1 002339 2 Настоящее изобретение относится к ти

1
Настоящее изобретение относится к тиольным производным, обладающим ингибирующей активностью в отношении металлопептидаз, и в частности оно относится к производным N-меркаптоацилаланина, пригодным для
лечения сердечно-сосудистых заболеваний.
Интерес к изучению молекул, обладающих
способностью ингибировать металлопептидазы,
с точки зрения фармакологии обусловлен ролью
указанных ферментов, проявляющейся на уровне сердечно-сосудистой системы.
Хорошо известным является тот факт, что
соединения, которые обладают ингибирующей
активностью в отношении ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ), весьма перспективны для лечения гипертензии, сердечной недостаточности и постинфарктного состояния благодаря тому, что они ингибируют образование
ангиотензина II, представляеющего собой вещество, которое оказывает различные воздействия,
в том числе увеличивает кровяное давление.
Соединения, обладающие ингибирующей
активностью в отношении эндотелинпревращающего фермента (ЕСЕ), пригодны в качестве
антисосудосуживающих агентов, поскольку они
ингибируют образование эндотелина, представляющего собой пептид, состоящий из 21 аминокислоты и обладающий сосудосуживающей активностью.
И наоборот, соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении фермента нейтральная эндопептидаза (NEP), который
также называют энкефалиназой, пригодны в
качестве сосудорасширяющих агентов, поскольку фермент NEP ответственен за инактивацию не только эндогенного энкефалина, но
также и некоторых натрийуретических факторов, среди которых, например, следует отметить
предсердный фактор (предсердный натрийуретический фактор, ANF), гормон, секретируемый
сердцем, который увеличивает расширение кровеносных сосудов и на почечном уровне повышает диурез и натрийурез.
Таким образом, с учетом их разных механизмов действия на сердечно-сосудистую систему, соединения, обладающие ингибирующей
активностью в отношении металлопептидаз,
обычно используются по отдельности или в
комбинации для лечения гипертензии, почечной
недостаточности, застойной сердечной недостаточности и ишемических кардиопатологий.
Из тиольных производных, обладающих
ингибирующей активностью в отношении металлопептидаз, в качестве соединений-аналогов
для NEP-ингибиторов и АСЕ-ингибиторов соответственно рассматривают тиорфан [(DL)-(3меркапто-2-бензилпропаноил)глицин], впервые
описанный Request и др. в Nature, том 288, стр.
286-288 (1980), и каптоприл (The Merck Index,
XI изд., № 1773, стр. 267) соответственно.
В литературе описаны другие имеющие
тиольное строение молекулы, которые обладают
002339
2
ингибирующей активностью в отношении металлопептидаз.
N-Меркаптоацильные дипептиды, обладающие ингибирующей активностью в отношении ЕСЕ, в частности N-меркаптоацильные
производные триптофана, описаны у S.R. Bertenshaw и др. в Bioorganic & Medicinal Chemistry
Letters, 10, 1953-1958,1993.
В патенте США 4401677 (E.R. Squibb &
Sons, Inc.) описаны меркаптоалканоильные аминокислоты, обладающие ингибирующей активностью в отношении энкефалиназы.
В патенте США 4199512 (E.R. Squibb &
Sons, Inc.) описаны меркаптоалканоильные аминокислоты, обладающие ингибирующей активностью в отношении АСЕ.
В европейской заявке 0566157 (Schering
Corporation) описаны N-меркаптоапильные производные аланина, обладающие ингибирующей
активностью в отношении NEP.
В европейской заявке 0449523 (E.R. Squibb
& Sons, Inc.) описаны меркапто- или ацилтиотрифторметиламиды, обладающие ингибирующей активностью в отношении NEP.
В европейской заявке 0524553 [Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale
(INSERM)] описаны ацилмеркаптоалканоилдипептиды, обладающие ингибирующей активностью в отношении нейтральной эндопептидазы
и пептидилпептидазы А.
В международной заявке WO 93/08162
[Rhone-Poulenc Rorer S.A.-Institut National de la
Sante et de la Recherche Medicale (INSERM)]
описаны β,β-дизамещенные α-меркаптометилпропиониламиды, обладающие смешанной
ACE/NEP-ингибирующей активностью.
