Выделение и очистка L-лизин-альфа

Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н.Ореховича
Архив журнала
Вопросы медицинской химии
ISSN 0042-8809
1985
Внимание! Распознавание текста проведено в автоматическом режиме для
облегчения работы поисковых систем. Будьте внимательны при
копировании,
возможны
ошибки
и
неточности.
Используйте
сканированный графический вариант.
Archive of journal
Voprosy meditsinskoi khimii
ISSN 0042-8809
1985
Attention! OCR has been performed automatically for search engines only.
Be careful when copying, errors are possible. Use scanned picture as standard.
http://pbmc.ibmc.msk.ru
(c) Orekhovich Institute of Biomedical Chemistry of the Russian Academy of Medical Sciences
ВОПРОСЫ
ХИМИИ
Медицинской
3. Зла то полис кий
Л. Д.,
Зыкова
Т.
А.,
Локшина
Л. А. и др. — Б и о х и м и я , 1984,
т. 49, № 9, с. 1128—1132.
4. Локшина
Л. А.,
Рифтина
Ф. Д.,
Орехович
В. II. — Там ж е , 1976,
т. 41,
№ 8, с. 1412—1414.
5. Локшина
Л. А., Гуреева
Т. А.,
Орехович
В. II. — Там ж е , 1979, т. 44, № 2,
с. 264—271.
6. Локшина
Л. А., Гуреева
Т. А.,
Лубкова О. Н. и др. — Там ж е , 1.982, т. 47,
№ 8, с. 1299 -1307.
7. Локшина
Л. А.,
Егорова
Т. /7., Ореховый В. 11. — Там ж е , 1983, т. 48, № 6,
с. 9 5 1 - 9 5 7 .
8. Локшина
Л. А., Тарханова
Pi. А.,
Лубкова О. II. и др. — Б юл. экс пер. б и о л . ,
1983, № 10, с. 5 0 — 5 2 .
9. Gray W. — M e t h . E n z y m o l . , 1972, v. 25,
p. 121 — 138.
10. Ilersh
L.
M eke Ivy
J. F. — J .
Neurochern., 1981, v. 36, p. 171 — 178.
11. Jarvinen
M.,
Hopsu-Havu
V. К. — Acta
с h e m . s c a n d . , 1975, v. 2 9 - B . , p. 772 —
780.
12. Kirschke H., Langner
/ . , Wiederanders
B.
et al. — Acta biol. m e d . g e r m . ,
1977,
Bd 36, S. 185—189.
J. P . , Locnikar
7 \ , Popovic
A.
13. Kregar
et a l .
- I b i d . , 1981, Bd 40, S. 1433 1438.
14. Mason /?., Taylor
M.} Etherington
D. —
F E B S L E T T . , ' 1982, v. 146, p. 3 3 — 3 6 .
15. Najjar
V. A.
In: T h e
Reticuloendothelial S y s t e m . N e w Y o r k , 1980, v. 2,
p. 4 5 — 7 1 .
16. Perez / / . , Ohtani
0 . , Banda D. et a l . J . I m m u n o l . , 1983, v. 131, p. 397.
17. Schwartz
W. N.,
Barrett
A. ,/. - Bioc h e m . J . , 1980, v. 191, p. 4 8 7 — 4 9 7 .
18. Singh
Я . , Kalnitsky
G. - J . biol. C h e m . ,
1980, v. 255, p. 369 - 3 7 4 .
19. Towatari
T., Tanaka
K., Yoschikawa
D.
et a l . — J . B i o c h e m . (Tokyo), 1978, v. 84,
p. 659—671.
20. Yokota
I\.} Shono
F.} Yamamoto
S. e t
a l . — I b i d . , 1983, v. 94, p. 1173.
21. Zvonap—Popovic
T., Lah
Т., Kregar
J.
et a l . — C r o a t , c h e m . A c t a , 1980, v. 53,
p. 5 0 9 - 5 1 7 .
Поступила
23.05.84
STUDY
OF P R O P E R T I E S
AND
SPECIFICITY OF CATHEPS1N H FROM BOVINE
SPLEEN
L.
T.
A.
A.
