На правах рукописи Мухатова Елена Михайловна СИНТЕЗ И

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ
УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
АСТРАХАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
На правах рукописи
Мухатова Елена Михайловна
СИНТЕЗ И ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
ОРГАНИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ ОЛОВА С ФЕНОЛЬНЫМИ
ФРАГМЕНТАМИ
02. 00. 03 – Органическая химия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата химических наук
Астрахань - 2013
Работа выполнена в Астраханском государственном техническом университете на кафедре
органической, биологической и физколлоидной химии
Научные руководители:
Берберова Надежда Титовна,
доктор химических наук, профессор
Шпаковский Дмитрий Борисович,
кандидат химических наук,
старший научный сотрудник
Официальные оппоненты:
Сидоров Алексей Анатольевич,
доктор химических наук, профессор
(Институт общей и неорганической химии
им. Н.С. Курнакова РАН,
заместитель директора)
Аксенов Александр Викторович,
доктор химических наук, профессор
(Северо-Кавказский федеральный университет,
заведующий кафедрой химии)
Ведущая организация:
ФГБОУ ВПО «Ивановский государственный
химико-технологический университет»,
г. Иваново
Защита состоится «19» декабря 2013 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д
307.001.04 при ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный технический университет» по
адресу:
414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 16, учебный корпус 2, ауд. 201.
С диссертацией можно ознакомиться
технического университета.
Автореферат разослан
в библиотеке Астраханского государственного
«18» ноября 2013 г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор химических наук, доцент
Е.В. Шинкарь
2
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. Оловоорганические соединения (ООС), применяемые в
сельском
хозяйстве
(биоциды)
и
промышленности
(катализаторы
различных
производств, добавки в антиобрастающие краски), в отличие от своих неорганических
предшественников являются достаточно токсичными веществами. Токсичность RnSnX4-n
обусловлена не только способностью взаимодействовать с SH-группами цистеиновых и
гистидиновых аминокислотных остатков белков, но и их прооксидантной активностью,
что приводит к развитию окислительного стресса и возникновению многочисленных
патологий. С целью снижения побочных токсических эффектов в настоящее время
активно ведутся работы по созданию новых антиокислительных ловушек для токсичных
ООС, проявляющих прооксидантную активность. Недавние исследования доказали
высокую цитоксическую активность производных ООС с различными N, O, Cдонорными лигандами. Подавление окислительной активности ООС важно также с
точки зрения поиска лекарственных препаратов цитотоксического действия, не
оказывающих
нежелательного
свободнорадикальных
побочного
окислительных
действия.
процессов
Известными
являются
ингибиторами
пространственно-
затрудненные фенолы, имитирующие активность витамина Е. С целью снижения
токсичности ООС можно провести их функционализацию подобными редоксактивными фрагментами. В связи с этим, синтез органических производных олова,
содержащих фрагмент пространственно-затрудненного фенола, исследование их
редокс-свойств в биохимически значимых реакциях является актуальной задачей и
представляет не только научный интерес, но и практическую значимость.
Цель работы заключается в направленном синтезе новых оловоорганических
соединений, содержащих фрагмент пространственно-затрудненного фенола, изучении
их влияния на биохимические процессы in vitro и установлении взаимосвязи структура
– биоактивность. В рамках диссертационной работы решались следующие задачи:
1. Синтез
новых
оловоорганических
соединений,
содержащих
фрагмент
пространственно-затрудненного фенола, и исследование их редокс-свойств.
2. Комплексное изучение анти/прооксидантной и антирадикальной активности
полученных соединений на различных модельных системах.
3. Изучение влияния оловоорганических соединений на скорость разложения
пероксида водорода гемолизатом эритроцитов крови человека in vitro.
4. Оценка цитотоксической активности полученных соединений на линиях
3
раковых клеток и изучение их взаимодействия с белком тубулином, как одной из
биохимических мишеней для потенциальных противораковых средств.
Научная новизна
Синтезированы новые оловоорганические соединения, содержащие фрагмент 2,6ди-трет-бутилфенола.
Исследованы редокс-превращения оловоорганических соединений в растворах
совокупностью физико-химических методов: циклическая вольтамперометрия (ЦВА),
электронный парамагнитный резонанс (ЭПР).
Установлена антиоксидантная активность новых серосодержащих соединениий
Sn(IV)
и
Sn(II)
с
фрагментами
2,6-ди-трет-бутилфенола
в
процессах
неферментативного и ферментативного окисления жирных ненасыщенных кислот на
примере
цис-9-октадеценовой
(олеиновой)
и
цис-9,цис-12-октадекадиеновой
(линолевой) кислот.
Впервые показано, что оловоорганические соединения, содержащие фрагменты
2,6-ди-трет-бутилфенола, в отличие от хлоридов, увеличивают скорость разложения
Н2О2 под действием каталазы крови in vitro. Предложены новые детоксицирующие
агенты – водорастворимый мезо-тетра(4-сульфофенил)порфирин и 3,5-ди-трет-бутил4-гидрокситиофенол
для
снижения
токсического
действия
оловоорганических
соединений.
Установлено, что комплексы оловоорганических соединений с фрагментами 2,6ди-трет-бутилфенола проявляют высокую антипролиферативную активность против
линий раковых клеток MCF-7 и HeLa, при этом наблюдается корреляция с их высокой
антиоксидантной
активностью
в
процессах
пероксидного
окисления
жирных
ненасыщенных кислот, также обнаружено их высокое сродство к белку тубулину,
рассматриваемому в качестве одной из мишеней противоопухолевых препаратов аналогов колхицина, проявляющих антимитотическую активность.
Практическая ценность. В работе предложен способ диагностики стадий течения
воспалительных заболеваний придатков матки с помощью определения активности
каталазы. Данный способ позволяет повысить точность диагностики и оценить
динамику процесса (Патент № 2291438).
Найдены новые детоксицирующие агенты для токсических оловоорганических
соединений.
4
Изучение влияния оловоорганических тиолатов на биохимические мишени
противораковых агентов – фермент липоксигеназу и белок тубулин, представляет
значительный интерес для поиска новых противораковых агентов, обладающих менее
выраженными побочными эффектами. Данные о высокой цитотоксической активности
позволяют рассматривать комплексы оловоорганических соединений с фрагментами
2,6-ди-трет-бутилфенола в качестве перспективных противораковых препаратов.
Апробация работы. Основные результаты и материалы диссертационной работы
представлены на Всероссийской молодежной конференции-школе, посвященной 150летию со дня рождения А.Е. Фаворского (Санкт-Петербург, Россия, 2010), International
conference «Topical problems of organometallic and coordination chemistry» V Razuvaev
lectures (N. Novgorod, Russia, 2010), XI Международной конференции по физической и
координационной химии порфиринов и их аналогов (ICPC-II) (Одесса, Украина, 2011);
Frontiers of Organometallic Chemistry, FOC-2012. (Saint Petersburg, Russia, 2012);
International Symposium «Modern Trends in organometallic chemistry and catalysis
(Мoscow, Russia, 2013); International conference “Organometallic and Coordination
Chemistry: Fundamental and Applied Aspects” International Youth School-Conference on
Organometallic and Coordination Chemistry, (N. Novgorod, Russia, 2013); V конференции
“Электрохимические и электролитно-плазменные методы модификации металлических
поверхностей” 2013; Первой Российской конференции по медицинской химии (Москва,
2013).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей, 13 тезисов
докладов, получен 1 патент.