В европейской заявке 0419327 (Societe Civile Bioproject) описаны производные аминокислот, такие как, например, N-меркаптоацильные производные фенилаланина, гистидина и
триптофана, обладающие ингибирующей активностью в отношении энкефалиназы и в отношении АСЕ.
α-Меркаптоацильные дипептиды, обладающие ингибирующей активностью в отношении АСЕ и NEP, также описаны у S.S. Bhagwat и
др. в Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7,
735-738, 1995.
В этой последней работе авторами сделано
заключение, что присутствие бифенилметильной группы придает представляющую интерес
смешанную ACE/NEP-ингибирующую активность молекулам, имеющим строение αмеркаптоацильного дипептида, замещение бифенильной группы такими группами, как α- или
β-нафтил, приводит к существенному снижению
активности.
Согласно настоящему изобретению были
обнаружены производные N-меркаптоацилаланина, которые обладают выраженной ингибирующей активностью в отношении ангиотен-
3
зинпревращающего фермента, а также фермента
нейтральная эндопептидаза (двойная ACE/NEPингибирующая активность), что делает их особенно пригодными для лечения сердечнососудистых патологий.
Таким образом, объектом настоящего изобретения являются соединения формулы
где R обозначает меркаптогруппу или группу
R4COS, которая превращается в организме в
меркаптогруппу,
R1 обозначает С2-С4алкильную группу с
прямой или разветвленной цепью или арильную
или арилалкильную группу, имеющую от 1 до 6
атомов углерода в алкильном фрагменте, где
арил обозначает фенил или 5- или 6-членный
ароматический гетероцикл с одним или двумя
гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно
замещенный одним или несколькими одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей атомы галогена,
гидроксигруппы, алкокси-, алкил-, алкилтио-,
алкилсульфонил- или алкоксикарбонильные
группы, которые имеют от 1 до 6 атомов углерода в алкильном фрагменте, C1-С3алкильные
группы, которые содержат один или несколько
атомов фтора, карбоксигруппы, нитрогруппы,
амино- или аминокарбонильные группы, ациламиногруппы, аминосульфонильные группы,
моно- или диалкиламино- или моно- или диалкиламинокарбонильные группы, имеющие от 1
до 6 атомов в алкильном фрагменте,
R2 обозначает водород, С1-С4алкильную
группу с прямой или разветвленной цепью или
бензильную группу,
R3 обозначает 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, который содержит один или
два гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно
замещенный фенильной группой, где фенильная
и гетероциклическая группа необязательно замещены одним или двумя одинаковыми или
различными заместителями, выбранными из
группы, включающей атомы галогена, алкил-,
алкокси-, алкилтио- или алкоксикарбонильные
группы, которые имеют от 1 до 3 атомов углерода в алкильном фрагменте,
R4 обозначает С1-С4алкильную группу с
прямой или с разветвленной цепью или фенильную группу,
атомы углерода, помеченные звездочкой, являются стереогенными центрами,
и их фармацевтически приемлемые соли,
при условии, что R3 не обозначает имидазолильную или индолильную группу.
Соединения формулы I содержат два стереогенных центра и поэтому могут находиться в
форме стереоизомеров.
002339
4
Таким образом, объектом настоящего изобретения являются соединения формулы I в
форме стереоизомерной смеси, а также в форме
отдельных стереоизомеров.
Соединения формулы I по изобретению
обладают двойной ACE/NEP-ингибирующей
активностью и пригодны для лечения сердечнососудистых заболеваний.
В контексте настоящего описания, если не
указано иное, под понятием "алкильная группа с
прямой или разветвленной цепью" подразумевают алкил, такой как метил, этил, н-пропил,
изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил,
изобутил, н-пентил, 2-пентил, 3-пентил, изопентил, трет-пентил, н-гексил и изогексил; под понятием "алкоксигруппа с прямой или разветвленной цепью" подразумевают алкоксигруппу,
такую как метокси, этокси, н-пропокси и изопропокси; под понятием "атом галогена" подразумевают атом фтора, хлора, брома или йода;
под понятием "ацил" подразумевают ацильную
группу, происходящую из алифатической или
ароматической карбоновой кислоты, такой как
уксусная, пропионовая, масляная и бензойная
кислота; под понятием "5- или 6-членный ароматический гетероцикл с 1 или 2 гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот,
кислород и серу", подразумевают такую группу,
как тиазол, изоксазол, оксазол, изотиазол, пиразол, имидазол, тиофен, пиррол, пиридин, пиримидин, пиразин, пиридазин и фуран, необязательно сконденсированный с бензольным кольцом.
