Морфологическая оценка зигот и эмбрионов

Предлагаем вашему вниманию главу 5.
Настоящая глава называется «Морфологическая оценка зигот и эмбрионов».
Автор: Lisbet Van Landuyt.
1
Цель настоящей главы — изучение того, как выполняется оценка зигот на 1-й
день после получения ооцитов, оценка эмбрионов на стадии дробления с 1-го
дня (раннее дробление) по 4-й день эмбриогенеза и, наконец, оценка
бластоцист на 5-й и 6-й день развития.
Из данной главы вы узнаете
• Способы оценки различных параметров зиготы и отличия между
нормальными, аномальными и неоплодотворенными ооцитами на 1-й день
развития (т. е. на следующий день после пункции фолликулов)
• Способы оценки эмбриона на стадии дробления и различных
дополнительных параметров, определяющих конечное качество эмбриона (
на 1, 2, 3, 4 день)
• Способы оценки компактизованного и находящегося в стадии
компактизации эмбриона на 4-й день
• Способы оценки различных стадий бластоцисты на 5-й и 6-й дни и качества
внутренней клеточной массы и трофэктодермы
2
Процесс оплодотворения заключается в слиянии ооцита и сперматозоида,
после чего происходит слияние гаплоидных хромосомных наборов обеих
гамет. Под воздействием факторов, содержащихся в ооплазме, ядро
сперматозоида деконденсируется. Завершается второе мейотическое деление
и происходит выделение второго полярного тельца. Хромосомы ооцита
окружаются мембраной и образуют женский пронуклеус (рядом со вторым
полярным тельцем). При деконденсации хроматина головки сперматозоида
образуется мужской пронуклеус.
В какие сроки следует оценивать оплодотворение?
При ИКСИ оценку оплодотворения предпочтительнее выполнять через 16–18
часов после микроинъекции ооцитов, когда в цитоплазме нормально
оплодотворенного ооцита видны два пронуклеуса. При экстракорпоральном
оплодотворении характерный внешний вид пронуклеусов возникает
приблизительно на 4 часа позже, чем у ооцитов, оплодотворенных методом
ИКСИ.
.
Nagy ZP и соавт., 1994
Nagy ZP и соавт ., 1998
3
Для оценки оплодотворения и качества зиготы, можно использовать
различные параметры. Наиболее важный параметр — оценка пронуклеусов.
Кроме того, системы оценки зиготы зачастую основаны на различиях
проядрышек внутри пронуклеусов.
Для оценки оплодотворения также исследуются полярные тельца. И, наконец,
можно оценивать качественные аспекты цитоплазмы.
4
В каждом пронуклеусе содержится гаплоидный набор хромосом, полученный
от ооцита (женский пронуклеус) или сперматозоида (мужской пронуклеус).
Пронуклеус оценивают по следующим параметрам: количество пронуклеусов,
размер каждого пронуклеуса и их расположение в цитоплазме.
5
Нормально оплодотворенный ооцит содержит два пронуклеуса и два
полярных тельца.
Если пронуклеусы отсутствуют и имеется одно полярное тельце, то ооцит не
оплодотворился. Однако иногда возникает ситуация, когда пронуклеусов не
видно, но имеется два полярных тельца или их фрагменты. Даже когда два
пронуклеуса «потеряны» и уже исчезли, ооцит, возможно, оплодотворен. При
проверке оплодотворения следует учитывать период времени, прошедший от
момента инъекции до момента оценки. Пронуклеусы часто можно не увидеть
при выполнении микроинъеций в более раннее время, когда между инъекцией
и оценкой зиготы проходит более 20 часов.
6
После ИКСИ и ЭКО остается значительное число неоплодотворенных ооцитов,
которые не содержат пронуклеусов (приблизительно 30 %).
После инсеминации методом ЭКО причинами этого может быть:
• отсутствие проникновения сперматозоида в цитоплазму ооцита;
• незрелость ооцита на момент инсеминации;
• хромосомные аномалии в ооците;
• преждевременная конденсация хромосом.
Отсутствие пронуклеусов после ИКСИ может быть следствием отсутствия
активации ооцита сперматозоидом, хромосомные аберрации яйцеклетки и/или
сперматозоида.
