БИОСИНТЕЗ КОФЕРМЕНТА А – УНИВЕРСАЛЬНЫЙ МЕХАНИЗМ

ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯
ÓÄÊ 577.164.14:612.015.6:615.356
ÁÈÎÑÈÍÒÅÇ ÊÎÔÅÐÌÅÍÒÀ À – ÓÍÈÂÅÐÑÀËÜÍÛÉ
ÌÅÕÀÍÈÇÌ ÑÎÏÐßÆÅÍÈß ÝÊÇÎÃÅÍÍÎÑÒÈ
È ÌÍÎÆÅÑÒÂÅÍÍÎÑÒÈ ÔÓÍÊÖÈÉ ÏÀÍÒÎÒÅÍÎÂÎÉ ÊÈÑËÎÒÛ
À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊÎÂ
Èíñòèòóò áèîõèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, Ãðîäíî;
e-mail: [email protected]
Ðîçâèòîê ³äå¿ àêàäåì³êà Ð. Â. ×àãîâöÿ ùîäî ðåãóëÿòîðíî¿ ðîë³ â³òàì³í³â òà ¿õí³õ ïîõ³äíèõ â
îáì³í³ ñ³ðêîâì³ñíèõ ñïîëóê, ôîðìóâàíí³ àíòèîêñèäàíòíî¿ ñèñòåìè îðãàí³çìó, â äîñë³äæåíí³ íåêîôåðìåíòíèõ
ôóíêö³é â³òàì³í³â ãðóïè Â, â³òàì³íçâ’ÿçóâàëüíèõ á³ëê³â ìàëî çíà÷íèé âïëèâ íà á³ëüø í³æ 40-ð³÷íº âèâ÷åííÿ
ìåòàáîë³çìó òà á³îõ³ì³÷íèõ ôóíêö³é ïàíòîòåíîâî¿ êèñëîòè ñï³âðîá³òíèêàìè ãðîäíåíñüêî¿ â³òàì³íîëîã³÷íî¿ øêîëè. Îáãðóíòîâàíî êîíöåïö³þ ñòîñîâíî “âíóòð³øíüîêë³òèííî¿ ñòðóêòóðè ôîíäà êîôåðìåíòíîãî
ïàíòîòåíàòó-ÑîÀ” (âì³ñò òà ñï³ââ³äíîøåííÿ ÑîÀ-SH, àöåòèë-ÑîÀ, êîðîòêîëàíöþãîâèõ òà äîâãîëàíöþãîâèõ àöèë-ÑîÀ, äèñóëüô³äíèõ ôîðì êîôåðìåíòó òà ÑîÀ-S-S-á³ëê³â), ùî º íàéâàæëèâ³øèì ôàêòîðîì
ðåãóëÿö³¿ ìåòàáîë³çìó (çà âêëþ÷åííÿ ðåäîêñ-ïîòåíö³àëó ñèñòåìè ãëóòàò³îíó), çì³íà ÿêîãî º ïðîâ³äíèì
ìåõàí³çìîì ðåàë³çàö³¿ â³òàì³ííî¿ òà ôàðìàêîòåðàïåâòè÷íî¿ àêòèâíîñò³ ïîõ³äíèõ ïàíòîòåíîâî¿ êèñëîòè. ijÿ îñòàíí³õ îïîñåðåäêîâóºòüñÿ ñèñòåìîþ á³îñèíòåçó ÑîÀ, ôîñôîïàíòåòå¿íïðîòå¿í³â, çì³íîþ ð³âíÿ
ÑîÀ-S-S-á³ëê³â, ùî ó ñâîþ ÷åðãó ï³äòðèìóþòü âíóòð³øíüîêë³òèííèé ð³âåíü ÑîÀ-SH òà öèòîçîëüíîì³òîõîíäð³àëüíîãî òðàíñïîðòóâàííÿ éîãî â³òàì³íîâì³ñíèõ ïîïåðåäíèê³â. Âèÿâëåíî óí³âåðñàëüíó ôóíêö³þ
á³îñèíòåçó ÑîÀ â ïîïåðåäæåíí³ ³í³ö³þâàííÿ ïðîöåñ³â ïåðîêñèäíîãî îêèñëåííÿ ë³ï³ä³â òà ðîçâèòêó îêèñëþâàëüíîãî ñòðåñó.
Ê ë þ ÷ î â ³ ñ ë î â à: êîôåðìåíò À (ÑîÀ), á³îñèíòåç ÑîÀ, ïàíòîòåíàòê³íàçà, ÑîÀ-S-S-áåëîê,
ïàíòîòåíîâà êèñëîòà, àöèë-ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ, 4 ′-ôîñôîïàíòåòå¿í, 4 ′-ôîñôîïàíòîòåíîâà êèñëîòà.
Ì
èíóâøèé 2003 ãîä áûë îòìå÷åí âàæíûìè èñòîðè÷åñêèìè âåõàìè â èçó÷åíèè ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû – âèòàìèííîãî ïðåäøåñòâåííèêà êîôåðìåíòà À (ÑîÀ), à
èìåííî 70-ëåòèåì îòêðûòèÿ ýòîãî íåçàìåíèìîãî
ôàêòîðà ïèòàíèÿ (R.Williams, 1933) è, ñïóñòÿ
10 ëåò, åãî êîôåðìåíòíîé ôîðìû â ôåðìåíòàòèâíîé ðåàêöèè àöåòèëèðîâàíèÿ õîëèíà (D. Nachmansohn, 1943). ×åðåç 5 ëåò, â 1948 ã., ÑîÀ áûë
èäåíòèôèöèðîâàí êàê ïàíòîòåíàòñîäåðæàùèé êîôàêòîð (F. Lipmann, 1948) â ïðîöåññàõ N-àöåòèëèðîâàíèÿ, ÷òî ñòàëî îñíîâàíèåì ïðèñóæäåíèÿ
àâòîðó Íîáåëåâñêîé ïðåìèè (÷åðåç 20 ëåò ïîñëå
ðàáîòû D. Nachmansohn). ÑîÀ-çàâèñèìàÿ ðåàêöèÿ àöåòèëèðîâàíèÿ õîëèíà ñòàëà ïðåäìåòîì è
íà÷àëîì èññëåäîâàíèé ïðîöåññîâ àöåòèëèðîâàíèÿ
è áèîñèíòåçà ÑîÀ Ãðîäíåíñêîé áèîõèìè÷åñêîé
øêîëîé, îñíîâàòåëåì è ìíîãîëåòíèì ðóêîâîäèòåëåì êîòîðîé áûë ïðîôåññîð, â ïîñëåäóþùåì
àêàäåìèê ÀÍ ÁÑÑÐ Þ. Ì. Îñòðîâñêèé.
40-ëåòíèé ïåðèîä èññëåäîâàíèé ãðîäíåíñêèõ
áèîõèìèêîâ â îáëàñòè ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû
(ÏÀÊ), ÑîÀ, 100-ëåòíèé þáèëåé êîðèôåÿ ñîâåòñêîé è óêðàèíñêîé âèòàìèíîëîãèè àêàäåìèêà
Ð. Â. ×àãîâöà, åãî òâîð÷åñêàÿ äðóæáà ñ îñíîâàòåëåì Ãðîäíåíñêîé áèîõèìè÷åñêîé øêîëû è áåçóñëîâíîå âëèÿíèå íà ôîðìèðîâàíèå íàó÷íûõ íà-
ïðàâëåíèé â Îòäåëå ðåãóëÿöèè îáìåíà âåùåñòâ
Èíñòèòóòà ÀÍ ÁÑÑÐ, à âïîñëåäñòâèè òàêæå ðÿäà
äðóãèõ ïîäðàçäåëåíèé Èíñòèòóòà áèîõèìèè ÍÀÍ
Áåëàðóñè, ïîñëóæèëè ïîâîäîì äëÿ îöåíêè ïðîéäåííîãî ïóòè êàê óêðàèíñêèìè, òàê è áåëîðóññêèìè ó÷åíûìè è ïëîäîòâîðíîé ðåàëèçàöèè èäåé
àêàäåìèêà Ð. Â. ×àãîâöà. Ðå÷ü èäåò î êîíöåïòóàëüíûõ ïîëîæåíèÿõ, îáîñíîâàííûõ èì îòíîñèòåëüíî ðåãóëÿòîðíîé ðîëè âèòàìèíîâ è èõ ìåòàáîëèòîâ â îáðàçîâàíèè è îáìåíå ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé (ÑîÀ-SH, ãëóòàòèîí-SH, öèñòåèí-SH è äð.), ôîðìèðîâàíèè àíòèîêñèäàíòíîé
ñèñòåìû (ÀÑ) îðãàíèçìà, èçó÷åíèè íåêîôåðìåíòíûõ ôóíêöèé âèòàìèíîâ ãðóïïû Â, âèòàìèíñâÿçûâàþùèõ áåëêîâ [1–3].
Ïðåäìåò ðàññìîòðåíèÿ è èññëåäîâàíèé –
ÏÀÊ (âèòàìèí Â5) – øèðîêî ðàñïðîñòðàíåííûé
â áèîîáúåêòàõ âèòàìèí è ïðåèìóùåñòâåííî â
ôîðìå ÑîÀ èñïîëüçóåìûé â ìíîãî÷èñëåííûõ ðåàêöèÿõ ïåðåíîñà àöèëîâ, îñóùåñòâëåíèè êëþ÷åâûõ ýíåðãåòè÷åñêèõ öèêëîâ â ìèòîõîíäðèÿõ. Ïî
îöåíêå Ð. Â. ×àãîâöà, ýññåíöèàëüíîñòü ÏÀÊ ñîîòâåòñòâóåò ôåíîìåíó âòîðè÷íîé ãåòåðîòðîôíîñòè ó ìëåêîïèòàþùèõ [2], ÷òî ïîäòâåðæäåíî íàìè
â ñïåöèàëüíîì èññëåäîâàíèè [4].  îòëè÷èå îò
ðÿäà äðóãèõ êîôåðìåíòîâ (íàïðèìåð íèêîòèíàìèäíûõ è ðèáîôëàâèíîâûõ) êàòàëèòè÷åñêèå ôóíê-
68
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊÎÂ
öèè ÑîÀ-SH ðåàëèçóþòñÿ ñâîáîäíîé (íåïðîòåèíèçèðîâàííîé) ôîðìîé êîôåðìåíòà, êîòîðàÿ ïðèñóòñòâóåò âî âñåõ áèîëîãè÷åñêèõ îáúåêòàõ, íàïðèìåð â òêàíÿõ ìëåêîïèòàþùèõ â êîíöåíòðàöèè 20–140 íìîëü/ã ñûðîé òêàíè. Ñóììàðíîå
ñîäåðæàíèå ôðàêöèé ÑîÀ, âêëþ÷àÿ ÑîÀ-SH, àöåòèë-ÑîÀ, äðóãèå àöèë-ÑîÀ, äèñóëüôèäíûå ïðîèçâîäíûå ñîñòàâëÿþò âåëè÷èíó, ïðåâûøàþùóþ
óêàçàííóþ â 2,5–3,0 ðàçà. Íàïðèìåð, â ïå÷åíè
áåëûõ êðûñ, ïîëó÷àþùèõ ñáàëàíñèðîâàííûé ðàöèîí, ñóììàðíîå êîëè÷åñòâî ÑîÀ (îáùåãî êîôåðìåíòà) ïðèáëèæàåòñÿ ê 450 íìîëü/ã ñûðîé òêàíè. Ê êîíöó 70-õ ãîäîâ âûÿñíèëîñü, ÷òî ñóùåñòâóåò êëàññ ôîñôîïàíòåòåèíïðîòåèíîâ, ó÷àñòâóþùèõ â íåêîòîðûõ ñëîæíûõ öèêëè÷åñêèõ ïðîöåññàõ áèîñèíòåçà æèðíûõ êèñëîò, àíòèáèîòèêîâ, êàòàëèçèðóåìûõ ìóëüòèôåðìåíòíûìè êîìïëåêñàìè, â ÷àñòíîñòè ñèíòåòàçîé æèðíûõ êèñëîò [5]. Íàèáîëåå òðóäíóþ ïðîáëåìó â áèîõèìèè
ÑîÀ ïðåäñòàâëÿëî íå ñòîëüêî êîëè÷åñòâåííîå
îïðåäåëåíèå ôðàêöèé ÑîÀ (ÑîÀ-SH, êèñëîòîðàñòâîðèìûõ è êèñëîòîíåðàñòâîðèìûõ àöèë-ÑîÀ),
ñêîëüêî äèôôåðåíöèðîâàííûé ó÷åò ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ – ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ. Óæå ê êîíöó
60-õ ãîäîâ ñòàëî î÷åâèäíûì, ÷òî îïðåäåëåííûå
êîëè÷åñòâà ïîñëåäíèõ (4′-ôîñôîïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà, 4′-ôîñôîïàíòîòåíîèëöèñòåèí, 4′-ôîñôîïàíòåòåèí, äåôîñôî-ÑîÀ, ïàíòåòèí) èäåíòèôèöèðóþòñÿ â òêàíÿõ ìëåêîïèòàþùèõ. Òåì ñàìûì
áûë îïðîâåðãíóò âàæíûé ïîñòóëàò, âûòåêàþùèé
èç èòîãîâ èññëåäîâàíèé Å. Lipmann î òîì, ÷òî
åäèíñòâåííîé ìåòàáîëè÷åñêè àêòèâíîé ôîðìîé
ÏÀÊ ÿâëÿåòñÿ ÑîÀ [5]. Îòêðûëèñü ïåðñïåêòèâû
èçó÷åíèÿ øèðîêîãî ñïåêòðà ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ,
êàê ïîòåíöèàëüíûõ âèòàìèííûõ è ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ, êîòîðûå ïðîâîäèëèñü ïðàêòè÷åñêè
îäíîâðåìåííî â Îòäåëå ðåãóëÿöèè îáìåíà âåùåñòâ
ÀÍ ÁÑÑÐ è íà êàôåäðå áèîõèìèè Îäåññêîãî
óíèâåðñèòåòà èì. È. È. Ìå÷íèêîâà. Íà I Âñåñîþçíîì ñèìïîçèóìå ïî áèîõèìèè ñèíòåçà è îáìåíà êîôåðìåíòîâ è êîôåðìåíòíûõ âèòàìèíîâ
(Êèåâ, ÿíâàðü 1972 ã.), îðãàíèçîâàííûì àêàäåìèêîì Ð. Â. ×àãîâöåì, âïåðâûå áûëè äîëîæåíû
äàííûå ïî áèîäîñòóïíîñòè ïðîèçâîäíûõ ÏÀʖ
ÏÀÊ-Ñà, 4′-ôîñôî-ÏÀÊ-Ñà, ïàíòåíîëà, S-áåíçîèëïàíòåòåèíà, ïàíòåòèíà (ÏÒ), 4′-ôîñôî-áåíçîèëïàíòåòåèíà. Ðåçóëüòàòû ïîêàçàëè, ÷òî ôîñôîðèëèðîâàííûå ïðîèçâîäíûå âèòàìèíà, à òàêæå ïàíòåòèí, ÿâëÿþòñÿ ýôôåêòèâíî óòèëèçèðóåìûìè ïðåïàðàòàìè, ñïîñîáíûìè ñòèìóëèðîâàòü
áèîñèíòåç ÑîÀ, è îáëàäàþò âûñîêîé ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ [6]. Ðåçóëüòàòèâíûé è êâàëèôèöèðîâàííûé ñèíòåç ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ îáåñïå÷èâàëñÿ ñîòðóäíè÷åñòâîì ñ êîëëåêòèâîì ëàáîðàòîðèè ãåòåðîöèêëè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé ÂÍÈÂÈ
(Â. È. Ãóíàð, Â. Ì. Êîïåëåâè÷, Ã. Ñ. Êîçëîâà,
Ò. Ä. Ìàðèåâà, ÍÏÎ “Âèòàìèíû”), â òîì ÷èñëå
íàïðàâëÿåìûìè íà ó÷åáó è ñòàæèðîâêó ñîòðóäíèêàìè èç Ãðîäíî (À. Â. Ëûñåíêîâà, Ò. Â. Äåäîâè÷ è äð.). Ñèíòåç 4′-ôîñôîïàíòîòåíîâîé êèñëîòû, ïàíòåòåèíà, ôîñôàòíûõ ïðîèçâîäíûõ ïàíòåòèíà è S-ñóëüôîïàíòåòåèíà áûë ðåàëèçîâàí íà
ïðèîðèòåòíîì óðîâíå [7–10].
