Liquid Urea Nitrogen (BUN) Reagent Set Каталожный № HTI
реклама
Liquid Urea Nitrogen (BUN) Reagent Set Каталожный № HTI-B7552 Каталожные номера: концентрации азота мочевины в исследуемом образце. Реагенты HTI-B7552-150 HTI-B7552-450 HTI-B7552-600 Назначение Предназначен для количественного определения азота мочевины в сыворотке крови. Только для in vitro диагностики. Клиническое значение Определение концентрации мочевины в сыворотке крови используется в качестве скринингового теста для оценки функции почек. Совместное определение концентраций азота мочевины и креатинина полезно для дифференциальной диагностики трех типов азотемии: преренальной, ренальной и постренальной. История метода Мочевина определяется прямым методом, в котором мочевина взаимодействует с диацетилом с формированием хромогена и непрямым методом, в котором измеряется концентрация аммиака, как продукта воздействия уреазы на мочевину. Выделенный аммиак можно измерить с использованием реактива Nessler и по реакции Berthelot. В 1965 году Talke и Shubert ввели общую энзиматическую процедуру с использованием уреазы и глутамат дегидрогеназы. Настоящая процедура основана на модификации этого метода. Принцип метода Мочевина + Н2О уреаза NH3+α-кетоглутарат+NADH+H + ГД 2 NH3 + CO2 L-глутамат + NAD+ + H2O Мочевина гидролизуется уреазой, при этом образуется аммиак и диоксид углерода. Выделенный аммиак присутствии NADH взаимодействует с αкетоглутаратом с образованием глутамата. В результате реакции NADH подвергается окислению, что сопровождается уменьшением абсорбции, интенсивность которой прямо пропорциональна (концентрация в рабочем реагенте) Уреаза 1500 МЕ/л, Глутаматдегидрогеназа (бычья) 1667 МЕ/л, АДФ 2,0 ммоль, α-Кетоглутарат 4,0 ммоль, NADH 0,28 ммоль, Буфер рН 7,8+0,1, стабилизаторы, азид натрия (0,2%) в качестве консерванта. Подготовка реагентов Приготовить рабочий реагент: 5 объемов ферментного реагента (R1) + 1 объем коферментного реагента (R2). Хорошо перемешать. Хранение реагентов 1. Неоткрытый набор можно хранить в холодильнике при 2-80С. 2. Рабочий раствор хранить в холодильнике при 2-80С. 3. Рабочий раствор стабилен три дня при комнатной температуре (18-250С), 14 дней при 2-80С. Непригодные для анализа реагенты Не использовать реагенты, если начальная абсорбция рабочего реагента против воды при 340 нм меньше 1,0. Предостережения 1. Только для in vitro диагностики. 2. Не употреблять реагент внутрь, так как токсичность неизвестна. 3. Реагенты содержат в качестве консерванта раствор азида натрия 0.2% (w/v). Азид натрия при контакте с металлом может образовывать взрывоопасные соединения. Поэтому при удалении реагентов в сточные трубы (свинец) необходимо смывать их большим количеством проточной воды. 4. Ко всем компонентам набора следует относиться как к потенциально биологически опасными, необходимо соблюдать общепринятые меры предосторожности. Сбор и хранение образцов 1. Использовать свежие, негемолизированные образцы сыворотки крови. 2. Не использовать образцы плазмы крови. 3. Все материалы, контактирующие с образцами сыворотки крови должны быть свободны от примесей аммиака и тяжелых металлов. 4. Концентрация мочевины в сыворотке крови стабильна в течение 72 часов в холодильнике при 2-80С. Liquid Urea Nitrogen (BUN) Reagent Set Каталожный № HTI-B7552 Незамороженные образцы сыворотки крови должны быть проанализированы в течение 8 часов. 5. Ни один из методов не может гарантировать отсутствие в сыворотке крови таких инфекционных агентов, как ВИЧ, гепатит В, С. Ко всем образцам следует относиться как к потенциально биологически опасными, необходимо соблюдать меры предосторожности. Влияние других соединений 1. Активность уреазы может быть ингибирована флуоридом. 2. В образцах с повышенными уровнями аммиака, результаты определения концентрации азота мочевины могут ложно завышенными. 3. Билирубин при концентрации 20 мг/дл не оказывает влияние на результаты определения концентрации азота мочевины. 4. Гемоглобин при концентрации 200 мг/дл не оказывает влияние на результаты определения концентрации азота мочевины. Внимание: Концентрация азота мочевины при исследовании билирубина составила 46,0 мг/дл, и 46,3 мг/дл – при исследовании гемоглобина. Материалы, входящие в состав набора 1. Ферментный реагент азота мочевины (R1) 2. Коферментный реагент азота мочевины (R2) 3. Стандарт мочевины Материалы необходимые, но не поставляемые 1. 