ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
(19)RU
(11)2445965
(13)C2
(51) МПК
A61K31/734 (2006.01)
A61K38/05 (2006.01)
A61P1/00 (2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(12)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
Статус: по данным на 07.08.2012 - действует
Пошлина: учтена за 3 год с 06.07.2012 по 05.07.2013
(21), (22) Заявка: 2010127706/15, 05.07.2010
(24) Дата начала отсчета срока действия патента:
05.07.2010
Приоритет(ы):
(22) Дата подачи заявки: 05.07.2010
(45) Опубликовано: 27.03.2012
(72) Автор(ы):
Малинин Владимир Викторович
(RU)
(73) Патентообладатель(и):
(56) Список документов, цитированных в отчете о
Общество с ограниченной
поиске: WO 96/27368 A1, 12.09.1996. Клиническая
ответственностью "ЦитоНИР"
фармакология тимогена. / Под ред. В.С.Смирнова.
(ООО "ЦитоНИР") (RU)
- СПб., 2004. RU 2165254 С2, 20.04.2001. WO
2009/064819 А2, 22.05.2009. EP 2088154 A1,
12.08.2009.
Адрес для переписки:
191023, Санкт-Петербург, Мучной пер., 2, ООО
"ЦитоНИР"
(54) ПЕРОРАЛЬНАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине и касается пероральной фармацевтической
композиции для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта,
включающей альгинат натрия, функциональную добавку и воду. В качестве
функциональной добавки композиция содержит дипептид глутамил-триптофан в форме
мононатриевой соли. Изобретение обеспечивает повышение эффективности композиции
при лечении воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. 6 пр., 11 табл.
Заявляемое изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным препаратам
на основе пептидов для перорального применения, а именно к фармацевтическим
композициям, содержащим средство для лечения воспалительных заболеваний
желудочно-кишечного тракта. Оно может найти широкое применение в
гастроэнтерологии.
Нарушение механизмов физиологической регуляции системы пищеварения приводит, как
правило, к формированию полиморбидности, т.е. вовлечению в патологический процесс
различных органов пищеварения и развитию нескольких заболеваний желудочнокишечного тракта, объединенных общим патологическим процессом. Фармакотерапия
заболеваний органов пищеварительной системы имеет свои особенности и конкретные
показания, в зависимости от поражения того или иного органа (желудка, печени,
поджелудочной железы и т.д.) и симптоматики заболевания. Вместе с тем развитие
полиморбидности, наиболее характерной для пожилого возраста, требует особого подхода
к фармакотерапии, заключающегося в применении лекарственных препаратов, влияющих
на единый патогенетический механизм гастроэнтерологических заболеваний. Это связано
также с нарастанием инволюционных процессов в слизистой оболочке различных отделов
желудочно-кишечного тракта, изменением темпов регенерации и снижением активности
пищеварительных ферментов при старении организма [Валенкевич Л.Н., Уголев A.M.
Пищеварительная система // Биология старения. Руководство по физиологии. - Л.: Наука,
1982. - С.343-369; Лазебник Л.Б., Дроздов В.Н. Заболевания органов пищеварения у
пожилых. - М.: Анахарсис, 2003. - 208 с.].
Известен синтетический пептидный иммуномодулятор «Гепон» (Thr-Glu-Lys-Arg-ArgGlu-Thr-Val-Glu-Arg-Glu-Lys-Glu), используемый для перорального применения в
комплексной терапии у больных пожилого возраста с язвенной болезнью желудка не
ассоциированной с Heliobacter pylori [Лазебник Л.Б. и др. Экспериментальная и
клиническая гастроэнтерология, 2003, 3, с.17-20]. Применение «Гепона» в комплексной
терапии способствовало ускорению процессов регенерации, сокращению сроков
рубцевания язвенного дефекта и улучшению показателей клеточного иммунитета. Однако
изолированное применение «Гепона» не приводило к рубцеванию язвенного дефекта.
Также известен синтетический пептидный иммуномодулятор ликопид (Nацетилглюкозаминил-1-4-N-ацетилмурамид-L-аланил-D-изоглутамин),
применяемый
перорально в комплексной терапии хронической язвенной болезни двенадцатиперстной
кишки, ассоциированной с Heliobacter pylori, в сочетании с хроническим гастритом [RU
2252777, 2003; Способ лечения хелиобактерассоциированной хронической
дуоденальной язвы]. Комплексная терапия, включающая ликопид, показала высокую
эффективность в эрадикации Heliobacter pylori и в восстановлении структурнофункциональных показателей слизистой оболочки желудка. Однако индивидуальное
влияние ликопида на патогенез заболевания не выявлено.