Объем и структура работы.
Материал диссертационной работы изложен на 120 страницах, включает 8 таблиц,
22 рисунка и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов,
экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы из 147
наименований и полностью соответствует паспорту специальности 02.00.03.
Настоящая диссертационная работа проводилась при финансовой поддержке
Российского Фонда Фундаментальных Исследований (гранты № 11-03-00389, 13-0300487), Федеральной Целевой Программы «Научные и научно-педагогические кадры
инновационной России» на 2009-2013 г.г. (ГК №16.740.11.0771 от 31 октября 2011 г.).
5
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
1. Литературный обзор
В обзоре представлены данные о свойствах, применении и механизме действия
оловоорганических соединений; рассмотрены возможные пути снижения токсического
действия органических производных олова, а также последние достижения в поиске
цитотоксических агентов на основе производных олова.
2. Обсуждение результатов
В работе описан синтез новых соединений Sn(IV) и Sn(II), содержащих фрагменты
2,6-ди-трет-бутилфенола, а также результаты комплексного исследования редокссвойств, антирадикальной и антиоксидантной активностей с использованием модельных
процессов неферментативного пероксидного окисления цис-9-октадеценовой кислоты и
ферментативного окисления цис-9,цис-12-октадекадиеновой кислоты под действием
липоксигеназы (LOX 1-В).
Установлено увеличение скорости ферментативной реакции разложения Н2О2
каталазой
крови
in
vitro
в
присутствии
оловоорганических
соединений
с
порфириновыми и тиофенольным лигандами.
Изучено связывание оловоорганических соединений с SH-группами белка
тубулина - потенциальной мишени для противоопухолевых препаратов. Обнаружена
выраженная цитотоксическая активность оловоорганических соединений с тиолатными
лигандами на линиях раковых клеток человека MCF-7 и HeLa in vitro.
2.1. Синтез и редокс - активность соединений Sn(IV) и Sn(II), содержащих
фрагмент 2,6-ди-трет-бутилфенола
В
работе
синтезированы
новые
соединения
олова
1-8
взаимодействием
соответствующих хлоридов олова и 3,5-ди-трет-бутил-4-гидрокситиофенола (RSH) в
присутствии гидроксида калия (Схема 1). Соединения Sn(IV) различаются длиной и
объемом заместителей (Me, Et, Bu, Ph) и числом тиолатных лигандов на основе 2,6-дитрет-бутил-4-меркаптофенола (RSH) (10). В качестве соединений сравнения выбраны
производные олова Sn(IV) и Sn(II) (8, 9), содержащие два фенольных фрагмента. Бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)оловодихлорид
(9)
получен
по
известной
методике переметаллирования из соответствующего ртутьорганического производного.
6
Bu
t
HO
SH
But
RSH, (10)
+
'
R nSnCl4-n
n = 2, 3
'
R nSn(SR)4-n
(1-7)
SnCl2
KOH,
MeOH
Sn(SR)2 (8)
Bu
1) Hg(OAc)2, AcOH
HO
2) KCl, Me2CO
НgCl
Sn
о-ксилол
SnCl2 (9)
HO
t
But
But
R' = Me; Et; Bu; Ph; R
Me2Sn(SR)2 (1)
Et2Sn(SR)2 (2)
n-Bu2Sn(SR)2 (3)
Ph2Sn(SR)2 (4)
R2Sn(SR)2 (5)
Me3SnSR (6)
Ph3SnSR (7)
t
But
t
Bu
HO
KOH, MeOH
Bu
2
Схема 1.
Состав и строение тиолатов Sn подтверждено данными элементного анализа, ИК
спектроскопии, ЯМР и рентгеноструктурного анализа (РСА) 1.
По данным РСА соединений 1, 5 структура координационного полиэдра при атоме
олова представляет собой искаженный тетраэдр (Рис. 1). Длины связи Sn-S в
комплексах составляют 2.40-2.42 Å. Несмотря на пространственные препятствия ввиду
наличия четырех фрагментов 2,6-ди-трет-бутилфенола
молекулы
участвовать в образовании межмолекулярных водородных связей
5 способны
O4–H4⋯S1,
расстояние H4⋯S1 составляет 2.936 Å.
Рис. 1. Молекулярные структуры соединений 1, 5.
В ИК-спектрах при образовании тиолатов 1-8 исчезает полоса валентных
колебаний
ν(SH)
2573
см-1
лиганда
RSH.
Полоса
валентных
колебаний
неассоциированной ОН-группы наблюдается в области 3620-3640 см-1 для соединений
1-8. Сдвиги характеристичных полос ν(ОН) в область более высоких частот по
сравнению с RSH свидетельствуют о перераспределении электронной плотности в
1
РСА был выполнен в лаборатории структурной химии химического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова под
руководством д.х.н., проф. Л.А. Асланова.
7
комплексах и доказывают образование связи S-Sn.
В спектрах ЯМР 1Н 1-8 в CDCl3 отсутствует сигнал протона S-H группы в RSH при
3.5 м.д., а характеристичные сигналы эквивалентных протонов But и ОН группы
смещены в сильное поле в спектрах комплексов по сравнению с таковыми для RSH.
Наличие двух эквивалентных -связей С-Sn в 5 приводит к проявлению спин-спинового
взаимодействия ароматических протонов фенольных групп с парамагнитными
изотопами 117,119Sn (S = 1/2) с константой расщепления 3J(Sn-H) 84 Гц.
Далее
было
проведено
исследование
редокс-свойств
соединений
олова,
содержащих фрагмент 2,6-ди-трет-бутилфенола. В биологические окислительновосстановительные процессы ООС вовлекаются с образованием реакционноспособных
частиц и вторичных продуктов распада, в связи с этим методами ЭПР и электрохимии
изучено участие тиолатов олова в данных превращениях.
Химическое окисление соединений 1-8 под действием PbO2 в толуоле приводит к
образованию радикальных частиц. Наличие в соединениях 1-8 одной, двух или четырех
2,6-ди-трет-бутилфенольных групп предполагает образование на первой стадии
окисления
феноксильного
радикала,
затем
возможна
генерация
нескольких
радикальных центров с последующей деструкцией соединений (Схема 2). Спектры ЭПР
радикалов представляют собой триплеты (Рис. 2), характеризующие взаимодействие
спина
неспаренного
электрона
с
двумя
эквивалентными
мета-протонами
феноксильного кольца с константами сверхтонкого взаимодействия (СТВ) а(2Н).
Введение атома Sn не оказывает значительного влияния на величину константы СТВ
а(2Н) в феноксильных радикалах 1.-8., составляющую 0.15-0.16 мТл.
