Ветеринария

Ветеринария
Р.Н. Цыбикова
УДК 636.293.4:591.443
ГИСТОЭНЗИМОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТИМУСА ЯКА
БУРЯТСКОГО ЭКОТИПА В ВОЗРАСТНОМ АСПЕКТЕ
В статье рассматриваются результаты исследований распределения оптической
плотности гранул диформазана при гистоэнзимологической реакции на сукцинатдегидрогеназу в тимусе яка. Они показали, что активность сукцинатдегидрогеназы
выше в мозговом веществе долек. Высокий уровень активности сукцинатдегидрогеназы в клетках тимуса плодов и молодых животных свидетельствует об усиленных окислительно-восстановительных процессах в организме и торможении перекисного окисления липидов в мембранах клеток тимуса яков. У старых животных
происходит понижение функциональной активности и истощение энергетических
ресурсов иммунокомпетентных клеток тимуса, что приводит к понижению активности сукцинатдегидрогеназы. Обнаруженные особенности метаболизма иммунокомпетентных клеток тимуса яка можно использовать для разработки, планирования лечебно-профилактических мероприятий.
Благодаря высокочувствительным методам выявления гистоэнзимологической активности клеток в
органах и тканях, мы имеем возможность наблюдать и регистрировать изменения, происходящие при процессах окисления в отдельных клетках и, следовательно, обнаруживать изменения в характере жизнедеятельности клетки. Важную роль в клетке играют митохондрии, которые являются окислительным и энергетическим центром клетки. В них содержится система ферментов, контролирующих и катализирующих весь
комплекс реакций ди- и трикарбоновых кислот, которая является специфическим интегратором биохимических процессов и концентрирует вокруг себя ферменты всех других компонентов клетки, воздействует на их
каталитические потенции. Сукцинатдегидрогеназа относится к группе окислительно-восстановительных
ферментов, осуществляющих биологическое окисление веществ [2]. Целью настоящей работы явилась
оценка клеточной энергетики в тимусе яка бурятского экотипа в возрастном аспекте.
Материал и методика. Для исследований использовали тимус от клинически здоровых яков (фермерские хозяйства Окинского района Республики Бурятия, благополучные по эпидемиологическому окружению). Исследуемые животные были распределены по возрастным группам: 7–8-месячные плоды; новорожденные; половозрелые (3 года); взрослые животные старше 7 лет. Активность сукцинатгидрогеназы определяли по Нахласу (Пирс Э., 1962) и выявляли в свежезамороженных срезах тимуса, полученных на криостате,
инкубированных в растворе субстрата, состоящего из 0,2 М раствора сукцината натрия, 0,2М фосфатного
буфера (рН 7,6), раствора нитросинего тетразолия (нитро-СТ). Приготовленные в криостате свежезамороженные срезы тимуса были инкубированы при 37˚С в течение 30 минут и ополощены в изотоническом растворе NaCl; зафиксированы в 10%-м растворе формалина, приготовленном на изотоническом растворе NaCl
в течение 10 минут. Затем срезы были промыты в 15%-м спирте в течение 45 минут и заключены в желатину. Синий осадок диформазана выявлялся в структурах тимуса, обладающих сукцинатдегидрогеназной активностью.
Оценку уровней активности фермента окислительно-восстановительного ряда в тимусе животных
проводили по распределению оптической плотности диформазана на микропрепаратах (Кухаренко Н.С.,
1989); препараты распределяли по оптической плотности: «м» – малая плотность; «с» – средняя; «б» –
большая.
Результаты исследований и обсуждение. Данные по оптической плотности ранул диформазана
при гистоэнзимологической реакции на сукцинатдегидрогеназу в срезах тимуса яка приведены в таблице.
Из нее следует, что в тимусе 7–8-месячных плодов преобладает средняя плотность («с») гранул диформазана, равная 4,9±0,31, которая превосходит таковую у яков старших возрастных групп в 1,32; 1,95;
2,33 раза соответственно. У новорожденных животных также преобладает средняя плотность («с») и имеет
величину, равную 3,7±0,02, однако у животных периода полового развития (трехлетних) наблюдается большая плотность («б») гранул диформазана, когда как у животных старше 7 лет преобладает малая плотность
распределения гранул. В целом в тимусе животных всех возрастных групп малая плотность («м») гранул
диформазана была одних величин. У плодов 7–8-месячного возраста и новорожденных отмечена большая
плотность («б») на одном уровне.