Известно вещество, обладающее защитным действием при поражениях желудка
различной этиологии, - альгинат натрия. При пероральном введении альгината натрия в
дозе 100 мг/кг крысам-самцам Вистар за час до ульцерогенного воздействия снижались
число и размеры деструктивных участков слизистой желудка и нормализовался
энергобаланс в ткани желудка [Хасина Э.И., Кривоногова А.С. Аграрный вестник Урала,
2009, 11(65), с.92-94]. Альгинат натрия представляет собой натриевую соль альгиновой
кислоты - смеси полиуроновых кислот, составленных из остатков D-маннуроновой и Lгулуроновой кислот, то есть относится к классу полисахаридов [Сливкин А.И. Вестник
ВГУ, сер. Химия, биология, 2000, с.30-46]. Альгинат натрия в виде водного раствора в
желудке образует пленку, защищающую слизистую оболочку желудка.
Наиболее близкой по совокупности существенных признаков к заявляемой композиции
является композиция, представляющая собой водный раствор 8-14% мас./об. альгината
натрия и, в качестве функциональной добавки, до 5% мас./об. бикарбоната калия, до 5%
мас./об. карбоната кальция и до 1% мас./об. карбомера, нейтрализованного гидроксидом
натрия [RU 2173139, М. кл. A61K 9/22, 2001]. Указанная композиция (лекарственный
препарат «Гевискон») предназначена для лечения рефлюкс-эзофагита, гастрита,
диспепсии или язвенной болезни. В RU 2173139 указывается, что при взаимодействии
фармацевтической композиции с содержимым желудка образуется карбонизированная
(насыщенная углекислым газом) желатинозная пена или пленки, которые плавают на
содержимом желудка. Это, безусловно, эффективно при лечении рефлюкс-эзофагита и
связанных с ним неприятных ощущений, однако, как и в случае применения других
препаратов, повышающих pH желудочного сока, мало влияет на течение воспалительных
и репаративных процессов в органах желудочно-кишечного тракта.
Результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в
повышении эффективности пероральной фармацевтической композиции.
Указанный результат достигается тем, что пероральная фармацевтическая композиция,
включающая воду, альгинат натрия и функциональную добавку, в качестве
функциональной добавки содержит дипептид глутамил-триптофан (Glu-Trp) в форме
мононатриевой соли при следующем соотношении компонентов в расчете на одну дозу 10
мл (в мг)
глутамил-триптофан 0,01-0,50
альгинат натрия
50-500
вода
остальное
Мононатриевая соль глутамил-триптофана выпускается по ФСП Р
под наименованием «Тимоген-натрий».
002382/01-050209
Известно использование тимогена в инъекциях при лечении острого панкреатита,
послеоперационного перитонита, а также желчно-каменной болезни, осложненной острым
холециститом [Под ред. B.C.Смирнова. Клиническая фармакология тимогена. - С.Петербург, 2004. - С.81-87]. Эффективность применения тимогена в этой лекарственной
форме для данных заболеваний заключалась в системном действии препарата на
иммунитет. Не было установлено влияние тимогена на хроническое течение
патологического процесса. Эффективность тимогена при заболеваниях органов
желудочно-кишечного тракта при пероральном применении не исследовалась.
Пероральное применение тимогена как компонента лекарственного противовирусного
средства «Цитовир» было эффективным при гриппе и ОРВИ [RU 2165254, 2001 БИ
11]. Выявить влияние тимогена в этой композиции на состояние органов желудочнокишечного тракта невозможно, особенно на фоне избытка аскорбиновой кислоты,
присутствующей в «Цитовире». Кроме того, исследования физиологической роли
коротких пептидов в питании показали, что устойчивость пептидов к действию ферментов
желудка и тонкого кишечника очень низка [Тутельян В.А. и др. Бюл. эксперим. биологии
и медицины, 2003, т.135, 1, с.4-10]. В силу сказанного выше неожиданными оказались и
эффективность перорального использования тимогена при заболеваниях органов
желудочно-кишечного тракта, и устойчивость заявляемой композиции к действию
ферментов.
Заявляемая композиция получена растворением компонентов в воде с последующей
стерилизацией образовавшегося геля.
Композиция была исследована на моделях язвообразования, токсического гепатита и
токсического панкреатита, а также в клинической практике при лечении лиц пожилого
возраста.
Пример 1. Гастропротекторная активность заявляемой фармацевтической композиции при
лечебном применении на модели язвообразования.
Экспериментальное исследование выполнено на 50 аутбредных крысах-самцах линии
Sprague-Dawley с массой тела 180-200 г. До экспериментов животных подвергали 14дневному карантину и рандомизации. Животных содержали в условиях вивария на
стандартном рационе.
Животных распределяли в следующие группы:
- крысы, получавшие ульцероген (индометацин) и физиологический раствор (2 мл/кг) контрольная группа животных;
- крысы, получавшие внутрижелудочно ульцероген и препарат сравнения (сукральфат в
дозе 200.0 мг/кг);
- крысы, получавшие внутрижелудочно ульцероген и фармацевтическую композицию
(10.0 мкг/кг);
- крысы, получавшие внутрижелудочно ульцероген и фармацевтическую композицию (0.1
мкг/кг).