Lokshina,
Gureeva,
0.
N.
V. N.
Lubkova,
Orekhbvich
I n s t i t u t e of B i o l o g i c a l a n d Medical C h e m i s t r y ,
A c a d e m y of M e d i c a l Sciences of t h e U S S R ,
Moscow
A c t i o n of c a t h e p s i n H f r o m b o v i n e s p l e e n
on t u f t s i n , e n k e p h a l i n , t h e o x i d i z e d В c h a i n
of i n s u l i n a n d a v a r i e t y of s y n t h e t i c s u b s t r a t e s
w a s s t u d i e d . C a t h e p s i n H s p l i t s off o n l y one
N - t e r m i n a l a m i n o acid f r o m each t u f t s i n a n d
e n k e p h a l i n , w h i c h , a c c o r d i n g to t h e l i t e r a t u re, led to i n a c t i v a t i o n of p e p t i d e s . T h e enzyme a c t s on t h e o x i d i z e d В c h a i n of i n s u l i n as
an a m i n o e n d o p e p t i d a s e : it s p l i t s off t h e Nterminal
phenylalanine
and
the
centrally
l o c a t e d bond(s). K m a n d V m a x for t h e c a t h e p sin H c a t a l y z e d h y d r o l y s i s of L e u N A , A r g N A
L y s N A a n d B A N A were d e t e r m i n e d . S u b s t r a t e s w i t h t h e free N I L g r o u p w e r e h y d r o lyzed at a h i g h e r r a t e . Based on t h e d a t a obtained and the previously reported results
on c o n v e r s i o n of k a l l i d i n i n t o b r a d y k i n i n ,
t h e s p e c i f i c i t y of c a t h e p s i n H a n d its possible
b i o l o g i c a l f u n c t i o n s were d i s c u s s e d . C a t h e p sin H a p p e a r s to p a r t i c i p a t e in f o r m a t i o n and
i n a c t i v a t i o n of p h y s i o l o g i c a l l y a c t i v e p e p t i des. U s i n g t h e a n t i s e r u m to s p l e e n c a t h e p s i n
И it was f o u n d t h a t l i v e r , k i d n e y a n d l u n g
tissues contained the enzymes identical and/or
p a r t i a l l y i d e n t i c a l to c a t h e p s i n H f r o m s p l e e n .
T h e d a t a on t h e p r o p e r t i e s of c a t h e p s i n H f r o m
v a r i o u s s o u r c e s are s u m m a r i z e d .
УДК 615.355:577.152.l].017:<t15.277.3].012.8:1(582.282-1 19: 577.152.1
С.
X.
Хадуев,
E.
В.
Лукашева,
И.
П.
Смирнова,
Т.
Т.
Березов
В Ы Д Е Л Е Н И Е И ОЧИСТКА L-J1 ИЗИН-а-ОКСИДАЗЫ
ИЗ T R I C H O D E R M A sp.
К а ф е д р а б и о х и м и и У н и в е р с и т е т а д р у ж б ы н а р о д о в им. П # Л у м у м б ы , Москва
Исключение из диеты животных с
перевивными опухолями L-лизина (как
и любой другой незаменимой аминокислоты) приводит к торможению роста
о п у х о л ей и у в е л и ч е н и ю п р од о л ж и тел ь ности
жизни животных [7, 14]. Эти
и некоторые другие
результаты побудили исследователей к поиску ферментов, катализирующих необратимый
распад незаменимых аминокислот и соответственно снижающих
концентрацию их до минимального уровня, а
также к применению чистых фермент130
ных препаратов в лечении опухолевых
заболеваний животных и человека И
3, 4, 10 131.
Одним из таких ферментов, перспективных в проблеме энзимотерапии опухолей, я в л яетс я
L - л и з и и - а - о кс и да з а,
котор ы й к ата л и з и р у ет о к и сл и тел ь ное
дезамииирование L-лизина с образованием а-кето-е-аминокапроновой кислоты, аммиака и перекиси водорода.
Указанная
реакция в тканях животных не имеет места, поскольку аналогичного фермента не обнаружено, а
оксидаза L-аминокислот недостаточно
специфична по отношению к L-лизину.