 1977 ã. íàìè áûë îðãàíèçîâàí ìåæðåñïóáëèêàíñêèé ñèìïîçèóì “Õèìèÿ, áèîõèìè÷åñêèå ôóíêöèè è ïðèìåíåíèå ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû”, êîòîðûé ïîçâîëèë îáúåäèíèòü è ñêîîðäèíèðîâàòü óñèëèÿ ïðàêòè÷åñêè âñåõ ó÷åíûõ ÑÑÑÐ,
ðàáîòàâøèõ â äàííîé îáëàñòè âèòàìèíîëîãèè.
Ãëàâíûì íàó÷íûì èòîãîì ðàáîòû ñèìïîçèóìà
ÿâèëîñü îáîñíîâàíèå àêòóàëüíîñòè èññëåäîâàíèé
ïî áèîñèíòåçó ÑîÀ, äåòàëüíîìó èçó÷åíèþ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ, íåîáõîäèìîñòè ñîâåðøåíñòâîâàíèÿ ìåòîäîëîãèè èññëåäîâàíèé áèîòðàíñôîðìàöèè ïàíòîòåíàòîâ [11]. Ñ 1980 ã. ñîãëàñîâàííàÿ
ïðîãðàììà, â ÷àñòíîñòè ïî èçó÷åíèþ 4′-ôîñôîïàíòîòåíîâîé êèñëîòû, ïîñëåäîâàòåëüíî ðåàëèçóåòñÿ â íàó÷íûõ ó÷ðåæäåíèÿõ Ãðîäíî, Ìîñêâû,
Îäåññû, Êèåâà, Ðèãè, Âèëüíþñà, Èðêóòñêà è
×èòû.  ñîîòâåòñòâèè ñ ïîñòàíîâëåíèåì Áþðî
Ïðåçèäèóìà ÀÍ ÁÑÑÐ îò 2 èþëÿ 1981 ã. íà îñíîâå íàó÷íîé ãðóïïû áèîõèìèè ñåðîñîäåðæàùèõ
âèòàìèíîâ (ðóê. – ê.ì.í. À. Ã. Ìîéñååíîê) áûëà
ñôîðìèðîâàíà ëàáîðàòîðèÿ êîôåðìåíòîâ â ñòðóêòóðå Îòäåëà ðåãóëÿöèè îáìåíà âåùåñòâ ÀÍ ÁÑÑÐ
( ñ 1985 ã. Èíñòèòóò áèîõèìèè). Óòâåðæäåíî íàó÷íîå íàïðàâëåíèå : “Èçó÷åíèå îáìåíà ïðèðîäíûõ ñîåäèíåíèé ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû â îðãàíèçìå æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà, âêëþ÷àÿ èññëåäîâàíèÿ ìåõàíèçìîâ ðåãóëÿöèè ïàíòîòåíàòñîäåðæàùèõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì, ìåõàíèçìîâ ðåãóëÿöèè
ñèñòåì áèîñèíòåçà è ðàñïàäà êîôåðìåíòà àöåòèëèðîâàíèÿ”. Ìåòîäè÷åñêîé îñíîâîé âûïîëíÿåìûõ èññëåäîâàíèé ñòàëè îðèãèíàëüíûå èëè ìîäèôèöèðîâàííûå ìåòîäû îïðåäåëåíèÿ ÏÀÊ ìåòîäîì ÃÆÕ [12], èññëåäîâàíèå áèîòðàíñôîðìàöèè âèòàìèíñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé íà îñíîâå
ðàäèîíóêëèäíîé äåòåêöèè [13], îïðåäåëåíèå ôîñôîïàíòîòåíîâîé êèñëîòû [14], îïðåäåëåíèå àêòèâíîñòè ÏÀÊ-êèíàçû ðàäèîìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì [15], äèôôåðåíöèðîâàííîå îïðåäåëåíèå êîðîòêîöåïî÷å÷íûõ èëè äëèííîöåïî÷å÷íûõ àöèëÑîÀ íà îñíîâå 2-îêñîãëóòàðàòäåãèäðîãåíàçíîé
ðåàêöèè [16], îïðåäåëåíèå ñâîáîäíîãî ÑîÀ, êîðîòêîöåïî÷å÷íûõ àöèë-ÑîÀ, â òîì ÷èñëå àöåòèëÑîÀ íà îñíîâå ôîñôîòðàíñàöåòèëàçíîé ðåàêöèè
[17], îïðåäåëåíèå ÏÀÊ-áåëêîâûõ êîìïëåêñîâ
öèòîçîëÿ ãåïàòîöèòîâ íà îñíîâå ãåëü-ôèëüòðàöèè è èîíîîáìåííîé õðîìàòîãðàôèè [18], èçó÷åíèå ìåõàíèçìîâ òðàíñïîðòà ÏÀÊ â òîíêîì êèøå÷íèêå [19], êîìïëåêñíûå ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ [20], èñ-
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
69
ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯
ñëåäîâàíèå áèîòðàíñôîðìàöèè ìå÷åíûõ ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ íà îñíîâå ÂÝÆÕ [21].
 ñóùíîñòè, ê ñåðåäèíå 80-õ ãîäîâ áûëà ðàçðàáîòàíà ñîâðåìåííàÿ ìåòîäîëîãèÿ èññëåäîâàíèé,
ïîçâîëÿþùàÿ âñåñòîðîííå ðåøàòü íàó÷íûå çàäà÷è â ðàìêàõ íàó÷íîãî íàïðàâëåíèÿ ëàáîðàòîðèè
êîôåðìåíòîâ, à òàêæå âûïîëíÿòü íàó÷íî-òåõíè÷åñêèå è ïðèêëàäíûå ðàçðàáîòêè, ôèíàíñèðóåìûå ÍÏÎ “Âèòàìèíû” [22].
Êàê èçâåñòíî, èçìåíåíèå ñòðóêòóðû âíóòðèêëåòî÷íîãî ôîíäà ÑîÀ èëè, èíà÷å ãîâîðÿ, ñîîòíîøåíèå äåòåêòèðóåìûõ ôðàêöèé ÑîÀ (ÑîÀSH/àöåòèë-ÑîÀ, àöèë-ÑîÀ/îáùèé ÑîÀ è äð.)
ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ðåãóëÿòîðíûì ôàêòîðîì ìåòàáîëèçìà óãëåâîäîâ è ëèïèäîâ. Íàïðèìåð ïèðóâàòäåãèäðîãåíàçà èíãèáèðóåòñÿ âûñîêèì îòíîøåíèåì àöåòèë-ÑîÀ/ÑîÀ, òîãäà êàê ïèðóâàòêàðáîêñèëàçà àêòèâèðóåòñÿ èçáûòêîì àöåòèë-ÑîÀ [23].
Áîëåå ïîäðîáíî ìåòàáîëè÷åñêàÿ ðîëü èçìåíåíèé
ñòðóêòóðû âíóòðèêëåòî÷íîãî ôîíäà ÑîÀ èçëîæåíà â öèêëå ðàáîò Ð. Garland, P. Randle, J. Williamson, îáîáùåíà â èçâåñòíîé ìîíîãðàôèè
Å. Íîñõîëìà è Ê. Ñòàðà [24] è, ÷àñòè÷íî, â íàøåé ìîíîãðàôèè [25]. Ñîáñòâåííûå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî àëèìåíòàðíàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü
âèòàìèíà Â5 â îðãàíèçìå æèâîòíûõ ïðèâîäèò ê
âûðàæåííîìó ñíèæåíèþ îáùåãî êîëè÷åñòâà ÑîÀ
â ïå÷åíè è ðÿäå äðóãèõ òêàíåé. Êîëè÷åñòâî ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ (4′-ôîñôî- è äåôîñôî-ÑîÀ-ïàíòåòåèíà) ïîäâåðãàåòñÿ áûñòðîìó
ñíèæåíèþ è íà ãëóáîêèõ ñòàäèÿõ âèòàìèííîé
íåäîñòàòî÷íîñòè ñîñòàâëÿåò 50–60% îò óðîâíÿ,
íàáëþäàåìîãî ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àþùèõ ñáàëàíñèðîâàííûé ðàöèîí.  òî æå âðåìÿ ââåäåíèå
ïîñëåäíèì ðàçëè÷íûõ ïðåïàðàòîâ ÏÀÊ âûçûâàåò çíà÷èòåëüíûå è íåðàâíîöåííûå èçìåíåíèÿ ñîäåðæàíèÿ ÑîÀ-SH è åãî àöèëèðîâàííûõ ïðîèçâîäíûõ, à òàêæå ñîäåðæàíèÿ ïðåäøåñòâåííèêîâ
êîôåðìåíòà â ïå÷åíè. Òåì ñàìûì âïåðâûå áûëè
ïîëó÷åíû äàííûå, ïîçâîëÿþùèå ñäåëàòü âûâîä
î ñóùåñòâîâàíèè îïðåäåëåííûõ îñîáåííîñòåé âî
âçàèìîîòíîøåíèÿõ ÏÀÊ – ïðåäøåñòâåííèêîâ
ÑîÀ è ñèñòåìû áèîñèíòåçà ÑîÀ [11,18,25].
Íàèáîëåå âåðîÿòíûì ìåõàíèçìîì, îáóñëîâëèâàþùèì ñòîëü î÷åâèäíûå ðàçëè÷èÿ èíèöèèðîâàíèÿ áèîñèíòåçà ÑîÀ ïðè ââåäåíèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ, ìîæåò áûòü èõ ðàçëè÷íàÿ áèîäîñòóïíîñòü è õàðàêòåð âçàèìîäåéñòâèÿ ñ êëþ÷åâûì
ôåðìåíòîì áèîñèíòåçà êîôåðìåíòà – ïàíòîòåíàòêèíàçîé (2.7.1.33). Èíãèáèòîðàìè àêòèâíîñòè
ôåðìåíòà ÿâëÿåòñÿ ÑîÀ-SH, äåôîñôî-ÑîÀ, ôîñôîïàíòåòåèí è ðàçëè÷íûå àöèë-ÑîÀ. Ïðè Êi ïàíòîòåíàòêèíàçû, ðàâíîé 0,25 ìÌ, ôèçèîëîãè÷åñêàÿ êîíöåíòðàöèÿ ôîñôîïàíòåòåèíà è ÑîÀ ðàâíÿåòñÿ 0,2–0,36 ìÌ. Ïîñêîëüêó òêàíåâîå ñîäåðæàíèå ñâîáîäíîé ôîðìû ÑîÀ-SH ñîñòàâëÿåò
òîëüêî ÷àñòü óêàçàííîé âåëè÷èíû, ñóììàðíûé
“ñäåðæèâàþùèé” ýôôåêò áèîñèíòåçà ÑîÀ äîïîëíèòåëüíî îáåñïå÷èâàþò àöèë-ÑîÀ, ïðåæäå âñåãî
àöåòèë-ÑîÀ, ïðîïèîíèë-ÑîÀ, ïàëüìèòîèë-ÑîÀ è
äðóãèå àêòèâèðîâàííûå àöèëû [5,25,26]. Àíàëèç
ñîîòíîøåíèÿ óðîâíÿ ÑîÀ-SH, äëèííîöåïî÷å÷íûõ
àöèë-ÑîÀ è îáùåãî ÑîÀ îáíàðóæèâàåò çíà÷èòåëüíûå èçìåíåíèÿ â ñòðóêòóðå òêàíåâîãî ôîíäà
êîôåðìåíòà, ïðîèñõîäÿùèå ïðè ââåäåíèè ðàçëè÷íûõ ïðåïàðàòîâ ÏÀÊ (ðèñ. 1), ÷òî ñîïðîâîæäàåòñÿ êà÷åñòâåííûìè è êîëè÷åñòâåííûìè èçìåíåíèÿìè óðîâíÿ ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ,
à òàêæå àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ ñèíòåçà è ãèäðîëèçà àöèë-ÑîÀ ãåïàòîöèòîâ [25].
Ðàñøèðåííûå èññëåäîâàíèÿ, ïðîâîäèìûå ñ
îñíîâíîé âèòàìèííîé è ëåêàðñòâåííîé ôîðìîé
âèòàìèíà Â5 – ÏÀÊ-Ñà, ïîêàçàëè, ÷òî â ïå÷åíè
ïîëîâîçðåëûõ áåëûõ êðûñ ñóùåñòâåííîå óâåëè÷åíèå îáùåãî ÑîÀ äîñòèãàåòñÿ îäíîêðàòíîé
èíúåêöèåé ïðåïàðàòà â äîçå, ðàâíîé èëè âûøå
30 ìã/êã ìàññû òåëà. Ïîâûøåíèå îáùåãî ÑîÀ
èìååò õàðàêòåðíûé ìàêñèìóì ñïóñòÿ 6 ÷ îò ìîìåíòà èíúåêöèè è íå ñîïðîâîæäàåòñÿ èçìåíåíèåì ñòðóêòóðû ôîíäà êîôåðìåíòà â ïå÷åíè, â ÷àñòíîñòè ñîîòíîøåíèÿ ÑîÀ-SH/îáùèé ÑîÀ. Îäíàêî êóðñîâîå ââåäåíèå ïàíòîòåíàòà (ñóììàðíàÿ äîçà
300 ìã/êã ìàññû òåëà) óâåëè÷èâàåò óðîâåíü îáùåãî ÑîÀ â ïå÷åíè íà 52% ïðè îäíîâðåìåííîì
ñíèæåíèè êîýôôèöèåíòà ÑîÀ-SH/îáùèé ÑîÀ
[25,27]. Êàê âïåðâûå ïîêàçàíî â ëàáîðàòîðèè
À. ß. Ðîçàíîâà, ïðè èíúåêöèîííîì ââåäåíèè ïðåïàðàòîâ ÏÀÊ æèâîòíûì íàáëþäàþòñÿ îñöèëëÿöèè óðîâíÿ ìåòàáîëèòîâ âèòàìèíà, â ò.÷. ÑîÀ, â
ðàçëè÷íûõ òêàíÿõ è ïðîÿâëÿþòñÿ â áûñòðîì ïåðâè÷íîì (15–60 ìèí) è ìåäëåííîì âòîðè÷íîì (4–
70
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
0,5
0,4
Ñîîòíîøåíèå CoASH/îáùèéCoA
ÑîA-SH/ îáùèé ÑîÀ
Ñîîòíîøåíèå àöèë-CoA/îáùèé CoA
0,4
0,37
0,29
0,3
0,27
0,26
0,25
0,2
0,2
0,22
0,19
0,17
0,1
0
1
2
3
4
5
Ðèñ. 1. Èçìåíåíèå ñîîòíîøåíèÿ ÑîÀ-SH/îáùèé
ÑîÀ è äëèííîöåïî÷å÷íûå àöèë-ÑîÀ/îáùèé ÑîÀ â
ïå÷åíè áåëûõ êðûñ ïîñëå êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â äîçå 30 ìã/êã ìàññû òåëà, ýêâèìîëÿðíîé ÏÀÊ-Ñà. 1 – êîíòðîëü; 2 – ÏÀÊ-Ñà; 3 –
ïàíòåíîë; 4 – ôîñôî-ÏÀÊ-Ñà; 5 – ïàíòåòèí [25].
