Автореферат Ращектаева А.С. - Уральская государственная
реклама
На правах рукописи Ращектаев Александр Сергеевич Фармако-клиническое обоснование применения препарата «Геприм для кошек» при жировом гепатозе 06.02.03 - Ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Троицк 2015 Диссертация выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении «Южно-Уральский государственный аграрный университет» Научный руководитель Щербаков Павел Николаевич доктор ветеринарных наук, доцент Официальные: оппоненты: Чудов Иван Владимирович, доктор биологических наук, доцент ФГБОУ ВО Башкирский государственный аграрный университет, проректор по научной и инновационной деятельности Глотова Татьяна Ивановна, доктор биологических наук, профессор Федеральное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока", заведующая лабораторией вирусологии Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Зональный научно исследовательский институт сельского хозяйства Северо-Востока имени Н.В. Рудницкого" Защита диссертации состоится «____» «______________» ______г. в «____» часов на заседании диссертационного совета Д 220.066.01 при ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный аграрный университет» по адресу: 457100, Челябинская область, г. Троицк, ул. Гагарина, 13, тел. 8 (35163) 2-4888; факс 8(35163) 2-04-72; E-mail: [email protected], официальный сайт www.usavm.ac.ru С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВО «ЮжноУральский государственный аграрный университет» и на сайте www.usavm.ac.ru. Автореферат разослан «___» «_______________» _______г. Ученый секретарь Диссертационного совета Борисенко Елена Валерьевна 2 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. За последние десятилетия значительно увеличилось количество мелких домашних животных, в том числе кошек. Вопервых, это связано с появлением большого числа питомников породистых животных. Во-вторых - с недостаточно эффективной профилактической работой по сокращению бродячих животных (Шаповалова Ю.С., 2009). Соответственно, участились случаи обращения в ветеринарные учреждения животных с различными патологиями как инфекционного, так и неинфекционного происхождения. Кроме того, в связи с близкородственным скрещиванием в питомниках, увеличилось число кошек с генетическими нарушениями и наследственными заболеваниями (Шустрова И., 2010). Несбалансированное кормление животных, гиподинамия, нарушение ветеринарно-санитарных показателей и зоогигиенических норм, а также слабая обеспеченность учреждений ветеринарной службы лечебными и профилактическими препаратами, приводят к развитию патологических метаболических процессов, способствующих возникновению заразных и незаразных болезней животных (Алиев A.A., 1972; Данилевский В.М.,1983; Журавель А.А., Савойский А.Г., 1985; Жаров А.В., 1999; Уша Б.В. с соавт., 2002; Фердман Н.А., 2007; Смирнов А.М., 2010). Наибольшее количество незаразных заболеваний связано с желудочнокишечным трактом. Среди патологий пищеварительной системы особую роль занимают поражения печени (Котард Ж.П.,1999; Jubb K.V.F., Kennedy P.C., 1970; Ling G.V., 1977; Cornelius L.M., DeNovo R.C., 1983; Zawie D.A., Garvey M.S.,1984; Cornelius L.M., Rogers K.S., 1985; Center S.A., 1986; Weiss D.j., Armstrong P.J. and Gagne J.,1997; Lisciandro S.C., Hohenhaus A., Brooks M., 1998; James O., Day C.P., 1999; Roudebush P., Davenport D.J., Dimski D.S., 2000; Holan K.M., 2008; Blanchard G., Armstrong P.J., 2009). Одной из причин этого является появление в последнее время на рынке огромного количества готовых рационов в виде сухих кормов или консервов. Наряду с неоспоримыми плюсами, такими как: простота кормления, сбалансированность рациона по всем необходимым веществам и элементам, существует и большой недостаток – нерациональное скармливание, приводящее к набору живой массы, ожирению, а соответственно и повышенной нагрузке на внутренние органы, и в первую очередь на печень. Большая часть заболеваний печени у кошек 3 относится к хроническим, среди которых ведущую роль занимает жировой гепатоз. Актуальным остается вопрос разработки как новых препаратов для лечения жировой дистрофии печени, так и создание целых схем лечения на основании уже имеющихся препаратов. Однако, несмотря на комплексность лечения, основным видом терапии при печеночных заболеваниях является гепатопротективная. На данный момент имеется значительное количество гепатопротективных препаратов, но практически все они имеют ряд недостатков – дороговизна, длительные курсы применения, сложность введения некоторых из них. Данный факт послужил причиной поиска новых средств лечения жирового гепатоза кошек. Степень разработанности проблемы. Данные по применению препаратов на основе цитотоксических сывороток при лечении гепатозов у непродуктивных животных в специальной литературе отсутствуют. В связи с этим, изучение вопросов приготовления этих препаратов и использовании их в схемах лечения гепатозов является актуальным научным направлением. Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось обоснование применения препарата «Геприм для кошек» при жировом гепатозе, в составе комплексной терапии. Для достижения поставленной цели были проведены комплексные исследования, в задачи которых входило изучение следующих вопросов: 1. Изготовить опытный образец препарата «Геприм для кошек», изучить его фармакологические свойства, токсичность. 2. Изучить фармакодинамику препарата в организме кошек. 3. Разработать схему лечения жирового гепатоза кошек в условиях ветеринарной клиники и определить ее эффективность. Предмет и объект исследования. Предмет исследования – фармакотоксикологические свойства препарата «Геприм для кошек». Объект исследования – кошки различной половой, породной и возрастной категорий, лабораторные мыши в возрасте 2-3-х месяцев, белые крысы в возрасте 6 месяцев. Научная новизна результатов исследования. Для ветеринарной практики предложен гепатопротективный препарат изготовленный на основе цитотоксических сывороток «Геприм для кошек», эффективность которого подтверждена патентом № 2527700 «Способ лечения жирового гепатоза кошек»; изучены его фармако-токсические свойства; получены данные о 4 нормализующем влиянии препарата «Геприм для кошек» на морфологические и биохимические показатели крови, после введения препарата у больных жировым гепатозом кошек нормализуется количество эритроцитов и тромбоцитов, стабилизируется уровень гемоглобина, снижается уровень АСТ на 15%, АЛТ – на 16,6%, щелочной фосфатазы – на 26,8%, билирубина – на 25,8%, по сравнению с животными контрольных групп. Комплексная схема лечения жирового гепатоза кошек с применением препарата «Геприм для кошек» позволяет сократить сроки выздоровления животных на 16,7 – 26,8 % по сравнению с традиционными методами лечения данной патологии, в зависимости от тяжести заболевания. Применение препарата «Геприм для кошек» вместо «Эссенциале Форте Н» позволяет сократить затраты на гепатопротектор в 10,5 раза. Теоретическая значимость работы. Полученные результаты позволили рекомендовать препарат «Геприм для кошек» в составе комплексной терапии для лечения жировой дистрофии печени у кошек. Результаты проведённых исследований могут быть использованы при написании соответствующих разделов учебных и справочных пособий по ветеринарной фармакологии, терапии, а также в учебном процессе на ветеринарных и биологических факультетах, и отделениях высших и средних специальных учебных заведений. Практическая значимость работы. препарат «Геприм для кошек» прошел производственные испытания в ветеринарных учреждениях Челябинской области. Показана высокая лечебная эффективность препарата. Разработаны рекомендации по лечению жирового гепатоза у кошек. Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения, изложенные в диссертации, соответствуют паспорту специальности 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией по следующим пунктам: 1. Механизм действия лекарственных веществ на организм животных, его отдельные системы и функции (фармакодинамика); 6. Зависимость фармакологического действия лекарственных средств от их дозы, формы применения, метода введения с учетом видовых особенностей животных; 7. Теоретическое обоснование и разработка рецептур лекарственных веществ, обеспечивающих наибольшую эффективность при наименьших дозах и кратностях применения; 8. Токсичность лекарственных веществ для животных и характер их побочного действия, разработка показания и противопоказания для применения в ветеринарной практике, а также методов устранения побочных эффектов. 5 Апробация и реализация научных исследований . Апробация: результаты научных исследований доложены на научной конференции факультета ветеринарной медицины Уральской государственной академии ветеринарной медицины (Троицк, 2013г.), на расширенном заседании кафедры микробиологии и вирусологии (Троицк, 2013 г.), на научнотехническом совете ветеринарной клиники «Биовет» (Магнитогорск, 2013 г.) Реализация: результаты исследования внедрены в ветеринарную клинику «Биовет» города Магнитогорска Челябинской области, а также в учебный процесс и научно-исследовательскую работу кафедры эпизоотологии и терапии ФГБОУ ВПО «Орловского государственного аграрного Университета», кафедры морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней ФГБОУ ВПО Башкирского ГАУ, кафедры внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВПО Омского ГАУ им. П. А. Столыпина, кафедры фармакологии и токсикологии и кафедры ветеринарной хирургии ФГБОУ ВПО «КГАВМ им. Н. Э. Баумана». Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных статей, в том числе три в изданиях, рекомендованных ВАК РФ и патент № 2527700 РФ «Способ лечения жирового гепатоза кошек» Основные положения, выносимые на защиту. Препарат «Геприм для кошек» представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость соломенно-желтого цвета с незначительным осадком, без выраженного запаха, посторонних примесей и неразбивающегося осадка. Препарат «Геприм для кошек» не обладает острой и хронической токсичностью, а также эмбриотоксическими свойствами. Применение препарата «Геприм для кошек» положительно влияет на морфологические показатели крови - нормализует в первую очередь количество эритроцитов и гемоглобина у животных и сокращает период выздоровления. Применение препарата «Геприм для кошек» позволяет нормализовать биохимические показатели крови больных животных, отражающих работу печени. 