ОТЗЫВ ОФИЦИАЛЬНОГО ОППОНЕНТА на диссертационную работу Барбиной Анастасии Алексеевны

ОТЗЫВ ОФИЦИАЛЬНОГО ОППОНЕНТА
на диссертационную работу Барбиной Анастасии Алексеевны
«Полиморфизм генов АCE (I/D), AGTR1 (А1166С) и FGA (Thr312Ala) у
больных с метаболическим синдромом и их связь с лабораторными
факторами риска атеросклероза»
представленной на соискание ученой степени кандидата биологических наук
по специальности 14.03.10 – клиническая лабораторная диагностика.
Актуальность.
Метаболический
синдром
(МС)
–
это
комплекс
заболеваний,
включающий в себя такие нарушения как ожирение, гипергликемию или
диагноз диабет 2 типа, повышенное артериальное давление, дислипидемию.
В индустриальных странах распространённость метаболического синдрома
среди лиц старше 30 лет составляет 10—20 %. МС – это фактор риска
развития сердечно-сосудистых осложнений, рассматривающихся сегодня как
ведущая причина инвалидизации и смерти в развитых странах мира. МС
ассоциируется
с
развитием
диабета
2
типа,
сердечно-сосудистых,
неврологических, нефрологических и других эндокринных заболеваний.
Необходимо отметить, что у пациентов с МС помимо повышения уровня
глюкозы и развития дислипидемиии, часто выявляются нарушения системы
гемостаза. МС – является мультифакторным заболевание в этиологию
которого вносят вклад внешние факторы (образ жизни, рацион питания), так
и генетические факторы. Поэтому выявление генетических факторов,
ассоциированных с изменением лабораторных показателей, определяющих
развитие
МС,
является,
безусловно,
актуальным.
Так
же
важным
представляется разработка простых молекулярно-генетических методов
идентификации значимых генетических факторов риска развития МС,
удобных для повседневного использования в клинических лабораториях.
Таким образом, цель диссертационного исследования Барбиной
Анастасии
Алексеевны,
разработка
методов
определения
аллельных
вариантов полиморфных генов AGTR1 (А1166С), FGA (Thr312Ala) на основе
аллельспецифической
ПЦР,
и
изучение
ассоциации
полиморфизма
указанных генов, а также гена ACE (I/D) с лабораторными факторами риска
атеросклероза у пациентов с метаболическим синдромом для установления
их
диагностической
и
прогностической
ценности,
представляется
актуальной.
Научная новизна и теоретическая значимость работы.
В результате выполнения работы были разработаны новые методы
генотипирования
(A1166C)
и
следующих
FGA
аллельспецифической
генетических
(Thr312Ala)
полимеразной
на
вариантов
основе
цепной
генов
AGTR1
проведения
метода
реакции,
что
упрощает
процедуру их выявления.
Впервые среди пациентов с МС показано превалирование особого типа
дислипидемии - повышение уровня холестерина низкой плотности в
сочетании с гипо-α-холестеринемией, а также повышение концентрации
высокочувствительного С-реактивного белка и инсулина в плазме крови.
Получены новые данные о влиянии изучаемых генетических вариантов
(ACE (I/D), AGTR1 (A1166C) и FGA (T312A)) на некоторые лабораторные
показатели как у пациентов с МС, так и у лиц контрольной группы.
Практическая значимость исследования.
Полученные
результаты
расширяют
научные
представления
о
функциональной значимости полиморфизма генов ACE (I/D), AGTR1
(A1166C) и FGA (Thr312Ala) и их влиянии на лабораторные показатели у
пациентов МС и условно здоровых лиц. Разработанные в ходе работы новые
методы
ПЦР-диагностики
двух
ключевых
полиморфизмов
генов
фибриногена и рецептора ангиотезиногена II, могут быть использованы в
работе клинико-диагностических лабораторий.
Обоснованность и достоверность результатов исследования.
Диссертационное исследование Барабиной А.А. выполнено на высоком
научно-методическом уровне. Результаты исследования обработаны с
использованием современных математико-статистических методов, что
подтверждает их обоснованность и достоверность. Научные положения,
выводы и практические рекомендации подтверждаются результатами
теоретического анализа научной литературы и собственных эмпирических
данных, полученных диссертантом на репрезентативных выборках.