Кроме того, образующееся а-кетопроизводное L-лизина спонтанно циклизуется в А-пирролидонкарбоновую кислоту, которая в силу пространственного
р а с п о л оже н и я
и е м о жет в ы п о л и я т ь
функциональных групп функций акцептора аминогруппы в реакциях трансам и нирова ми я аминокислот. Этими обстоятельствами может быть объяснена
необратимость приведенной выше реакции окислительного дезаминирования
L-лизина при введении в организм животных извне фермента, катализирующего распад этой аминокислоты 11].
Нами ведутся
систематические исследования по подбору продуцентов
L - л из и н - а - о кс ид азы с р ед и ми к р оор г а низмов, разработке методов культивирования
штамма-продуцента и методов очистки и получения гомогенных ферментов препарата.
Впервые L-лизин-а-оксидазу в чистом виде получили Soda и соавт. 1.91
в 1979 г. из экстрактов гриба Trichoderma viride штамм v-244-2. Этими же
авторами [10.1 был показан тормозящий
рост-эффект на культуре лейкозных
клеток L-5178 Y. Предложенный японским и иссл едовател ям и метод выдел ения L-лизин-а-оксидазы из культуры
Trichoderma viride [9] включает в себя
6 стадий очистки с конечным выходом
фермента 8 % . Поскольку этот метод
является громоздким, а штамм культуры
недоступным, в нашей работе
была поставлена
задача разработать
новый усовершенствованный метод получения L - л и з и н - а - о кс и д а з ы и з оте чественного штамма Trichoderma sp.
В связи с тем что применение этого
фермента в клинической
онкологии
представляется перспективным, весьма
интересным было исследовать не только физико-химические его особенности,
но и биологические свойства.
Методика
В к а ч е с т в е и о н о о б м е н н ы х смол в работе
были и с п о л ь з о в а н ы Д Е А Е - ц е л л ю л о з а («Reanal», В е н г р и я ) , Д Е А Е - с е ф а ц е л
(«Pharmacia
F i n e C h e m i c a l s » , Ш в е ц и я ) и у л ь т р а г е л ь АсА-34
( « P h a r m a c i a F i n e Chemicals»), в качестве реа к т и в о в — о р т о д и а н и з и п и д и н ( « О л а й н е » , СССР),
L - л и з и н («Олайне»),
п е р о к с и д а з а из хрена
(«Reanal») и я и ч н ы й а л ь б у м и н («Fluka», Швейцария).
В работе и с п о л ь з о в а л и
штамм
Trichoderma
sp.
полученный
из
коллекции
культур
кафедры
низших
растений
МГУ
им. Al. В. Л о м о н о с о в а ;
штамм был о т о б р а н
при и з у ч е н и и к у л ь т у р рода T r i c h o d e r m a к а к
высокоактивный
штамм — п р о д у ц е н т фермента L - л и з и н - а - о к с и д а з ы . П о с е в н о й матер и а л в ы р а щ и в а л и на среде Ч а п е к а , а з а т е м
к у л ь т и в и р о в а л и по р а н е е о п и с а н н о м у методу
[5, 9].
Активность
L-лизии-а-оксидазы
определ я л и по п р и р о с т у
концентрации перекиси
водорода в п о л н о й р е а к ц и о н н о й смеси. Станд а р т н ы е о п ы т н ы е пробы (объемом 2 мл) сод е р ж а л и 1,7 мл р а с т в о р а о р т о д и а н и з и д и п а в
0,1
и а т р и й ф о с ф а т н о м б у ф е р е р Н 7,4 ( 1 , 9 Х
Х 1 0 - 4 М), 0 , 2 мл р а с т в о р а L - л и з и н а ( 9 Х
-3
X Ю ) , 0 , 0 5 мл р а с т в о р а п е р о к с и д а з ы из
х р е н а (1-10— 5 ) и 0 , 0 5 мл р а с т в о р а , с о д е р ж а щего ф е р м е н т .