7
Если виден только один пронуклеус или три и более пронуклеусов, значит,
произошло аномальное оплодотворение ооцита.
8
После ЭКО и ИКСИ приблизительно у 3–6 % ооцитов обнаруживается один
пронуклеус (Staessen и соавт., 1993).
В исследовании Staessen и соавт., 1997, был выполнен анализ хромосомной
конституции эмбрионов, развивающихся из ооцитов с одним (1 ПН) или тремя
(3 ПН) пронуклеусами.
При ЭКО причинами могут быть:
• Отсутствие деконденсации головки проникшего сперматозоида (приблизительно
у 70–75 % ооцитов с одним пронуклеусом).
• Спонтанная активация ооцита — у 25–30 % ооцитов с одним пронуклеусом
(партеногенетическая активация).
• Асинхронность в виде мужского и женского пронуклеуса в случае нормального
оплодотворения ооцита. В исследовании Staessen и соавт., 1997, было
обнаружено, что после ЭКО 48,7 % ооцитов с одним пронуклеусом являются
диплоидными при равном соотношении XX- и XY-эмбрионов. В другом
исследовании у 25 % ооцитов с одним пронуклеусом второй пронуклеус был
обнаружен спустя несколько часов при повторном исследовании ооцита
(Staessen и соавт. 1993).
• Кроме того, возможно слияние женского и мужского пронуклеусов в один
большой пронуклеус.
9
При ИКСИ возможными причинами могут быть:
• Активация ооцита.
• Отсутствие деконденсации инъецированного сперматозоида.
• Слияние женского и мужского пронуклеусов. Было обнаружено, что после
ИКСИ 27,9 % ооцитов с одним пронуклеусом являются диплоидными и
нормально оплодотворенными. Кроме того, следует учитывать, что при ИКСИ
после повторного осмотра все же можно обнаружить второй пронуклеус в
ооците. (Staessen и соавт., 1997).
9
Приблизительно 5 % инъецированных или осемененных ооцитов содержат три
пронуклеуса. При ЭКО чаще всего (в 90 % случаев) это возникает из-за
проникновения в ооцит еще одного (диспермия) или нескольких (полиспермия)
дополнительных сперматозоидов. Эмбрионы могут быть триплоидные с
генотипом XXX, XXY или XYY
Другая причина этого явления — непроизошедшее выделение второго
полярного тельцы и образование им ядра. Кроме того, это является основной
причиной образования ооцитов с тремя пронуклеусами при ИКСИ. В таком
случае эмбрионы имеют генотип XXX или XXY. Генотипа XYY быть не может!
Эмбрионы с тремя пронуклеусами для переноса не используют.я
Staessen et al., 1997
10
Вторым параметром оценки пронуклеусов и, следовательно, качества зиготы
является относительные размеры двух пронуклеусов.
В норме пронуклеусы имеют одинаковый размер или отличаются в небольшой
степени. Большие отличия в размере могут коррелировать с наличием у
эмбриона хромосомных дефектов, например анеуплоидии (Munné и Cohen,
1998).
11
Положение пронуклеусов считается нормальным, если они находятся в
центральной области цитоплазмы и соприкасаются друг с другом
(совмещены). Если они не соприкасаются, то в ходе оплодотворения может не
произойти слияния гамет либо могут возникнуть аберрации.
12
Проядрышки (ПЯ) имеют следующее определение:
Это органеллы, располагающиеся внутри ядра, в которых синтезируется
прерибосомальная РНК, что чрезвычайно важно для прохождения мейоза и
дробления клеток.
Во время оплодотворения синтез рРНК становится интенсивнее, проядрышки
в состоянии активного синтеза называются ядрышками.
Они подвергаются процессам слияния и поляризации, зависимым от времени,
которые идеально синхронизированы в двух ядрышках.
13
Для оценки ядрышек применяют следующие критерии.
В первую очередь оценивают количество ядрышек в пронуклеусах. В идеале в
каждом пронуклеусе содержится от трех до десяти ядрышек. Максимальная
разница между количеством ядрышек в двух пронуклеусах — от одного до
трех.
Во вторую очередь регистрируют размер: ядрышки должны быть маленькими,
после чего следует их слияние. Размер считается аномальным, если
наблюдаются очень маленькие точечные ядрышки.