But
But
HO
Схема 2.
S
n
SnR
PbO2, PhCH3
4-n
-е, - H+
.O
But
But
1-8
S
n
SnR
4-n
продукты
окисления
. .
1-8
Рис. 2. Спектр ЭПР феноксильного радикала,
регистрируемого при окислении соединения 1
(толуол, PbO2, 290К).
Радикалы, образующиеся при окислении 1-8 устойчивы в растворе в отсутствии
кислорода при комнатной температуре в течение нескольких часов. Сходство общего
8
вида и параметров спектров ЭПР радикалов, образующихся при окислении 1-8 и RSH, а
также отсутствие взаимодействия с парамагнитными ядрами
117,119
Sn указывает на
отсутствие переноса электронной плотности от радикального центра через атом S к
атому Sn. Величины изотропных g-факторов (g = 2.0041 – 2.0051) для радикалов 1.8.близки g-фактору органического радикала и свидетельствуют о делокализации
неспаренного электрона в органическом фрагменте.
Электрохимическое поведение соединений 1-9 в сравнении с 3,5-ди-трет-бутил-4гидрокситиофенолом в процессах переноса электрона изучено методом циклической
вольтамперометрии (ЦВА).
Cоединения 1-9 и RSH окисляются необратимо в две одноэлектронные стадии при
потенциалах 1.02÷1.30 и 1.4÷1.70 В (Табл. 1). Типичный вид ЦВА на Pt электроде в
CH3CN представлен на рисунке 3. На обратной ветви циклической вольтамперограммы
(ЦВА) всех соединений наблюдается пик восстановления протона при потенциале 0.13В, идентифицированный добавкой в систему кислот (HClO4, CF3COOH).
Табл. 1. Потенциалы окисления соединений 1-10.
Соединени
1
2
3
4
5
е
1,16 1,17 1,13 1,17 1,20
Еп.а.1, В
Еп.а.2, В
Известно,
восстановление
1,45
что
1,48
1,43
увеличение
оловоорганических
1,46
1,70
числа
6
7
8
9
10
1,02
1,19
1,30
1,30
1,20
1,53
1,36
1,63
1,61
1,65
органических
соединений.
заместителей
Монозамещенные
затрудняет
органические
производные олова(IV) легче всего восстанавливаются, следовательно, являются более
сильными окислителями. Установлено, что соединения 1-8 способны проявлять
восстановительные свойства за счет тиофенольных фрагментов.
Рис. 3. ЦВА соединения 6 (CH3CN, Pt, 0.1
М nBu4NClO4, C=5мM, Ag/AgCl,
v= 0.2 В∙с-1).
Bu
t
O
O
Bu
t
При проведении исчерпывающего электролиза соединения 6 при Епа= 1.02 В
образуется продукт, который восстанавливается обратимо при потенциале Епк= -0.8 В, в
ИК-спектре выделенного соединения отмечена полоса поглощения, соответствующая
9
валентным колебаниям ν(С=О) 1720 см-1. Аналогичная картина наблюдается в
результате исчерпывающего электролиза фенола 10. Продукт восстанавливается
обратимо при потенциале Епк= -0.74 В, в ИК-спектре продукта также отмечена полоса
поглощения, соответствующая валентным колебаниям карбонильной группы.
Спектроскопия поглощения продуктов электролиза 6 и 10 в видимой области
подтверждает образование 2,6-ди-трет-бутилбензохинона, для которого характерна
полоса поглощения при λ= 425 нм.
Использование
метода
ЦВА
подтверждает
ступенчатое
окисление
оловоорганического соединения 6. Наличие первого пика, обусловлено окислением
фенольного фрагмента до катион-радикала, который фрагментируется с отрывом
протона с образованием радикала, окисляющегося далее до хиноидной формы
(Схема 3).
But
HO
.+
But
Sn(CH3)3
S
-e
HO
I
But
Sn(CH3)3
S
+
-H
O
S
Sn(CH3)3
-e
II
But
But
+
But
t
Bu
электролиз
O
.
But
S
Sn(CH3)3
O +
O
H2O
продукты деструкции
t
Bu
But
Схема 3.
Исследование окислительно-восстановительных свойств новых тиолатов олова
свидетельствуют о высокой редокс-активности данных соединений. Введение донорных
заместителей в органическую часть комплексов олова облегчает их окисление.
Поскольку все полученные соединения содержат структурный фрагмент тиофенола, то
их редокс-характеристики близки.
Таким образом, окисление соединений олова, а также 3,5-ди-трет-бутил-4гидрокситиофенола происходит с отрывом протона от фенольного фрагмента с
образованием стабильного феноксильного радикала, что позволяет предположить
проявление антирадикальной активности данными соединениями. В случае соединений
олова(IV) предположительно происходит деструкция оловоорганического соединения,
что согласуется с литературными данными.
2.2. Антирадикальная и антиоксидантная активность оловоорганических
соединений с фрагментами 2,6-ди-трет-бутилфенола
10
В работе исследована взаимосвязь структура - активность соединений в
следующих модельных реакциях: 1) перенос атома водорода от изучаемых соединений
к
стабильному
радикалу
2,2-дифенилпикрилгидразилу
2)
неферментативное
пероксидное окисление цис-9-октадеценовой (олеиновой) кислоты 3) ферментативное
окисление
цис,цис-9,12-октадекадиеновой
(линолевой)
кислоты
под
действием
липоксигеназы.
2.2.1. Антирадикальная активность тиолатов Sn(IV), содержащих фрагменты
2,6-ди-трет-бутилфенола
Одним из способов оценки антирадикальной активности органических соединений
является способность таких соединений к восстановлению стабильного радикала 2,2дифенил-1-пикрилгидразила (ДФПГ) (схема 4). Мониторинг за ходом реакции
осуществляется спектрофотометрически
раствора ДФПГ (
max
по
уменьшению
оптической плотности
= 517 нм) в МеОН в присутствии исследуемых соединений.
But
t
Bu
HO
But
X
-H
O2N
N
.
N
O2N
NO2
.
H
.O
X
But
H O2N
.
MeOH
N
N
NO2
O2N
ДФПГ
Схема 4.
Нами исследована антирадикальная активность2 соединений 1-9 в ДФПГ-тесте, и
установлена их высокая антирадикальная активность (Табл. 2). Наиболее активным
восстановителем ДФПГ в данном ряду является соединение 5, содержащее четыре
фенольные группы и для которого значение эффективной концентрации EC50,
восстанавливающей 50% ДФПГ составляет (8 ± 1) μМ. Реакция восстановления
эквимолярных количеств ДФПГ и 5 (0.1 мМ) завершается в течение нескольких секунд.
Табл. 2. Значения ЕС50 для соединений 1-7 и RSH в ДФПГ тесте (MeOH, 20 oC).
Соединение
1
2
3
4
EC50, мкM 12 ± 2 16 ± 2 14 ± 2 12 ± 2
5
8±1
6
7
24 ± 3 15 ± 4
RSH
5±1
Кинетические кривые восстановления ДФПГ в присутствии различных концентраций 5
представлены на рисунке 4.