За единицу ферментативной
активности
принимали количество фермента, катализир у ю щ е е о б р а з о в а н и е 1 м к м о л я п е р е к и с и вод о р о д а в 1 мин. Ф е р м е н т а т и в н у ю а к т и в н о с т ь
определяли
на с п е к т р о ф о т о м е т р е
(VSU2P,
Г Д Р ) при X 460 нм. Б е л о к н а х о д и л и по Л о у ри |11], и с п о л ь з у я в к а ч е с т в е с т а н д а р т а яичный а л ь б у м и н («Fluka»). К о н ц е н т р а ц и ю белка при о ч и с т к е фермента о ц е н и в а л и т а к ж е п о
величинам
оптической
плотности при X
280 нм проб, п о л у ч е н н ы х с к о л о н о к . У д е л ь н у ю а к т и в н о с т ь фермента в ы р а ж а л и ч и с л о м
е д и н и ц а к т и в н о с т и на 1 мг б е л к а .
Все о п е р а ц и и по в ы д е л е н и ю и о ч и с т к е
L-лизин-а-оксидазы проводили в холодной
к о м н а т е при т е м п е р а т у р е 0 — 5 °С.
Центрифугирование
э к с т р а к т о в о с у щ е с т в л я л и на
ц е н т р и ф у г е К-70 ( Г Д Р ) при 5- 103 об/мин в
течение 40 м и н .
Р е з у л ь т а т ы
и
обсуждение
1 стадия очистки. Фракционированное осаждение сульфатом аммония.
Поскольку при использовании таких
методов очистки ферментов, как ионообменная хроматография и гель-фильтрация, большое значение имеет состав
среды (рН, ионная сила, концентрация
белка), возникает необходимость в проведении предварительного диализа или
обессоливания исходного раствора или
э кстр а кта к ульту р ы микроорганизмов.
Д л я такого широко распространенного
метода очистки, как фракционированное осаждение
сульфатом аммония,
состав среды не имеет существенного
значения, и поэтому указанный метод
был применен на начальных стадиях
о ч и ст к и L - л и з и н - а - о кс и да з ы.
Исходным
материалом для
выделения
L-лизин-а-оксидазы служил
сравнительно большой объем водного
экстракта
культуры
гриба Trichoderma sp. Метод
фракционированного
осаждения сульфатом
аммония позволил
существенно
уменьшить рабочий объем, что создало дополнительные удобства при проведении
дальнейшей очистки. Уже на этой ста131
.дни очистки удалось отделить балластные вещества, загрязняющие носители,
испол ьзуемые
rip и
хроматографи и.
В работе был проведен поиск оптимальных условий очистки фермента фракционированным осаждением сульфатом
аммония.
Показано, что при добавлении в раствор фермента сульфата
аммония до
35% насыщения, весь фермент остается
в надосадочной жидкости, а в осадок Р и с . 1. И о н о о б м е н н а я х р о м а т о г р а ф и я L-лиз и п - а - о к с и д а з ы на Д Е А Е - ц е л л ю л о з е .
выпадают лишь балластные белки. ДоЗ д е с ь и на р и с . 2 и 3: 1 — о п т и ч е с к а я п л о т н о с т ь при
бавление сульфата аммония до 50
2 8 0 им;
2 — активность
L-лизии-а-оксидазы
Н 2 0 2 » I мин). Р а з м е р к о л о н к и
4Х
55% насыщения приводит к частич- (в м к м о л ь
26 см; с к о р о с т ь э л ю и р о в а н и я 100 мл/ч.
ному осаждению фермента. И лишь при
60% насыщении большая часть фермента (91%) выпадает в осадок. Поэтому
том аммония до 70% и подвергали диа[ 1 р и ф р а к ц и о 11 и р о в а и и ом
оса ж д е и и и
лизу против 0,02М натри йфосфатпого
фермента сульфатом аммония испольбуфера рН 7,4.
зовали концентрации последнего 35 Удельная активность после II ста60%. К 1600 мл водного экстракта
дии очистки возросла в 1,9 раза.
гриба Trichoderma harzianum Rifai с
Ill стадия
очистки. Ионообменная
исходной
удельной
активностью
хроматография на ДЕАЕ-сефацеле.