Кроме того, оценивают распределение ядрышек внутри ооплазмы.
Предпочтительным является полярное расположение ядрышек в обоих
пронуклеусах.
В последнюю очередь оценивают синхронность процессов, происходящих с
ядрышками. Предпочтительным является синхронное слияние и поляризация
ядрышек в обоих пронуклеусах.
14
В научной литературе доступно несколько исследований по разработке систем
оценки зиготы на основании различных признаков проядрышек: Tesarik и Greco
(1999), Scott и соавт. (2000), Montag и соавт. (2001), Scott и соавт. (2003),
Balaban и соавт. (2004).
На основании результатов этих исследований можно сделать вывод, что с
помощью оценки проядрышек можно прогнозировать развитие эмбриона,
формирование бластоцисты, наступление беременности и имплантацию.
Более того, морфологические признаки пронуклеусов помогают
прогнозировать хромосомную конституцию.
15
В Центре репродуктивной медицины Университетской клиники UZ Brussel при
оценке пронуклеусов выделяют пять категорий, основанных на
«пересмотренной системе оценке», опубликованной Скоттом и соавт. в 2000 г.
Эти категории обозначаются как тип два-ноль, тип два-один, тип два-два, тип
два-три и, наконец, тип два-четыре.
Зигота наилучшего качества имеет оценку два-ноль, при которой пронуклеусы
и ядрышки имеют одинаковый размер, ядрышки поляризованы, их количество
одинаковое.
Вторая по качеству оценка зиготы — это два-один, при которой пронуклеусы и
ядрышки имеют одинаковый размер, количество ядрышек одинаковое.
Однако, ядрышки не поляризованы, а распределены по обоим пронуклеусам.
Тип оценки зиготы два-два объединяет различные виды асинхронных и
аномальных морфологий ядрышек: пронуклеусы с различным количеством
неполяризованных ядрышек, пронуклеусы с асинхронной поляризацией
ядрышек или пронуклеусы с очень малым количеством крупных ядрышек.
Типы пронуклеусов два-три и два-четыре рассматриваются как зиготы плохого
качества. Тип два-три характеризуется не соприкасающимися, разделенными
ядрышками. К этому типу также относят зиготы с пронуклеусами,
расположенными вне центра цитоплазмы. Зиготы типа два-четыре имеют
пронуклеусы, значительно различающиеся по размеру.
16
Выводы, сделанные на основании результатов исследования Скотта и соавт. .
1. Появление несоприкасающихся пронуклеусов (тип два-три) характерно для
аномальной функции центриолей и аномального формирования
сперматической звезды
2. Поляризация проядрышек (ПЯ) зависит от времени, и ее не всегда можно
обнаружить при однократном исследовании.
3. Асинхронные морфологии (тип два-два, два-три и два-четыре в нашей
системе оценки зиготы) коррелируют с низкой частотой формирования
бластоцисты и имплантации.
17
При оценке оплодотворения также исследуют внешний вид полярных телец.
В оплодотворенном ооците можно обнаружить два отдельных полярных
тельца или их фрагменты. Чаще всего они расположены вблизи друг от друга
(в тесном соприкосновении), однако также могут располагаться и на
отдалении.
Согласно исследованию Rienzi и соавт., 2003, отдаленное расположение
полярных телец объясняется значительной отдаленностью мейотического
веретена от первого полярного тельцы и коррелирует с повышенным риском
развития эмбриона низкого качества.
18
После проведения ЭКО и ИКСИ можно выполнить оценку качества
цитоплазмы ооцита. Как после ИКСИ, так и после ЭКО цитоплазма ооцита
может быть повреждена. При ИКСИ дегенерация может возникнуть сразу
после инъекции либо после культивирования в течение ночи. Цитоплазма
ооцита становится темно-коричневой и теряет свою целостность.
Разрушенные ооциты не принимают участия в дальнейшей оценке,
проводимой в последующие дни. Их можно сразу же удалить.
После ИКСИ разрушается около 5–8 % ооцитов, а при инсеминации ЭКО это
наблюдается редко.