2
Эксперименты по изучению антирадикальной активности выполнены совместно с к.х.н. Грачевой Ю.А.
11
Рис. 4. Изменение оптической
плотности растворов ДФПГ при 517
нм
в
присутствии
различных
концентраций комплекса 5: 1- 0,01
мМ; 2- 0,02 мМ; 3- 0,04 мМ; 4- 0,06
мМ; 5- 0,08 мМ; 6 – 0,1 мМ, контроль
– 0,1 мМ ДФПГ (MeOH, 20 oC).
На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что с введением
фрагмента 2,6-ди-трет-бутилфенола и увеличением их числа растет антирадикальная
активность.
Ингибирующая активность соединений 1-9 связана с возможностью отрыва атома
водорода от фенольной группы и образованием соответствующих стабильных
феноксильных радикалов, что подтверждено ранее методом ЭПР.
Таким образом, показано, что ООС, содержащие группу меркаптофенола, в
отличие от соответствующих хлоридов олова – промоторов радикальных процессов,
обладают антирадикальной активностью.
2.2.2. Антиоксидантная активность соединений Sn(IV) и Sn(II) в процессе
пероксидного окисления олеиновой кислоты
Одним из важнейших условий нормального функционирования клетки является
стационарность уровня окислительных процессов в липидах. В этой части работы
исследовано влияние тиолатов 1-9 на процесс окислительной деструкции цис-9октадеценовой (олеиновой) (R′′H) кислоты как структурного фрагмента липидов.
Данная система моделирует один из цепных радикальных биопроцессов - пероксидное
окисление липидов (ПОЛ) биомембран.
Окисление проведено в течение 5 ч, при постоянном барботировании воздуха в
термостатируемой установке при 65°С и 37°С. Выбор температур обусловлен тем, что
65°С моделирует состояние окислительного стресса, а 37°С является физиологической
температурой. Влияние соединений 1-9 на скорость окисления олеиновой кислоты
изучено в сравнении с соответствующими хлоридами R nSnCl4-n и SnCl2 как отдельно,
так и совместно с 3,5-ди-трет-бутил-4-гидрокситиофенолом.
Добавка
всех
оловоорганических
соединений,
не
содержащих
фрагмент
пространственно-затрудненного фенола, способствует промотированию окислительного
12
процесса при двух температурах, что согласуется с ранее полученными данными.
Концентрация первичных продуктов окисления - изомерных гидропероксидов R′′OOH
через 5 ч возрастает примерно в 2 раза относительно контроля (Табл. 3) при указанных
температурах. Сравнивая прооксидантное действие хлоридов Sn(IV) и SnCl2 в процессе
окисления олеиновой кислоты при 65°С можно расположить их в следующий ряд по
уменьшению прооксидантных свойств:
Et2SnCl2 > SnCl2> n-Bu2SnCl2> Ph2SnCl2> Me2SnCl2> Ph3SnCl > Me3SnCl
Все соединения олова, содержащие тиофенольный фрагмент, ингибируют
окисление олеиновой кислоты при 65°С и 37°С. Соединение 9 также проявляет
ингибирующую активность, что можно объяснить наличием в структуре двух
фрагментов пространственно-затрудненного фенола. Добавка RSH к соединению 9,
приводит к еще большему снижению уровня накопления R''OOH.
По
степени
ингибирования
окисления
олеиновой
кислоты
при
65°С
оловоорганические тиолаты образуют следующий ряд активности:
R2Sn(SR)2 > Et2Sn(SR)2 = Ph2Sn(SR)2 > Me3SnSR > Ph3SnSR > Sn(SR)2 > Me2Sn(SR)2
> n-Bu2Sn(SR)2
Значительное снижение уровня накопления гидропероксидов R''OOH при 65°С (на
70 - 80 %), по сравнению с аналогичными показателями при 37°С (на 15 - 57%),
объясняется, по видимому, тем, что при данной температуре скорость разложения
R''OOH больше, чем скорость их образования.
Табл. 3. Влияние соединений олова на уровень накопления гидропероксидов
олеиновой кислоты при 65°С через 5 ч в ходе окисления.*
[R′′OOH],% от контроля
Me2SnCl2
188
Me2SnCl2 +RSH
28
(1) Me2Sn(SR)2
26
Et2SnCl2
217
Et2SnCl2 +RSH
32
(2) Et2Sn(SR)2
15
n-Bu2SnCl2
207
n-Bu2SnCl2 +RSH
36
(3) n-Bu2Sn(SR)2
33
Ph2SnCl2
195
Ph2SnCl2 +RSH
18
(4) Ph2Sn(SR)2
15
R2SnCl2
36
R2SnCl2 +RSH
14
(5) R2Sn(SR)2
14
Me3SnCl
174
Me3SnCl +RSH
18
(6) Me3SnSR
16
Ph3SnCl
178
Ph3SnCl +RSH
20
(7) Ph3SnSR
17
SnCl2
210
SnCl2 +RSH
20
(8) Sn(SR)2
23
*Абсолютная концентрация [R′′OOH] в контрольном эксперименте (без добавок)
240 мМ. В присутствии RSH концентрации R′′OOH составляет 14 % от контроля.
13
Наибольшую ингибирующую активность при данных температурах проявило
соединение 5, содержащее в структуре четыре фенольных фрагмента, два из которых
содержат серу. Более высокое антиокислительное действие данного соединения,
вероятно, связано с его способностью реагировать с несколькими радикалами,
образующимися на стадии зарождения или разветвления цепи.
Известно, что серосодержащие производные пространственно-затрудненных
фенолов являются полифункциональными антиоксидантами, в которых возможно
проявление внутреннего синергизма антиокислительной активности: фенольный
фрагмент участвует в обрыве кинетической цепи в реакции с пероксильными
радикалами, а сульфидный фрагмент молекулы разрушает гидропероксиды без
образования радикалов.
В результате сравнения уровня накопления гидропероксидов в присутствии
индивидуальных соединений 1-8 и смеси соответствующих хлоридов и RSH,
установлена более выраженная эффективность антиоксидантного действия комплексов
1-8.
Таким образом, введение в структуру оловоорганического соединения фрагмента
2,6-ди-трет-бутилфенола приводит к инверсии прооксидантных свойств исходных
оловоорганических
соединений.
Доказано,
что
увеличение
числа
фрагментов
пространственно-затрудненного фенола в серосодержащей анионной части комплексов
приводит к повышению их антиоксидантной активности. Полученные результаты могут
быть использованы для создания фармацевтических препаратов, не оказывающих
характерного для большинства подобных препаратов нежелательного побочного
влияния на здоровые ткани.