0,33% Е/мл добавляли при перемешиПоскольку при
хроматографии на
вании сульфат аммония до 35% насыДЕАЕ-целлюлозе имела место недощения, затем центрифугировали расстаточно полная очистка фермента, мы
твор и удаляли осадок. К надосадочсочли целесообразным провести также
ной жидкости (1200 мл) добавляли
ионообменную
хроматографию
на
сульфат аммония до 60% насыщения
ДЕАЕ-сефацеле, обладающем высокой
и образовавшийся
осадок
отделяли
разрешающей
способностью и хороце нт р и фуги р ов а и и ем;
п ос л ед 11 и й расшими гидродинамическими свойстватворяли в 72 мл натрийфосфатпого буми .
фера, рН 7,4 и диализовали против тоРаствор фермента после
диализа
го же буфера.
(198 мл) с удельной активностью 6,7 Е/мг
После данной стадии очистки удельк о л и ч ест в е н но
переносили
на
коная активность фермента превышала
лонку с ДЕАЕ-сефацелем. Предвариисходную в 1 I раз.
тельно колонку промывали 0,2М иатII
стадия очистки. Ионообменная
рийфосфатным
буфером рН 7,4. Пухроматография на ДЕАЕ-целлюлозе.
тем создания ступенчатого градиента
Выбор ионообменной
хроматограх л ор и ст о го н а т р и я элю и р о вал и фе р фии на ДЕАЕ-целлюлозе обусловлен
мент с колонки (рис. 2).
тем, что фермент имеет р ! в зоне рН 4,0,
Удельная активность после данной
а при рН 7,4 он з а р я ж е н отрицательувеличилась в 2 рано и соответственно адсорбируется на стадии очистки
за.
Фракции,
в
которых
удавалось оиа и ионообмен ника х.
Полученный после I стадии очистки
раствор объемом 110 мл с удельной
активностью 3,6 Е/мг постепенно наносили на колонку с ДЕАЕ-целлюлоз о й, п р е д вар и т е л ь и о у р а в н о в е ш е и н у ю
0,02 М иатрийфосфатным буфером р Н
7,4. После тщательного промывания колонки сначала 0,02 М иатрийфосфатным буфером рН 7,4, а затем буферным
раствором, содержащим возрастающие
концентрации
хлористого
натрия
(0,2 М
0,6 М), элюировали с коРис. 2. И о н о о б м е н н а я х р о м а т о г р а ф и я L-лилонки
(рис. 1). Фракции, в которых
з и н - а - о к с и д а з ы на Д Е А Е - с е ф а Д е к с е .
удавалось определить активность ферР
а
з
м
е
р
к о л о н к и 1 , 5 X 3 0 см; с к о р о с т ь э л ю и р о в а н и я
мента , объеди 11 ял и, насыщали сул ьфа 10 мл/ч.
132
Исходная
культу рал ьн а я жидкость
2 460
0,33
Степень
очистки
7 350
Выход, %
Удельная
активность,
Е мг
Стадия
очистки
Общая а к тивность, Е
L - л и з и н - а - о к с и д а з ы из Trichoderrna sp.
Общий белок, мг
Очистка
100
0
3.6
6.7
14,8
29
91
64,4
44,2
22,4
10,9
20,3
44.8
87.9
/ 5 Фрикции
I
II
Рис. 3. Г е л ь - ф и л ь т р а ц и я
L-лизип-ос-оксидазы на у л ь т р а г е л е АсА-34.
Размер
колонки
1 x 1 0 0 см; с к о р о с т ь
1 0 мл/ч.
элюирования
р едел и т ь фер ментат и в ну ю а кт и в н ост ь,
объединяли и насыщали сульфатом аммония на 7 0 % . После центрифугирования осадок растворяли в 0,02М натри/фосфатном буфере р Н 7,4. Конечный объем раствора фермента перед
IV стадией очистки составлял 1,8 мл.
Удельная активность — 14,8 Е/мг.
1V стади я оч ист к и. Гел ь-фил ьтр ация на ультра геле АсА-34.
С целыо разделения по молекулярным массам
гель-фильтрацию проводили с малыми объемами материала.