À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊÎÂ
6 ÷) èõ íàêîïëåíèè, îáóñëîâëåííîì ðåòðîèíãèáèðîâàíèåì ïàíòîòåíàòêèíàçíîé ðåàêöèè (ñì.
âûøå), à òàêæå ïå÷åíî÷íî-êèøå÷íîé ðåöèðêóëÿöèåé ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ [11,28].
Äåòàëèçàöèÿ âûøåóêàçàííîãî ýêñïåðèìåíòàëüíîãî ïîäõîäà è èñïîëüçîâàíèå ñîâðåìåííîãî
ìåòîäà ðàçäåëåíèÿ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ ñ ïîìîùüþ õðîìàòîãðàôèè íà ñåðâàöåëå ÄÝÀÝ 23SH
[29] ïðèâåëè ê íåîæèäàííûì ðåçóëüòàòàì. Ïîñëå
îäíîêðàòíîãî ïîäêîæíîãî ââåäåíèÿ [14Ñ]-ðàäèîíóêëèäîâ ÏÀÊ-Ñà, ôîñôî-ÏÀÊ è ÏÒ â äîçå
36 ìêìîëü/êã (0,12 ìêÊè/ìêìîëü) ÷åðåç 10, 30,
60, 180 è 360 ìèí â ïå÷åíè êðûñ ñ íåäîñòàòî÷íîñòüþ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû âûÿâëåíû ñóùåñòâåííûå ðàçëè÷èÿ â íàêîïëåíèè â íåé ðàäèîàêòèâíûõ ïðåïàðàòîâ è èõ ìåòàáîëèòîâ âî âðåìåíè.
Íàèáîëåå âàæíûì â îöåíêå áèîòðàíñôîðìàöèè
ïðåïàðàòîâ [14C]-ïàíòîòåíàòà è åãî ïðîèçâîäíûõ
ÿâëÿåòñÿ îïðåäåëåíèå èõ âêëþ÷åíèÿ âî ôðàêöèþ
êîôåðìåíòà. Íàðàñòàþùàÿ âî âðåìåíè èíêîðïîðàöèÿ ðàäèîíóêëèäà âî ôðàêöèþ ÑîÀ ïå÷åíè îáåñïå÷èâàåòñÿ èíúåêöèåé ÏÀÊ-Ñà. Ñðàâíèòåëüíûé
àíàëèç áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ-Ñà è ÏÒ äî ñòàäèè îáðàçîâàíèÿ êîôåðìåíòà ñâèäåòåëüñòâóåò î
ïðåäïî÷òèòåëüíîì èñïîëüçîâàíèè ñèñòåìîé áèîñèíòåçà ÑîÀ ñâîáîäíîãî âèòàìèíà ïî ñðàâíåíèþ
ñ ÏÒ. Ýòî îòìå÷åíî ïî ñêîðîñòè áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ-Ñà â ôîñôîðèëèðîâàííûå ìåòàáîëèòû
ÑîÀ, ÑîÀ è ïî ïðîäîëæèòåëüíîñòè íàêîïëåíèÿ
ìåòàáîëèòîâ, à òàêæå ïî àáñîëþòíîé âåëè÷èíå
âíåäðåíèÿ ðàäèîíóêëèäà â áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûå ôîðìû âèòàìèíà [25].
Äëÿ îöåíêè âîçìîæíîñòè ïðîòåèíèçàöèè
ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ è âåðîÿòíîé âçàèìîñâÿçè îáðàçîâàíèÿ ÏÀÊ-áåëêîâûõ êîìïëåêñîâ (ÏÁÊ) ñ
áèîòðàíñôîðìàöèåé ÏÀÊ-ïðîèçâîäíûõ, èññëåäîâàíèÿ áûëè ïðîâåäåíû íà æèâîòíûõ, ïîëó÷àþùèõ ÏÀÊ-äåôèöèòíûé ðàöèîí â òå÷åíèå 12 íåäåëü.
Æèâîòíûì ââîäèëè ïîäêîæíî D,L-[14C]ÏÀÊ-Ñà
èëè D,L-[ 14C]ÏÒ, èëè D,L-[ 14C]ôîñôî-ÏÀÊ
(óäåëüíàÿ àêòèâíîñòü 3,5⋅10-3 ÌÁê/ìêìîëü) îäíîêðàòíî â äîçå 68 ìêìîëü/êã íà ïåðèîä 6 ÷.
Ñóäÿ ïî ðåçóëüòàòàì ðàäèîõðîìàòîãðàôè÷åñêèõ
èññëåäîâàíèé, íàèáîëåå âûñîêàÿ ñòåïåíü áèîòðàíñôîðìàöèè äî ìåòàáîëèòîâ, îòíîñÿùèõñÿ ê ôðàêöèè III (äåôîñôî-ÑîÀ + ÑîÀ), íàáëþäàåòñÿ â
ñëó÷àÿõ ââåäåíèÿ ÏÀÊ-Ñà è ôîñôî-ÏÀÊ (20–
25% âñåãî òêàíåâîãî ðàäèîíóêëèäà ó êîíòðîëüíûõ
æèâîòíûõ è 38–41% ó æèâîòíûõ ñ íåäîñòàòî÷íîñòüþ ÏÀÊ). Áèîòðàíñôîðìàöèÿ ÏÒ ïðîèñõîäèò ïðåèìóùåñòâåííî äî íåíóêëåîòèäíûõ ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ (ôðàêöèÿ II), êîòîðàÿ ñîäåðæàëà
57–64% âñåé òêàíåâîé ðàäèîàêòèâíîñòè. Îòíîñèòåëüíûé óðîâåíü ðàäèîíóêëèäà âî ôðàêöèè
ÑîÀ (ôðàêöèÿ III) ïå÷åíè æèâîòíûõ ñ âèòàìèííîé íåäîñòàòî÷íîñòüþ áûë âûøå, ÷åì â êîíòðîëå [18]. Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ ðàäèîíóêëèäîâ
â ñîñòàâå ÏÁÊ öèòîçîëÿ êëåòîê ïå÷åíè ïîêàçàëè, ÷òî ïðåïàðàò ôîñôî-ÏÀÊ èëè åãî ìåòàáîëèò
íàèáîëåå ýôôåêòèâíî ñâÿçûâàåòñÿ â ÏÁÊ ê øåñòè ÷àñàì ïîñëå èíúåêöèè è ïðè ýòîì óðîâåíü
ïðîòåèíèçàöèè ðàäèîíóêëèäà ñóùåñòâåííî âîçðàñòàåò â óñëîâèÿõ ÏÀÊ-âèòàìèííîé íåäîñòàòî÷íîñòè.
Ñîïîñòàâëåíèå äàííûõ ïðîòåèíèçàöèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ è ñòåïåíè èõ áèîòðàíñôîðìàöèè
â ïðîìåæóòî÷íûå ìåòàáîëèòû áèîñèíòåçà ÑîÀ è
ñàì êîôåðìåíò ïîçâîëèëî ïðåäïîëîæèòü íàëè÷èå îïðåäåëåííûõ âçàèìîîòíîøåíèé õàðàêòåðà
ïðîòåèíèçàöèè ÏÀÊ-ñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé â
öèòîçîëå è ïðîöåññîâ èõ âíóòðèêëåòî÷íîãî ðàñïðåäåëåíèÿ èëè äåïîíèðîâàíèÿ, ïðîòåêàþùèõ
ñèíõðîííî ñ âíóòðèêëåòî÷íûì áèîñèíòåçîì ÑîÀ
[13,18,25].
Íà ñëåäóþùåì ýòàïå ðàáîòû íàìè ïðîâîäèëîñü èçó÷åíèå áèîòðàíñôîðìàöèè ïðåïàðàòà [14C]ÏÀÊ-Na ñ âûñîêîé óäåëüíîé àêòèâíîñòüþ
55,2 ìÊè/ììîëü ïðè åãî âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè íîðìàëüíûì è Â5-àâèòàìèíîçíûì æèâîòíûì â äîçå 0,33 ìêìîëü/êã. Íà ïðîòÿæåíèè èçáðàííîãî ñðîêà èññëåäîâàíèÿ (10–60 ìèí) îòìå÷åíû âîëíîîáðàçíûå èçìåíåíèÿ îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè, ïðè÷åì åå óðîâåíü â ïå÷åíè ïàíòîòåíàòäåôèöèòíûõ æèâîòíûõ ïðàêòè÷åñêè âî âñå
ñðîêè èññëåäîâàíèÿ îêàçàëñÿ ñóùåñòâåííî âûøå
îòíîñèòåëüíî êîíòðîëÿ. Ðåçóëüòàòû ðàäèîõðîìàòîãðàôè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ãîìîãåíàòîâ ïå÷åíè íîðìàëüíûõ è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ áåëûõ êðûñ
(ðèñ. 2) ïîäòâåðæäàþò äàííûå ïðåäûäóùèõ èññëåäîâàíèé [25] î ñóùåñòâîâàíèè òðåõ îñíîâíûõ
ôðàêöèé ðàäèîàêòèâíûõ ïðîèçâîäíûõ âèòàìèíà, ïðåäñòàâëåííûõ ÏÀÊ (ôðàêöèÿ I), ôîñôîÏÀÊ è ôîñôîïàíòåòåèí (ôðàêöèÿ II) è ÑîÀ
(ôðàêöèÿ III). Ìèíîðíûìè êîìïîíåíòàìè ýòèõ
ôðàêöèé ìîãëè ñîîòâåòñòâåííî ÿâëÿòüñÿ: ÏÒ, ôîñôîïàíòîòåíîèëöèñòåèí, äåôîñôî-ÑîÀ.
Ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò, ÷òî ïîëíûé ïðîöåññ áèîòðàíñôîðìàöèè ðàäèîíóêëèäà ÏÀÊ â
ïå÷åíè êàê íîðìàëüíûõ, òàê è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ æèâîòíûõ îñóùåñòâëÿåòñÿ äîñòàòî÷íî áûñòðî (âíåäðåíèå âî ôðàêöèþ ÑîÀ íàáëþäàåòñÿ ÷åðåç 10 ìèí îò íà÷àëà ýêñïåðèìåíòà). Îäíàêî ê
60 ìèí îïûòà, âñëåäñòâèå áîëåå áûñòðîãî è èíòåíñèâíîãî îáðàçîâàíèÿ ôîñôîðèëèðîâàííûõ
ïðåäøåñòâåííèêîâ êîôåðìåíòà, óðîâåíü ðàäèîàêòèâíîñòè ôðàêöèè ÑîÀ ïðè Â5-íåäîñòàòî÷íîñòè îêàçàëñÿ â 1,8 ðàçà âûøå (ðèñ. 2).
 öèòîçîëå ïå÷åíè ýòèõ æå ïîäîïûòíûõ æèâîòíûõ íàáëþäàåòñÿ óâåëè÷åíèå óðîâíÿ ðàäèîíóêëèäà ÑîÀ (ôðàêöèÿ III) ñ 1–4 (10–30 ìèí) äî
6 (45 ìèí) è 28% (60 ìèí) ó íîðìàëüíûõ æèâîòíûõ (ðèñ. 3). Ñîîòâåòñòâåííî ðàäèîàêòèâíîñòü
ôðàêöèè ñâîáîäíîé ÏÀÊ ñíèæàëàñü ñ 76–87%
îò îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè öèòîçîëÿ äî 55 (45 ìèí)
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
71
ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯
3
õ 10
à
3
*
120
*
I
II
60
40
20
0
10
20
30
45
60
à
100
Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1
80
·
Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1
õ 10
I
II
80
60
*
40
20
0
ìèí
10
Âðåìÿ, ìèí
3
*
I
II
*
3
30
40
*
20
30
45
ìèí
õ 10
*
*
á
*
*
I
II
20
10
0
0
10
20
30
45
ì
60
10
20
30
45
Âðåìÿ, ìèí
60
ìèí
Âðåìÿ,ìèí
3
õ 10
12
80
*
60
I
II
*
*
40
20
ã
·
â
-1
Èìï⋅ìèí1 -1⋅ã
1
3
õ 10
100
Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1
60
Âðåìÿ, ìèí
Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1
á
60
·
Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1
õ 10
20
â
8
*
I
II
*
*
*
*
4
0
0
10
20
30
45
60
ì
Âðåìÿ, ìèí
10
20
30
45
60
ìèí
Âðåìÿ, ìèí
Ðèñ. 2. Äèíàìèêà ñîäåðæàíèÿ ðàäèîàêòèâíûõ ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ âî ôðàêöèÿõ ÏÀÊ (à), ôîñôîðèëèðîâàííûõ íåíóêëåîòèäíûõ (á) è íóêëåîòèäíûõ
(â) ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â ãîìîãåíàòå ïå÷åíè íîðìàëüíûõ (I) è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ (II) êðûñ; * p < 0,05
ïî îòíîøåíèþ ê I ãðóïïå.
Ðèñ. 3. Äèíàìèêà ñîäåðæàíèÿ ðàäèîàêòèâíûõ ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ âî ôðàêöèÿõ ÏÀÊ (à), ôîñôîðèëèðîâàííûõ íåíóêëåîòèäíûõ (á) è íóêëåîòèäíûõ
(â) ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â öèòîçîëå ïå÷åíè íîðìàëüíûõ (I) è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ (II) êðûñ; * p < 0,05
ïî îòíîøåíèþ ê I ãðóïïå.
è 28% (60 ìèí). Ó ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ êðûñ ïðîöåññ áèîòðàíñôîðìàöèè âèòàìèíà áûë äîñòàòî÷íî çàìåòåí óæå íà 20-é ìèíóòå îïûòà, êîãäà ôðàêöèÿ II ñîäåðæàëà 37% ðàäèîíóêëèäà, à ÑîÀ –
14%.