За 24 ч до применения ульцерогена животных лишали пищи при свободном доступе к
воде, так как голодание вследствие активации анаэробного гликолиза способствует
снижению уровня факторов защиты в слизистой желудка. Ульцерогенную дозу
индометацина, равную 10 мг/кг, вводили в течение трех последовательных дней
внутримышечно
на
стерильном
апирогенном
физиологическом
растворе.
Фармацевтическую композицию и препарат сравнения в указанных выше дозах вводили
внутрижелудочно в течение 7 дней от момента моделирования индометациновой язвы
желудка (лечебная схема). Животные контрольной группы получали эквиобъемные
количества растворителя в соответствующих режимах.
В динамике определяли массу тела животных. Через 24 ч после окончания лечения
животных подвергали эвтаназии мгновенной декапитацией с забором крови, желудки
извлекали, вскрывали по малой кривизне, промывали холодным физиологическим
раствором и макроскопически, с помощью бинокуляра, при ярком вертикальном
освещении определяли число деструкции, которые дифференцировали по площади их
поверхности на: мелкие (точечные, менее 1 мм), средние (округлые и полосовидные, от 1
мм) и крупные (более 1-2 мм). Наличие крови на дне деструкции выявляли в
пероксидазной реакции с субстратом ортодианизидина с подкраской слизистой
метиленовым синим; при этом гемсодержащая поверхность окрашивалась в коричневочерный цвет на синеватом фоне интактной слизистой.
Учитывали распределение животных в группе с дефектами слизистой оболочки по
степени выраженности макроскопических изменений, проводили расчет индекса Паулса
(ИП) по формуле: среднее количество язв × % животных с язвами / 100% и
гастропротекторную активность (ГА): отношение ИП в контрольной группе к ИП в
опытной группе. Изучаемый препарат считали активным, если ГА составляла 2 и более
единиц.
Статистическую обработку данных проводили с помощью стандартного пакета программ
«Microsoft Excel». Существенность изменений вычисляли с применением t-критерия
Стьюдента.
Установлено, что моделирование язвы желудка путем введения индометацина в
ульцерогенной дозе сопровождается развитием значимых патологических изменений у
крыс через 3 суток от момента затравки. На 7 сутки животные теряли в весе до 30% от
фоновых значений, что было связано как с потерей крови в результате желудочных
кровотечений, так и с активизацией катаболизма. У всех животных из контрольной
группы отмечали выраженную гиперемию и появление деструкции в слизистой оболочке
желудка: значительное количество поверхностных и глубоких эрозий и отек
околоэрозивной поверхности; на дне большинства деструкции выявлено наличие гемположительного материала (кровь: окси- и метгемоглобин, вследствие кровоизлияния
обнаженных подслизистых капилляров и окисления гемоглобина соляной кислотой
желудочного сока). Динамика снижения массы тела отражена в таблице 1.
Значимое снижение массы тела отмечали в следующих случаях: в контроле и при
введении фармацевтической композиции в дозе 10.0 мкг/кг - у 100% животных в группах.
При применении фармацевтической композиции в дозе 0.1 мкг/кг наблюдалось
увеличение массы тела крыс по сравнению с показателем в контрольной группе.
На фоне введения препарата сравнения сукральфата происходило существенное снижение
как числа, так и площади язвенных дефектов. Гиперемия слизистой была отмечена у 40%
животных.
Таблица 1
Влияние фармацевтической композиции на динамику
массы тела (M±m, г) животных на модели
индометациновой язвы желудка (n=10 в каждой группе)
Группа, доза, мкг/кг
Срок
наблюдения
Фон
3 дня
7 дней
Интактные
196±4
195±3
Контроль
195±2
180±3* 136±5*
Сукральфат, 200 мг/кг
198±3
186±4 169±3*
Фармацевтическая композиция, 10.0 мкг/кг
195±4
183±3 155±4*
Фармацевтическая композиция, 0.1 мкг/кг
200±5
191±6 177±3**
200±5
* - Р<0.05 по сравнению с фоновыми значениями; ** P<0.05 по сравнению с контролем.
Результаты оценки влияния фармацевтической композиции на количество деструкции в
слизистой оболочке желудка животных представлены в таблице 2.
Таблица 2
Влияние фармацевтической
композиции на процесс
язвообразования у
животных на модели
индометациновой язвы
желудка (n=10 в каждой
группе)
Группа, доза, мкг/кг
Крупные
Животные
Количество Среднее
с язвами,
ИП
язв (X±m) (X±m)
%
ГА
Средние
Мелкие
0
-
-
Контроль
100
11±2
7±1
16±3 35±3
Сукральфат, 200 мг/кг
100
5±2*
4±1
8±2* 17±4* 16.9*
2.05
Фармацевтическая
композиция, 10.0 мкг/кг
100
4±1*
7±2
11±3 21±3* 21.7*
1.60
Фармацевтическая
композиция, 0.1 мкг/кг
60*
3±1*
5±2
9±1* 17±2* 10.2*/** 3.40**
Интактные
-
-
-
-
34.7
-
* - P<0.05 по сравнению с
контролем; ** - P<0.05 по
сравнению с препаратом
сравнения.