Примерами фармацевтически приемлемых
солей соединений формулы I являются соли
щелочных или щелочно-земельных металлов и
соли фармацевтически приемлемых органических оснований.
Предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, в которых R3 обозначает 5- или 6-членную ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит один
или два гетероатома, выбранных из группы,
включающей азот, кислород и серу.
Еще более предпочтительными соединениями в этом классе являются соединения формулы I, у которых R1 обозначает фенилалкильную группу, необязательно замещенную одним
или несколькими одинаковыми или различными
заместителями, выбранными из группы, включающей атомы галогена, гидрокси-, алкил- или
алкоксигруппы.
Предпочтительными примерами фармацевтически приемлемых солей соединений
формулы I являются соли щелочных металлов,
таких как натрий, литий и калий.
Для специалиста в данной области очевидно, что соединения формулы I, у которых R обозначает группу R4COS, обладают способностью
превращаться в организме в соединения, у которых R обозначает меркаптогруппу, а соединения
формулы I, у которых R2 обозначает алкильную
5
или бензильную группу, являются биологическими предшественниками (пролекарствами)
соответствующих соединений формулы I, у которых R обозначает меркаптогруппу (R=SH)
или R2 обозначает атом водорода (R2=Н) соответственно.
Конкретные примеры предпочтительных
соединений формулы I по изобретению включают
метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио2-фенилметилпропионил)(2-тиенил)аланина;
метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио2-фенилметилпропионил)(4-тиазолил)аланина;
метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио2-фенилметилпропионил)(2-пиридил)аланина;
метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио2-фенилметилпропионил)(3-пиридил)аланина;
метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио2-фенилметилпропионил)(2-фурил)аланина;
N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)
(2-тиенил)аланин;
N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)
(4-тиазолил)аланин;
N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)
(2-пиридил)аланин;
N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)
(3-пиридил)аланин;
N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)
(2-фурил)аланин.
Получение предлагаемых соединений
формулы I проводят в соответствии со способом
синтеза, включающим взаимодействие между
соединением формулы
где R и R1 имеют указанные выше значения, и
производным аланина формулы
где R2 и R3 имеют указанные выше значения.
Реакцию конденсации проводят в соответствии со способами, общепринятыми в химии
пептидов.
До проведения реакции может оказаться
полезным соответствующим образом защитить
необязательные функциональные группы, которые могут мешать взаимодействию.
Необязательную защиту проводят общепринятыми способами.
В отношении соединений, у которых R
обозначает группу R4COS, предпочтительно
использовать в качестве промежуточных веществ соединения формулы II, получая, таким
образом, соответствующие соединения формулы I, у которых R обозначает группу R4COS, из
которых путем гидролиза могут быть получены
соединения формулы I, у которых R обозначает
группу SH.
Оценка пригодности необязательной защиты, а также выбор приемлемого типа защиты,
002339
6
соответствующего проводимой реакции и функциональным группам, подлежащим защите, хорошо известны специалистам в данным области.
Удаление необязательных защитных групп
проводят в соответствии с общепринятыми способами.
Общие примеры применения защитных
групп в органической химии можно найти у
Theodora W. Greene и Peter G.M. Wuts в "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley &
Sons, Inc., 2 изд., 1991.
Соединения формул II и III являются известными или легко могут быть получены общепринятыми способами.
Например, соединения формулы II могут
быть получены согласно описанию к патенту
Великобритании 1576161, выданному на имя
E.R. Squibb & Sons, Inc.
Соединения формулы I в форме отдельных
стереоизомеров получают путем стереоселективного синтеза или разделения стереоизомерной смеси в соответствии с общепринятыми
способами.
Получение солей предлагаемых соединений формулы I также проводят в соответствии с
общепринятыми способами.
Соединения формулы I по изобретению
проявляют двойную ACE/NEP-ингибирующую
активность и пригодны для лечения сердечнососудистых заболеваний.
Ингибирующую активность соединений
формулы I оценивали в опытах in vitro.
В частности, ингибирующую активность
соединений формулы I оценивали в сравнении с
вышеуказанными тиорфаном и каптоприлом.