2. 3. 4. Автоматические пипетки (10 мкл и 1 мл) Таймер Пробирки Биохимический анализатор с термостатируемой кюветой, измерение при длине волны 340 нм. Автоматический метод определения Wavelength: Assay Type: Sample/Reagent Ratio: Reaction Direction: Temperature: Lag Phase: Read Time: Low Normal: 340 nm Initial Rate 1:101 Decreasing 37°C 30 seconds 60 seconds 7 mg/dl High Normal: 18 mg/dl Существуют параметры измерения концентрации азота мочевины на других анализаторах. Необходимо связываться со службой технической поддержки. Ручной метод определения 1. Приготовить рабочий реагент в соответствии с инструкцией 2. Настроить спектрофотометр на «0» по воде при 340 нм. 3. Внести по 1,0 мл реагента во все пробирки. Нагреть до 370С. 4. Внести во все пробирки по 100 мкл исследуемых образцов сыворотки крови. Немедленно поместить пробирки в спектрофотометр. 5. Инкубировать 30 секунд. Считать абсорбцию (А1). 6. Инкубировать 60 секунд. Считать абсорбцию (А2). 7. Вычислить изменение абсорбции (А1-А2). 8. Повторить процедуру для каждого исследуемого образца 9. Вычислить концентрацию аммиака мочевины в исследуемых образцах. См. «Подсчет результатов». Ограничения Если в исследуемом образце предполагаемая концентрация азота мочевины выше, чем 150 мг/дл, то необходимо провести разведение: 1 объем исследуемой сыворотки на 1 объем изотонического солевого раствора. Полученные результаты необходимо умножить на 2. Калибровка Необходимо использовать подходящие для анализа коммерческие калибраторы или стандарты (например, стандарт 20 мг/дл). Построение калибровочной кривой необходимо проводить в соответствии с инструкциями по калибровке. Если измеренная концентрация азота мочевины в контрольных материалах не соответствует указанной на этикетке, то необходимо провести повторную калибровку. Подсчет результатов (А1-А2) = изменение абсорбции между первым и вторым измерением ((A1-А2) неизв. обр./(A1-А2) стандарта) Х конц. стандарта = конц. азота мочевины (мг/дл) Liquid Urea Nitrogen (BUN) Reagent Set Каталожный № HTI-B7552 Пример подсчета: A1 неизв. = 1,5, A2 неизв. = 1,0 А1 стандарта = 1,5, А2 стандарта = 0,9 Конц. стандарта = 20 мг/дл Тогда (1,5 - 1,0) / (1,5 – 0,9) = 0,5 / 0,6 Х 20 = 17 мг/дл Внимание: для перевода в международные единицы полученные результаты необходимо умножить на 10 (перевод децилитры в литры) и разделить на 28 (молекулярный вес азота). Например: 17 мг/дл х 10/28 = 6,06 ммоль/л Для перевода концентрации азота мочевины из мг/дл в моль/л, необходимо концентрацию в мг/дл умножить на 0,357. Для перевода концентрации азота мочевины (мг/дл) в концентрацию мочевины (мг/дл), необходимо концентрацию азота мочевины умножить на 2,14. Точность Внутри серии Среднее S.D. 10.1 0.3 68.4 0.9 144.3 1.9 C.V.% 3.1 1.4 1.3 C.V.% 4.6 1.3 1.6 Чувствительность Определялась по изменению абсорбции изотонического солевого раствора при 340 нм и в образце сыворотки крови с известной концентрацией азота мочевины. Были проведены серии из 10 исследований. Результаты показали, что в изотоническом солевом растворе абсорбция практически не отличается от таковой в реагенте азота мочевины. Изменение абсорбции на 0,003 примерно эквивалентно концентрации азота мочевины 1 мг/дл. Контроль качества Рекомендовано при каждом проведении серии анализов включать коммерческие контрольные сыворотки (патологические и нормальные) с известной концентрацией азота мочевины. Рекомендовано в каждой лаборатории устанавливать свою частоту проведения контроля качества. Концентрация у практически здоровых лиц Азот мочевины: 7-18 мг/дл. В каждой лаборатории необходимо устанавливать свои границы нормальных значений. Характеристики теста Линейность: 0-150 мг/дл Если в исследуемом образце предполагаемая концентрация азота мочевины выше, чем 150 мг/дл, то необходимо провести разведение: 1 объем исследуемой сыворотки на 1 объем изотонического солевого раствора. Полученные результаты необходимо умножить на 2. Сравнение Проведен корреляционный анализ результатов, полученных на данных тест-наборах и другого коммерческого тест-набора (диапазон концентраций: 5 – 139 мг/дл). Коэффициент корреляции составил 0,999, регрессионный анализ: у=1,05Х-0,2. (Sy – x = 20,93) От серии к серии Среднее S.D. 10.3 0.5 69.3 0.9 145.1 2.3 Произведено High Technology Inc. 109 Production Rd Walpole, MA 02081 USA Fax: 1 508 660-22-24 e-mail: [email protected]