На колонку с ультра гелем АсА-34,
уравновешенную 0,02М натрийфосфатным буфером р Н 7,4, наносили расвор фермента (1,8 мл) и подвергали
IV
620 2 240
237 1 584
1 086
77,1
551
19
гель-фильтрации в два приема (рис. 3).
Удельная активность после данной
стадии составила 29 Е/мг.
Данные, полученные на всех четырех стадиях очистки
L-лизин-а-оксидазы, суммированы в таблице.
Пол у чей 11 ы й в резул ьтате 11 роведенной очистки фермент
L-лизин-а-оксидаза оказался гомогенным по результатам
диск-электрофореза и ультрацентрифугирования
(рис. 4).
Таким образом, разработан усовершенствованный метод выделения и очистки нового антиопухолевого фермента
L-лизин-а-оксидазы из отечеств ен и о го
штамма
Т г i с h оdегm a
s р.
Метод
очистки
включает
4 ста-
Р и с . 4. Э л е к т р о ф о р е г р а м м а (/) и с е д и м е н т о г р а м м а
зис-а-оксидазы.
а
( / / ) L-ли-
О б р а з е ц с о д е р ж а л 80 мкг б е л к а . Э л е к т р о ф о р е з п р о в о д и л и rio D a v i s 1.8 |.
0 , 5 % р а с т в о р б е л к а в 0 . 0 2 М н а т р и й ф о с ф а т м о м б у ф е р е рМ 7 , 4 , 25 мин.
56 100 о б / мин.
39
дии (вместо 6, использованных ранее)
и дает хороший выход
22,4%. Изучены физико-химические (оптимум рН,
с у бсгр ат н а я с пе циф и ч 11 ость, к о иста н та Михаэлиса, молекулярная масса и
др.), а также антиопухолевые свойства
гомогенного фермента, что будет предметом отдельного сообщения.
Л И Т Е Р Л Т У Р А
1. Березов Т. Т. — Вести. А М Н СССР, 1984,
№ 8, с. 11—24.
2. Березов
Т. Т. — Там ж е , 1971,
№11,
с. 3 5 - 4 6 .
3. Брюле Ж-, Экхардпг С. Дж., Холл Т.
Уинклер
А.
Л е к а р с т в е н н а я т е р а п и я рака. М., 1974.
4. Березов
Т. Т. — В к н . : Р о л ь а с п а р а г и пазы в э н з и м о т е р а п и и о п у х о л е й . М., 1972,
с. 5—37.
5. Смирнова
И. П., Хадуев С. X. — Микроб и о л о г и я , 1984, т. 53', № 1, с. 163—164.
6. Capizzi R. L. — C a n c e r C h e m o t h e r . R e p . ,
1975, v. 6, p. 37—39.
7. Coohey D. A., Handschumacher
R. E.
Annu.
Rev.
Pharmacol.,
1970, v. 10,
p. 4 2 1 — 4 2 5 .
8. Davis
B. J . - - A n n . N. Y. A c a d . S c i . ,
1964, v. 121, p. 4 0 4 — 4 0 7 .
9. Kusakabe
M.,
Kodama
K., Kuninaka
A.
et a l . - J . bio 1. Chern., 1980, v. 255,
p. 9 7 6 — 9 8 1 .
10. Kusakabe
II., Kodama
K-, Kuninaka
A.
et a l . — A g r i c u l t .
B i o l . Chern.,
1980,
v. 44, p. 387—392.
УДК
11. Lowry 0. / / . , Rosebrough N. /., Farr A. L.
et a l .
J . b i o l . Chern.,
1951. v. 193,
p. 2 6 5 — 2 7 5 .
12. Masbom
L. 7 \ ,
Wriston
J. C. — A r c h .
Biochem.,
1964, v. 105, p. 105—106.
13. Patterson M. K-, Orr G. /?. — Cancer Res.,
1969, v. 29, p. 1280.
14. Rutter D. A., Wade И. E. — B r i t . J . e x p .
P a t h . , 1971, v. 52, p. 610—611.
15. Struck
J., Sizer J. W. -— Arch. B i o c h e m . ,
I960, v. 90, p. 2 2 — 3 0 .