Обнаруженная ингибирующая активность
in vitro соединений формулы I, выраженная в
виде значения IC50, является важной с фармакологической точки зрения, поскольку проявляется в наномолярных концентрациях.
Обнаруженная ингибирующая активность
в отношении АСЕ оказалась сопоставимой с
активностью каптоприла, а ингибирующая активность в отношении NEP оказалась сопоставимой с активностью тиорфана.
Для практического применения в терапии
на основе соединений формулы I могут быть
изготовлены твердые или жидкие фармацевтические композиции, пригодные для орального
или парентерального введения.
Таким образом, фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество соединения формулы I в смеси с
носителем, предназначенные для фармацевтического применения, являются еще одним объектом настоящего изобретения.
Конкретными примерами фармацевтических композиций по настоящему изобретению
являются таблетки, таблетки с покрытием, капсулы, грануляты, растворы и суспензии, пригодные для орального введения, а также раство-
7
ры и суспензии, пригодные для парентерального
введения.
Фармацевтические композиции по изобретению получают в соответствии с общепринятыми способами.
Суточная доза соединения формулы I или
соответствующего пролекарства может зависеть
от ряда факторов, таких как серьезность заболевания, индивидуальная реакция пациента или
тип композиции, но она обычно находится в
диапазоне от 0,1 до 10 мг на кг веса тела и может применяться в виде однократной дозы или
может быть разделена на несколько суточных
доз.
Ниже изобретение проиллюстрировано на
примерах.
Если не указано иное, быструю хроматографию проводили с использованием силикагеля для быстрой хроматографии фирмы Baker
(код 7024-00).
Пример 1. Получение метилового эфира N(3-фенилкарбонилтио-2-фенилметилпропионил)
(4-тиазолил)-L-аланина (соединение 1).
Раствор гидроксибензотриазола (1,25 г;
9,25 ммоля) в тетрагидрофуране (30 мл), а затем
раствор дициклогексилкарбодиимида (1,81 г;
9,25 ммоля) в метиленхлориде (10 мл) добавляли при перемешивании при 0°С к смеси, содержащей 3-фенилкарбонилтио-2-фенилметилпропионовую кислоту (2,78 г; 9,25 ммоля), метиловый эфир (4-тиазолил)-L-аланина (2,40 г; 9,25
ммоля), полученный обработкой метилового
эфира N-трет-бутоксикарбонил-(4-тиазолил)-Lаланина (поставляемого фирмой Sinthetech Inc.
Oregon) метанолом и тионилхлоридом, триэтиламин (2,58 мл; 18,5 ммоля) в тетрагидрофуране
(25 мл) и в метиленхлориде (40 мл). Реакционную смесь выдерживали при перемешивании
при комнатной температуре в течение 20 ч, затем отфильтровывали дициклогексилмочевину
и растворитель выпаривали при пониженном
давлении. Остаток собирали этилацетатом и
раствор промывали 20%-ным водным раствором
хлорида натрия, 5%-ным раствором бикарбоната натрия и еще раз 20%-ным раствором хлорида натрия. После разделения фаз и упаривания
органической фазы образовавшееся твердое вещество очищали экспресс-хроматографией (силикагель, элюент этилацетат:гексан в соотношении 1:1, давление азота 0,1 атм.), получая
таким образом метиловый эфир N-(3фенилкарбонилтио-2-фенилметилпропионил)(4тиазолил)-L-аланина (3,85 г; выход 88%) в виде
маслянистого продукта.
После обработки маслянистого продукта
этиловым эфиром и гексаном и последующей
фильтрации получали требуемый продукт в виде твердого вещества (2,2 г; соотношение стереоизомеров 2S:2R = 85:15).
1
H-ЯМР (200 МГц, СDСl3): δ (част./млн):
2,67-3,30 (m, 7H, СH2-СН-СН2, СН2-тиазолил);
3,60 (s, 3Н, ОСН3); 4,77-4,89 (m, 1H, CONH-CH);
002339
8
6,53 (s, 1Н, NH); 7,15-7,90 (m, 10Н, фенил); 6,928,51 (m, 2H, тиазолил).
Из маточных растворов выделяли дополнительную фракцию соединения 1 (1,5 г; соотношение стереоизомеров 2S:2R = 65:35) в виде
маслянистого продукта.