В цитоплазме может находиться одна или несколько вакуолей. Вакуоли — это
окруженные мембраной цитоплазматические включения, наполненные
жидкостью, которая фактически идентична перивителлиновой жидкости. Их
размер и количество могут отличаться. Зиготы с крупными вакуолями могут не
вступить в первое деление или продемонстрировать цитокинез в
выраженными отклонениями (Van Blerkom, 1990).
19
В ходе дальнейшего развития in vitro для оценки качества эмбриона
используют три различные системы оценки
• Система оценки для эмбрионов на стадии дробления. В первую очередь
качество эмбрионов на стадии дробления оценивают по клеточной стадии
(количество клеток), а также по наличию или отсутствию фрагментации.
Кроме того, выполняется оценка таких дополнительных показателей, как
компактизация, размер бластомеров, наличие вакуолей, грануляция
цитоплазмы и многоядерность бластомеров. Данную систему оценки можно
использовать на 1-й день для исследования стадии раннего дробления.
Однако основное ее применение приходится на 2-й, 3-й и 4-й дни развития.
• На 4-й день для эмбрионов в процессе компактизации или после ее
завершения применяется другая система оценки, помогающая различить 2
стадии компактизации. Ее можно также применять, если у эмбриона
происходит ранняя компактизация на 3-й день или поздняя — на 5-й.
• Система оценки качества бластоцисты основана на трех показателях:
стадия бластоцисты, качество внутренней клеточной массы и качество
трофэктодермы. Ее можно применять с 4-го дня на ранней стадии
кавитации и формирования бластоцисты, однако основное ее применение
приходится на 5-й и 6-й дни культивирования эмбрионов.
20
При оценке эмбриона на стадии дробления самым важным признаком
является клеточная стадия эмбриона. Она определяется путем подсчета
количества бластомеров в составе эмбриона. Для правильного подсчета
количества клеток необходимо видеть эмбрион в различных координационных
плоскостях, что дает возможность подсчитать все клетки, из которых состоит
трехмерный эмбрион.
Оплодотворенный ооцит начинает деление на две клетки в 1-й день после
полудня. Это называется ранней стадией дробления. Важность проведения
повторноц оценки в 1-й день развития обсуждается ниже.
Идеальным можно считать дробление, при котором эмбрион на 2-й день
состоит их четырех клеток, на 3-й день из восьми клеток, на 4-й день проходит
компактизация и на 5-й день формируется бластоциста. Однако прохождение
всех этих клеточных стадий (от двух клеток до 16) зависит от скорости
дробления, которая может быть повышенной или пониженной.
Таким образом, на 2-й день, например, можно наблюдать эмбрион из шести
или восьми клеток, а на 3-й день эмбрион может состоять из более чем
восьми клеток или уже пройти стадию компактизации. Кроме того, можно
наблюдать эмбрионы с нечетным количеством бластомеров, например
трехклеточный эмбрион на 2-й день или пятиклеточный — на 2-й или 3-й дни.
Это называется асинхронным дроблением. Таких эмбрионов желательно не
выбирать для переноса.
21
Вторым по частоте использования параметром оценки качества эмбриона
является фрагментация, или наличие между бластомерами небольших
безъядерных фрагментов. Считается, что у эмбрионов без фрагментации или
с небольшой фрагментацией вероятность имплантации выше, чем у
эмбрионов с большим количеством безъядерных фрагментов. В нашем центре
в зависимости от процентного значения фрагментации, имеющейся в
эмбрионе, выделяют пять различных категорий.
К первой категории относят эмбрионов с 0 % фрагментации. Она называется
F0. Кроме того, к типу F0 относят эмбрионов с одним или двумя небольшими
фрагментами, возможно являющимися остатками полярных телец.
В эмбрионе типа F1 фрагменты занимают 10 и менее процентов от общего
объема в пределах прозрачной оболочки.
Для эмбрионов типа F2 характерна фрагментация от 10 до 20 %.
Staessen C и соавт., 1992
22
Для эмбрионов типа F3 характерна фрагментация от 20 до 50 %.
В эмбрионах типа F4 фрагментировано более половины объема в пределах
прозрачной оболочки либо эмбрион фрагментирован по всему объему.
