Выделение ДНК & РНК из биологических жидкостей на

©2003-2004 НП АО "Силекс
тел.: (095) 737 42 24
тел.: (095) 998 42 88
М"
эл.почта: [email protected]
факс: (095) 737 42 24
Интернет: www.sileks.com
Выделение ДНК & РНК из биологических жидкостей (плазмы,
сыворотки и других безклеточных жидкостей организма) на
магнитных частицах
Набор предназначен для выделения ДНК или/и вирусной РНК из плазмы, сыворотки и других
безклеточных жидкостей организма..
Набор не рассчитан на отдельное выделение вирусной РНК от присутствующей в образце ДНК и
наоборот. Обе эти нуклеиновые кислоты выделяются одновременно, если они присутствуют в образце.
(Если есть необходимость выделения исключительно какой-то одной нуклеиновой кислоты – РНК или ДНК – в
процессе выделения образец можно обработать ДНазой или РНазой в зависимости от того, присутствие какой
нуклеиновой кислоты нежелательно)
Преимущество набора с магнитными частицами по сравнению с другими наборами:
1. бόльшая емкость сорбента, позволяющая выделять бόльшие количества РНК/ДНК
2. минимизация потерь в ходе выделения (нет необходимости разделения фаз как при "классическом"
способе выделения, не требуется осаждение материала)
3. уменьшение риска перекрестной контаминации за счет того, что весь (или почти весь) нуклеиновый
материал связывается сорбентом
4. возможность масштабирования методики выделения
5. высокая чистота конечного продукта
Состав набора :
1. Сорбент (магнитные частицы, покрытые SiO2 )
2. Лизирующий буфер
3. Буфер для промывки Wash
4. Буфер для промывки WashEnd
5. Буфер для элюции EL
6. 2-Меркаптоэтанол
- 500 мкл
- 25 мл
- 50 мл
- 10 мл
- 2 мл
- 2 мл
Набор рассчитан на 100 процедур выделений из расчета на 100 мкл исходного образца
Условия хранения: Хранить набор рекомендуется при +4 °С.
При хранении в лизирующем буфере может образовываться осадок. Для растворения осадка перед
использованием прогрейте раствор при +55 °С. Избегайте оставлять лизирующий буфер надолго при ярком свете.
При длительном хранении лизирующий буфер постепенно «стареет», что приводит к снижению качества
выделяемой РНК/ДНК.
При хранении в рекомендованных условиях работоспособность набора гарантируется в течении как минимум 3
месяцев.
Применять только для исследовательских целей
Подготовка к работе
™
™
™
Образцы, многократно подвергавшиеся процедуре замораживания-оттаивания или долго хранившиеся при
+ 4 °С могут вызывать агрегацию магнитных частиц в процессе выделения. Это может приводить к
уменьшению выхода выделяемого продукта.
Если целью выделения является РНК, убедитесь, что все рабочие буфера не загрязнены РНазами.
Разрушение РНК в процессе выделения РНазами – самая частая причина неудач при выделении РНК.
При выделении РНК и/или ДНК работайте в резиновых перчатках (особенно, если целью выделения
является РНК). Руки – это основной источник загрязнения РНазами и другими ферментами, приводящими
к разрушению нуклеиновых кислот.
Подготовка образца
Если целью выделения является РНК, добавьте перед началом работы 0.5 мл 2-меркаптоэтанола в 25 мл
лизирующего буфера, 1 мл 2-меркаптоэтанола в 50 мл буфера для промывки Wash и хорошо перемешайте
полученные растворы.
В биологических жидкостях организма, таких как плазма, моча, сыворотка, цереброспинальная жидкость, может
содержаться очень маленькое количество материала для выделения. В таких случаях имеет смысл предварительно
сконцентрировать материал из большего объема (3-5 мл) до конечного объема 100 мкл.
Перенесите 100 мкл образца (плазма, моча, сыворотка, цереброспинальная жидкость или другая жидкость
организма) в пробирку объемом 1.5 мл типа Eppendorf или Sarstedt.
1
© Copyright 2003-2004 • НПАО “Силекс М”
тел.: (095) 737 42 24, 998 42 88 • факс: (095) 737 42 24 • [email protected] • www.sileks.com
Протокол выделения
Выделение вирусной РНК или ДНК
1. Добавьте 250 мкл лизирующего буфера к 100 мкл образца заранее отобранного в отдельную
пробирку, закройте пробирку, тщательно перемешайте содержимое встряхиванием на вортексе в
течении 20 секунд.
2. Поместите пробирку в нагревательный блок или водяную баню и инкубируйте при +65 °С в
течении 10 мин..
Â
При выделении внеклеточной ДНК, содержащуюся в биологических жидкостях, процедуру прогрева при +65 °С
можно исключить. Прогрев нужен только для разрушения вирусных частиц
3. Добавьте 5 мкл сорбента (магнитные частицы, покрытые SiO2) в пробирку, тщательно
перемешайте содержимое встряхиванием на вортексе в течении 5 секунд.
Â
перед использованием магнитные частицы необходимо тщательно перемешать на вортексе до гомогенного
состояния
4. Инкубируйте смесь в течении 10 мин.. Периодически перемешивайте смесь, чтобы частички
сорбента находились во взвешенном состоянии.
5. Соберите частицы, поместив пробирку в магнитный штатив (1 мин). Как можно тщательнее
отберите супернатант, переставьте пробирку в обычный (немагнитный) штатив, добавьте к
осадку 250 мкл буфера Wash.
6. Перемешайте и повторите процедуру, описанную в п.5.
7. Как можно тщательнее отберите супернатант и добавьте к осадку 100 мкл буфера WashEnd.
8. Перемешайте, соберите частицы, поместив пробирку в магнитный штатив (1 мин). Как можно
тщательнее отберите супернатант.
9. Просушите осадок на воздухе в течение 10 мин .
10. Добавьте к осадку 20 мкл буфера EL, перемешайте и инкубируйте 10 мин при +55 °С .
11. Соберите частицы, поместив пробирку в магнитный штатив на 3 мин. Как можно тщательнее
отберите супернатант. Перенесите супернатант, содержащий препарат РНК и/или ДНК, в другую
пробирку.
Если в вашем препарате остались мелкие магнитные частицы, повторите процедуру, описанную в п.11,
поместив пробирку в магнитный штатив на 5 мин .
Рекомендации
™
Элюированный материал можно использовать сразу или сохранить для работы в дальнейшем.
™
Элюированную РНК можно хранить до 6 месяцев при -80 °С.
™
Элюированную ДНК можно хранить до 12 месяцев при -20 °С.
™
Выделенная РНК/ДНК годится для постановки блотов, гибридизации, обратной транскрипции и
полимеразной цепной реакции.
™
Для обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции используйте 1/5 – 1/2 полученного материала
(4-10 мкл).
2
© Copyright 2003-2004 • НПАО “Силекс М”
тел.: (095) 737 42 24, 998 42 88 • факс: (095) 737 42 24 • [email protected] • www.sileks.com