114
Вестник КрасГАУ. 2007
2007. №4
Распределение оптической плотности гранул диформазана в тимусе яка
в зависимости от возраста ( M±m, n=5)
Возрастные группы
7–8-месячные плоды
Новорожденные
Половозрелые, 3 года
Взрослые животные
старше 7 лет
Оптическая плотность гистоэнзимологической реакции на препаратах
«м» – малая
«с» – средняя
«б» – большая
плотность, усл.ед
плотность, усл.ед
плотность, усл.ед
2,1±0,43
4,9±0,31
2,8±0,72
2,6±0,22
3,7±0,02
2,8±0,11*
2,8± 0,22
4,1±0,38*
4,3±0,25
2,5±0,76
2,1±0,13
1,6±0,28
*
Различия оптической активности препаратов статистически достоверны в сравнении с таковой в тимусе новорожденного яка при Р ≥ 0,05.
Следует отметить, что в тимусе яков всех возрастных групп активность сукцинатдегидрогеназы была
выше в мозговом веществе долек. Вероятно, это связано с тем, что наибольшее количество ретикулоэпителиальных клеток тимуса находятся в мозговом веществе. Известно, что ретикулоэпителиальные клетки характеризуются обилием митохондриев [1], что требует большого потребления окислительных ферментов.
Лимфоциты характеризуются небольшой цитоплазмой, в которой наблюдается незначительное количество
митохондрий, что объясняет скудность гранул диформазана в корковом веществе долек тимуса, где лимфоциты являются преобладающей клеточной популяцией. Величина гранул диформазана при гистоэнзимологической реакции на сукцинатдегидрогеназу в дольках тимуса была различной у яков разных возрастных
групп. В клетках тимуса плодов и молодых животных гранулы диформазана крупные. У 3-летних животных
последние были несколько округлее и мельче. Такой тип изменений гранул диформазана в тимоцитах
взрослых животных, по-видимому, свидетельствует о некоторых структурных особенностях митохондриальных мембран, характеризующих функциональное изменение их проницаемости, что может проявиться у
взрослых яков [5].
Выводы. Полученные данные наглядно свидетельствуют о том, что ферментативная активность
иммунокомпетентных клеток тимуса имеет различные значения в зависимости от возраста. Высокий уровень
активности сукцинатдегидрогеназы в клетках тимуса плодов и молодых животных говорит в пользу высокой
целлюлярной активности и несомненно свидетельствует об усиленных окислительно-восстановительных
процессах в организме и торможении перекисного окисления липидов в мембранах клеток тимуса яков, как
показатель хорошего физиологического состояния организма. Изменения формы и плотности распределения гранул диформазана у половозрелых животных объясняются тем, что этот период развития является
критическим, когда подключение половых гормонов в систему регуляции существенно воздействует на
метаболизм и функциональные параметры органов и систем, а у старых животных это объясняется понижением функциональной активности и истощением энергетических ресурсов иммунокомпетентных клеток
тимуса яка.
Литература
1. Долгова, М.А. Антенатальное и раннее постнатальное развитие органов иммуногегеза / М.А. Долгова,
Л.Д. Марцинкевич, Т.Д. Батюто [и др.] // Арх. анат. – 1982. – №2. – С. 73–83.
2. Лилли, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лили. – М., 1969. – 645 с.
3. Пирс, Э. Гистохимия теоретическая и прикладная / Э. Пирс. – М., 1967. – С. 506–516.
4. Кухаренко, Н.С. Ускоренный способ количественного сравнения морфологических препаратов / Н.С. Кухаренко. – Благовещенск, 1989. – С. 55.
5. Райхлин, Н.Т. Окислительно-восстановительные ферменты в опухолях / Н.Т. Райхлин. – М., 1967.
– 215 с.
115