Введение фармацевтической композиции в различных дозах внутрижелудочно
препятствовало образованию язв желудка. Этот эффект в большей мере был выражен на
фоне введения дозы 0.1 мкг/кг по общему числу язв желудка. В дозе 10.0 мкг/кг
фармацевтическая композиция вызывала достоверное уменьшение числа крупных
деструкций и не оказывала влияния на число средних и мелких язв.
Пример 2. Оценка гепатопротекторной активности заявляемой фармацевтической
композиции при лечебном применении в экспериментальной модели токсического
гепатита.
Опыты поставлены на 40 аутбредных крысах-самцах линии Sprague-Dawley массой 200210 г. В каждой опытной группе было по 10 животных. Исследуемые препараты вводили
крысам внутрижелудочно в виде водного раствора с помощью атравматического
металлического зонда. Контрольным животным вводили воду очищенную.
Препаратом сравнения при изучении гепатопротекторной активности служил
«Силибинин», капсулы, производства «Роза Фитофарм» (Болгария).
Гепатит моделировали у крыс-самцов линии Sprague-Dawley с массой тела 200-210 г
путем внутрижелудочного введения тетрахлорметана (ТХМ) в течение 14 дней. ТХМ в
50% растворе на оливковом масле вводили в желудок в дозе 1.5 мл/кг. Лечение начинали с
15-го дня отравления. Введение фармацевтической композиции проводили ежедневно
однократно в дозах 0.1 и 10 мкг/кг внутрижелудочно. Контрольные животные получали
токсикант и эквиобъемное с гепатопротекторами количество воды очищенной.
Гепатопротекторную активность оценивали через 7 и 14 дней после начала терапии.
В сыворотке крови определяли активность аспартатаминотрансферазы (ACT),
аланинаминотрансферазы (АЛТ), щелочной фосфатазы, уровень холестерина,
триглицеридов.
Патоморфологическое исследование включало в себя некропсию, макроскопическое
исследование, взвешивание и гистологическое исследование внутренних органов.
Некропсия выполнялась под непосредственным наблюдением патоморфолога. После
эвтаназии было проведено исследование макро- и микроскопических особенностей
строения печени. Для гистологического изучения кусочки печени замораживали на
столике микротома жидкой углекислотой, а также фиксировали в 10% растворе
формалина, срезы окрашивали Суданом IV и ядра гепатоцитов докрашивали
гематоксилином.
Статистическую обработку проводили с помощью пакетов программ ((Microsoft Excel».
Отличия между выборками оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.
Установлено, что при введении заявляемой фармацевтической композиции в дозах 0.1 и
10 мкг/кг летальных эффектов не отмечалось. Состояние и поведение животных носили
нормальный характер. В группе животных, получавших препарат силибинин, гибели
также не отмечали. В контроле погибло 3 крысы из 10. Данные отражены в таблице 3.
Таблица 3
Влияние фармацевтической композиции на выживаемость крыс с
токсическим гепатитом на 14 сутки
Экспериментальные группы/дозы
ТХМ (контроль)
Погибло крыс
абс. (%)
3/10-(30)
ТХМ + Силибинин (100 мг/кг)
0/10*
ТХМ + Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)
0/10*
ТХМ + Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)
0/10*
* - P<0.05 по сравнению с контролем.
Активность печеночных аминотрансфераз в крови как маркер синдрома цитолиза при
патологии печени токсического генеза существенно менялась у крыс опытных групп на 7
и 14 сутки терапии. Достоверное отличие в действии фармацевтической композиции
отмечали при введении доз 0.1 и, в особенности, 10 мкг/кг. По этому показателю
фармацевтическая композиция превосходила действие силибинина на 14 день терапии.
Данные представлены в таблице 4.
Нормализация активности щелочной фосфатазы и уровней холестерина и триглицеридов
происходила на фоне введения фармацевтической композиции в дозах 0.1 и 10 мкг/кг. В
дозе 10 мкг/кг фармацевтическая композиция существенно влияла на изученные
показатели. По своей активности фармацевтическая композиция не уступала препарату
силибинин в дозе 100 мг/кг. Данные отражены в таблице 4 и 5.
