных или не стимулированных инактивированным боррелиозным антиге ном применялся морфологический метод с анализом не менее 5001000 клеток в препара тах, окрашенных красителем Романовского Гимзе [12]. Спонтанные и стимулированные живыми боррелиями и инактивированным боррелиоз ным антигеном уровни продукции ИФg и ин терлейкина4 (ИЛ4, пг/мл) в супернатантах 24 часовых культур мононуклеарных клеток пери ферической крови были определены с помо щью твердофазного ИФА в соответствии с ин струкциями, предлагаемыми производителем тестсистем (ООО «Протеиновый контур», г. СанктПетербург и «Biosours IFNg», США). Оптическую плотность регистрировали с помо щью полуавтоматического спектрофотометра при длине волны 490 нм. Для статистической обработки данных ис пользовали стандартный пакет программ «Statistica 7.0». Проверку нормальности распре деления количественных показателей проводи ли с использованием критерия Колмогорова Смирнова. Для оценки различий между выбор ками применяли tтест Стьюдента [13]. Полу ченные результаты РБТЛ представлены как вы борочное среднее арифметическое (M) и ошиб ка среднего (m). Для определения статистичес 50 кой значимости различий между выборками при анализе концентраций ИФg и ИЛ4 в су пернатантах культур был использован крите рий МаннаУитни. Результаты концентраций цитокинов представлены как выборочное сред нее арифметическое (M) и стандартное квадра тичное отклонение (s). Для выявления зависи мостей между изучаемыми параметрами про водили ранговую корреляцию Спирмена. Кри тический уровень значимости (p) при проверке статистических гипотез в исследовании прини мался равным 0,05. Результаты и обсуждение При анализе результатов РБТЛ было уста новлено, что 120часовая стимуляция инакти вированным корпускулярным антигеном бор релий культур, полученных от больных в ост рый и хронический периоды заболевания, а также от реконвалесцентов (13,73 ± 1,45 %, 5,61 ± 1,80 % и 19,45 ± 1,40 % для групп I, II и III) приводила к существенному росту трансформа ции лимфоцитов в бластные клетки, по сравне нию соответствующими показателями в конт роле (0,31 ± 0,25 % для группы IV, p < 0,01). У больных острым и хроническим ИКБ, а также в группе реконвалесцентов, стимуляция культур мононуклеарных клеток сопровождалась суще ственным повышением числа бласттрансфор мированных клеток, по сравнению со спонтан ными значениями (13,73 ± 1,45 % против 0,61 ± 0,41 для группы I, p < 0,01; 5,61 ± 1,80 % против 0,43 ± 0,56 % для группы II, p < 0,01; 19,45 ± 1,40 % против 1,65 ± 0,42 % для группы III, p < 0,01). В контрольной группе лиц, не болевших ранее ИКБ (группа IV), в отличие от больных людей, показатели стимулированной трансформации лимфоцитов после добавления в культуры ан тигена были сопоставимы со спонтанными зна чениями (0,31 ± 0,25 % против 0,20 ± 0,15, p > 0,05). У больных в период реконвалесценции острого ИКБ (группа II), по сравнению с пери одом разгара заболевания (группа I) спонтан ные уровни трансформации лимфоцитов дос товерно не отличались между собой или от спонтанного уровня в контрольной группе (группа IV) (0,60 ± 0,41 % против 0,43 ± 0,56 %, p > 0,05). Вместе с тем, после стимуляции анти геном культур лимфоцитов реконвалесцентов (5,61 ± 1,80 %, группа II), пролиферативный от вет клеток был существенно ниже, чем в соот ветствующих культурах, полученных от боль ных с острым и, особенно, с хроническим тече нием заболевания (13,73 ± 1,45 % и 19,45 ± Immunopathology, Allergology, Infectology 2011 N°4 Инфектология: Функциональная активность лимфоцитов при иксодовом клещевом боррелиозе 1,40% для групп I и III, p < 0,01). Таким образом, наиболее высокие показатели спонтанной и стимулированной РБТЛ были характерны для больных с хроническим течением ИКБ. В отли чие от больных острым ИКБ и реконвалесцен тов, спонтанный уровень бластной трансфор мации лимфоцитов в культурах мононуклеар ных клеток больных хроническим ИКБ был