23
Третьим параметром, характеризующим эмбрион на стадии дробления,
является размер бластомеров. При оценке размера бластомеров всегда
необходимо учитывать клеточную стадию. В нашем центре используются две
различные системы оценки размера бластомеров.
При нормальном синхронном дроблении, например 2-4-8, бластомеры должны
иметь одинаковый размер. Если размер бластомеров соответствует модели
дробления, эмбрион относят к типу B0 (Б-ноль). Это самая лучшая оценка для
размера бластомеров. Эмбрион типа Б0 может иметь бластомеры разного
размера, например, в случае шестиклеточного эмбриона — две крупные и
четыре небольшие клетки. В последнем случае шестиклеточный эмбрион
образовался вследствие того, что у четырехклеточного эмбриона две клетки
уже прошли третье деление стадии дробления.
Когда размер или объем бластомеров не соответствует модели нормального
развития, эмбрион относят к типу Б1. Например, если четырехклеточный
эмбрион имеет две крупные и две небольшие клетки (см. рисунок), значит, он
образовался из трехклеточного эмбриона и проходит асинхронное дробление.
Кроме того, к типу B1 относят трехклеточный (см. рисунок) и шестиклеточный
эмбрионы с бластомерами одинакового размера.
24
Другим параметром оценки эмбрионов на стадии дробления является степень
компактизации.
У эмбрионов типа C0 наблюдаются ранние признаки компактизации, но все
еще можно подсчитать количество клеток.
У эмбрионов типа C1 компактизация отсутствует.
На обоих изображениях показаны эмбрионы, у которых начинается
компактизация
25
Другим важным параметром, по которому следует выполнять оценку, является
возможная многоядерность бластомеров. В теории, каждый бластомер
эмбриона должен содержать одно целостное ядро. Однако, начиная с первого
деления стадии дробления могут обнаруживаться многоядерные бластомеры
(МЯБ).
Многоядерность может возникать различными путями (описано в Staessen и
соавт., 1998): деление ядра (кариокинез) без деления клетки (цитокинез),
частичная фрагментация ядра и нарушение перемещения хромосом во время
анафазы митоза.
В нашем центре, чтобы различать многоядерные и немногоядерные
эмбрионы, а также оценить степень многоядерности, мы ввели пять типов
оценок.
Лучшая оценка — это М0, которой характеризуется эмбрион без многоядерных
клеток, в котором в каждом бластомере наблюдается по одному ядру. Второй
тип, М1, определяется, если в каком-либо из бластомеров ядра не видно.
Оценка многоядерности М2 используется для эмбрионов, в которых
содержится до 50 % многоядерных бластомеров и в каждом многоядерном
бластомере наблюдается не более двух нормальных ядер. У эмбрионов типа
М3 до 50 % бластомеров содержат по несколько нормальных ядер либо
небольшие фрагменты ядер. В эмбрионах типа М4 многоядерными являются
более 50 % клеток. Наш принцип — не переносить и не замораживать
эмбрионы типа М4.
26
На первых двух изображениях показаны эмбрионы, состоящие из восьми и
двух клеток, у которых все бластомеры имеют одно четко видимое ядро.
На третьем изображении представлен двухклеточный эмбрион без видимых
ядер.
27
На изображении слева показан эмбрион типа М3. Один из его пяти
бластомеров содержит несколько ядер.
Тип M4 продемонстрирован на примере двухклеточного эмбриона, у которого
обе клетки содержат фрагментированные ядра
28
В качестве еще одного дополнительного параметра обычно используется
степень вакуолизации. Вакуоли могут присутствовать на всех стадиях
дробления, даже в бластоцисте.
Имеется пять степеней вакуолизации. Эмбрион без вакуолей получает
наилучшую оценку, кодируемую как V0.
Эмбрион типа V1 содержит одну или несколько вакуолей только в одном
бластомере. Эмбрион типа V2 содержит одну или несколько вакуолей в
нескольких бластомерах. Эмбрионы типа V3 имеют множество вакуолей в
нескольких бластомерах, а эмбрионы типа V4 полностью вакуолизированы и
не отбираются для переноса или замораживания.