Таблица 4
Влияние фармацевтической композиции на
активность аминотрансфераз и щелочной
фосфатазы в крови при токсическом гепатите
Экспериментальные группы/доза, мкг/кг
Изучаемые
показатели
АлАТ, ммоль/ч×л
АсАТ,
ммоль/ч×л
ЩФ,
нмоль/с×л
Контроль
2.47±0.14
2.10±0.11
786±45
Силибинин (100 мг/кг)
1.56±0.12*
1.28±0.15*
469±30*
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)
1.73±0.16*
1.31±0.14*
455±29*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)
1.44±0.15*
1.24±0.17*
477±23*
Контроль
2.20±0.19
1.84±0.16
604±31
Силибинин (100 мг/кг)
0.99±0.16*
0.75±0.11*
288±17*
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)
1.01±0.18*
0.72±0.12*
335±22*
7 сутки терапии
14 сутки терапии
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)
0.54±0.10*/** 0.44±0.17*/** 221±16*/**
* - P<0.05 по сравнению с контролем; ** P<0.05 по сравнению с препаратом сравнения.
Таблица 5
Влияние фармацевтической композиции на уровень
холестерина и триглицеридов в крови при токсическом
гепатите
Экспериментальные
Изучаемые
показатели
Холестерин, ммоль/л
Триглицериды,
ммоль/л
7 сутки терапии
Контроль
5.06±0.19
3.18±0.16
Силибинин (100 мг/кг)
3.60±0.18*
2.44±0.12*
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)
3.77±0.19*
2.51±0.10*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)
3.66±0.16*
2.38±0.12*
Контроль
3.88±0.16
2.48±0.19
Силибинин (100 мг/кг)
1.99±0.12*
1.48±0.14*
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)
2.04±0.16*
1.33±0.18*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)
1.46±0.18*
1.08±0.10*/**
14 сутки терапии
* - P<0,05 по сравнению с контролем; ** - P<0,05 по
сравнению с препаратом сравнения.
После окончания эксперимента животные были подвергнуты эвтаназии для определения
степени жировой дистрофии гепатоцитов. По данным вскрытия и макроскопического
исследования изучаемых органов различий между опытными группами животных,
получавших фармацевтическую композицию в обеих дозах и препарат сравнения, не
установлено.
Существенно увеличивались линейные размеры и объем печени. Поверхность печени
была гладкой, неоднородной коричнево-бурой окраски. Ткань печени на разрезе была
темно-красной с множественными кровоизлияниями. Капсула печени была тонкой,
прозрачной. Консистенция печени была мягкой.
Размеры и форма селезенки были увеличены. Поверхность селезенки имела однородную
темно-вишневую окраску, была гладкой.
При гистологическом исследовании печени (окраска срезов Суданом) была выявлена
жировая дистрофия центролобулярных и перипортальных гепатоцитов, выраженная в
различной степени. Для полуколичественной оценки содержания липидов использовали
пятибалльную шкалу:
1. Минимальная степень жировой дистрофии - гепатоциты с липидными включениями
только в перипортальной зоне печеночной дольки.
2. Слабая степень: гепатоциты с липидными включениями занимают 1/4-1/3 длины
печеночных балок в перипортальной зоне.
3. Умеренная степень: подобные гепатоциты занимают 1/4-1/3 длины печеночных балок
по периферии дольки.
4. Высокая степень: гепатоциты с жировыми каплями занимают 1/2-2/3 длины
печеночных балок.
5. Максимальная степень: стеатоз всей печеночной дольки, слияние жировых кист.
В контроле в печени крыс наблюдали глубокие повреждения паренхимы печени в виде
жировой и белковой дистрофии с некробиозом части гепатоцитов. Жировая дистрофия
носила диффузный характер. Средние и крупные капли жира заполняли цитоплазму
большей части гепатоцитов во всех отделах печеночной дольки -максимальная степень
жировой дистрофии.
В группе силибинина дистрофические изменения жирового характера в печени крыс были
слабо выражены, носили очаговый характер. Крупные капли жира содержались в
цитоплазме мелких групп - 4-5 гепатоцитов в поле зрения - слабая степень жировой
дистрофии. При докраске гематоксилином трабекулярное строение печени и ядра
гепатоцитов были отчетливыми.
У крыс, получавших фармацевтическую композицию в дозе 0.1 мкг/кг, дистрофические
изменения печени были менее распространенными. Жировая дистрофия носила очаговый
характер. Значительная часть гепатоцитов не содержала жировых включений - слабая
степень жировой дистрофии.
В группе крыс, получавших фармацевтическую композицию в дозе 10 мкг/кг, выявлены
дистрофические изменения очень слабой степени. Дистрофические изменения печени
практически отсутствовали. Мелкие капли жира наблюдали в цитоплазме единичных
гепатоцитов - минимальная степень жировой дистрофии. Трабекулярное строение печени
и ядра гепатоцитов, докрашенных гематоксилином, были отчетливыми. Нарушений
тинкториальных свойств цитоплазмы не отмечали. Таким образом, фармацевтическая
композиция оказывает выраженное гепатопротекторное действие на модели гепатопатии
токсического генеза. Фармацевтическая композиция способствует восстановлению
функционального и морфологического состояния гепатоцитов.
Пример 3. Оценка панкреопротекторной активности фармацевтической композиции при
лечебном применении в экспериментальной модели токсического панкреатита.
Эксперименты выполнены на 40 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 220-240
г. Каждая экспериментальная группа содержала 10 животных.