Íà îñíîâàíèè ýòèõ èññëåäîâàíèé ìîæíî
êîíñòàòèðîâàòü, ÷òî öèòîçîëü ïå÷åíè ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé íå òîëüêî êëåòî÷íûé êîìïàðòìåíò
èíòåíñèâíîé áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ, ãäå îñóùåñòâëÿþòñÿ âñå ýòàïû áèîñèíòåçà ÑîÀ [30], íî
è ìåñòî àêêóìóëèðîâàíèÿ íåèçìåíåííîãî âèòàìèíà (ðèñ. 3, à), ïî êðàéíåé ìåðå â íà÷àëüíûå
ñðîêè èíèöèàöèè áèîñèíòåçà êîôåðìåíòà. Â òî
æå âðåìÿ ìåòàáîëèòû ìå÷åíîé ÏÀÊ äîñòàòî÷íî
áûñòðî ýêñïîðòèðóþòñÿ, â îòëè÷èå îò ñâîáîäíîãî âèòàìèíà, â äðóãèå êëåòî÷íûå êîìïàðòìåíòû,
÷òî îñîáåííî çàìåòíî ïî ðåçóëüòàòàì èññëåäîâàíèÿ ðàäèîàêòèâíîñòè ôðàêöèè ÑîÀ â öèòîçîëå è
ãîìîãåíàòàõ ïå÷åíè.
Äëÿ îöåíêè òðàíñïîðòà ïðåäøåñòâåííèêîâ
áèîñèíòåçà ÑîÀ è åãî íàêîïëåíèÿ âî âíåöèòîçîëüíûõ êîìïàðòìåíòàõ (äî 75% êëåòî÷íîãî ôîíäà â ìèòîõîíäðèÿõ [31,32]) íàìè ïðîèçâåäåí ðàñ÷åò
ïåðåðàñïðåäåëåíèÿ ðàäèîàêòèâíîé ÏÀÊ, åå ìå-
72
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊÎÂ
2
2
à
õ10
1000
II
I
500
Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1
Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1
õ10
600
400
300
200
100
0
á
II
I
800
600
400
200
0
0
10
20
30
45
60
0
10
20
30
45
Âðåìÿ, ìèí
ìèí
60
Âðåìÿ, ìèí
Ðèñ. 4. Âíóòðèêëåòî÷íîå ðàñïðåäåëåíèå [14C]-ÑîÀ è [14C]-äåôîñôî-ÑîÀ â ïå÷åíè êðûñ ÷åðåç 10–60 ìèí
ïîñëå ââåäåíèÿ [14C]-ÏÀÊ-Na íîðìàëüíûì (à) è ÏÀÊ-äåôèöèòíûì êðûñàì (á); I – ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ â
öèòîçîëüíîé ôðàêöèè, II – ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ âíå öèòîçîëÿ.
òàáîëèòîâ è ÑîÀ ïî ðàçíîñòè ðàäèîàêòèâíîñòè
ýòèõ òðåõ îñíîâíûõ ôðàêöèé â öèòîçîëå è îáùåì ãîìîãåíàòå ïå÷åíè. Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò îá èíòåíñèâíîì ýêñòðàöèòîçîëüíîì
òðàíñïîðòå äåôîñôî-ÑîÀ è ÑîÀ íà ïðîòÿæåíèè
60 ìèí ýêñïåðèìåíòà (ðèñ. 4), ïðè÷åì âûðàæåííîñòü ïðåäïîëàãàåìîãî âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíîãî íàêîïëåíèÿ íóêëåîòèäíûõ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ
îêàçàëàñü ñóùåñòâåííî áîëüøåé ïðè Â5-íåäîñòàòî÷íîñòè (ðèñ. 4, á).
Çíà÷èòåëüíàÿ ÷àñòü îáíàðóæåííîãî â öèòîçîëå ðàäèîíóêëèäà ÏÀÊ âûÿâëåíà â ïðîòåèíèçèðîâàííîé ôîðìå (òàáë. 1). Ñòåïåíü ïðîòåèíèçàöèè ìå÷åíîãî ìåòàáîëèòà ïàíòîòåíàòà â öèòîçîëå ïå÷åíè âîçðàñòàëà êàê ó êîíòðîëüíûõ, òàê è
ó îïûòíûõ æèâîòíûõ, äîñòèãàÿ ó ïîñëåäíèõ ê
30 ìèí ýêñïåðèìåíòà äîâîëüíî ñòàáèëüíîãî óðîâ-
íÿ (43%) îò îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè öèòîçîëÿ.
Íàêîïëåíèå ñâîáîäíîé ìåòêè â öèòîçîëå õàðàêòåðèçîâàëîñü íàëè÷èåì ìàêñèìóìà ê 30 ìèí îïûòà. Î÷åâèäíî, ÷òî 30-ìèíóòíûé ìàêñèìóì îáðàçîâàíèÿ ÏÁÊ â öèòîçîëå ñîâïàäàåò ñ âðåìåííûì
ïàäåíèåì áèîòðàíñôîðìàöèè ñâîáîäíîãî âèòàìèíà (ðèñ. 3, à) â ÑîÀ (ðèñ. 3, â) è, òåì ñàìûì,
ñâèäåòåëüñòâóåò î âîçìîæíîì ó÷àñòèè ÏÁÊ â ðåãóëÿöèè áèîñèíòåçà ÑîÀ íà ñòàäèè, êàòàëèçèðóåìîé ÏÀÊ-êèíàçîé [33].
Ñ öåëüþ èäåíòèôèêàöèè ïðåäøåñòâåííèêîâ
áèîñèíòåçà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ ïå÷åíè êðûñ ïðè
ðàçëè÷íîé îáåñïå÷åííîñòè îðãàíèçìà ïàíòîòåíîâîé êèñëîòîé èçó÷åíî ðàñïðåäåëåíèå [14Ñ]-ÏÀÊ
â ïå÷åíè ïîñëå ââåäåíèÿ âèòàìèíà â äîçå, îáåñïå÷èâàþùåé ñóòî÷íóþ ïîòðåáíîñòü â âèòàìèíå.
Èññëåäîâàëè ñîîòíîøåíèå ÏÀÊ-ñîäåðæàùèõ
Ò à á ë è ö à 1. Ðåçóëüòàòû ãåëü-õðîìàòîãðàôèè öèòîçîëÿ ïå÷åíè êîíòðîëüíûõ (1) è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ (2) êðûñ, ïîëó÷èâøèõ âíóòðèáðþøèííî [14Ñ]-ÏÀÊ-Nà ñ óäåëüíîé àêòèâíîñòüþ 55,2 ìÊè/ììîëü â
äîçå 0,33 ìêìîëü/êã
Âðåìÿ, ìè í
Ãðóï ï à
10
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
20
30
45
60
Î áùàÿ ðàäè îàêòè â í îñòü
ö è òîçîëÿ,
è ìï ⋅ìè í -1⋅ìã-1 áåëêà
3 3 3 ,0 ± 2 2 ,7
4 5 6 , 9 ± 3 6 ,4
7 0 6 ,9 ± 2 5 ,5
1116,8 ± 20,7*
1157,9 ± 57,2
1 7 8 0 ,3 ± 9 9 ,4 *
1 0 1 9 ,4 ± 2 0 ,8
1 2 2 1 ,7 ± 7 2 ,6
1 0 3 8 ,6 ± 6 5 ,4
9 3 0 ,9 ± 5 0 ,4
ÏÁÊ,
è ìï ⋅ìè í -1⋅ìã-1 áåëêà
4 7 ,7 ± 8 ,4
6 9 ,3 ± 1 2 ,9
6 4 ,9 ± 3 ,6
3 7 5 ,8 ± 4 ,8 *
3 1 4 ,1 ± 1 9 ,8
7 6 3 ,6 ± 2 2 ,0 *
3 3 6 ,0 ± 9 ,1
5 3 0 ,9 ± 8 1 ,1
4 5 1 ,3 ± 4 1 ,2
4 2 7 ,8 ± 2 0 ,6
% ÏÁÊ îò îáùåé
ðàäè îàêòè â í îñòè ö è òîçîëÿ
14
15
9
34
27
43
33
43
43
46
* Ðàçëè÷èÿ ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ äîñòîâåðíû, ð < 0,05; ÏÁÊ – ÏÀÊ-áåëêîâûé êîìïëåêñ.
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
73
ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯
êîìïîíåíòîâ â ãîìîãåíàòàõ è ìèòîõîíäðèàëüíûõ
ýêñòðàêòàõ ïå÷åíè ïðè äëèòåëüíîì (5–10 ñóò) åæåäíåâíîì ââåäåíèè æèâîòíûì 14Ñ-ÏÀÊ-Na â äîçå
1,25 ìã/êã (5 ìêìîëü/êã, 6,25 ìêÊu/êã ìàññû)
äëÿ äîñòèæåíèÿ ìàêñèìàëüíîé çàìåíû òêàíåâûõ
ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ íà èõ ðàäèîíóêëèäíûå ïðîèçâîäíûå. Ðàçäåëåíèå ìåòàáîëèòîâ îñóùåñòâëÿëè
ÂÝÆÕ, îáåñïå÷èâàþùåé ðàçäåëåíèå ôîñôîïðîòåèííóêëåîòèäà, äåôîñôî-ÑîÀ è ÑîÀ [34]. Âíåñåíèå 25 ìÌ òàðòðàòà íàòðèÿ â ñðåäó äëÿ ãîìîãåíèçàöèè òêàíè ïðåäóïðåæäàëî ãèäðîëèç ÑîÀ
ôîñôàòàçàìè [32].
Ïîêàçàíî, ÷òî â ãîìîãåíàòàõ òêàíè ïå÷åíè
ìåíåå 5% îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè ïðèõîäèòñÿ íà
äðóãèå ìåòàáîëèòû ÏÀÊ, à íå íà ÑîÀ (äàííàÿ
ôðàêöèÿ ïðèíÿòà çà 100%), ïðè èññëåäîâàíèè
÷åðåç 5 ñóò ââåäåíèÿ ìå÷åíîãî âèòàìèíà. Ôðàêöèÿ íåèçìåíåííîé ÏÀÊ è åå ôîñôîðèëèðîâàííîé ôîðìû äîñòèãàëà 2,8–3,6%, à ôðàêöèè ÔÏÍ,
äåôîñôî-ÑîÀ ïðàêòè÷åñêè íå âûÿâëÿëèñü. ×åðåç
10 ñóò ýêñïåðèìåíòà ôðàêöèè ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ,
âêëþ÷àÿ ÔÏÍ è äåôîñôî-ÑîÀ, ñîñòàâèëè áîëåå
çíà÷èìóþ âåëè÷èíó (7–11%).
 òàáë. 2 ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ ìèòîõîíäðèàëüíûõ ýêñòðàêòîâ ïå÷åíè.
×åðåç 5 ñóò ýêñïåðèìåíòà ìåòàáîëèòû ÏÀÊ, èíûå
÷åì ÑîÀ, ñîñòàâëÿëè áîëåå 1/2 ðàäèîàêòèâíîãî
ìàòåðèàëà, ïðåèìóùåñòâåííî çà ñ÷åò ôðàêöèè
äåôîñôî-ÑîÀ. ×åðåç 10 ñóò ýêñïåðèìåíòà óðîâåíü ðàäèîàêòèâíîñòè óêàçàííîé ôðàêöèè çíà÷èòåëüíî ïðåâûñèë òàêîâîé ôðàêöèè ÑîÀ ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ è äîñòèãàë âûñîêîãî óðîâíÿ
â ìèòîõîíäðèÿõ ïå÷åíè ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ êðûñ [35].
Íå èñêëþ÷åíî ïðèñóòñòâèå âî ôðàêöèè äåôîñôî-ÑîÀ ïàíòåòåèíà, ñïîñîáíîãî çà ñ÷åò ïàíòåòåèíêèíàçíîé èëè ÏÀÊ-êèíàçíîé ðåàêöèè
òðàíñôîðìèðîâàòüñÿ â ôîñôîïàíòåòåèí. Îäíàêî
òàêèå ôåðìåíòàòèâíûå ñèñòåìû îòñóòñòâóþò â
ìèòîõîíäðèàëüíîì êîìïîíåíòå êëåòêè, à ñàì ïàíòåòåèí, íå ÿâëÿåòñÿ ïðåäøåñòâåííèêîì ÑîÀ â
ìèòîõîíäðèÿõ [5]. Íàèáîëåå âåðîÿòíî ïðîöåññ
áèîñèíòåçà ÑîÀ ëèìèòèðóåò, ïðåæäå âñåãî, äîñòóïíîñòü äåôîñôî-ÑîÀ, ïîñêîëüêó â ìèòîõîí-
äðèÿõ ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ êðûñ, ó êîòîðûõ àêòèâèðóåòñÿ áèîñèíòåç ÑîÀ, âûÿâëåí áîëåå íèçêèé
óðîâåíü äåôîñôî-ÑîÀ [35].
Èçëîæåííîå âûøå ïîçâîëÿåò ñäåëàòü çàêëþ÷åíèå, ÷òî äåôîñôî-ÑîÀ ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì
ïðåäøåñòâåííèêîì íà êîíå÷íûõ ñòàäèÿõ áèîñèíòåçà âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíîãî ÑîÀ (âîçìîæíî
òàêæå îïòèìàëüíîé òðàíñïîðòíîé ôîðìîé). Íåñîìíåííî, ÷òî ýòîò ìåòàáîëèò, ïðåâðàùåíèå êîòîðîãî êàòàëèçèðóåòñÿ äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçîé
(ÑîÀ-ñèíòåòàçîé) [36], ÿâëÿåòñÿ äîìèíèðóþùèì
áèîñèíòåòè÷åñêèì ôàêòîðîì ïîääåðæàíèÿ ñòàáèëüíîñòè CoA-SH â ãëàâíîì ÑîÀ-ñîäåðæàùåì
êîìïàðòìåíòå êëåòêè – ìèòîõîíäðèÿõ.
Îñòàâàëñÿ îòêðûòûì âîïðîñ î ðîëè ïàíòîòåíàòêèíàçíîé ðåàêöèè â âûøåðàññìîòðåííûõ
ïðîöåññàõ áèîòðàíñôîðìàöèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ
ñ ó÷åòîì åå êëþ÷åâîé ðîëè â áèîñèíòåçå ÑîÀ è
âîçìîæíîñòè èíãèáèðîâàíèÿ ôèçèîëîãè÷åñêèìè
êîíöåíòðàöèÿìè êîôåðìåíòà è 4′-ôîñôîïàíòåòåèíà.  ýòîé ñâÿçè â íàøåé ëàáîðàòîðèè èç ïå÷åíè
êðûñû áûë âûäåëåí ýëåêòðîôîðåòè÷åñêè ãîìîãåííûé ïðåïàðàò ïàíòîòåíàòêèíàçû ñî ñòåïåíüþ
î÷èñòêè 199 ðàç è óäåëüíîé àêòèâíîñòüþ 8,55 íìîëü
çà 1 ìèí íà 1 ìã áåëêà. Ïîêàçàíî, ÷òî ôåðìåíòíûé áåëîê îáëàäàåò ÷åòâåðòè÷íîé ñòðóêòóðîé è
ñîñòîèò èç äâóõ èäåíòè÷íûõ ñóáúåäèíèö ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 49 êÄà. Ïàíòîòåíàòêèíàçà èìååò øèðîêóþ ñóáñòðàòíóþ ñïåöèôè÷íîñòü ñ âåëè÷èíàìè Êm äëÿ ïàíòîòåíàòà 1,2 ⋅ 10-5 Ì, à äëÿ
ïàíòåòåèíà – 2,7 ⋅ 10-5Ì. 4′-Ôîñôîïàíòåòåèí, äåôîñôî-ÑîÀ, ÑîÀ-SH è àöèë-ÑîÀ èíãèáèðóþò
ôåðìåíò, ÷òî ïðåäïîëàãàåò íàëè÷èå ðåãóëÿòîðíîãî öåíòðà â ìîëåêóëå ïàíòîòåíàòêèíàçû.  ÷àñòíîñòè, òîðìîæåíèå ðåàêöèè ÑîÀ-SH, 4′-ôîñôîïàíòåòåèíîì, äåôîñôî-ÑîÀ, àöåòèë-ÑîÀ, ïàëüìèòîèë-ÑîÀ îñóùåñòâëÿëîñü ïî áåñêîíêóðåíòíîìó
òèïó ñ Ê1 0,45; 1,4; 6,4; 12,0; 5,6 ìêÌ ñîîòâåòñòâåííî. Áëîêèðîâàíèå ñêîðîñòè ðåàêöèè ôèçèîëîãè÷åñêèìè êîíöåíòðàöèÿìè ýòèõ ìåòàáîëèòîâ,
â îñîáåííîñòè ÑîÀ-SH, ñâèäåòåëüñòâóåò, ÷òî àêòèâíîñòü êèíàçû in vivo ïîñòîÿííî ïîäâåðæåíà
âîçäåéñòâèþ îòðèöàòåëüíûõ ýôôåêòîðîâ [37].