29
Мы выделяем три степени грануляции. Степень G0 — это эмбрионы с
гомогенной цитоплазмой без гранул. Эмбрионы со слабой грануляцией
цитоплазмы классифицируются как G1. Тип G2 — это эмбрионы с очень
выраженной грануляцией или эмбрионы с признаками дегенерации
цитоплазмы.
30
Оценка ранней стадии дробления (на этапе двух клеток в 1-й день)
применяется как дополнительный параметр, помогающий отобрать эмбрионы,
которые морфологически будут более качественными на день переноса.
В исследованиях Lundin и соавт., 2001 и Sakkas и соавт., 1998, 2001
продемонстрировано, что оценка эмбриона на ранней стадии дробления
коррелирует с лучшей морфологией эмбриона и более высоким числом клеток
на момент переноса. Был сделан вывод, что оценка ранней стадии дробления
может сделать отбор эмбриона более качественным. В исследовании Van
Montfoort и соавт., 2004 было обнаружено, что оценка ранней стадии
дробления — это значимый прогностический фактор как для развития
бластоцисты, так и для наступления беременности.
Оценивать раннюю стадию дробления эмбрионов желательно через 23–
26 часов после ИКСИ и через 25–28 часов после ЭКО.
31
На изображении слева показан двухклеточный эмбрион, в бластомерах
которого ядра не видны. На изображении в центре показан двухклеточный
эмбрион, в обоих клетках которого четко видно по одному ядру.
На третьем изображении справа показан нормальный оплодотворенный ооцит.
Оба пронуклеуса исчезли, но в деление ооцит еще не вступил.
32
На 4-й день эмбрионального развития эмбрион либо начинает компактизацию,
либо уже является полностью компактизованным. Если уже нет возможности
точно подсчитать количество клеток, стадия эмбриона определяется как
стадия компактизации, а не как клеточная стадия. Для эмбриона,
находящегося в стадии компактизации, определяется стадия С1, а для
полностью компактизованного эмбриона — стадия C2.
В эмбрионе, находящемся в стадии компактизации (C1), компактизация не
завершена, и все еще можно увидеть границы некоторых клеток. У эмбриона
на стадии C2 границы клеток уже не видны. Иногда бывает, что эмбрион на
этой стадии компактизации наблюдается уже на 3-й день. Однако в
большинстве случаев на 3-й день у эмбриона еще можно подсчитать
количество клеток, а компактизация оценивается как дополнительный
параметр, а не как клеточная стадия.
33
Данные рисунки иллюстрируют порядок оценки всех параметров конкретного
эмбриона.
На верхнем изображении показан восьмиклеточный эмбрион со следующими
характеристиками: фрагментов нет, бластомеры одинаковые, компактизация
еще не наблюдается, каждый бластомер содержит по одному ядру, вакуолей
нет, грануляции нет.
На изображении ниже показан четырехклеточный эмбрион без фрагментации,
но с бластомерами разного размера. Поскольку у четырехклеточного эмбриона
все клетки должны быть одинакового размера, данный эмбрион относится к
типу B1. Компактизации нет, в каждом бластомере содержится по одному ядру,
вакуолей и гранул в цитоплазме нет.
34
На первом изображении данного слайда показан полностью
компактизованный эмбрион, фрагментация — менее 10 %. Вакуолей и гранул
в цитоплазме нет. В компактизованном эмбрионе невозможно оценить ни
количество ядер в клетках, ни размер бластомеров.
Поскольку наличие компактизации очевидно исходя из клеточной стадии (т. к.
это стадия C2), нет необходимости оценивать ее в качестве дополнительного
параметра.
На втором изображении показан эмбрион, состоящий из восьми клеток, без
фрагментации, с одинаковыми бластомерами, но с первыми признаками
компактизации клеток. Поэтому компактизация оценивается в виде
дополнительного параметра как C0. В каждом бластомере заметно по одному
ядру, вакуоли и гранулы не выявляются.
35
Для оценки качества эмбриона на стадии бластоцисты мы используем
систему, созданную на основании системы оценки Гарднера и Шулкрафта,
1999.
Оцениваются три параметра бластоцисты: во-первых, оценивается стадия
развития бластоцисты, во-вторых — качество внутренней клеточной массы, втретьих — качество трофэктодермы.