значительно выше соответствующих спонтан ных значений в контроле (1,65 ± 0,42 % против 0,20 ± 0,15 %, p < 0,01). Полученные нами результаты во многом со впадают с данными других исследователей, ко торые наблюдали существенно повышенный пролиферативный ответ лимфоцитов на сти муляцию антигенами B. burgdorferi в культурах, полученных от больных острой или хроничес кой формами заболевания [7, 14, 15]. Кроме изучения особенностей бластной трансформации лимфоцитов в стимулирован ных культурах больных ИКБ, нами было прове дено определение концентрации ИФg и ИЛ4 в супернатантах этих культур (Табл. 1). В резуль тате нами было установлено, что стимулиро ванная инактивированным корпускулярным антигеном боррелий трансформация лимфо цитов у больных с острым и хроническим тече нием заболевания, в отличие от контроля и ре конвалесцентов, сопровождалась значительным повышением содержания ИФg в супернатан тах, по сравнению с соответствующими спон танными значениями (p < 0,01). Уровни стиму лированной продукции ИФg в культурах боль ных острым и хроническим ИКБ были суще ственно выше соответствующих значений в группе реконвалесцентов (p < 0,01) и в контро ле (p < 0,01). Кроме того, у больных острым и хроническим боррелиозом нами были выявле ны значимые положительные корреляционные зависимости между значениями РБТЛ и кон центрацией ИФg в супернатантах соответ ствующих культур (r = + 0,71 и + 0,74 при p < 0,01 для группы I и r = + 0,79 и + 0,68 при p < 0,01 для группы III). С другой стороны, у больных острым ИКБ уровни спонтанной и стимулированной про дукции ИЛ4 в культурах не отличались от кон троля (p > 0,05), а у больных с хронической g и ИЛ4 в стимулированных или не стимулированных инактивированным Таблица 1. Продукция цитокинов ИФg корпускулярным антигеном B. garinii 24часовых культурах лимфоцитов периферической крови больных ИКБ Группы Уровни ИФg, пг/мл M±s Медиана (minmax) I. Больные острым ИКБ n =11 Спонтан ный Стимули рованный II. Здоровые реконвалесценты (через 3 мес. после терапии) n=10 III. Больные хроническим ИКБ n=11 Спон танный Стимули рованный 23 (18–105) p 1>0,05 p 3<0,01 268,27±285,76 65 (30–730) p 1<0,01 p 2<0,01 p 3>0,05 21,09±11,29 18 (15–43) p 3<0,01 IV. Контроль n=14 Спон танный Стимули рованный Спон танный Стимули рованный p ИЛ4, пг/мл M±s Медиана (minmax) p 4,7±4,64 4 (0–10) p 1>0,05 5,34±4,65 3,5 (0–16) 2,25±2,86 1,5 (0–8) p 1>0,05 p 2>0,05 p 3<0,01 p 1>0,05 37,45±27,16 25 (20–109) p 2>0,05 p 3<0,01 p 4<0,01 179,63±158,88 115 (53–430) p 1<0,01 4,38±3,30 3 (0–10) 3,09±4,36 2 (0–12) 495,45±319,0 500 (55–860) p 1<0,01 p 2<0,01 28,27±10,18 22 (20–45) 0,60±0,78 0 (0–2,0) 2,81±2,22 2 (0–5,1) p 1<0,01 p 2<0,01 32,36±13,38 23 (18–51) 4,18±4,42 2 (0–12,3) p 2>0,05 39,9±32,17 p 2>0,05 p 2>0,05 p 3<0,01 p 4>0,05 p 1>0,05 Примечание: p – значимость различий между исследуемыми группами; p 1 – отличие I, II или III групп от IV группы (контроля); p 2 – между спонтанным и стимулированным уровнями показателя в каждой группе; p 3 – отличие I или II групп от III группы; p 4 – различие между I и II группами. M – среднее арифметическое и s – стандартное квадратичное отклонение. Приведены значения медианы выборки, а в скобках указан диапазон значений выборки. ИКБ – иксодовый клещевой боррелиоз; n 7 численность группы. РБТЛ – реакция бластной трансформации лейкоцитов. ИФ7g – интерферон7g, ИЛ74 – интерлейкин7 4. Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2011 N°4 51 Е.Н. Ильинских, А.Г. Семенов, И.