2.2.3. Влияние оловоорганических соединений на ферментативное окисление
линоленовой кислоты под действием липоксигеназы
Важными молекулярными мишенями, принимающими участие в механизмах
возникновения и/или развития заболеваний, являются ферменты липоксигеназы (LOX)
– негемовые железосодержащие диоксигеназы, которые катализируют окисление
полиненасыщенных жирных кислот. Ингибиторы липоксигеназ рассматриваются в
качестве возможных противоопухолевых препаратов, поскольку продуктами окисления
полиненасыщенных жирных кислот являются биологически активные вещества,
играющие важную роль в воспалительных процессах, аллергии и раковых заболеваниях.
Нами исследовано влияние соединений олова на активность липоксигеназы (LOX
14
Для
1-В).
этого
определяли
начальную
скорость
накопления
изомерных
гидропероксидов: 9-гидроперокси-транс-10,цис-12 и 13-гидроперокси-цис-9,транс-11октадекадиеновых кислот (HPOD)) – продуктов ферментативного окисления линолевой
кислоты. Значение начальной скорости накопления HPOD в присутствии исследуемых
соединений (v0) рассчитывали по формуле:
v0 = Δc/Δt = ΔA/(Δt ⋅ ε) = tg α / ε,
где c – концентрация гидропероксидов, t – время реакции, A – оптическая
плотность, ε – молярный коэффициент поглощения, α – угол наклона кинетической
кривой.
Типичный вид кинетических кривых окисления линолевой кислоты представлен на
рисунке 5. Исследования проводили в сравнении с RSН и соответствующими
хлоридами RnSnCl4-n и SnCl2.
Все
изученные
нами
хлорпроизводные
оловоорганических
соединений
ингибируют активность LOX 1-В (Рис. 6). Степень ингибирования липоксигеназы
определяли по формуле: A(%) = 100-((Vo / Vo’)•100%).
Рис. 5. Кинетические кривые окисления
линолевой кислоты под действием LOX
1-B: 1 – контроль- ДМСО без добавок; 2
– Ph2SnCl2 (C = 50 мкM, ДМСО).
По степени ингибирования (А) % оловоорганические хлориды располагаются в
следующий ряд активности:
n-Bu2SnCl2 > R2SnCl2 > Ph3SnCl > SnCl2 > Ph2SnCl2 > Et2SnCl2 >Me3SnCl> Me2SnCl2,
а тиолаты в следующий ряд:
Sn(SR)2 > n-Bu2Sn(SR)2 > Ph2Sn(SR)2 > Me3SnSR > Ph3SnSR > Et2Sn(SR)2 >
Me2Sn(SR)2
Степень ингибирования фермента оловоорганическими тиолатами значительно
ниже и лежит в интервале 54% - 11%. Наиболее эффективными ингибиторами среди них
являются Sn(SR)2 8 и R2SnCl2 9.
15
Рис. 6. Влияние оловоорганических
тиолатов на активность LOX 1-В (С
=50 мкМ в ДМСО, рН 9.0).
Можно предположить, что ингибирование липоксигеназы в присутствии хлоридов
обусловлено
действием
взаимодействии
ООС
активных
с
свободных
образующимися
при
радикалов,
окислении
возникающих
линолевой
при
кислоты
пероксильными радикалами. Высокая токсичность хлоридов Sn(IV) ограничивает
возможность применения данных соединений в качестве потенциальных средств для
регулирования симптомов, индуцируемых эндогенными метаболитами липоксигеназы.
Тиолаты Sn(IV) и Sn(II), содержащие фрагменты пространственно-затрудненного
фенола, проявили себя как менее выраженные ингибиторы LOX 1-B по сравнению с
хлоридами Sn, что может быть связано с важной ролью фрагмента тиофенола в
структуре ООС.
Таким образом, применение пространственно-затрудненного тиофенола в качестве
детоксицирующей антиокислительной ловушки для оловоорганических соединений
открывает возможность для поиска новых типов физиологически активных комплексов
металлов.
2.3. Изучение биологической активности тиолатов Sn
2.3.1. Взаимодействие новых соединений олова с SH- группами тубулина
В качестве биохимической мишени для ряда противораковых лекарственных
средств выступает митотическое веретено, имеющее решающее значение в клеточном
делении. Тубулин - глобулярный димерный белок, содержащий в своей структуре более
20 свободных SH-групп. При полимеризации тубулина образуются микротрубочки,
участвующие в формировании митотического веретена.
В работе изучено
взаимодействие тиолатов Sn, содержащих
фрагменты
пространственно-затрудненного фенола, с SH-группами тубулина при взаимодействии с
реактивом Эллмана - 5,5`-дитио-бис-2-нитробензойной кислотой (ДТНБ). Метод
основан на связывании доступных тиольных групп с ДТНБ в реакции тиолдисульфидного обмена в слабощелочной среде. В результате реакции образуется анион
16
5-тио-2-нитробензойной кислоты (ТНБ), хиноидная форма которого имеет максимум
поглощения 412 нм (Схема 5).
S
O2N
S S
NO2
белок-SH
ОН
COOH
HOOC
белок-SS
-
S
NO2
NO2
COOH
COOH
+
ТНБ
ДТНБ
NO2
COOH
Схема 5.
Исследование влияния соединений олова на связывание SH–групп тубулина с
ДТНБ показало, что большинство тиолатов Sn конкурируют с ДТНБ за связывание с
SH-группами тубулина (Рис. 7.).
Рис. 7. Влияние соединений Sn(IV) на
связывание SH–групп тубулина с ДТНБ.
Концентрация
свободных
SH-групп
тубулина без добавок (контроль) принята
за 100%. (С = 50 мкМ).
Наибольшее снижение концентрации свободных SH-групп тубулина наблюдается
в присутствии соединений 5, 7 и R2SnCl2 9, что может быть обусловлено структурной
комплементарностью между данными соединениями и одним из активных сайтов
тубулина.
В
случае
9
связывание
с
тубулином
может
быть
связано
с
комплексообразованием между Sn и SH- группами тубулина.
С целью определения эффективной концентрации (EC50) соединений 5,7 и 9, при
которой наблюдается снижение реактивности тиольных групп тубулина на 50%,
проведены кинетические эксперименты при различных концентрациях данных
соединений (5 - 50 μМ) в сравнении с классическим ингибитором полимеризации
тубулина - колхицином (Рис. 8).
17
Кинетические кривые связывания свободных SH-групп тубулина с ДТНБ в
присутствии исследуемых соединений олова сходны с колхицином, что свидетельствует
о взаимодействии данных соединений с колхициновым сайтом тубулина.
Рис.
8.
Кинетические
кривые
связывания тиольных групп тубулина с
ДТНБ при 25оС в присутствии
соединений Sn (C= 50 μM). 1контроль; 2- колхицин; 3- Ph3SnSR (7),
4 - R2Sn(SR)2 (5); 5 - R2SnCl2 (9).
0,45
1
0,40
0,35
A
2
0,30
3, 4
5
0,25
0,20
0
10
20
30
40
Time, min
Значения EC50 для серии изученных соединений (Табл. 4) вычислены графически.