Аналогичным путем получали следующие
соединения:
метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио2-фенилметилпропионил)(2-тиенил)-L-аланина
(соединение 2):
tпл 68-70°С;
1
H-ЯМР (200 МГц, СDCl3): δ (част./млн):
2,65-3,40 (m, 7H, СН2-СН-СH2, СН2-тиенил);
3,61 и 3,62 (2s, 3Н, ОСН3); 4,70-4,90 (2m, 1H,
CONH-CH); 5,85-5,90 и 5,95-6,02 (2m, 1H, NH);
6,60-7,05 (m, 3Н, тиенил); 7,10-8,00 (m, 10Н,
фенил);
метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио2-фенилметилпропионил)(2-пиридил)-L-аланина (соединение 3):
tпл 84-86° С;
1
H-ЯМР (200 МГц, СDСl3): δ (част./млн):
2,70-3,30 (m, 7H, СН2-СН-СН2, СН2-пиридил);
3,59 (s, 3Н, ОСН3); 4,71-4,92 (m, 1H, CONH-CH);
6,90-8,28 (m, 15H, NH, фенил, пиридил).
Пример 2. Получение N-(2-фенилметил-3меркаптопропионил)(4-тиазолил)-L-аланина
(соединение 4).
Метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио2-фенилметилпропионил)(4-тиазолил)-L-аланина (1,20 г; 2,56 ммоля), полученный согласно
примеру 1, суспендировали в этаноле (30 мл),
дегазировали, барботируя азотом, для удаления
кислорода. К суспензии при 0°С добавляли в
атмосфере азота по каплям водный дегазированный 1н. раствор гидроксида натрия (7,68 мл).
Реакционную смесь выдерживали при перемешивании в течение 4 ч при комнатной температуре, затем охлаждали до 0°С и подкисляли
10%-ным раствором соляной кислоты (5 мл) и
предварительно дегазированной водой (5 мл).
Реакционную смесь упаривали досуха при пониженном давлении и остаток собирали ацетонитрилом и еще раз упаривали досуха. Остаток,
собранный смесью метанол:метиленхлорид в
соотношении 1:1 (15 мл), фильтровали с целью
удаления неорганических солей и раствор упаривали досуха при пониженном давлении. Затем
остаток собирали водой, содержащей соляную
кислоту (20 мл) и метиленхлорид (20 мл). Фазы
разделяли и органическую фазу упаривали досуха при пониженном давлении, получая остаток (0,81 г), из которого после обработки третбутиловым эфиром, фильтрации и сушки получили N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)
(4-тиазолил)-L-аланин (0,52 г; выход 58%; соотношение стереоизомеров 2S:2R = 90:10).
tпл 145-147° С.
1
H-ЯМР (200 МГц, СDСl3): δ (част./млн):
1,53 (t, 1H, JHH=8,4 Гц, SH); 2,51-2,98 (m, 5H,
9
CH2-CH-CH2); 3,39-3,51 (ABX, 2H, Jab=14,7 Гц,
Jax=3,4 Гц, Jbx=5,9 Гц, СН2-тиазолил); 4,63-4,71
(m, 1H, CHCOO); 6,51 (d, 1H, JHH=5,8 Гц,
CONH); 7,09=7,30 [m, 6H, фенил, СН(тиазолил)]; 8,85 [d, 1H, JHH=2,0 Гц, СН(тиазолил)].
Аналогичным путем получали следующие
соединения:
N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)
(2-тиенил)-L-аланин (соединение 5):
1
H-ЯМР (200 МГц, СDСl3): δ (част./млн):
1,40-1,61 (m, 1H, SH); 2,47-3,46 (m, 7H, СН2-СНСН2, СН2-СН-СОО); 4,78-4,91 (m, 1H, CHCOO);
6,00-6,06 (m, 1H, CONH); 6,40-7,33 (m, 8H, ароматич.); 7,50 (bs, 1H, COOH);
N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)
(2-пиридил)-L-аланин (соединение 6):
tпл 164-166°С;
1
H-ЯМР (200 МГц, ДMCO-d6): δ
(част./млн): 1,78-1,86 (m, 1H, SH); 2,20-2,89 (m,
5Н, СH2-СН-СH2); 2,95-3,26 (m, 2H, СH2пиридил); 4,64-4,75 (m, 1H, СНСОО); 8,33 (d,
1H, JHH=8,1 Гц, NH); 7,10-8,47 (m, 9H, ароматич.); 12,7 (bs, 1H, СООН).