Н. Ильинских и др. формой заболевания концентрации стимули рованной секреции этого цитокина были даже существенно ниже, чем в контрольной группы (0,60 ± 0,78 пг/мл против 4,18 ± 4,42 пг/мл, p < 0,01). В Таблице 2 показаны результаты сравне ния уровней стимулированной продукции ИФg и ИЛ4 после добавления в культуры мононуклеарных клеток живых или инакти вированных боррелий. Повидимому, в куль турах больных острым и хроническим ИКБ живые боррелии оказались более мощными индукторами секреции ИФg, чем инактиви рованный корпускулярный антиген. В супер натантах культур реконвалесцентов досто верных различий концентраций этого цито кина после инкубации клеток с живым и инак тивированными боррелиями обнаружено не было. В то же время, концентрации ИЛ4 в супернатантах культур мононуклеарных кле ток, полученных от этой группы (группа II), после стимуляции живыми боррелиями были достоверно выше соответствующих значений после культивирования с инактивированным корпускулярным антигеном. Показано, что живые боррелии способны вы зывать более выраженную продукцию цитоки нов в культурах мононуклеарных клеток, по срав нению с инактивированными и, в особенности, по сравнению с лизированным ультразвуком антиге ном боррелий или их очищенными Ospбелками. Это обусловлено тем, что живые боррелии более активно фагоцитируются моноцитами и запус кают трансформацию лимфоцитов [16]. Таким образом, нами было высказано предпо ложение, о том, что стимуляция живыми борре лиями или инактивированным антигеном борре лий культур, полученных от больных с острым и, особенно, с хроническим течением заболевания, приводит к Тхелпер типа1подобному ответу и сопровождается активной продукцией ИФg. Известно, что ИФg является одним из цито киноврегуляторов апоптоза иммунокомпетен тных клеток, связанных с формированием пер систентно активированного Тклеточного им мунного ответа. Кроме того, он играет суще ственную роль в развитии васкулитов и аутоим мунных реакций, лежащих с основе механиз мов, приводящих к повреждению тканей и ор ганов при хроническом ИКБ [17]. g и ИЛ4 в ответ на 24часовую стимуляцию живыми или инактивированны Таблица 2. Продукция цитокинов ИФg ми боррелиями культур мононуклеарных клеток периферической крови больных ИКБ Группы больных Концентрации цитокинов в супернатантах (пг/мл) Стимуляция культур лимфоцитов живыми инактивированными боррелиями боррелиями p Острый ИКБ n=11 ИФg M±s Медиана (minmax) M±s Медиана (minmax) 714,54±727,01 350 (30–1600) 268,27±285,76 65 (30–730) p<0,05 8,60±7,74 9,5 (0–21) 5,34±4,65 3,5 (0–16) p>0,05 M±s Медиана (minmax) M±s Медиана (minmax) 56,41±31,64 40 (18–132) 37,45±27,16 25 (20–109) p>0,05 18,27±11,92 20 (2,1–40) 4,38±3,30 3 (0–10) p<0,05 M±s Медиана (minmax) M±s Медиана (minmax) 942,0±633,04 700 (182–1600) 495,45±319,0 500 (55–860) p<0,05 0,75±0,57 0 (0–1,2) 0,60±0,78 0 (0–2,0) p>0,05 ИЛ4 Здоровые реконвалесценты n=10 ИФg ИЛ4 Хронический ИКБ n=11 ИФg ИЛ4 52 Immunopathology, Allergology, Infectology 2011 N°4 Инфектология: Функциональная активность лимфоцитов при иксодовом клещевом боррелиозе Выводы 1. Стимуляция in vitro живыми боррелиями или инактивированным специфическим боррелиозным антигеном культур мононук леарных клеток периферической крови, по лученных от больных с острым течением ИКБ, приводит к доминированию Тхелпер ного типа1подобного ответа и сопровожда ется активной продукцией ИФg. 2. При благоприятном исходе ИКБ в период ре конвалесценции происходит постепенное пере ключение инициального доминирования им мунного ответа Тхелперов типа 1 и гиперпро дукции ИФg на преобладание ответа Тхелпе ров типа 2, секретирующих ИЛ4 в ответ на стимуляцию культур мононуклеарных клеток живыми боррелиями или инактивированным специфическим боррелиозным антигеном. 3. Хроническое течение ИКБ ассоциировано с повышенным пролиферативным Тхелпер типа1подобным ответом, активной про дукцией ИФg и подавлением стимулирован ной секреции ИЛ4 в культурах мононукле арных клеток в ответ на специфический боррелиозный антиген. 4. Показано, что живые боррелии способны вызывать более выраженную продукцию цитокинов в культурах мононуклеарных клеток, по сравнению с инактивированным боррелиозным антигеном. Литература 1. Postic D., Assous M.V., Grimont P.A., Baranton G. Diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato evidenced by restriction fragment length polymorphism of rrf (5S)rrl (23S) intergenic spacer amplicons. Int. J. Syst. Bacteriol. 