Острый панкреонекроз (ОП) моделировали у крыс-самцов линии Sprague-Dawley с массой
тела 220-240 г путем внутрибрюшинного введения 20% раствора L-аргинина в фосфатном
буфере в дозе 5000 мг/кг дробно с интервалом 6 ч. Через 4 и 24 часа всем животным
начинали инфузионную терапию путем внутривенного введения в дорзальную хвостовую
вену. В силу острой токсичности применяемой дозы аргинина крысам опытных групп
вводили препарат «Стерофундин Г-5» (Серия: B29LA24L производства «Б.Браун
Мельзунген АГ», Германия) в одинаковой дозе 4 мл /100 г массы тела 4 раза в сутки.
Введение заявляемой фармацевтической композиции проводили ежедневно однократно в
дозах 0.1 и 10 мкг/кг внутрижелудочно в течение 5 дней.
Через 72 часа и на 5 сутки всех выживших крыс подвергали эвтаназии. Собирали кровь и
выделяли поджелудочную железу.
В сыворотке крови крыс определяли активность ферментов трипсина, -амилазы, липазы.
Антиоксидантный статус оценивали по активности пероксидазы и соотношению
сульфгидрильных и дисульфидных групп в сыворотке крови. Выделенные на холоде
поджелудочные железы отмывали физиологическим раствором натрия хлорида, очищали
от жировой ткани и гомогенизировали в среде выделения, состоящей из 0.05 М фосфатносолевого буфера и 5 мМ ЭДТА. В гомогенате поджелудочной железы определяли уровень
белка, общих карбонильных групп (ОКГ), содержание сульфгидрильных и дисульфидных
групп белков.
Статистическую обработку проводили с помощью пакетов программ «Microsoft Excel».
Отличия между выборками оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.
Оценку протекторного действия препаратов проводили через 72 часа и на 5-е сутки после
моделирования ОП по биохимическим показателям крови и поджелудочной железы в
сравнении с таковыми у контрольных животных, получавших терапию только препаратом
«Стерофундин Г-5» (инфузионную терапию проводили всем опытным и контрольным
крысам).
Во всех опытных группах крыс через 1 час после введения аргинина отмечали развитие
гиподинамии и усиленное потребление воды. Через 24 часа у всех контрольных крыс
отмечали выделение жидкого кишечного содержимого черного цвета. Гибель животных
на эти сроки составила 20%.
Через 48 часов в контрольной группе отмечали усиление проявления ОП в виде скопления
пальпируемого объема брюшного экссудата и появления петехий на коже под шерстным
покровом. Гибель через 48 часов составила 40%.
Через 72 часа в контрольной группе осталось 5 крыс из 10. В сыворотке крови этих крыс
были выявлены следующие изменения: резкое пиковое увеличение активности амилазы
(10235.5 Е/л), трипсина (6.65 Е/л) и липазы (19.88 МЕ/л). Эти данные соответствовали
тяжелому острому панкреонекрозу.
К 5 суткам все животные из контрольной группы впали в коматозное состояние и были
выведены из эксперимента путем эвтаназии с забором крови и поджелудочной железы.
В группах терапии фармацевтической композицией отмечали уменьшение летальности
через 24 и 72 часа, особенно при лечении препаратом в дозе 0.1 мкг/кг. У выживших крыс
отмечали частые дефекации черным содержимым кишечника.
Фармацевтическая композиция способствовала увеличению количества выживших
животных с ОП по сравнению с контрольной группой.
Экспериментальная терапия ОП изучаемой фармацевтической композицией
способствовала снижению активности протеолитических ферментов в сыворотке крови.
Данные представлены в таблице 6.
Таблица 6
Влияние фармацевтической композиции на
активность протеолитических ферментов в
крови при остром панкреатите
Экспериментальные группы/доза, мкг/кг
Изучаемые
показатели
Амилаза, МЕ/л
Трипсин,
МЕ/л
Липаза, МЕ/л
Контроль
10235±356
6.65±1.20
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)
8146±162*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)
7911±105*
4.26±0.95*
17.60±1.12*
6230±456
3.47±0.65
6.43±0.52
3 сутки терапии
19.60±1.15
3.80±0.86*/** 13.55±1.03*/**
5 сутки терапии
Контроль
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)
811±148*/** 1.79±0.44*/**
1864±433*
2.14±0.29*
3.35±0.22*
2.2±0.16*
* - P<0,05 по сравнению с контролем; ** P<0,05 по сравнению с дозой
фармацевтической композиции 10 мкг/кг.
Примечание: - животные выведены из
эксперимента в коматозном состоянии.
Терапия фармацевтической композицией в дозах 0.1 и 10 мкг/кг способствовала
снижению активности амилазы, трипсина и липазы. При этом отчетливая разница в
действии двух доз прослеживалась начиная с 3 суток терапии.