Пример 3. Оценка фармакологической активности in vitro.
а) Ингибирующая активность в отношении
NEP.
Ингибирующую активность в отношении
NEP оценивали на мембранах коркового слоя
почки крыс, полученных в соответствии со способом, описанным у Т. Maeda и др. в Biochim.
Biophys. Acta 1983, 731(1), 115-120.
У самцов крыс линии Sprague-Dawley весом примерно 300 г удаляли почки и выдерживали при 4°С. Корковый слой почки осторожно
выделяли, тонко измельчали и суспендировали в
гомогенизирующем буфере (10 мМ фосфат натрия, рН 7,4, содержащий 1 мМ MgCl2, 30 мМ
NaCl, 0,02% NаN3) в концентрации 1:15 мас./об.
Затем ткань гомогенизировали на холоде в течение 30 с с использованием гомогенизатора
типа Ultra-Turrax. Приблизительно 10 мл гомогената наслаивали на 10 мл сахарозы (41%
мас./об.) и центрифугировали при 31200 об./мин
в течение 30 мин при 4°С с фиксированным углом ротора. Мембраны собирали с поверхности
буфера/сахарозы, дважды промывали 50 мМ
трис-НСl-буфером (рН 7,4) и ресуспендировали
в этом же буфере для хранения до использования в виде аликвотных количеств при -80°С.
Ингибирующую активность в отношении NEP
оценивали в соответствии с методом, описанным у С.Llorens и др. в Eur. J. Pharmacol. 69,
(1981), 113-116, как представлено в данном описании.
Аликвотные количества суспензии мембран, полученные по описанной выше методике,
(концентрация протеинов 5 мкг/мл) предварительно инкубировали в присутствии ингибитора
аминопептидазы (Бестатин -1 мМ) в течение 10
мин при 30°С. Добавляли [3Н] [Leu5]-энкефалин
002339
10
(15 нМ) и трис-НСl-буфер, рН 7,4 (50 мМ), таким образом, чтобы получить конечный объем
100 мкл. Через 20 мин инкубацию при 30°С
прекращали, добавляя 0,1 M HCl (100 мкл). Образование метаболита [3H]Tyr-Gly-Gly количественно оценивали после отделения непрореагировавшего субстрата с помощью хроматографии на полистироловых колонках (Porapak Q),
измеряя относительную радиоактивность с помощью жидкостного сцинтиляционного счетчика.
Процент ингибирования образования метаболита в препаратах мембран, обработанных
соединениями формулы I и соединениямиэталонами, по сравнению с необработанными
препаратами мембран выражали в виде значения IС50 (нМ).
б) Ингибирующая активность в отношении
АСЕ.
Ингибирующую активность в отношении
АСЕ оценивали в соответствии с методом, известным из литературы [B.Holmquist и др. Analytical Biochemistry, 95, 540-548 (1979)].
50мкМ АСЕ (250 миллиед./мл, выделенный из легкого кролика, КФ 3.4.15.1, фирма
SIGMA) предварительно инкубировали в термостатированных кюветах при 37°С с 50 мкл соединения формулы I или соединения-эталона,
или соответствующего носителя. Реакцию начинали добавлением 500 мкл 0,8 мМ фурилакрилоилфенилаланилглицилглицина
(FAPGGSIGMA). Одновременно с помощью спектрофотометра типа Beckman DU-50, снабженного программой для расчета дельта А/мин и коэффициентов регрессии кривых, описывающих кинетику фермента, непрерывно в течение 5 мин регистрировали поглощение при 340 нм.
Процент ингибирования фермента в препаратах, обработанных соединениями формулы
I или соединениями-эталонами, по сравнению с
препаратами, которые инкубировали с носителем, выражали в виде значения IC50 (нМ).
Ниже в таблице приведены значения IC50
(нМ), соответствующие АСЕ-ингибирующей и
NEP-ингибирующей активности соединений 4, 5
и 6 и соединений-эталонов тиорфана и каптоприла.