Антимитотический агент подофиллотоксин - лиганд колхицинового сайта тубулина,
также связывается с колхициновым сайтом тубулина и оказывает аналогичное действие
на полимеризацию тубулина как и колхицин. Сравнение значений ЕС50 для
подофиллотоксина и тиолатов Sn демонстрирует высокую эффективность связывания
соединений R2Sn(SR) (5) и Ph3Sn(SR) (7) с тубулином.
Табл. 4. ЕС50 связывания соединений олова (1-7,9) с SH-группами тубулина в
сравнении с колхицином (К) и подофиллотоксином (П)
Соед.
1
2
3
4
>100
EC50,
5
7
9
К
П
2,9 ±
5,5 ±
21,0 ±
6,5 ± 0,6
8,6
0,4
0,5
0,3
6
µM
Таким образом, установлено, что исследуемые соединения олова можно
рассматривать в качестве потенциальных антимитотических агентов, связывающихся с
колхициновым сайтом тубулина.
2.3.2. Влияние соединений олова, содержащих фрагмент пространственнозатрудненого фенола, на скорость разложения пероксида водорода гемолизатом
эритроцитов крови человека in vitro
Одной
из
причин
токсичности
и
развития
окислительного
стресса,
промотированного ООС, может быть снижение способности эритроцитов крови
разлагать пероксид водорода -
наиболее стабильную активированную форму
кислорода, которая способна проникать через клеточные мембраны. Разложение Н2О2 с
участием ионов металлов приводит к образованию активного гидроксильного радикала
18
ОН, способного взаимодействовать с биомишенями. В живых организмах разложение
Н2О2 осуществляется с участием пероксидаз. В частности, порфирины и их комплексы с
металлами являются биомиметиками гемовых оксидоредуктаз.
В связи с этим важным представляется исследование влияния комплексов олова 19, а также водорастворимого мезо-тетра(4-сульфофенил)порфирина (H4TPPS, 11), его
комплекса с триметилоловом ((CH3)3Sn)4TPPS, 12) на скорость разложения Н2О2
отмытыми эритроцитами крови человека in vitro. Изучена активность соответствующих
оловоорганических соединений R'nSnCl4-n и их смесей с RSH и свободными
основаниями мезо-тетра(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)порфирина (R4PH2, 13) и
мезо-тетрафенилпорфирина (TPPH2, 14).
X
SO3H
SO3SnMe3
NH N
X
X
OH
But
Bu
t
X=
N NH
11
X
13
12
14
11-14
Показано, что скорость фоновой реакции разложения пероксида водорода при рН
7.4 и температуре 25оС составляет 10% от скорости разложения Н2О2.
Табл. 5. Относительные скорости разложения Н2О2 в присутствии ООС.
Скорость разложения (%) от контроля
Me2SnCl2
54
Me2SnCl2+ RSH
102 (1) Me2Sn(SR)2
108
Et2SnCl2
55
Et2SnCl2+ RSH
111 (2) Et2Sn(SR)2
121
n-Bu2SnCl2
42
n-Bu2SnCl2+ RSH
127 (3) n-Bu2Sn(SR)2
140
Ph2SnCl2
60
Ph2SnCl2 + RSH
127 (4) Ph2Sn(SR)2
143
Me3SnCl
50
Me3SnCl + RSH
103 (6) Me3SnSR
129
n-Bu3SnCl
30
Ph3SnCl
58
Ph3SnCl + RSH
102 (7) Ph3SnSR
140
SnCl2
60
SnCl2 + RSH
102 (8) Sn(SR)2
102
(9) R2SnCl2
105
R2SnCl2 + RSH
100 (5) R2Sn(SR)2
122
(10) RSH
105
(11) Н4ТРРS
98
Н4ТРРS+Мe3SnCI
89 (12) (Me3Sn)4TPPS
(14) ТРРН2
61
(13) R4РН2
84
19
130
Добавка к гемолизату эритроцитов хлоридов олова, не содержащих фрагмента
пространственно-затрудненного фенола, а также порфиринов 13 и 14 приводит к
снижению способности эритроцитов разлагать Н2О2 (Табл. 5).
В соответствии со степенью снижения скорости данного процесса, соединения
олова можно расположить в следующий ряд активности:
n-Bu3SnCl > n-Bu2SnCl2 > Me3SnCl > Et2SnCl2 = Me2SnCl2 > Ph3SnCl > Ph2SnCl2 =
SnCl2
Влияние ООС на скорость данной реакции определяется природой органической
группы, а также, в случае производных c Me и Bu группами, числом этих групп.
Увеличение числа алкильных заместителей приводит к снижению скорости процесса.
Снижение скорости разложения Н2О2 гемолизатом эритроцитов в присутствии R4PH2 и
TPPH2 составило 16% и 40%, соответственно.
Снижение
соединений
скорости
R'nSnCl4-n
разложения
можно
Н 2 О2
в
присутствии
предположительно
оловоорганических
объяснить
ингибированием
антиоксидантных ферментов – каталазы и пероксидазы, а также взаимодействием
данных соединений с гемоглобином – основным компонентом гемолизата эритроцитов.
Добавка хлоридов дибутил- и дифенилолова в смеси с RSH приводит к
возрастанию скорости разложения Н2О2 в среднем на 27% по сравнению с контролем.
Еще большее повышение скорости разложения Н2О2 обнаружено при добавлении в
гемолизат
эритроцитов
соединений
олова
1-8
и
(Me3Sn)4TPPS.
Введение
оловоорганического фрагмента в структуру сульфосодержащего порфирина приводит к
увеличению скорости разложения Н2О2.
По уменьшению скорости данной реакции тиолаты Sn можно расположить в
следующий ряд активности:
Ph2Sn(SR)2 > Ph3SnSR= n-Bu2Sn(SR)2 >(Me3)3Sn)4TPPS > Me3SnSR > (R)2Sn(SR)2 >
Et2Sn(SR)2 > Me2Sn(SR)2 > (R)2SnCl2 = RSH > Sn(SR)2
Наибольшая эффективность установлена для соединения 4, скорость разложения
Н2О2 в присутствии которого возрастает на 42%. Указанное влияние оловоорганических
соединений,
вероятно,
свидетельствует
о
пероксидазной
активности
данных
соединений, учитывая легкость их окисления.
Сравнивая оловоорганические соединения с тиофенольным и порфириновым
фрагментами можно сделать вывод о том, что в большей степени повышение скорости
разложения Н2О2 происходит в присутствии соединений, содержащих тиофенольный
20
фрагмент (n-Bu2Sn(SR)2 (3), Ph2Sn(SR)2 (4), Ph3SnSR (7).
Известно,
что
одной
из
причин
развития
окислительного
стресса,
промотированного оловоорганическими соединениями, может быть снижение скорости
разложения Н2О2 гемолизатом крови человека. Введение фрагмента 2,6-ди-третбутилфенола в лигандное окружение комплексов приводит не только к нивелированию
их негативного влияния на способность эритроцитов разлагать Н2О2, но и
сопровождается увеличением скорости ферментативного разложения H2O2.
2.3.3.