Антиоксидантное действие фармацевтической композиции оценивали по влиянию на
активность пероксидазы и тиол-дисульфидный баланс сыворотки крови крыс через 5 дней
терапии.
При ОП отмечали выраженное снижение уровня восстановленных сульфгидрильных
групп крови и увеличение количества окисленных дисульфидных связей, что
характеризовало формирование оксидативного стресса и истощение содержания
сывороточных антиоксидантов. При этом активность пероксидазы крови значимо
увеличивалась.
Терапия фармацевтической композицией на фоне инфузионной терапии положительно
влияла на показатели тиол-дисульфидного равновесия крови и нормализовала активность
пероксидазы. По своему действию на пероксидазную активность и содержание
дисульфидных групп фармацевтическая композиция в дозе 0.1 мкг/кг превосходила
действие 10 мкг/кг и контроля. Данные отражены в таблице 7.
Таблица 7
Влияние фармацевтической
композиции на состояние
антиоксидантной системы крови
при остром панкреатите
Экспериментальные группы/доза,
мкг/кг
Изучаемые
показатели
Сульфгидрильные
группы, мкмоль/л
Дисульфидные
группы, мкмоль/л
81.2±7.6
258.1±8.0
142.5±11.0
Фармацевтическая композиция (0.1
мкг/кг)
23.5±5.4*/**
341.6±12.4*/**
62.1±8.5*/**
Фармацевтическая композиция (10
мкг/кг)
48.4±6.1*
306.2±5.9*
89.0±6.1*
Пероксидаза, мкмоль/мин×мг
5 сутки терапии
Контроль
* - P<0,05 по сравнению с
контролем; ** - P<0,05 по
сравнению с дозой
фармацевтической композиции 10
мкг/кг.
Примечание: - животные
выведены из эксперимента в
коматозном состоянии.
Показатели ткани поджелудочной железы - содержание белка и уровень карбонильных
групп - являются маркерами протеолиза и оксидативного повреждения самой железы при
панкреонекрозе. На фоне терапии фармацевтической композицией (при условиях
инфузионной терапии препаратом Стерофундин Г-5) происходила нормализация этих
показателей, что свидетельствовало о панкреопротективном действии. Данные
представлены в таблице 8.
Таким образом, изучаемая фармацевтическая композиция обеспечивала восстановление
функциональной активности поджелудочной железы крыс с острым панкреонекрозом,
препятствовала ее протеолизу, снижала ферментемию и оказывала антиоксидантное и
антигипотическое действие на фоне инфузионной терапии препаратом «Стерофундин Г5».
Таблица 8
Влияние фармацевтической композиции на уровень
общего белка и карбонильных групп в поджелудочной
железе при остром панкреатите
Экспериментальные группы/доза, мкг/кг
Изучаемые
показатели
Белок, мг/г сырой ткани
ОКГ, нмоль/мг
белка
5 сутки терапии
38.0±4.1
0.514±0.065
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)
77.6±4.4*/**
0.276±0.040*/**
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)
54.9±3.6*
0.359±0.013*
Контроль
* - Р<0,05 по сравнению с контролем; ** - Р<0,05 по
сравнению с дозой фармацевтической композиции 10
мкг/кг.
Примечание: - животные выведены из эксперимента в
коматозном состоянии.
Пример 4. Эффективность применения фармацевтической композиции у больных после
ваготомии с пилоропластикой
Послеоперационные осложнения являются причиной формирования функциональной
недостаточности, нарушений секреторной и моторной функций различных отделов
желудочно-кишечного тракта.
Исследуемую фармацевтическую композицию применяли ежедневно 2 раза в день в
течение 20 дней у 11 больных с состоянием после операции по поводу язвенной болезни
двенадцатиперстной кишки (ваготомия с пилоропластикой).
Больные в различные сроки после операции (от 2 до 10 лет) отмечали нарушение стула,
вздутие живота, урчание в брюшной полости, снижение аппетита.
Все больные ранее получали симптоматическую и патогенетическую терапию по поводу
данного заболевания.
Контрольная группа состояла из 9 больных с аналогичным заболеванием, которым
назначалось традиционное лечение.
В результате проведенного исследования установлено, что применение фармацевтической
композиции способствовало повышению аппетита и устранению диспептических
расстройств.
При гастродуоденоскопии установлено уменьшение воспалительных изменений
слизистой пилорического отдела желудка и двенадцатиперстной кишки.
Очевидно, что нормализация пищеварения у больных с послеоперационными
нарушениями связана с регуляторным воздействием фармацевтической композиции не
только на функцию клеток слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, но и
стимуляцией ферментативной активности дуоденального содержимого.
Фармацевтическая композиция не вызывает побочных эффектов, осложнений и
лекарственной зависимости.
Пример 5. Эффективность применения фармацевтической композиции у больных с
хроническим гепатитом
Исследование проведено на 15 больных в возрасте 27-62 лет. Длительность заболевания
составляла от 3 до 20 лет. У 87% больных в анамнезе был перенесенный вирусный
гепатит, у 13% - токсический гепатит.