Ò à á ë è ö à 2. Ðàñïðåäåëåíèå ðàäèîíóêëèäà [14Ñ]-ÏÀÊ âî ôðàêöèÿõ ìåòàáîëèòîâ âèòàìèíà â ìèòîõîíäðèÿõ êëåòîê ïå÷åíè
Ãðóï ï û æè â îòí ûõ
Êîí òðîëü, 5 ñóò
ÏÀÊ- í åäîñòàòî÷í îñòü, 5 ñóò
Êîí òðîëü, 10 ñóò
ÏÀÊ- í åäîñòàòî÷í îñòü, 10 ñóò
Ðàäè îàêòè â í îñòü îòí îñè òåëüí î
ÏÀÊ + ÔÏÊ
ÔÏÍ
2 ,4 ± 0 , 4
0 , 9 ± 0 ,3
2 ,5 ± 0 ,6
0 , 8 ± 0 ,5
5±3
10 ± 2
3 ,2 ± 0 ,5
1 ,3 ± 0 ,1 *
ô ðàêö è è ÑîÀ (100%), %
Ñ îÀ
äåô îñô î- ÑîÀ
100
51 ± 18
100
17 ± 2*
100
166 ± 30
100
26 ± 8*
* Ðàçëè÷èÿ äîñòîâåðíû ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ, ð < 0,05; ÏÀÊ – ïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà, ÔÏÍ – ôîñôîïàíòåòåèí, ÔÏÊ – ôîñôîïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà.
74
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊÎÂ
Âîçíèêàåò âîïðîñ, çà ñ÷åò êàêèõ ìåõàíèçìîâ îñóùåñòâëÿåòñÿ ñòèìóëÿöèÿ àêòèâíîñòè ïàíòîòåíàòêèíàçû, ïîçâîëÿþùàÿ ïîääåðæèâàòü ñòàáèëüíûé âíóòðèêëåòî÷íûé ôîíä ÑîÀ èëè îáåñïå÷èâàòü ýôôåêòèâíóþ áèîòðàíñôîðìàöèþ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ, íàïðèìåð â ñëó÷àå èõ èíúåöèðîâàíèÿ â ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ äîçàõ. Î÷åâèäíî
îòâåò ñëåäîâàëî èñêàòü â ïîèñêå ñïîñîáîâ ôèçèîëîãè÷åñêîãî äåèíãèáèðîâàíèÿ ôåðìåíòà, êîòîðûé
áûë óæå èçâåñòåí ïðè èñïîëüçîâàíèè L-êàðíèòèíà, íî íå åãî àöèëèðîâàííîé ôîðìû [38]. Ñ
ó÷åòîì íàëè÷èÿ ôóíêöèîíàëüíî àêòèâíîé ñóëüôãèäðèëüíîé ãðóïïû ó ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ è ôîñôîïàíòåòåèíà è âîçìîæíîñòüþ èõ íåôåðìåíòàòèâíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ðÿäîì ïðèðîäíûõ äèñóëüôèäîâ, à òàêæå íåïîñðåäñòâåííûì ó÷àñòèåì L-öèñòåèíà â áèîñèíòåçå ÑîÀ [5], ïðåäñòàâëÿëîñü î÷åâèäíûì ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèé ñ
ðÿäîì ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé, ïðåæäå âñåãî ñ îêèñëåííûì ãëóòàòèîíîì è öèñòåèíîì. Ïàðàëëåëüíûå èññëåäîâàíèÿ, ïðîâåäåííûå in vivo,
ïîêàçàëè, ÷òî ñî÷åòàííàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü ÏÀÊ
è ìåòèîíèíà ïðèâîäèò ê íàèáîëåå çàìåòíîìó
óìåíüøåíèþ óðîâíÿ ÑîÀ è ïðåäøåñòâåííèêîâ
åãî áèîñèíòåçà â ïå÷åíè. Ââåäåíèå â ýòèõ óñëîâèÿõ èíäèêàòîðíîé äîçû ðàäèîàêòèâíîãî ìåòèîíèíà âûÿâèëî, ÷òî äî 16% íàõîäÿùåéñÿ â òêàíè
ïå÷åíè ìå÷åíîé àìèíîêèñëîòû âêëþ÷àåòñÿ âî
ôðàêöèè (ÄÅÀÅ-õðîìàòîãðàôèÿ) 4′-ôîñôîïàíòåòåèíà è ÑîÀ [27]. Ýòè ðåçóëüòàòû ñëóæàò äîïîëíèòåëüíîé èëëþñòðàöèåé ê âûñêàçàííîé åùå â
1967 ã. Ð. Â.×àãîâöåì èäåè îá ó÷àñòèè âèòàìèíîâ è èõ ïðîèçâîäíûõ â îáìåíå ñåðîñîäåðæàùèõ
ñîåäèíåíèé [39].
Ñðåäè áîëüøîãî ÷èñëà èññëåäóåìûõ ñîåäèíåíèé öèñòèí è îêèñëåííûé ãëóòàòèîí (2,10 ìÌ),
âíîñèìûå â èíêóáàöèîííóþ ñðåäó îäíîâðåìåííî ñ ÑîÀ-SH (1,5 èëè 3,0 ìêÌ), ïðåäóïðåæäàëè
èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå êîôåðìåíòà íà àêòèâíîñòü êèíàçû, òîãäà êàê âîññòàíîâëåííûå ôîðìû
ýòèõ ïðåïàðàòîâ ïîäîáíûì ýôôåêòîì íå îáëàäàëè.  ÷èñòûõ ñèñòåìàõ (áåç ÑîÀ-SH) öèñòèí, îêèñëåííûé ãëóòàòèîí è èõ òèîëû íå ÿâëÿëèñü ýôôåêòîðàìè ôåðìåíòà. Äëÿ îáúÿñíåíèÿ âûÿâëåííîãî ïðîöåññà äåèíãèáèðîâàíèÿ, èññëåäîâàëè ñèììåòðè÷íûé äèñóëüôèä ÑîÀ, à òàêæå ñèíòåçèðîâàííûå íàìè ñìåøàííûå äèñóëüôèäû: ÑîÀ-S-Sãëóòàòèîí è ÑîÀ-S-S-ïàíòåòåèí. Âíåñåíèå â ðåàêöèîííóþ ñðåäó ýòèõ äèñóëüôèäîâ (1,5–9,0 ìÌ)
íå ïðèâîäèëî ê èíãèáèðîâàíèþ ôåðìåíòà, â òî
âðåìÿ êàê äîáàâëåíèå äèòèîòðåèòîëà (20 ìÌ) â
àíàëîãè÷íóþ ôåðìåíòàòèâíóþ ñðåäó çíà÷èòåëüíî ñíèæàëî àêòèâíîñòü ÏÀÊ-êèíàçû. Äåéñòâèå
äèòèîòðåèòîëà â äàííîé ñèòóàöèè ñâÿçàíî ñ âîññòàíîâëåíèåì äèñóëüôèäîâ äî ñîîòâåòñòâóþùèõ
òèîëüíûõ ôîðì, èç êîòîðûõ îòðèöàòåëüíûì ýô-
ôåêòîðîì ÿâëÿåòñÿ òîëüêî ÑîÀ-SH [40].
Ñëåäîâàòåëüíî, ïðåäóïðåæäåíèå îêèñëåííûì
ãëóòàòèîíîì è öèñòèíîì èíãèáèðóþùåãî äåéñòâèÿ ÑîÀ-SH íà ðåàêöèþ ôîñôîðèëèðîâàíèÿ
ÏÀÊ îáóñëîâëåíî îáðàçîâàíèåì ñìåøàííûõ äèñóëüôèäîâ ñ ÑîÀ. Ñòàíîâèòñÿ ïîíÿòíîé âûñîêàÿ
áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ïàíòåòåèíà, à ðîëü äèñóëüôèäîâ ÑîÀ â êëåòêå ìîæíî ðàññìàòðèâàòü
íå òîëüêî êàê ðåçåðâíóþ, íî è êàê ðåãóëÿòîðíóþ. Òàêèì îáðàçîì, âïåðâûå âûÿâëåí ìåõàíèçì
ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòè ïàíòîòåíàòêèíàçû ïóòåì
åå äåèíãèáèðîâàíèÿ â ñèñòåìå, ñîäåðæàùåé ÑîÀSH, êîòîðûé îáóñëîâëåí îáðàçîâàíèåì ñìåøàííûõ äèñóëüôèäîâ ïðè âçàèìîäåéñòâèè ÏÒ, öèñòèíà èëè îêèñëåííîãî ãëóòàòèîíà ñ ñóëüôãèäðèëüíîé ôîðìîé êîôåðìåíòà [40]. Ñ ó÷åòîì âûñîêîãî óðîâíÿ ãëóòàòèîíà â æèâîòíûõ òêàíÿõ (îò
0,4 äî 12 ìÌ) è ïðåèìóùåñòâåííî â öèòîçîëå,
åñòü âñå îñíîâàíèÿ ïîëàãàòü, ÷òî âçàèìîäåéñòâèå
ñèñòåìû ðåäîêñ-ñîñòîÿíèÿ ãëóòàòèîíà è áèîñèíòåçà ÑîÀ ÿâëÿåòñÿ âàæíåéøèì ôàêòîðîì ðåãóëÿöèè âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ ìåòàáîëèçìà è
îáåñïå÷åíèÿ ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ÑîÀ-çàâèñèìûõ
ïðîöåññîâ, ïðèâîäÿùèõ ê ñòàáèëüíîìó ýíåðãåòè÷åñêîìó ñîñòîÿíèþ è ñòðóêòóðíîé öåëîñòíîñòè ïëàçìàòè÷åñêèõ è âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåìáðàí.
Âåðîÿòíî çà ñ÷åò óêàçàííîãî ìåõàíèçìà, à
òàêæå âûñîêîãî ñðîäñòâà ïðîèçâîäíûõ âèòàìèíà
ê áèîìåìáðàíàì [3] îáåñïå÷èâàåòñÿ âûñîêàÿ áèîäîñòóïíîñòü ïðåïàðàòîâ ÏÀÊ – ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ, ââîäèìûõ êàê per os, òàê è
ïàðåíòåðàëüíî [20]. Ðàñøèðåííûå ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ, ïðîâîäèìûå íà áåëûõ
ìûøàõ è êðûñàõ ñ èñïîëüçîâàíèåì ìå÷åííûõ ïî
óãëåðîäó èëè òðèòèþ ïðåïàðàòîâ, ââîäèìûõ â
äîçàõ 30 ìã/êã ìàññû òåëà ýêâèìîëÿðíî ÏÀÊ-Ñà,
ïîçâîëèëè îïèñàòü ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå ïðîöåññû èññëåäóåìûõ ñîåäèíåíèé ñ ïîìîùüþ îäíî-,
äâóõ- è òðåõ÷àñîâûõ ìîäåëåé íà îñíîâå ïðîãðàììû ÀÑÏÈÄ [41].
Ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ïðåïàðàòû ÏÀÊ áûñòðî âñàñûâàþòñÿ â
æåëóäî÷íî-êèøå÷íîì òðàêòå, â îñîáåííîñòè ïàíòåíîë, ÿâëÿþùèéñÿ êñåíîáèîòè÷åñêèì ïðåäøåñòâåííèêîì ÑîÀ è òðàíñôîðìèðóåìûé â ÏÀÊ â
àëêîãîëüäåãèäðîãåíàçíîé ðåàêöèè [5,42]. Áèîäîñòóïíîñòü èññëåäóåìûõ ïðåïàðàòîâ ïðè ïàðåíòåðàëüíîì ââåäåíèè òàêæå âûñîêà (60–85%) è íåñêîëüêî íèæå ó êàëüöèåâûõ ñîëåé ïðîèçâîäíûõ
ÏÀÊ. Âñå ñîåäèíåíèÿ õàðàêòåðèçóþòñÿ âûñîêîé
ñòåïåíüþ óòèëèçàöèè è ïðîòåèíèçàöèè, îäíàêî
ñîõðàíÿþò çíà÷èòåëüíûå äèíàìè÷åñêèå ðàçëè÷èÿ
â áèîòðàíñôîðìàöèè â êîôåðìåíòíóþ ôîðìó.
Ýêñêðåòèðóþòñÿ èññëåäîâàííûå ñîåäèíåíèÿ è èõ
ìåòàáîëèòû ïðåèìóùåñòâåííî ñ ìî÷îé, ïðè÷åì
âðåìÿ ýëèìèíàöèè äëÿ íåêîòîðûõ ñîåäèíåíèé
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
75
ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯
(íàïðèìåð äëÿ ÏÒ) äîñòèãàåò ïðàêòè÷åñêè ñóòî÷íîãî ïåðèîäà [41], ÷òî õîðîøî ñîîòâåòñòâóåò äàííûì, ïîëó÷åííûì ïðè èññëåäîâàíèè áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÒ [25].
Ìåõàíèçì âñàñûâàíèÿ ÏÀÊ â êèøå÷íèêå,
êàê âïåðâûå ïîêàçàíî â íàøåé ëàáîðàòîðèè [19]
ñ èñïîëüçîâàíèåì ìåìáðàííûõ âåçèêóë ùåòî÷íîé êàéìû ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê òîíêîé êèøêè
êðûñ, îñóùåñòâëÿåòñÿ ïî íàòðèé-ïàíòîòåíàò êîòðàíñïîðòíîìó ìåõàíèçìó. Åñòü îñíîâàíèÿ ïîëàãàòü, ÷òî èíòåíñèâíîñòü ïðîöåññîâ òðàíñïîðòà
íå çàâèñèò îò îáåñïå÷åííîñòè îðãàíèçìà ÏÀÊ,
îäíàêî îí íàõîäèòñÿ â òåñíîé ôóíêöèîíàëüíîé
ñâÿçè ñ óñâîåíèåì íåêîòîðûõ äðóãèõ âèòàìèíîâ
(áèîòèí, ëèïîàò). Â ïîñëåäíèå ãîäû â ðÿäå ëàáîðàòîðèé äåòàëüíî îõàðàêòåðèçîâàí óíèâåðñàëüíûé
ïåðåíîñ÷èê ÏÀÊ, áèîòèíà è ëèïîàòà â ïëàöåíòå,
ýíòåðîöèòàõ è êîëîíîöèòàõ. Ïðîöåññ óñâîåíèÿ
ÏÀÊ ïîñòóëèðîâàí êàê îïîñðåäîâàííûé ïåðåíîñ÷èêîì Na+-çàâèñèìûé ïðîöåññ, èìåþùèé ðàçëè÷íóþ ýëåêòðîãåííóþ ïðèðîäó ïðè ïåðåíîñå âèòàìèíà ÷åðåç ìåìáðàíó ùåòî÷íîé êàéìû èëè áàçîëàòåðàëüíóþ ìåìáðàíó ýïèòåëèîöèòîâ [43].