16. Uren J. R.}
Handschumacher
R. E. —
I n : Cancer A C o m p r e h e n s i v e
Treatise./
E d . F. F. Becker. N e w Y o r k , 1977, v. 6,
p. 460—471; 4 7 7 — 4 8 0 .
Поступила
02.10.84
I S O L A T I O N A N D P U R I F I C A T I O N O F LL Y S V L-ct-OX I D A S E
FROM
TR1CHODER/У1Д sp.
S.
/.
Kh.
P.
Khaduev,
Smirnova,
E. V.
T. 7 \
Lukashova,
Berezov
D e p a r t m e n t of B i o c h e m i s t r y , P .
People's Friendship
University,
Lumumba
Moscow
An i m p r o v e d and r e l a t i v e l y r a p i d procedure is d e v e l o p e d for i s o l a t i o n and p u r i f i c a t i o n
of a new a n t i t u m o r e n z y m e L - l y s y l - a - o x i d a s e
from
Trichoderma
sp.
The
method
involves
four s t e p s ,
instead
of six s t e p s
d e s c r i b e d p r e v i o u s l y , w i t h a y i e l d of 2 2 . 4 % .
T h e p u r i f i e d e n z y m e p r e p a r a t i o n w a s homogenous as s h o w n by p o l y a c r y l a m i d e gel disc electrophoresis and u l t r a c e n t r i f u g a t i o n . Physicoc h e m i c a l and a n t i t u m o r
p r o p e r t i e s of
the
e n z y m e are u n d e r s t u d y .
В16-056.257-092: 61(5-008.938.57
И. А. Фролова, E. А. Беюл,
НАРУШЕНИЯ
10. /7. Попова
ПУРИНОВОГО О Б М Е Н А
АЛИМЕНТАРНЫМ
У
ВОЛЬНЫХ
ОЖИРЕНИЕМ
Институт питания АМН СССР, Москва
В настоящее время растет число людей быточной массы тела у больных обменс повышенным содержанием в крови мо- н о - а л и м е н т а р н ы м о ж и р е н и е м.
чевой кислоты (МК), чему способствуют
избыточное питание, потребление алкоМет о д и к а
гол я, г и 11 од и 11 а м и я. Ч астота г и п е р у р и кемии (ГУ) среди взрослых достигает
П о д н а б л ю д е н и е м н а х о д и л о с ь 198 б о л ь н ы х
5 25% 124, 27, 291, частота подагры
о ж и р е н и е м — 90 м у ж ч и н и 108 ж е н щ и н в воз2% [11, 291. К заболеваниям, тесно свя- расте 25—60 л е т . У 40 из них основное заболезанным с ГУ и подагрой, относятся ожи- вание с о ч е т а л о с ь с п о д а г р о й , у о с т а л ь н ы х
имела место б е с с и м п т о м н а я г и п е р у р и к е м и я
рение и атеросклероз 1241. Атеросклероз ( Б Г У ) .
сопутствует подагре и ГУ в 10 -20% слуВ течение 3 0 — 3 5 дней больным в стациочаев, гиперлипопротеидемия (ГЛП)
в н а р е н а з н а ч а л и к у р с р е д у ц и р о в а н н о й по ка40 100%, ожирение - в 70% 1211, хо- л о р и й н о с т и диеты д л я д о с т и ж е н и я р е д у к ц и и
массы
т е л а (1200—1800 к к а л ) .
тя механизмы связи нарушений пурино- избыточной
В диете б ы л о р е з к о с н и ж е н о с о д е р ж а н и е мового обмена с таковым липидов нельзя
н о с а х а р и д о в и д и с а х а р и д о в , о г р а н и ч е н о сос ч и та т ь в ы я с н е и и ы м и.
д е р ж а н и е ж и р а и х о л е с т е р и н а (последнего —
Цель настоящего исследования заклю- до 300 мг). 5 0 % квоты б е л к а с о с т а в л я л и
б е л к и р а с т и т е л ь н о г о п р о и с х о ж д е н и я . Содерчалась в изучении состояния пуринового ж а н и е п у р и н о в ы х о с н о в а н и й б ы л о с н и ж е н о
обмена и влияния на пего редукции из- до 100 мг в д е н ь .
134
39