1994; 44 (4): 743752. 9. PohlKoppe A., Balashov K., Steere A.C., Logigian E.L., Hafler D.A. Identification of a T cell subset capable of both IFNg and IL10 secretion in patients with chronic Borrelia burgdorferi infection. J. Immunol. 1998; 160 (4): 18041810. 2. Рябченко А.В. Получение рекомбинантных белков за падносибирских изолятов Borrelia burgdorferi sensu lato и изучение их антигенных свойств: Автореф. дис. … канд. мед. наук. Новосибирск, 2009. 21 с. 10. Widhe M., Jarefors S., Ekerfelt C., Vrethem M., Bergstrom S., Forsberg P., Ernerudh J. Borreliaspecific interferong and interleukin4 secretion in cerebrospinal fluid and blood during Lyme borreliosis in humans: association with clinical outcome. J. Infect. Dis. 2004; 189 (10): 18811891. 3. Asbrink E., Hovmark A. Comments on the course and classification of Lyme borreliosis. Scand. J. Infect. Dis. Suppl. 1991; 77: 4143. 4. Takayama K.R., Rothenberg J., Barbour A.G. Absence of lipopolysaccharide in the Lima disease spirochete. Infect. Immun.1987; 55 (9): 23112313. 5. Wooten R.M., Weis J.J. Hostpathogen interactions promoting inflammatory Lyme arthritis: use of mouse models for dissection of disease processes. Curr. Opin. Microbiol. 2001; 4 (3): 274279. 6. Buechner S.A., Lautenschlager S., Itin P., Bircher A., Erb P. Lymphoproliferative responses to Borrelia burgdorferi in patients with erythema migrans, acrodermatitis chronica atrophicans, lymphadenosis benigna cutis, and morphea. Arch. Dermatol. 1995; 131 (6): 673677. 7. Krause A., Brade V., Schoerner C., Solbach W., Kalden J.R., Burmester G.R. T cell proliferation induced by Borrelia burgdorferi in patients with Lyme borreliosis. Autologous serum required for optimum stimulation. Arthritis Rheum. 1991; 34 (4): 393402. 8. Ma Y., Weis J.J. Borrelia burgdorferi outer surface lipoproteins Osp A and Osp B posses Bcell mitogenic and cytokinestimulatory properties. Infect. Immun. 1993; 61 (9): 38433853. 11. Bergstrцm S., Sjцstedt A., Dotevall L. et al. Diagnosis of Lyme borreliosis by an enzyme immunoassay detecting immunoglobulin G reactive to purified Borrelia burgdorferi cell components. Eur. J. Clin. Microbiol. Infeat. Dis. 1991; 10 (5): 422427. 12. Новиков Д.К., Новикова В.И. Оценка иммунного ста туса. М.: Витебск–Москва, 1996. 286 с. 13. Гланц С. Медикобиологическая статистика. М.: Прак тика, 1998. 459 с. 14. Oksi J., Savolainen J., Pene J., Bousquet J., Laippala P., Viljanen M.K. Decreased interleukin4 and increased gamma interferon production by peripheral blood mononuclear cells of patients with Lyme borreliosis. Infect. Immun. 1996; 64 (9): 36203623. 15. ValentineThon E., Ilsemann K., Sandkamp M. A novel lymphocyte transformation test (LTTMELISA) for Lyme borreliosis. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 2007; 57 (1): 2734. 16. Cruz A.R., Moore M.W., La Vake C.J. et al. Phagocytosis of Borrelia burgdorferi, the Lyme disease spirochete, potentiates innate immune activation and induces apoptosis in human monocytes. Infect. Immun. 2008; 76 (3): 5670. 17. Moody K.D., Barthold S.W., Terwilliger D.S., Beck D.S., Hansen G.M., Jacoby R.O. Experimental chronic Lyme borreliosis in Lewis rats. Am. J. Trop. Med. 1990; 42(2): 165174. Сведения об авторах: Ильинских И.Н. 7 д7р. биол. наук, профессор кафедры микробиологии и вирусологии СибГМУ; Ильинских Е.Н. 7 д7р мед. наук, профессор кафедры инфекционных болезней и эпидемиологии СибГМУ; Семенов А.Г. 7 аспирант кафедры микробиологии и вирусологии СибГМУ; Чередникова Е.А. 7 зав. бактериологической лабораторией клиник СибГМУ. Адрес для переписки: Ильинских Екатерина Николаевна г. Томск, а/я 808, Россия индекс: 634050. тел. 89039548817 и 8(38272) 41775763; e7mail: infconf2009@mail.ru Поступила 23.09.2011 г. Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2011 N°4 53