Ïðèâåäåííûå ðåçóëüòàòû ïîçâîëÿþò ñäåëàòü çàêëþ÷åíèå î òîì, ÷òî îáåñïå÷åíèå ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ñèñòåìû áèîñèíòåçà ÑîÀ âî ìíîãîì îïðåäåëÿåòñÿ ìåõàíèçìàìè áèîäîñòóïíîñòè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ (âñàñûâàíèå, òðàíñïîðò, ïðîäîëæèòåëüíîñòü íàõîæäåíèÿ â êðîâåíîñíîì ðóñëå) [25] è
âîçìîæíîñòüþ îáðàçîâàíèÿ ÏÀÊ-áåëêîâûõ êîìïëåêñîâ, âåðîÿòíî âðåìåííî äåïîíèðóþùèõ ìåòàáîëèòû âèòàìèíà äëÿ åãî ïîñëåäóþùåãî èñïîëüçîâàíèÿ â öèòîçîëüíûõ ñèñòåìàõ îáðàçîâàíèÿ ÑîÀ èëè ôîñôîïàíòåòåèíïðîòåèíîâ.
Äëÿ âûÿñíåíèÿ ïðèðîäû ÏÁÊ öèòîçîëÿ ïå÷åíè, ïðåäâàðèòåëüíî “ïîìå÷åíûé” in vivo êîìïëåêñ ïîäâåðãàëè ãåëü-ôèëüòðàöèè èëè õðîìàòîãðàôèè íà TSK-ãåëå Toyopearl HW-60F. Ïîñòðîåíèå ãðàäóèðîâî÷íîãî ãðàôèêà ñ èñïîëüçîâàíèåì áåëêîâ-ìàðêåðîâ ïîêàçàëî, ÷òî ìîëåêóëÿðíàÿ ìàññà êîìïëåêñà ñîñòàâëÿåò 60–70 êÄà. Ïîñëåäóþùàÿ ÂÝÆÕ ðàäèîàêòèâíîé ôðàêöèè, âêëþ÷åííîé â ÏÁÊ, îáðàáîòàííûé õëîðíîé êèñëîòîé, îáíàðóæèëà ñîâïàäåíèå ïèêà ñòàíäàðòà íåìå÷åíîãî ÑîÀ, äåòåêòèðóåìîãî ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêè ïðè 254 íì, ñ âðåìåíåì óäåðæàíèÿ ðàäèîàêòèâíîãî ìåòàáîëèòà ÏÀÊ. Äàëüíåéøåå èçó÷åíèå ñâîéñòâ ÏÁÊ ñ ïîìîùüþ ìåòîäà èììóíîáëîòòèíãà ñ ïðèìåíåíèåì àíòèòåë, ñïåöèôè÷íûõ
ê ÑîÀ, âûÿâèëî äèñóëüôèäíóþ ñâÿçü ÑîÀ ñ áåëêîì öèòîçîëÿ. Èíêóáàöèÿ ôðàêöèè áåëêîâ öèòîçîëÿ ñ ïåðâè÷íûìè àíòèòåëàìè, ñïåöèôè÷íûìè
äëÿ ÑîÀ, âûÿâèëà ôðàêöèþ, ðåàãèðóþùóþ ñ àíòèòåëàìè àíòè-ÑîÀ IgG, êîòîðóþ ïîâòîðíî èññëåäîâàëè ìåòîäàìè ýëåêòðîôîðåçà â ïîëèàêðèëàìèäíîì ãåëå, âåñòåðí-áëîòòèíãà è óñèëåííîé õå-
ìèëþìèíåñöåíöèè (ECL). Ñî÷åòàíèå ýòèõ ìåòîäîâ äëÿ èññëåäîâàíèÿ áåëêîâ öèòîçîëÿ ïå÷åíè
êðûñ ïîçâîëèëî äîñòè÷ü âûñîêîé ñòåïåíè ñïåöèôè÷íîñòè ïðè èõ ðàçäåëåíèè è äîñòîâåðíî îïðåäåëèòü ìîëåêóëÿðíóþ ìàññó ÑîÀ-ñâÿçûâàþùåãî
áåëêà, ðàâíóþ 56 êÄà [44].
Åñëè ïðèíÿòü òî÷êó çðåíèÿ, âûíåñåííóþ
íàìè â çàãëàâèå íàñòîÿùåé ñòàòüè î òîì, ÷òî áèîñèíòåç ÑîÀ ÿâëÿåòñÿ óíèâåðñàëüíûì ìåõàíèçìîì
ñîïðÿæåíèÿ ýêçîãåííîñòè è ìíîæåñòâåííîñòè
ôóíêöèé ÏÀÊ, íåîáõîäèìî îáúÿñíèòü, êàêèì
îáðàçîì îñóùåñòâëÿåòñÿ âçàèìîäåéñòâèå öèòîçîëüíîé ñèñòåìû áèîñèíòåçà ÑîÀ è ÑîÀ-ñèíòåòè÷åñêèõ ðåàêöèé ìèòîõîíäðèé (ïàíòåèíôîñôàò–àäåíèëòðàíñôåðàçà, 2.7.7.3 è äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçû,
2.7.1.24), âîçìîæåí ëè îáìåí èëè ýêñòðàöèòîçîëüíûé òðàíñïîðò ñàìîé êîôåðìåíòíîé ôîðìû
ïðè îïðåäåëåííûõ ìåòàáîëè÷åñêèõ óñëîâèÿõ.
Óìåñòíî íàïîìíèòü, ÷òî äî 70–90% âíóòðèêëåòî÷íîãî ôîíäà ÑîÀ ëîêàëèçîâàíî â ìèòîõîíäðèàëüíîì êîìïàðòìåíòå êëåòîê ìëåêîïèòàþùèõ [25].
Ïîëó÷åííûå íàìè ýêñïåðèìåíòàëüíûå äîêàçàòåëüñòâà ñóùåñòâîâàíèÿ çíà÷èòåëüíûõ êîëè÷åñòâ äåôîñôî-ÑîÀ â ìèòîõîíäðèàëüíîé ôðàêöèè ïå÷åíè æèâîòíûõ, äëèòåëüíî ïîëó÷àâøèõ èíäèêàòîðíóþ äîçó [14Ñ]-ÏÀÊ (òàáë. 2), à òàêæå ïðèñóòñòâèå ýòîãî êîìïîíåíòà (íàðÿäó ñ ÑîÀ) â ïðîöåññå ýêñòðàöèòîçîëüíîãî ïåðåíîñà ïðîäóêòîâ
áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ-ñîäåðæàùèõ ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ ïîçâîëÿþò ïðåäïîëîæèòü, ÷òî
îñíîâíîé òðàíñïîðòíîé ôîðìîé ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ ÿâëÿåòñÿ
äåôîñôî-ÑîÀ.  ýòîé ñâÿçè ñòàíîâÿòñÿ ïîíÿòíûìè ðåçóëüòàòû èçó÷åíèÿ ëîêàëèçàöèè ôåðìåíòîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ íà âíóòðåííåé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíå, êîòîðûå ïîêàçàëè áîëåå ïîâåðõíîñòíîå ðàñïîëîæåíèå áåëêà äåôîñôî-ÑîÀêèíàçû îòíîñèòåëüíî äåôîñôî-ÑîÀ-ïèðîôîñôîðèëàçû [46]. Îáà ôåðìåíòà ñòðóêòóðíî îáúåäèíåíû â áèîôóíêöèîíàëüíîì ôåðìåíòíîì êîìïëåêñå (òàê íàçûâàåìàÿ ÑîÀ-ñèíòåòàçà ìèòîõîíäðèé) è ïîïûòêè èõ ðàçäåëåíèÿ áûëè áåçóñïåøíûìè.
Êîíöåïöèÿ îá èçîëèðîâàííîñòè ìèòîõîíäðèàëüíîãî è öèòîçîëüíîãî ïóëà ÑîÀ, îñíîâàííàÿ íà íåïðîíèöàåìîñòè âíóòðåííåé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû äëÿ ÑîÀ [26,30], òàêæå äîëæíà áûòü ïåðåñìîòðåíà. Ðåøàþùèì àðãóìåíòîì,
îïðîâåðãàþùèì òðàäèöèîííûå ïðåäñòàâëåíèÿ,
ÿâèëîñü îòêðûòèå ìèòîõîíäðèàëüíîé ÑîÀ-òðàíñïîðòèðóþùåé ñèñòåìû â ìèîêàðäèîöèòàõ [46].
Ïîêàçàíî, ÷òî ìèòîõîíäðèè àêêóìóëèðóþò ðàäèîàêòèâíûé ÑîÀ, ïðè÷åì ïðîöåññ èìååò äâóõôàçíûé õàðàêòåð. Ïåðâàÿ ôàçà íå çàâèñèò îò èñòî÷íèêà ýíåðãèè è òåìïåðàòóðû è ïðåäñòàâëÿåò
ñîáîé íåíàñûùàþùèéñÿ ïðîöåññ íåñïåöèôè÷åñ-
76
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊÎÂ
êîãî ñâÿçûâàíèÿ ÑîÀ íà ÑîÀ-àäåíèí÷óâñòâèòåëüíîì ìåñòå ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí. Âòîðàÿ
ôàçà ÿâëÿåòñÿ ýíåðãî- è òåìïåðàòóðîçàâèñèìîé
è õàðàêòåðèçóåòñÿ íàñûùàþùåéñÿ êðèâîé ñïåöèôè÷åñêîãî ïåðåíîñà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèàëüíûé
ìàòðèêñ [46,47]. Ìèòîõîíäðèàëüíûé òðàíñïîðò
ÑîÀ â ìèîêàðäèîöèòàõ, êàê îêàçàëîñü, ìîäóëèðóåòñÿ ðÍ ìàòðèêñà è ðåãóëèðóåòñÿ ôèçèîëîãè÷åñêèìè êîíöåíòðàöèÿìè ÑîÀ, ïðèñóòñòâóþùåãî â öèòîçîëå (âåëè÷èíà Êm òðàíñïîðòà – 17 ìÌ
áëèçêà ê óðîâíþ ÑîÀ-SH â öèòîçîëå – 14 ìÌ).
Ìû íàáëþäàëè òðàíñïîðò ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ, èçîëèðîâàííûõ èç ïå÷åíè êðûñ (ðèñ. 5) â
ñèñòåìå, ñîäåðæàùåé àöèëäîíîðíûé ñóáñòðàò –
ïèðóâàò, ïóòåì ïàðàëëåëüíîãî êîíòðîëÿ ïîãëîùåíèÿ ÑîÀ ôåðìåíòàòèâíûì ìåòîäîì è ïðÿìîé
ðàäèîìåòðèåé âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíî îáðàçóþùåãîñÿ àöèë-ÑîÀ [48]. Ñîäåðæàíèå îáùåãî ÑîÀ
â ìèòîõîíäðèÿõ óâåëè÷èâàëîñü â çàâèñèìîñòè îò
åãî êîíöåíòðàöèè â ñðåäå èíêóáàöèè.
Ñèñòåìà òðàíñïîðòà ñâîáîäíîãî ÑîÀ â ìèòîõîíäðèè ìîæåò áûòü è èçâíå äåéñòâóþùèì
ìåõàíèçìîì â îïðåäåëåííûõ ìåòàáîëè÷åñêèõ ñèòóàöèÿõ (ñåêâåñòðàöèÿ ÑîÀ-SH, èçáûòîê àöèëèðóåìûõ ñóáñòðàòîâ è äð.), à òàêæå îáåñïå÷èâàòü
ñóáñòðàòîì ÑîÀ-ñèíòåòàçó, ÷òî ïðèâîäèò ê ïîñëåäóþùåìó äåôîñôîðèëèðîâàíèþ ÑîÀ ñ îáðàçîâàíèåì äåôîñôî-ÑîÀ è ôîñôîïàíòåòåèíà. Ýòî
ïîäòâåðæäåíî ïðÿìûì èññëåäîâàíèåì ñ èñïîëüçîâàíèåì ÂÝÆÕ, êîãäà â ìèòîõîíäðèàëüíûõ ýêñòðàêòàõ âûÿâëÿëèñü ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ, ÏÀÊ,
ôîñôîïàíòåòåèí è ôîñôî-ÏÀÊ [48]. Ïîÿâëåíèå
äîíóêëåîòèäíûõ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â ìèòîõîíäðèàëüíûõ ýêñòðàêòàõ, êàê è èõ âîçäåéñòâèå íà
òðàíñïîðò ÑîÀ â ìèòîõîíäðèè [49] òðåáóåò ýêñïåðèìåíòàëüíîé ïðîâåðêè. Ïåðâîíà÷àëüíàÿ âåðñèÿ î âîçìîæíîé ðîëè ïàíòåòåèíêèíàçíîé ðåàêöèè (2.7.1.34) â îáåñïå÷åíèÿ ìèòîõîíäðèàëüíîãî
ïóëà ÑîÀ, êàê ìû óêàçûâàëè âûøå, íå ïîëó÷èëà
ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äîêàçàòåëüñòâ [35,38]. Âìåñòå ñ òåì, ñóùåñòâóåò òî÷êà çðåíèÿ, ÷òî òðàíñïîðò
ÑîÀ â ìèòîõîíäðèè ìîæåò ïðåäñòàâëÿòü ñîáîé
ôèçèîëîãè÷åñêèé ìåõàíèçì àêòèâàöèè áèîñèíòåçà êîôåðìåíòà â öèòîçîëå [49].