Таблица
АСЕ-ингибируюшая и NEP-ингибирующая активность, выраженная в виде значения IC50 (нМ)
соединений 4, 5, 6 и тиорфана и каптоприла
Соединение
4
5
б
тиорфан
каптоприл
АСЕ-ингибирующая активность
IC50 (нМ)
12
6,5
23
99
4,6
NEP-ингибирующая активность
IC50 (нМ)
4,7
5,5
7,1
18
не активно
Данные, приведенные в таблице, показывают, что предлагаемые соединения формулы I
11
002339
обладают выраженной двойной ACE/NEPингибирующей активностью. Выявленная активность сопоставима с активностью каптоприла в отношении АСЕ-ингибирующей активности и с активностью тиорфана в отношении
NEP-ингибирующей активности.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы
где R обозначает меркаптогруппу или группу
R4COS, которая превращается в организме в
меркаптогруппу,
R1 обозначает С2-С4алкильную группу с
прямой или разветвленной цепью или арильную
или арилалкильную группу, имеющую от 1 до 6
атомов углерода в алкильном фрагменте, где
арил обозначает фенил или 5- или 6-членный
ароматический гетероцикл с одним или двумя
гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно
замещенный одним или несколькими одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей атомы галогена,
гидроксигруппы, алкокси-, алкил-, алкилтио-,
алкилсульфонил- или алкоксикарбонильные
группы, которые имеют от 1 до 6 атомов углерода в алкильном фрагменте, С1-С3алкильные
группы, которые содержат один или несколько
атомов фтора, карбоксигруппы, нитрогрулпы,
амино- или аминокарбонильные группы, ациламиногруппы, аминосульфонильные группы,
моно- или диалкиламино- или моно- или диалкиламинокарбонильные группы, имеющие от 1
до 6 атомов в алкильном фрагменте,
R2 обозначает водород, С1-C4алкильную
группу с прямой или разветвленной цепью или
бензильную группу,
R3 обозначает 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, который содержит один или
два гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, необязательно
сконденсированный с бензольным кольцом, необязательно замещенный фенильной группой,
где фенильная и гетероциклическая группа необязательно замещены одним или двумя одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей атомы галогена, алкил-, алкокси-, алкилтио- или алкоксикарбонильные группы, которые имеют от 1 до 3
атомов углерода в алкильном фрагменте,
R4 обозначает С1-С4алкильную группу с
прямой или разветвленной цепью или фенильную группу,
12
атомы углерода, помеченные звездочкой, являются стереогенными центрами,
и его фармацевтически приемлемые соли,
при условии, что R3 не обозначает имидазолильную или индолильную группу.
2. Соединение формулы I по п.1, где R3
обозначает 5- или 6-членную ароматическую
гетероциклическую группу, которая содержит
один или два гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу.
3. Соединение формулы I по п.2, где R1
обозначает фенилалкильную группу, необязательно замещенную одним или несколькими
одинаковыми или различными заместителями,
выбранными из группы, включающей атомы
галогена, гидрокси-, алкил- или алкоксигруппы.
4. Соединение формулы I по п.1 в форме
соли с щелочным металлом, выбранным из
группы, включающей натрий, литий и калий.
5. Способ получения соединения формулы
I по п.1, включающий взаимодействие между
соединением формулы
где R и R1 имеют значения, указанные в п.1, и
производным аланина формулы
где R2 и R3 имеют значения, указанные в п.1.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество
соединения формулы I по п.1 в смеси с носителем, предназначенная для фармацевтического
применения.
7. Фармацевтическая композиция по п.6,
предназначенная
для
лечения
сердечнососудистых заболеваний.
8. Способ лечения сердечно-сосудистых
заболеваний, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения
формулы I по п.1.
9. Метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио-2-фенилметилпропионил)(4-тиазолил)-Lаланина.
10. Метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио-2-фенилметилпропионил)(2-тиенил)-Lаланина.
11. Метиловый эфир N-(3-фенилкарбонилтио-2-фенилметилпропионил)(2-пиридил)-Lаланина.
12. N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)(4-тиазолил)-L-аланин.
13. N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)(2-тиенил)-L-аланин.
14. N-(2-фенилметил-3-меркаптопропионил)(2-пиридил)-L-аланин.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, ГСП-9 101999, Москва, Центр, М. Черкасский пер., 2/6