Цито-
и
нейротоксичность
соединений
олова
с
фенольными
фрагментами
Известно, что ООС, обладают высокой липофильностью и проявляют высокую
цитостатическую активность. В данной части работы исследована цитотоксическая
активность оловоорганических соединений с фенольными фрагментами на клеточных
линиях рака молочной железы человека (MCF-7) и шейки матки человека (HeLa)3.
Концентрация соединений, при которой наблюдается 50% гибель раковых клеток
(IC50) для соединений 1-7 представлена в Таблице 6. Наибольшую активность против
обеих клеточных линий проявляет производное триалкил олова 7, обладающее высокой
липофильностью.
Табл. 6. Цитотоксическая активность соединений 1-7 и R2SnCl2
клеточных линиях MCF-7 и HeLa.
Соединение
1
2
3
4
5
6
7
9
цисплатин
на раковых
IC50 (μΜ)
MCF-7
HeLa
19,20±1,70
23,90±1,30
6,20±0,80
4,90±0,70
0,40±0,06
0,40±0,07
6,20±0,80
5,90±0,70
>30
>30
4,90±0,50
2,90±0,30
0,25±0,03
0,16±0,01
3,12±0,38
18,5
10,5
Обнаружено, что соединения 2,3,4,6 и 7 проявляют более высокую активность, чем
цисплатин, в отличие от гидрофильных соединений 1 и 5.
Таким образом, установлено, что все исследованные комплексы олова проявляют
высокую цитотоксическую активность против раковых клеточных линий MCF-7 и
HeLa, что позволяет рассматривать их в качестве перспективных цитостатиков.
3
Исследования проведены проф. S.K. Hadjikakou (Университет г. Иоаннины, Греция).
21
Нами исследована нейротоксичность соединений олова с фрагментами тиофенола
на культуре гранулярных нейронов мозжечка крыс с помощью стандартного МТТ –
теста4.
Установлено, что исследуемые соединения снижают выживаемость гранулярных
нейронов мозжечка (Рис. 9.). Уменьшение цитотоксичности наблюдается в ряду:
Ph3SnSR >n-Bu2Sn(SR)2 > Ph2Sn(SR)2 > RSH > Me2Sn(SR)2 > Et2Sn(SR)2 > Me3SnSR >
(R)2Sn(SR)2
Рис. 9. Влияние соединений
олова и RSH на выживаемость
культуры клеток гранулярных
нейронов мозжечка крыс. (С 3
мкМ; контроль - ДМСО,
экспозиция
соединений
в
культуре 24 ч).
Действие исследуемых соединений олова на выживаемость культуры клеток
гранулярных нейронов зависит как от количества тиофенольных фрагментов в
структуре соединения, так и от алкильного или арильного заместителя при атоме олова.
Согласно данным настоящего исследования, введение тиофенольного фрагмента в
структуру оловоорганического соединения оказывает нейропротекторное действие, в
присутствии соединения Me3SnSR выживаемость снижается на 43%. В ряду фенильных
производных олова увеличение числа фенольных фрагментов приводит к снижению
цитотоксичности, в ряду метильных производных – к увеличению.
Наименьшую цитотоксическую активность для данной культуры клеток проявило
соединение (R)2Sn(SR)2, содержащее 4 фенольные группы. Следует отметить, что
нейротоксичность оловоорганических тиолатов и RSH сопоставима.
Нейротоксичность может быть связана с подавлением дегидрогеназной активности
митохондрий, а наличие тиофенольного фрагмента оказывает протекторное действие.
Таким образом, введение в структуру соединения пространственно-затрудненных
фенольных фрагментов приводит к снижению нейротоксичности, что может найти
применение в клинической практике.
4
Исследования проведены к.х.н. Шевцовой Е.Ф. (Институт физиологически активных веществ РАН, г. Черноголовка).
22
ВЫВОДЫ
1. Синтезированы новые органичеcкие производные олова с фрагментами 3,5-дитрет-бутил-4-гидрокситиофенола.
2. С помощью ЭПР и электрохимического метода (ЦВА) исследованы редокссвойства соединений олова (IV) и (II), содержащих фрагмент 3,5-ди-трет-бутил-4гидрокситиофенола, окисление которых приводит к образованию феноксильных
радикалов с дальнейшим гомолизом связи С-Sn.
3. Обнаружена высокая антирадикальная активность данных соединений с
помощью
ДФПГ-теста.
Показано,
что
соединения
олова
с
2,6-ди-трет-
бутилфенольными заместителями ингибируют пероксидное окисление ненасыщенных
жирных кислот. При этом увеличение числа фенольных фрагментов в молекуле
приводит к возрастанию ингибирующей активности.
4. Показано, что оловоорганические соединения R’nSnCl4-n (R’ = Me, Et, n-Bu, Ph)
вызывают резкое снижение скорости ферментативной реакции разложения H2O2
эритроцитами крови in vitro, в то время как введение фрагмента 2,6-ди-третбутилфенола (R) в молекулы R’nSn(SR)4-n приводит к нивелированию их негативного
влияния на эритроциты и увеличивает скорость разложения H2O2.
5. Установлено, что соединения олова ингибируют фермент липоксигеназа и
связываются с SH-группами тубулина как одной из биохимических мишеней для
потенциальных цитостатических агентов. Показана выраженная цитотоксичность 3,5ди-трет-бутил-4-гидрокситиофенолята трифенилолова на линиях раковых клеток
человека (МСА-7 и HeLa).
6. С использованием культуры гранулярных нейронов мозжечка крыс показано,
что введение 3,5-ди-трет-бутил-4-гидрокситиофенольного фрагмента в молекулы
оловоорганических соединений оказывает нейропротекторное действие, а увеличение
числа фенольных групп в их молекулах снижает токсичность.
23
Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:
Статьи по перечню ВАК и патенты:
1. Е.М. Мухатова, В.П. Осипова, М.Н. Коляда, Н.О. Мовчан, Д.Б. Шпаковский,
Ю.А. Грачева, С.И. Орлова, Е.Р. Милаева. Синтез и антирадикальная активность новых
оловоорганических соединений, содержащих 2,6-ди-трет-бутилфенол // Доклады АН.,
2013, T. 451, Вып. 1, с. 46-49.
2. Е.М. Мухатова, Н.Т. Лимонова, М.Н. Коляда, В.П. Осипова, Н.Т. Берберова,
Ю.Т. Пименов, Е.Р. Милаева. Протекторное влияние свободных оснований порфиринов
на скорость разложения пероксида водорода гемолизатом эритроцитов крови человека в
присутствии соединений ртути и олова // Макрогетероциклы, 2011, Вып. 4(3), с. 216221.
3. М.Н. Коляда, В.П. Осипова, Н.Т. Лимонова, Н.Т. Берберова, Е.М. Лагутина
(Мухатова). Влияние соединений ртути и олова на ферменты антиоксидантной защиты
гемолизата эритроцитов крови // Вестник АГТУ, 2006, Вып. 6(35), с. 62-68.
4. М.Н. Коляда, В.П. Осипова, Н.Т. Пипия, Е.М. Лагутина (Мухатова), Н.Т.