Ïîäîáíûì îáðàçîì ìîæíî ïðåäñòàâèòü è
ôóíêöèþ ÑîÀ-S-S-áåëêà öèòîçîëÿ, îñóùåñòâëÿþùåãî âðåìåííîå ñåêâåñòèðîâàíèå êîôåðìåíòíîé
ôîðìû âèòàìèíà äëÿ ñîçäàíèÿ îïòèìàëüíûõ óñëîâèé ïðîòåêàíèÿ ÏÀÊ-êèíàçíîé ðåàêöèè (äëÿ
ïðåäóïðåæäåíèÿ èíãèáèðîâàíèÿ êëþ÷åâîãî ôåðìåíòà áèîñèíòåçà ÑîÀ). Ïîäîáíîãî ðîäà ñåêâåñòèðîâàíèå CoA-SH ìîæåò òàêæå èãðàòü ðîëü â
ïîääåðæàíèè îïòèìàëüíîãî ñîîòíîøåíèÿ CoASH/àöèë-ÑîÀ, ÷òî õàðàêòåðíî äëÿ ðÿäà áåëêîâ,
ñâÿçûâàþùèõ àöèë-ÑîÀ â öèòîçîëå [5,25]. Íåëüçÿ
òàêæå èñêëþ÷àòü âîçìîæíîñòü ïðÿìîãî äåïîíèðîâàíèÿ ÑîÀ â öåëÿõ ñòàáèëèçàöèè åãî ëîêàëüíîãî ôîíäà äëÿ ïðåäóïðåæäåíèÿ ðåçêîãî èçìåíåíèÿ áàëàíñà ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðîöåññîâ â öèòîçîëå, â òîì ÷èñëå îáóñëîâëåííûõ èçìåíåíèåì ðåäîêñ-ïîòåíöèàëà. Àíàëîãè÷íûé ìåõàíèçì ïîñòóëèðîâàí â ìèòîõîíäðèÿõ, ãäå òàêæå äîêàçàíà ðîëü
Âðåìÿ,
Ðèñ. 5. Íàêîïëåíèå îáùåãî ÑîÀ (à) è èçìåíåíèå îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè êîôåðìåíòà (á) â èçîëèðîâàííûõ
ìèòîõîíäðèÿõ ïå÷åíè êðûñ â çàâèñèìîñòè îò âðåìåíè èíêóáàöèè ïðè ðÍ 7,4 â ñðåäå [48], ñîäåðæàùåé
ðàäèîàêòèâíûé ïðåïàðàò [3Í]-ÑîÀ â êîëè÷åñòâå 3,6 íìîëü (7ìêÊu/ìêÌ)/ìë.  äâîéíûõ ëîãàðèôìè÷åñêèõ êîîðäèíàòàõ ïðåäñòàâëåíà çàâèñèìîñòü íàêîïëåíèÿ ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ (Ñ1 ) îò åãî êîíöåíòðàöèè
(Ñ2 ) âî âíåøíåé ñðåäå.
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
77
ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯
ÑîÀ-ïðîòåèíèçàöèè äëÿ îáíîâëåíèÿ ôåðìåíòàòèâíûõ áåëêîâ [50].
Ñ ó÷åòîì âíîâü âûÿâëåííûõ äàííûõ ïî
èäåíòèôèêàöèè ÑîÀ-S-S-áåëêà öèòîçîëÿ è äåôîñôî-ÑîÀ, êàê äîìèíèðóþùåãî ïðåäøåñòâåííèêà áèîñèíòåçà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ, âçàèìîäåéñòâèå öèòîçîëüíîãî è ìèòîõîíäðèàëüíîãî êîìïàðòìåíòà â áèîñèíòåçå ÑîÀ ìîæíî ïðåäñòàâèòü
ñëåäóþùèì îáðàçîì (ñì. ñõåìó).
 öåëîì, ñèñòåìà áèîñèíòåçà ÑîÀ ïðåäñòàâ-
Ñóùåñòâóþò äîñòàòî÷íî óáåäèòåëüíûå äîêàçàòåëüñòâà, ïîëó÷åííûå ãðóïïîé óêðàèíñêèõ áèîõèìèêîâ [52], î ïðèñóòñòâèè ÑîÀ-ñèíòåòàçû â ìèòîõîíäðèÿõ, ëîêàëèçîâàííîé íà íàðóæíîé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíå áëàãîäàðÿ ãèäðîôîáíîìó ó÷àñòêó íà N-êîíöå ïîëèïåïòèäíîé öåïè ôåðìåíòà è áåëîê-áåëêîâûì âçàèìîäåéñòâèÿì. Ïðåäïîëàãàåòñÿ, â ÷àñòíîñòè, ÷òî ÑîÀ-ñèíòåòàçà ôèêñèðóåòñÿ íà ìåìáðàíå, ñïåöèôè÷åñêè âçàèìîäåéñòâóÿ ñ ïðåäñòàâèòåëåì ñåìåéñòâà áåëêîâ, îáðà-
Öèòîçîëü: ÏÀÊ (ÏÍ) –~→ ÔÏÍ→äåôîñôî-ÑîÀ→ÑîÀ↔ÑîÀ-S-S-áåëîê
Ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé:
Ìàòðèêñ
ìèòîõîíäðèé:
ÔÏÍ↔äåôîñôî-ÑîÀ→ÑîÀ↔ÑîÀ-S-S-áåëêè

àöèë-ÑîÀ ↔ àöåòèë-ÑîÀ
Ñõåìà. Ïóòè ñòàáèëèçàöèè ôîíäà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ.
ëÿåòñÿ êàê ìíîãîýòàïíûé ïðîöåññ, âêëþ÷àþùèé
ñòàäèè áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ â ÑîÀ â öèòîçîëüíîì êîìïàðòìåíòå, äåôîñôî-ÑîÀ (è, âîçìîæíî, ÔÏÍ) â ÑîÀ â ìèòîõîíäðèàëüíîì êîìïàðòìåíòå, ïåðåíîñ (àêòèâíûé òðàíñïîðò) ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ ÷åðåç ïëàçìàòè÷åñêóþ è âíóòðåííþþ ìèòîõîíäðèàëüíóþ ìåìáðàíû, ïðîòåèíèçàöèþ (îáðàçîâàíèå ÏÀÊ-áåëêîâûõ êîìïëåêñîâ) âíîâü ñèíòåçèðîâàííîãî ÑîÀ ÑîÀ-ñâÿçûâàþùèì áåëêîì öèòîçîëÿ, à òàêæå âûñîêîñïåöèôè÷íûé òðàíñïîðò êîôåðìåíòà â ìèòîõîíäðèè.
Åñòü âñå îñíîâàíèÿ ïîëàãàòü, ÷òî êëþ÷åâóþ ðîëü
â ðåãóëÿöèè ïðîöåññà áèîòðàíñôîðìàöèè ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ âûïîëíÿþò ôåðìåíòû êàê
öèòîçîëÿ (ÏÀÊ-êèíàçà), òàê è ìèòîõîíäðèé (äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçà). Ïðîöåññ áèîñèíòåçà ÑîÀ íà
êîíå÷íûõ ñòàäèÿõ òåñíî ñîïðÿæåí ñ ïðîòåèíèçàöèåé (ñåêâåñòðàöèåé) âíîâü ñèíòåçèðîâàííîãî
ÑîÀ çà ñ÷åò ðåàêöèé òèîë-äèñóëüôèäíîãî îáìåíà, ÷òî îáåñïå÷èâàåò îïòèìèçàöèþ óñëîâèé ñàìîãî áèîñèíòåçà è äåïîíèðîâàíèÿ ÷àñòè ÑîÀ (â
âèäå äèñóëüôèäà) äëÿ ñòàáèëüíîãî îáåñïå÷åíèÿ
ÑîÀ-çàâèñèìûõ ôåðìåíòàòèâíûõ ðåàêöèé.
 ïîñëåäíèå ãîäû äîñòèãíóò ñóùåñòâåííûé
ïðîãðåññ â èññëåäîâàíèÿõ ÏÀÊ-êèíàçû è ÑîÀñèíòåòàçû ìëåêîïèòàþùèõ, îñóùåñòâëåíî êëîíèðîâàíèå è ýêñïðåññèÿ ôåðìåíòíûõ áåëêîâ, èññëåäîâàíèå èõ áèîõèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ [43]. Ïðîâåäåíà èäåíòèôèêàöèÿ ìîíîôóíêöèîíàëüíîé äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçû, êîòîðàÿ, â îòëè÷èå îò ÑîÀñèíòàçû ìèòîõîíäðèàëüíîãî ìàòðèêñà, ëîêàëèçîâàíà â ìåæìåìáðàííîì ïðîñòðàíñòâå è âî ôðàêöèè íàðóæíîé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû [51].
çóþùèõ ïîòåíöèàëçàâèñèìûå àíèîííûå êàíàëû –
Voltage dependent anion channels (VDAC) èëè
VDAC-àññîöèèðîâàííûìè áåëêàìè (àöèë-ÑîÀñèíòåòàçà äëèííîöåïî÷å÷íûõ àöèë-ÑîÀ). Ïîêàçàíî, ÷òî îáà âèäà àêòèâíîñòè ÑîÀ-ñèíòåòàçû
(äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçíàÿ è äåôîñôî-ÑîÀ-ïèðîôîñôîðèëàçíàÿ) àêòèâèðóþòñÿ in vitro ôîñôàòèäèëõîëèíîì è ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèíîì [52] âåðîÿòíî âñëåäñòâèå èçìåíåíèÿ êîíôîðìàöèîííîãî ñîñòîÿíèÿ îáîèõ ôåðìåíòîâ.  ýòîì ïëàíå ðîëü
äåôîñôî-ÑîÀ âî âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíîì îáåñïå÷åíèè áèîñèíòåçà ÑîÀ ïðèîáðåòàåò êëþ÷åâîå
çíà÷åíèå. Åñëè êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ äëÿ
ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòè ÑîÀ-ñèíòåòàçû ñòîëü çíà÷èìû, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî îáðàòèìîñòü
äåôîñôî-ÑîÀ-ïèðîôîñôîðèëàçíîé ðåàêöèè äåëàåò
âîçìîæíûì âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíûé ñèíòåç
ÑîÀ èç 4′-ôîñôîïàíòåòåèíà [48] èëè, íàïðîòèâ,
óñòðàíåíèå èçáûòêà äåôîñôî-ÑîÀ èç ìèòîõîíäðèàëüíîãî êîìïàðòìåíòà (ñõåìà).
Âûøåîïèñàííûå ìåõàíèçìû ôîðìèðîâàíèÿ
è ðàñïðåäåëåíèÿ âíóòðèêëåòî÷íîãî ôîíäà ÑîÀ
èìåþò èñêëþ÷èòåëüíîå çíà÷åíèå äëÿ ïîääåðæàíèÿ ìåòàáîëè÷åñêîãî ãîìåîñòàçà, ýíåðãîîáåñïå÷åíèÿ è ïîääåðæàíèÿ öåëîñòíîñòè êëåòî÷íûõ
ìåìáðàí. Ñèñòåìà áèîñèíòåçà ÑîÀ â öèòîçîëå è
ìèòîõîíäðèÿõ, ôóíêöèîíàëüíîå äåïîíèðîâàíèå
èëè ñåêâåñòèðîâàíèå ÷àñòè ÑîÀ â ïðîöåññå áèîòðàíñôîðìàöèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ íåñîìíåííî
ÿâëÿþòñÿ ìåõàíèçìîì îáåñïå÷åíèÿ ìíîæåñòâåííîñòè ôóíêöèé ÑîÀ ïîñðåäñòâîì ðàçíîîáðàçíûõ
ÑîÀ- è àöèë-ÑîÀ-çàâèñèìûõ è ìåòàáîëèçèðóþùèõ ðåàêöèé.
78
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊÎÂ
 ïîñëåäíåå âðåìÿ ïðèâëåêàåò îñîáîå âíèìàíèå öèòîçîëüíûé ïóë ÑîÀ, â êîòîðîì ñîñðåäîòî÷åíî äî 10% êëåòî÷íîãî ñîäåðæàíèÿ ÑîÀ â
ôîðìå ÑîÀ-S-S-ãëóòàòèîíà. Äîêàçàíî ó÷àñòèå
íåñèììåòðè÷íîãî äèñóëüôèäà â íåôåðìåíòàòèâíîì è ôåðìåíòàòèâíîì ñóëüôãèäðèëüíî-äèñóëüôèäíîì îáìåíå, â òîì ÷èñëå êàòàëèçèðóåìîì ÑîÀãëóòàòèîí-ãîìîöèñòèí–òðàíñãèäðîãåíàçîé (1.8.4.1)
èëè NADP-çàâèñèìîé ÑîÀ-S-S-ãëóòàòèîí-ðåäóêòàçîé (1.6.4.6) [5]. Âåðîÿòíî, ñ ó÷àñòèåì ÑîÀ-SS-áåëêà öèòîçîëÿ ìîæåò îñóùåñòâëÿòüñÿ ñòàáèëèçàöèÿ ðåäîêñ-ïîòåíöèàëà ñèñòåìû ãëóòàòèîíà,
à òàêæå ðåàëèçàöèÿ ðåäîêñ-ñèãíàëèçèðîâàíèÿ [56].
Åñëè óêàçàííàÿ ãèïîòåçà ñïðàâåäëèâà, òî ñ
åå ïîìîùüþ ìîæíî îáúÿñíèòü ðîëü èíèöèèðîâàíèÿ áèîñèíòåçà ÑîÀ â ïðåäóïðåæäåíèè ïðîöåññîâ àêòèâàöèè ÏÎË, íàðóøåíèÿ öåëîñòíîñòè
ìåìáðàí, âûçûâàåìûõ ðàçíîîáðàçíûìè ôèçè÷åñêèìè è õèìè÷åñêèìè ôàêòîðàìè. Íåïðåìåííûì
óñëîâèåì ïðîòåêòèâíîãî ýôôåêòà ÿâëÿåòñÿ áèîòðàíñôîðìàöèÿ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â ÑîÀ è ñóùåñòâåííûé ðîñò âíóòðèêëåòî÷íîãî âîññòàíîâëåííîãî ãëóòàòèîíà-SH. Ïðîöåññ âûñîêîñïåöèôè÷åí,
òàê êàê áëèçêàÿ ïî ñòðóêòóðå è ôèçèêî-õèìè÷åñêèì ôóíêöèÿì ê ÏÀÊ ãîìîïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà íå òðàíñôîðìèðóåòñÿ â ÑîÀ, íå îáåñïå÷èâàåò
ïðèðîñò âíóòðèêëåòî÷íîãî âîññòàíîâëåííîãî ãëóòàòèîíà è ñòàáèëüíîñòü ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû àñöèòíîé êàðöèíîìû Ýðëèõà [53].
Áèîñèíòåç ÑîÀ, òåñíî ñâÿçàííûé ñ ðåäîêññîñòîÿíèåì êëåòîê òèîëäèñóëüôèäíûì îáìåíîì
ãëóòàòèîíà, ïðîöåññàìè ïðåäóïðåæäåíèÿ àêòèâàöèè ÏÎË è àïîïòîçà [4,5], ìîæåò áûòü íîâîé
îáøèðíîé ñôåðîé ôèçèîëîãè÷åñêèõ è áèîõèìè÷åñêèõ ôóíêöèé ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû, îïîñðåäîâàííîé ìåòàáîëèçìîì ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé [56]. Òåì ñàìûì ìû íàáëþäàåì ÷àñòíûé
ñëó÷àé ïîñòóëèðîâàííîé åùå Ð. Â. ×àãîâöåì [2,39]
ýññåíöèàëüíîñòè âèòàìèíîâ â ìåòàáîëèçìå ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé.
derivatives in thiol-containing compound metabolism and antioxidant system formation as well as in
studying non-coenzymatic functions of B-vitamins
and vitamin-binding proteins had a considerable effect on the almost 40-year studies on pantothenic
acid metabolism and biochemical functions by
scholars at the vitaminologic school in Grodno. The
concept concerning the intracellular structure of the
pantothenate coenzyme form, CoA, pool (content
and ratio of CoA-SH, acetyl-CoA, short-chain and
long-chain acyls-CoA, coenzyme disulfide forms and
CoA-S-S-proteins) was substantiated as an important metabolic regulatory factor (including glutathione
system redox potential), with changes being a principal mechanism of pantothenate derivative vitamin
and pharmacotherapeutic activity implementation.
The effect of the latter is mediated through the
systems of CoA biosynthesis and phosphopantetheine proteins, changed CoA-S-S-protein levels, which
in turn maintain the intracellular level of CoA-SH
as well as cytosolic and mitochondrial transport of
its vitamin-containing precursors. A universal CoA
biosynthetic function was revealed in prevention of
lipid peroxidation initiation and oxidative stress development.