36
В соответствии с типом формирования полости и степенью расширения
бластоцисты можно различить следующие стадии развития бластоцисты (от
ранней до поздней стадии развития):
BL1: ранняя бластоциста — объем полости составляет менее половины
объема эмбриона. Эмбрион, в котором начинает формироваться полость (о
чем свидетельствует наличие серповидных клеток), также расценивается как
бластоциста типа BL1.
BL2: ранняя бластоциста — объем полости составляет более половины
объема эмбриона.
BL3: поздняя бластоциста — бластоцель полностью заполняет эмбрион На
этой стадии развития бластоцисты можно различить формирование
внутренней клеточной массы и трофэктодермы.
BL4: экспандированная бластоциста — бластоцель превышает исходный
объем эмбриона. Прозрачная оболочка значительно истончена.
37
BL5: вылупляющаяся бластоциста — часть клеток трофэктодермы начинает
выступать из прозрачной оболочки.
BL6: вылупившаяся бластоциста — бластоциста полностью вышла из
прозрачной оболочки.
BL7: бластоциста с искусственным хэтчингом — выход через отверстие,
созданное при биопсии эмбриона, выполненной с целью преимплантационной
генетической диагностики. Оболочка не истончена.
BL8: коллабированная бластоциста. Это означает, что после экспандирования
бластоциста не выполнила хэтчинг, но вместо этого спалась. Однако,
возможно последующее повторное экспандирование бластоцисты и
превращение ее в бластоцисту с бластоцелем.
38
На этих изображениях показаны различные стадии бластоцисты: от ранней
бластоцисты до вылупляющейся бластоцисты и бластоцисты с
искусственным хэтчингом.
39
Начиная со стадии поздней бластоцисты (BL3) можно оценивать внутреннюю
клеточную массу и трофэктодерму.
Тип внутренней клеточной массы (ВКМ) обозначается буквой, которая ставится
сразу после кода стадии бластоцисты. Различают четыре типа ВКМ:
A: клетки ВКМ упакованы плотно, клеток много
B: клетки ВКМ упакованы рыхло, клеток немного
C: наблюдается очень мало клеток ВКМ
D: клеток не видно, ВКМ отсутствует или имеет признаки дегенерации
Тип трофэктодермы (ТЭ) обозначается буквой, которая ставится второй после
кода стадии бластоцисты. Качество трофэктодермы можно разделить на
четыре типа:
A: множество клеток формирует связанный эпителий
B: небольшое количество клеток формирует свободный эпителий
C: наблюдается очень мало крупных клеток
D: клетки трофэктодермы имеют признаки дегенерации или аномальный вид,
либо клеток нет вообще
40
На данных изображениях показаны бластоцисты с внутренней клеточной
массой типов A, B, C и D (тип внутренней клеточной массы обозначается
первой буквой, следующей за стадией бластоцисты).
41
На данных изображениях показаны бластоцисты с трофэктодермой типов A, B,
C и D (тип трофэктодермы обозначается второй по счету буквой, следующей
за стадией бластоцисты).
42
Данную тему можно подытожить следующим образом.
При морфологической оценке зиготы наиболее важными параметрами
оплодотворения являются количество и размер пронуклеусов. Кроме того,
морфологическая оценка зиготы основывается на различных параметрах
пронуклеусов. Оптимальная зигота имеет следующие признаки: пронуклеусы
одинакового размера, расположены в центре с поляризованными ядрышками.
Наиболее важные параметры оценки эмбриона — количество клеток и процент
фрагментации. Во вторую очередь, это размер бластомеров, который необходимо
оценивать с учетом клеточной стадии. При отборе эмбрионов для переноса
желательно выбирать эмбрионы с синхронным дроблением. К дополнительным
параметрам оценки относятся компактизация, грануляция, вакуолизация и
многоядерность. Оценка ранней стадии дробления может сделать отбор эмбриона
более качественным, особенно в случае наличия морфологически эквивалентных
эмбрионов.
43
В системе оценки бластоцисты выделяют несколько стадий, основанных на таких
параметрах, как формирование полости, увеличение объема бластоцисты,
истончение оболочки и вылупление. Кроме того, стадию бластоцисты характеризуют
по размеру внутренней клеточной массы и по качеству трофэктодермы.
44
45
46
47