Берберова, Ю.Т. Пименов, Е.Р. Милаева. Влияние соединений ртути и олова на
активность каталазы гемолизата эритроцитов крови человека in vitro // Вестник АГТУ,
2005, Вып. 6(29), с. 60-65.
5. М.Н. Коляда, Е.М. Лагутина (Мухатова), Н.Н. Федорова, Н.С. Алтуфьева,
Ю.Т. Пименов, Н.Т. Берберова. Биохимические механизмы влияния соединений олова и
тетрафенилпорфирина на пищеварительные железы крыс // Вестник АГТУ, 2005, Вып.
3(26), с. 233-240.
6. Е.Г. Шварев, Н.Т. Берберова, Г.С. Добренькая, Е.М. Лагутина (Мухатова),
М.Н. Коляда, Л.В. Дикарева, О.Е. Зайцева. Способ диагностики стадий течения
воспалительных заболеваний придатков матки // Патент РФ RU № 2291438, 10.01.2007.
Бюлл. №1.
Тезисы докладов:
7. M.N. Кolyada, V.P. Osipova, E.M. Lagutina (Mukhatova), N.T. Limonova, N.T.
Berberova, Yu.T. Pimenov, E.R. Milaeva. The influence of meso-tetra(4-sulfonatophenyl)porphine on the activity of blood ”erythrocyte”s catalase in the presence of Hg and Sn
compounds // Vth Conference on cluster’s chemistry and Polynuclear Compounds
(“CLUSTERS-2006”), Astrakhan, Russia, 2006, p. 44-45.
24
8. В.М. Игнатьева, Н.Т. Лимонова, Е.М. Лагутина (Мухатова), М.Н. Коляда,
В.П. Осипова, Н.Т. Берберова, Ю.Т. Пименов. Исследование влияния соединений ртути
и олова на пероксидное окисление липидов в мембранах эритроцитов крови человека
“in vitro” методом спектрофотометрии // I Международная конференция «Физикохимические методы исследования нанообъектов в химии, биологии и медицине»,
Туапсе, Россия, 2007, с. 65.
9. М.Н. Коляда, Е.М. Мухатова, Н.Т. Берберова. Влияние мезо-тетракис(3,5-дитрет-бутил-4-гидроксифенил)-порфирина
на
активность
каталазы
гемолизата
эритроцитов крови в присутствии оловоорганических соединений // Всероссийская
молодежная конференция-школа, посвященная 150-летию со дня рождения А. Е.
Фаворского, Санкт-Петербург, Россия, 2010, с. 198.
10. Yu.T. Pimenov, S.A. Smolyaninova, Е.М. Mukhatova, M.N. Кolyada, N.T.
Limonova, V.P. Osipova, N.T. Berberova. The impact of organometallic compounds of
mercury and tin at hemin // International conference «Topical problems of organometallic and
coordination chemistry» (V Razuvaev lectures), N. Novgorod, Russia, 2010, P76.
11. Ю.Т. Пименов, Е.М. Мухатова, М.Н. Коляда, Н.Т. Лимонова, В.П. Осипова,
Н.Т. Берберова, Е.Р. Милаева. Влияние порфиринов на каталазную активность
гемолизата эритроцитов крови человека в присутствии соединений ртути и олова // XI
Международная конференция по физической и координационной химии порфиринов и
их аналогов (ICPC-II), Одесса, Украина, 2011, с. 59.
12. Е.М. Mukhatova, V.P. Osipova, M.N. Kolyada, D.B. Shpakovsky, N.T. Berberova,
E.R. Milaeva. New complexes of tin with redox fragment based on 2,6-di-tert-butylphnol in
sulfur-containing ligand // Frontiers of Organometallic Chemistry (FOC-2012), Saint
Petersburg, Russia, 2012, c. 98.
13. Е.М Мухатова, М.Н. Коляда, В.П. Осипова, Н.Т. Берберова, Е.Р. Милаева.
Влияние оловоорганических соединений на активность липоксигеназы // Химия
биологичecки активных веществ: Всероссийская школа-конференция молодых ученых,
аспирантов и студентов с международным участием, Саратов, Россия, 2012, c.106.
14. Е.М. Мухатова, В.П. Осипова, М.Н. Коляда, Н.О. Мовчан, Н.Т. Берберова,
Ю.А. Грачева, Д.Б. Шпаковский, Е.Р. Милаева. Синтез и антиоксидантная активность
новых оловоорганических соединений с 2,6-ди-трет-бутилфенольными группами //
Международная междисциплинарная научная конференция «Биологически активные
25
вещества и материалы: фундаментальные и прикладные вопросы получения и
применения», Новый Свет, АР Крым, Украина, 2013, T. 2, с. 215.
15. Грачева
Ю.А.,
Мухатова
Е.М.,
Шпаковский
Д.Б.,
Милаева
Е.Р.
Антимитотическая активность новых оловоорганических соединений с фенольными
фрагментами
//
Международная
междисциплинарная
научная
конференция
«Биологически активные вещества и материалы: фундаментальные и прикладные
вопросы получения и применения», Новый Свет, АР Крым, Украина, 2013, T. 2, с. 135.
16. Е.М. Mukhatova, V.P. Osipova, M.N. Кolyada, D.B. Shpakovsky, N.T. Berberova,
E.R. Milaeva. Protective effect of 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxythiophenolate ligand in organotin
complexes on H2O2 decomposition by erythrocytes // International Symposium «Modern
Trends in organometallic chemistry and catalysis, Moscow, Russia, 2013, c. 140.
17. Е.М. Мухатова, В.П. Осипова, М.Н. Коляда, Н.Т. Берберова Н.Т., Д.Б.
Шпаковский, Е.Р. Милаева. Редокс-свойства новых оловоорганических соединений,
содержащих фрагмент пространственно-затрудненного фенола // V конференция
“Электрохимические и электролитно-плазменные методы модификации металлических
поверхностей”, Иваново, Россия, 2013, с. 141.
18. N.T. Berberova, Е.М. Mukhatova, V.P. Osipova, M.N. Кolyada, Y.A. Gracheva,
D.B. Shpakovsky, E.R. Milaeva. Redox properties and antiradical activity of novel organotin
compounds with hindered phenol pendants // International conference “Organometallic and
Coordination Chemistry: Fundamental and Applied Aspects”
International Youth School-
Conference on Organometallic and Coordination Chemistry, N. Novgorod, Russia, 2013. Р.12.
19. Грачева Ю.А., Мухатова Е.М., Шпаковский Д.Б., Шевцова Е.Ф., Милаева Е.Р.
Цитотоксическая активность новых оловоорганических соединений с S-лигандами //
Первая Российская конференция по медицинской химии, Москва, Россия, 2013, с. 46.
Автор выражает признательность и благодарность за ценные советы и
рекомендации доктору химических наук, профессору Милаевой Елене Рудольфовне,
кандидату химических наук Осиповой Виктории Павловне, кандидату биологических
наук Коляда Маргарите Николаевне.
26