Большинство больных предъявляли жалобы на боли в правом подреберье, общую
слабость и быструю утомляемость, у 65% больных отмечались диспептические
расстройства.
Все больные ранее получали симптоматическую и патогенетическую терапию по поводу
данного заболевания.
Исследуемую фармацевтическую композицию применяли ежедневно 2 раза в день в
течение 30 дней.
Контрольная группа состояла из 12 больных с аналогичным заболеванием, которым
назначалось традиционное лечение.
На фоне проводимого лечения 86% больных отмечали исчезновение слабости, повышение
аппетита и работоспособности. У 47% больных значительно снизилась интенсивность
болевого синдрома.
Наиболее значительное внимание при проведении обследования больных уделялось
оценке результатов биохимических исследований, характеризующих
аминотрансферазную активность, пигментную и белковообразовательную функцию
печени.
У 74% обследованных больных отмечались гипербилирубинемия, повышение уровня
аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT) и незначительное
увеличение -глобулиновой фракции белков крови в основном за счет IgM, что
свидетельствует об определенной активности хронического воспалительного процесса.
Применение фармацевтической композиции способствовало нормализации уровня
билирубина, активности АЛТ и ACT (табл.9).
Таблица 9
Влияние фармацевтической композиции на биохимические
показатели периферической крови больных хроническим
гепатитом
До
лечения
После
лечения
Холестерин
5.2±0.5
5.1±0.3
Билирубин
26.7±1.6
21.4±1.2*
ACT
41.3±2.5
31.5±2.4*
АЛТ
54.2±4.5
40.8±2.7*
ГГТ
45.4±3.4
42.6±4.3
Триглицериды
2.5±0.3
2.2±0.2
Показатели (ммоль/л)
* - P<0.05 по сравнению с показателем до лечения.
Исследование иммуноглобулинов периферической крови, являющихся существенным
критерием активности воспалительного процесса, после курса лечения с использованием
фармацевтической композиции показало снижение уровня IgM (табл.10).
Таблица 10
Влияние фармацевтической композиции на иммунологические
показатели у больных хроническим гепатитом
Показатели (г/л)
До
лечения
После
лечения
IgA
2.15±0.06
2.27±0.05
IgM
3.89±0.06
1.40±0.01*
IgG
14.6±1.3
13.2±0.4
* - P<0.05 по сравнению с показателем до лечения.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что применение
фармацевтической композиции у больных хроническим гепатитом способствует
нормализации метаболических процессов в печени, снижению активности
воспалительного процесса и предотвращает гибель гепатоцитов.
Фармацевтическая композиция не вызывает побочных эффектов, осложнений и
лекарственной зависимости.
Пример 6. Эффективность применения фармацевтической композиции у больных с
хроническим панкреатитом
Фармацевтическую композицию применяли ежедневно 2 раза в день в течение 30 дней у
10 больных в возрасте 56-75 лет с диагнозом: Хронический панкреатит, латентная форма.
Контрольная группа состояла из 9 больных с аналогичным заболеванием, которым
назначалось традиционное лечение.
Больные хроническим панкреатитом предъявляли жалобы на потерю аппетита, отрыжку,
метеоризм, урчание в животе, расстройство стула.
Установлено, что применение фармацевтической композиции у больных хроническим
панкреатитом способствовало повышению аппетита и снижению частоты диспептических
расстройств.
При лабораторном исследовании дуоденального содержимого отмечено исходное
снижение активности панкреатических ферментов (табл.11).
Таблица 11
Влияние фармацевтической композиции на активность
пищеварительных ферментов у больных хроническим
панкреатитам
Показатели
Трипсин, ммоль/л
-амилаза, кг/(ч·л)
До
лечения
После
лечения
2.14±0.09
3.2+0.1*
5.2±0.4
7.1±0.2*
* - P<0,05 по сравнению с показателем до лечения.
В результате применения фармацевтической композиции отмечено достоверное
увеличение активности панкреатических ферментов, что коррелирует с улучшением
клинической симптоматики.
Фармацевтическая композиция не вызывает побочных эффектов, осложнений и
лекарственной зависимости.
Таким образом, выявленные при экспериментальном и клиническом изучении
фармакологические свойства фармацевтической композиции свидетельствуют о ее
положительном воздействии на единые патогенетические механизмы
гастроэнтерологических заболеваний и перспективности применения для лечения
воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта.
Формула изобретения
Пероральная фармацевтическая композиция для лечения воспалительных заболеваний
желудочно-кишечного тракта, включающая альгинат натрия, функциональную добавку и
воду, отличающаяся тем, что в качестве функциональной добавки содержит дипептид
глутамил-триптофан в форме мононатриевой соли при следующем соотношении
компонентов в расчете на одну дозу 10 мл (в мг):
глутамил-триптофан 0,01-0,50
альгинат натрия
50-500
вода
остальное