Структура работы
Работа Барабиной Анастасии построена по традиционному плану и
состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы
исследования, пяти глав собственных результатов, обсуждения, выводов,
практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Работа
изложена на 110 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21
таблицей
и
18
рисунками.
Указатель
литературы
содержит
147
наименования (35 отечественных и 112 зарубежных авторов).
Автореферат и публикации достаточно полно отражают содержание и
основные положения представленной работы.
Обзор литературы составлен логично и дает полное представление о
понятии МС, а также о таких его составляющих как артериальная
гипертензия, дислипидемия и нарушений реологических свойств крови.
Обсуждаются генетические факторы риска развития МС.
В главе материалы и методы приводится подробное описание,
включенных в исследование групп пациентов с МС и лиц контрольной
группы. Приводятся общие характеристики обследованных групп. В
исследование вошло 84 пациента с МС и 32 практически здоровых
индивидуума.
Подробно приводится описание биохимических методов исследования,
метода выделения ДНК из периферической крови, а также генетические
методы индентификации включенных в работу полиморфных вариантов
генов ACE, FGA и AGTR1. Приводятся методы статистической обработки
полученных данных.
Собственные
результаты
работы
представлены
в
пяти
главах.
Полученные результаты представлены подробно. В главе три представлены
анамнестические
характеристики
пациентов,
а
также
проводится
сопоставление клинических показателей пациентов с МС и лиц контрольной
группы.
Глава
4
посвящена
описанию
результатов,
полученных
при
исследовании лабораторных биохимических показателей. Обращает на себя
большой объем проведенных исследований. Так был оценен липидный
профиль,
С-рективный
белок,
концентрация
инсулина,
глюкозы,
гомоцистеина плазмы крови, ряд показателй гемостаза (концентрация
фибриногена, сорбция фибриногена на фибрине. Выла проведен тщательный
анализ корреляции полученных лабораторных показателей как между собой,
так и с антропометрическими показателями.
Глава 5 включает подробное описание разработанных методов
определения однонуклеотидного полиморфизма в генах FGA и AGTR1.
Важно отметить, что точность и адекватность разработанных методов
оценена путем сравнения полученных результатов с традиционными
методами индентификации указанных генетических вариантов на основе
ПЦР и рестрикционного анализа.
Главы 6 и 7 посвящены распределению генотипов по изучаемым
генетическим вариантам в анализируемых выборках и их влиянию на
лабораторные
показатели.
Адекватность
использованных
методов
не
вызывает сомнения. Глава 8 посвящается сопоставлению полученных данных
с результатами других исследований.
Наибольший интерес представляют полученные автором результаты по
превалированию среди пациентов с МС особого типа дислипидемии с
повышением уровня холестерина низкой плотности в сочетании с гипо-α-
холестеринемией и повышенной концентрацией высокочувствительного Среактивного белка, что может свидетельствовать о высоком риске развития
атеросклероза. Определенный интерес представляют также данные о влиянии
генотипов гена FGA (Thr312Ala) на концентрацию фибриногена и активность
системы фибринолиза. С одной стороны они подтверждают полученные
ранее данные о повышении уровня фибриногена у носителей генотипа
АА312, с другой стороны впервые демонстрируют ассоциации данного
генотипа с пониженной активностью плазминогена, что расширяет наше
представление о влиянии генетических вариантов гена FGA на процесс
тромбообразования.
Хочется отметить сильные стороны настоящего исследования. В работе
были
изучены
полиморфные
варианты
генов,
продукты
которых
контролируют системы гомеостаза и участвуют в регуляции давления. А
именно в исследование включен ген FGA, продукт которого, фибриноген,
участвует в образовании фибринового сгустка, а так же гены ренинангиотензиновой системы ангитензин-превращающего фермента (ген ACE) и
рецептора
ангиотензина
генетические
II
детерминанты
(AGTR1).
в
Включенные
в
вышеуказанных
исследование
генах
являются
общепризнанными факторами риска развития тромбозов и гипертензии, и
логично предположить их влияние на лабораторные показатели у лиц с МС.