K e y w o r d s: coenzyme A (CoA), CoA biosynthesis, pantothenate kinase, CoA-S-S-protein,
pantothenic acid, acyl-CoA, dephospho-CoA,
4′-phosphopantetheine, 4′-phosphopantothenic acid.
Development of Academician R. V. Chagovets’
ideas of the regulatory role of vitamins and their
1. ×àãîâåö Ð. Â., Ëàõíî Å. Â. // Âîïð. ïèòàíèÿ.
1968. 27, ¹ 1. Ñ. 3–10.
2. ×àãîâåö Ð. Â., Ëàõíî Å. Â. // Âèòàìèíû-V.
Ýâîëþöèîííàÿ, ñðàâíèòåëüíàÿ è âîçðàñòíàÿ
âèòàìèíîëîãèÿ / Ðåä. Ð. Â. ×àãîâåö. Íàóê.
äóìêà, Êèåâ. 1970. Ñ. 75–87.
3. Õàëìóðàäîâ À. Ã., Òîöêèé Â. Í., ×àãîâåö Ð. Â.
Ìåìáðàííûé òðàíñïîðò êîôåðìåíòíûõ âèòàìèíîâ è êîôåðìåíòîâ. Êèåâ: Íàóê. äóìêà.
1982. 280 ñ.
4. Ìîéñååíîê À. Ã., Ãóðèíîâè÷ Â. À. / Ôèçèêîõèìè÷åñêèå è áèîëîãè÷åñêèå îñíîâû ôóíêöèîíèðîâàíèÿ æèâûõ ñèñòåì. Íàóêà. Ìîñêâà. 1985. Ñ. 106–109.
5. Ìîéñååíîê À. Ã. Ïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà (áèîõèìèÿ è ïðèìåíåíèå âèòàìèíà). Ìèíñê.: Íàóêà è òåõíèêà. 1980. 262 ñ.
6. Ìîéñååíîê À. Ã., Þðãèëåâè÷ Â. Ï., Êî÷óðêî Ñ. Í.
è äð. Áèîõèìèÿ ñèíòåçà è îáìåíà êîôåðìåíòîâ è êîôåðìåíòíûõ âèòàìèíîâ. Ìàòåð. I
Âñåñîþç. ñèìï. / Ðåä. Ð. Â. ×àãîâåö. Íàóê.
äóìêà, Êèåâ. 1972. Ñ. 22–23.
7. À.ñ. 629213 ÑÑÑÐ, ÌÊÈ Ñ07Ñ 161/05. Ñïîñîá ïîëó÷åíèÿ ùåëî÷íûõ èëè ùåëî÷íîçåìåëüíûõ ñîëåé S-ñóëüôîïàíòåòåèíà (Â. Ì. Êîïåëåâè÷, À. Â. Ëûñåíêîâà, À. Ã. Ìîéñååíîê,
Â. È. Ãóíàð).
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
79
COENZYME A BIOSYNTHESIS
AS UNIVERSAL MECHANISM
OF CONJUGATION OF EXOGENOUS
AND MULTIPLE PANTOTHENIC
ACID FUNCTIONS
A. G. Moiseyenok, V. A. Gurinovich,
S. N. Omelyanchik, V. S. Slyshenkov
Institute of Biochemistry, National Academy
of Sciences of Belarus, Grodno;
e-mail: [email protected]
Summary
ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯
8. À.ñ. 686360 ÑÑÑÐ, ÌÊÈ Ñ07F 9/09. Ñïîñîá
ïîëó÷åíèÿ 4′-ôîñôàòà D-ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû èëè åãî ñîëè (Â. Ì. Êîïåëåâè÷, À. Â. Ëûñåíêîâà, Ò. Ä. Ìàðèåâà, Â. È. Ãóíàð, À. Ã. Ìîéñååíîê).
9. À.ñ. 776042 ÑÑÑÐ, ÌÊÈ Ñ07F 9/09. Ñïîñîá
ïîëó÷åíèÿ ôîñôàòíûõ ïðîèçâîäíûõ ïàíòåòèíà èëè S-ñóëüôîïàíòåòåèíà (Â. Ì. Êîïåëåâè÷, À. Â. Ëûñåíêîâà, Â. È. Ãóíàð, À. Ã. Ìîéñååíîê).
10. Ëûñåíêîâà À. Â. Ñèíòåç ñåðî- è ôîñôîðñîäåðæàùèõ ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Àâòîðåô.äèñ. ... êàíä. õèì. íàóê. Ìîñêâà.
1979. 25 ñ.
11. Õèìèÿ, áèîõèìè÷åñêèå ôóíêöèè è ïðèìåíåíèå ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû (ìàòåðèàëû 4-ãî
Ãðîäíåíñêîãî ñèìïîçèóìà). Ïîä ðåä. À. Ã. Ìîéñååíêà è äð. Ìèíñê.: Íàóêà è òåõíèêà. 1977.
212 ñ.
12. Ìîéñååíîê À. Ã., Ñëûøåíêîâ Â. Ñ., Ñóíîçîâà Å. Â., Ãóðèíîâè÷ Â. À. // Âîïð. ìåä. õèìèè.
1984. 30, ¹ 1. Ñ. 126–128.
13. Ãóðèíîâè÷ Â. À., Ìîéñååíîê À. Ã. // Âîïð.
ïèòàíèÿ. 1986. ¹ 6. Ñ. 50–54.
14. Ñëûøåíêîâ Â. Ñ., Äåäîâè÷ Ò. Â., Ìîéñååíîê À. Ã. // Õèìèÿ ïðèðîäí. ñîåä. 1987. ¹ 2.
Ñ. 262–265.
15. Õîìè÷ Ò. È., Âîñêîáîåâ À. È. ×åðíèêåâè÷ È. Ï.,
Ìîéñååíîê À. Ã. // Âîïð. ìåä. õèìèè. 1984.
30, ¹ 1. Ñ. 131–132.
16. Øåéáàê Â. Ì., Ìîéñååíîê À. Ã. // Õèì.-ôàðì.
æóðíàë. 1983. 17, ¹ 7. Ñ. 778–781.
17. Ìîéñååíîê À. Ã., Îìåëüÿí÷èê Ñ. Í., Óòíî Ë. ß.
è äð. // Êðèîáèîëîãèÿ. 1988. ¹ 3. Ñ. 36–39.
18. Ãóðèíîâè÷ Â. À., Ìîéñååíîê À. Ã. // Óêð. áèîõèì. æóðíàë. 1987. 59, ¹ 5. Ñ. 60–66.
19. Âîðîáüåâ Â. Â., Õîìè÷ Ò. È., Ìîéñååíîê À. Ã.
// Ôèçèîë. æóðí. ÑÑÑÐ. 1988. 74, ¹ 1.
Ñ. 113–117.
20. Äîðîôååâ Á. Ô., Õîëîäîâ Ë. Å., ßêîâëåâà Ã. Ì.,
Ìîéñååíîê À. Ã. // Õèì.-ôàðì. æóðí. 1988.
¹ 4. Ñ. 401–406.
21. Ðåçÿïêèí Â. È., Ãóðèíîâè÷ Â. À. Äåäîâè÷ Ò. È.,
Ìîéñååíîê À. Ã. // Õèìèÿ ïðèðîäí. ñîåä. 1988.
¹ 6. Ñ. 855–858.
22. Ìîéñååíîê À. Ã. / Ìåòîäû îöåíêè è êîíòðîëÿ
âèòàìèí. îáåñïå÷. íàñåëåíèÿ. Ðåä. Â. Á. Ñïèðè÷åâ. Ìîñêâà. Íàóêà. 1984. Ñ. 111–120.
23. Âåëèêèé Í. Í., Îáðîñîâà È. Ã., Åôèìîâ À. Ñ.
è äð. // Âîïð. ìåä. õèìèè. 1992. 38, ¹ 4.
Ñ. 45–52.
24. Íüþñõîëì Ý., Ñòàðò Ê. Ðåãóëÿöèÿ ìåòàáîëèçìà. Ì.: Ìèð. 1977. 408 ñ.
25. Ìîéñååíîê À. Ã., Êîïåëåâè÷ Â. Ì., Øåéáàê Â. Ì.,
Ãóðèíîâè÷ Â. À. Ïðîèçâîäíûå ïàíòîòåíîâîé
êèñëîòû. Ðàçðàáîòêà íîâûõ âèòàìèííûõ è
ôàðìàêîòåðàïåâòè÷åñêèõ ñðåäñòâ. Ìèíñê: Íàóêà è òåõíèêà. 1989. 216 ñ.
26. Abiko Y. / Metabolism Sulfur Compounds. 7.
Ed. D. M. Greenberg. N.Y.: Acad. Press. 1975.
P. 1–20.
27. Øåéáàê Â. Ì. Âëèÿíèå ñïåöèôè÷åñêèõ è íåñïåöèôè÷åñêèõ ôàêòîðîâ íà ñîîòíîøåíèå
óðîâíÿ êîôåðìåíòà À, àöèë-ÑîÀ è ïðåäøåñòâåííèêà êîôåðìåíòà â ïå÷åíè æèâîòíûõ íà
ñáàëàíñèðîâàííîì è ïàíòîòåíàòäåôèöèòíîì
ðàöèîíàõ. Àâòîðåô. äèñ. ... êàíä.ìåä.íàóê.
Ìèíñê. 1986. 17 ñ.
28. Ðîçàíîâ À. ß. / Âèòàìèíû. Âûï. IX. Ðåä.
Ð. Â. ×àãîâåö. Ê.: Íàóê. äóìêà. 1976. Ñ. 34–
42.
29. Ìîéñååíîê À. Ã., Ãóðèíîâè÷ Â. À., Ëûñåíêîâà À. Â. è äð. // Õèì.-ôàðì. æóðí. 1986. ¹ 12.
Ñ. 1433–1437.
30. Robishaw J. D., Neely J. R. // Am. J. Physiol.
1985. 248, N 1. P. E1–E9.
31. Williamson J. R., Corkey B. // Methods Enzymol.
1979. 55. P. 200–222.
32. Tahiliani A. G., Beinlich C. J. // Vitam. Horm.
1991. 46. P. 165–228.
33. Robishaw J. D., Neely J. R. // Am. J. Physiol.
1984. 246, N 4. P. H532–H541.
34. Halvorsen O., Skrede S. // Anal. Biochem. 1980.
107, N 1. P. 103–108.
35. Ðåçÿïêèí Â. È. / Ïàíòåòèí: ìåòàáîëèçì, ôàðìàêîëîãèÿ è ðåãóëÿöèÿ îáìåíà ëèïèäîâ. Ðèãà:
Çèíàòíå. 1991. Ñ. 53–57.
36. Aghajanian S., Worrall D. M. // Biochem. J.
2002. 365. P. 13–18.
37. Õîìè÷ Ò. È., Ìîéñååíîê À. Ã., Âîñêîáîåâ À. È.
// Áèîõèìèÿ. 1990. 55, ¹ 8. Ñ. 1468–1473.
38. Õîìè÷ Ò. È. Ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû ðåãóëÿöèè è êèíåòè÷åñêèå ñâîéñòâà ïàíòîòåíàòêèíàçû ïå÷åíè êðûñ. Àâòîðåô. äèñ. .... êàíä.áèîë.íàóê. Ìèíñê. 1993. 16 ñ.
39. ×àãîâåö Ð. Â., Øòóòìàí Ö. Ì., Äóøåéêî À. À.
è äð. / Ìàòåð. VI íàó÷íîé ñåññèè Âñåñîþçíîãî íàó÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî èíñòèòóòà âèòàìèíîëîãèè Ìèíçäðàâà ÑÑÑÐ. Ðåä.
Ì. È. Ñìèðíîâ. Ìîñêâà. 1967. Ñ. 64–65.
40. Ìîéñååíîê À. Ã., Õîìè÷ Ò. È., Ðåçÿïêèí Â. È.
// Äîêë. ÀÍ ÑÑÑÐ. 1988. 300, ¹ 2. Ñ. 485–487.
41. Äîðîôååâ Á. Ô. Èññëåäîâàíèå òîêñèêîëîãè÷åñêèõ è ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Àâòîðåô.
äèñ. ..... äîêò. ìåä.íàóê. Ìîñêâà. 1994. 28 ñ.
42. Ïàíòåíîë è äðóãèå ïðîèçâîäíûå ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû: áèîõèìèÿ, ôàðìàêîëîãèÿ è ìåäèöèíñêîå ïðèìåíåíèå. Ìàòåð. ìåæäóíàð.
ñèìï. / Ðåä. À. Ã. Ìîéñååíîê. Ãðîäíî. 1998.
232 ñ.
43. Ìîéñååíîê À. Ã., Ãóðèíîâè÷ Â. À. / Ïèòàíèå è
80
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊÎÂ
îáìåí âåùåñòâ. Ðåä. À. Ã. Ìîéñååíîê. Ãðîäíî. 2002. Ñ. 53–70.
44. Ãóðèíîâè÷ Â. À. Áèîòðàíñôîðìàöèÿ è ïðîòåèäèçàöèÿ ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû
â ïå÷åíè æèâîòíûõ. Àâòîðåô. äèñ. ... êàíä.
áèîë. íàóê. Ãðîäíî. 2003. 24 ñ.
45. Skrede S., Halvorsen O. // Eur. J. Biochem.
1983. 131, N 1. P. 57–63.
46. Tahiliani A., Neely J. // J. Biol. Chem. 1987.
262, N 24. P. 11607–11610.
47. Ìîéñååíîê À. Ã. / Êîôåðìåíò À è åãî ïðåäøåñòâåííèêè: ñèíòåç, àíàëèç è ýêñïåðèìåíòàëüíîå èçó÷åíèå. Ðåä. Â. Ñ. Òèøêèí. Ìîñêâà. 1997. Ñ. 15–22.
48. Ìîéñååíîê À. Ã. Áèîñèíòåç êîôåðìåíòà À â
ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Àâòîðåô. äèñ. .... äîêò.
áèîë. íàóê. Ìîñêâà. 1996. 47 ñ.
49. Tahiliani A. G. // Biochim. Biophys. Acta. 1991.
1067, N 1. P. 29–37.
50. Balzer I., Huth W. // Ibid. 1986. 870, N 2.
P. 350–356.
51. Daugherty M., Polanuyer B., Farrell M. et al. //
J. Biol. Chem. 2002. 277, N 24. P. 21431–
21439.
52. Zhyvoloup A., Nemazanyy I., Panasyuk G. et al.
// Ibid. 2003. 278, N 50. P. 50316–50321.
53. Slyshenkov V. S., Rakowska M., Moiseenok A. G.,
Wojtczak L. // Free Radic. Biol. Med. 1995.
19, N 66. P. 767–772.
54. Slyshenkov V. S., Moiseenok A. G., Wojtczak L.
// Ibid. 1996. 20, N 6. P. 793–800.
55. Slyshenkov V. S., Piwocka K., Sikora E.,
Wojtczak L. // Ibid. 2001. 30, N 11. P. 1303–
1310.
56. Ìîéñååíîê À. Ã. / Áèîõèìèÿ, ôàðìàêîëîãèÿ
è êëèíè÷åñêîå ïðèìåíåíèå ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Ðåä. À. Ã. Ìîéñååíîê.
Ãðîäíî. 2003. Ñ. 107–114.
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4
81