Таким образом, включение в исследование данных
полиморфных
генетических вариантов логично и обосновано. Также необходимо отметить
широкий спектр проведенных биохимических исследований. Достоверность
полученных
результатов
не
подлежит
сомнению
и
подтверждается
адекватностью применяемых современных статистических методов, а также
широким
представлением
публикациях.
полученных
результатах
в
рецензируемых
По результатам исследования опубликовано 4 статьи в
журналах ВАК, получено 2 Изобретения Российской Федерации. Результаты
работы также широко представлены на отечественных и зарубежных
конференциях.
Замечания и вопросы
Имеется ряд замечаний. Во-первых, обращает на себя внимание тот
факт,
что
при
обсуждении
современного
состояния
проблемы
и
использования слов «сегодня», «в последнее время» приводятся ссылки на
исследования 2001-2004г. За последнее десятилетие появилось ряд методов
молекулярно-генетического анализа, в том числе полногеномного анализа,
направленного на выявление генетических факторов риска (метод GWAS).
При проведении ассоциативных исследований данный метод не требует
выбора генов кандидатов, а анализирует одновременно несколько тысяч
генетических вариантов в геноме человека. Хотя данный вид исследований
практически отсутствует в отечественных работах, было бы логично
привести результаты по полногеномным исследованиям ассоциаций
из
зарубежной литературы. В частности, хотелось бы узнать об ассоциации
изучаемых полиморфных вариантов с риском развития метаболического
синдрома, тромбозов, гипертензии по результатам GWAS.
Второе, следует отметить, что практическая рекомендация под пунктом
1. не вытекает непосредственно из результатов работы. В задачи настоящего
исследования
не
входило
выявление
факторов
генетической
предрасположенности к развитию МС. Проводилась лишь оценка ассоциаций
изученных генетических вариантов с рядом лабораторных показателей. Как
по мнению автора было бы более корректно сформулировать практическую
рекомендацию, вытекающую из выводов работы?
Хотелось бы узнать мнение автора об интерпретации полученных
данных об ассоциации генотипа СС1166 гена AGTR1, являющегося
известным фактором риска развития сердечно-сосудистой патологии, с
пониженным уровнем ХЛ-ЛПВП. Данный факт получен, основываясь на
анализе литературы, впервые и никак не обсуждается диссертантом.
К замечаниям можно отнести малочисленность группы условно
здоровых индивидуума, включившую всего 32 обследованного.
Следует также отметить многочисленные стилистические неточности.
Так стр.4. автореферата «данные об ассоциации полиморфизма с инфарктом
миокарда, гипертонией, гипертрофией левого желудочка.». Полиморфизм
может влиять на риск развития. Ассоциировано с развитием заболевания
может быть наличие (носительство) определенного аллеля или генотипа.
В главе 7 результаты (стр.75) генотип CC1166
гена AGTR1
ассоциирован с увеличением ХС-ЛПВП, а в главе обсуждение (стр.85)
встречается фраза «для генотипа CC характерны самые низкие значения ХСЛПВП» в той же группе пациентов с МС.
В работе на некоторых графиках отсутствует подпись оси ординат (стр.
74, 75).
Высказанные замечания не умаляют общей значимости проведенного
исследования.
Заключение
Диссертационная
работа
Барбиной
Анастасии
Алексеевны
«Полиморфизм генов АCE (I/D), AGTR1 (А1166С) и FGA (Thr312Ala) у
больных с метаболическим синдромом и их связь с лабораторными
факторами риска атеросклероза», представленная на соискание ученой
степени кандидата биологических наук по специальности 14.03.10 –
клиническая
лабораторная
диагностика,
законченной
научно-квалифицированной
Полученные
автором
результаты,
является
самостоятельной,
исследовательской
научные
положения
и
работой.
выводы,
сформулированные в диссертации, обоснованы и достоверны, имеют
фундаментальное и практическое значение.
Представленная диссертационная Барбиной А.А. отвечает требованиям
п. 9 «Положения о порядке присуждения ученых степеней», утвержденного
Постановлением Правительства РФ от 24.09.2013 г № 842, предъявляемым
к кандидатским диссертациям по специальности 14. 03. 10 – клиническая