6 Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах текста и включает разделы: введение, обзор, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические рекомендации и предложения. Список литературы включает 171 источников, в том числе 84 на иностранном языке. Диссертация иллюстрирована 28 таблицами и 18 рисунком. 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследования Производственный опыт и сопутствующие исследования проводились в ветеринарной клинике «Биовет» города Магнитогорска, Челябинской области и на кафедре Микробиологии и вирусологии Уральской государственной академии ветеринарной медицины. Сбор клинического материала осуществлялся в период с 2010 по 2013 годы. Схема опыта представлена на рисунке. Рисунок 1 – Схема опыта Объектом исследования являлись домашние кошки (разных пород), в возрасте от 1 до 15 лет в количестве 128 голов, а также беспородные белые 7 мыши в возрасте 2-3 месяцев, живой массой 18-20 г в количестве 20 голов, белые крысы в возрасте 6 месяцев, живой массой 150-200 г в количестве 34 голов. Препарат «Геприм для кошек» был изготовлен по принципу антиретикулярной цитотоксической сыворотки академика А.А. Богомольца. Внешний вид препарата определяли визуально при дневном естественном освещении и комнатной температуре. Определение прозрачности проводили по ГФ XI, вып.1, стр. 198. В качестве эталона использовали дистиллированную воду. Контроль препарата на механические включения проводили не вооруженным глазом на черном и матово - белом фонах, в соответствии с «Инструкцией по контролю на механические включения инъекционных лекарственных средств» (РД 42-501), освещенных электрической лампой накаливания мощностью 60 Вт или люминесцентной лампой мощностью 20 Вт. Наличие не разбивающегося осадка определяли визуально при дневном освещении. Определение стерильности проводили по ГФ ХI, в.2, стр.188 методом высева. Острую и хроническую токсичность «Геприм для кошек» определяли на 10 белых мышах в возрасте 2-3 месяца, 10 белых крысах в возрасте 6 месяцев и 10 кошках в возрасте 1-3 года. Животным однократно подкожно, в область холки вводили сыворотку по 2 ЕД на 1 кг массы тела (десятикратное увеличение оптимальной дозы). Исследование хронической токсичности проводили путем введения препарата подкожно в течение 3 дней с интервалом 24 часа в дозе 2 ЕД/кг. В течение 14 суток после окончания введения препарата оценивали состояние подопытных животных: аппетит, активность, работу систем организма, состояние кожных и слизистых покровов, а также их гибель. Сбор анамнеза - при опросе владельцев животных учитывались порода, возраст; данные о вакцинациях, контактах с другими животными, составе рациона, применяемых медикаментах, перенесенных ранее заболеваниях. Общий клинический осмотр – учитывали общее состояние животного, степень истощения, цвет видимых слизистых оболочек и кожного покрова. Методом пальпации определяли наличие болезненности в области печени, увеличение ее границ. 8 Взятие крови на морфологические и биохимические исследования – данная процедура во всех случаях сочеталась с введением периферического внутривенного катетера. Общий клинический анализ крови проводился в лаборатории клиники «Биовет» на автоматическом гематологическом анализаторе Abacus Junior B, 8. При этом определялось количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, содержание гемоглобина. Биохимический анализ сыворотки крови проводился на анализаторе MINDRAY BA-88A. Исследовались такие показатели, как аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), щелочная фосфатаза, билирубин, глюкоза, креатинин, мочевина и альфа амилаза. Ультразвуковая диагностика проводилась на аппарате Mindray DP-6900. Оценивали размеры органа, эхогенность, изменение структуры, сосудистый рисунок, желчные протоки, желчный пузырь. Тонкоигольную аспирационную биопсию проводили иглами типа CHIBA, Опыты по изучению гепатопротективных свойств препарата «Геприм для кошек» проводили на базе ветеринарной клиники «Биовет» в один этап. Для этого было сформировано 6 групп больных жировым гепатозом кошек. Первые три группы были контрольными, вторые три группы являлись опытными. Всем животным опытных групп был однократно введен «Геприм для кошек» подкожно в область холки из расчета 0,2 Ед/кг. Спустя 4 недели после начала лечения у всех животных опытных и контрольных групп были произведены повторные морфологические и биохимические анализы крови. Математический анализ и статистическую обработку данных проводили с помощью программ Microsoft Excel 2010, Биометрия, Statistica, IBM SPSS Statistics 21. 2.2 Результаты исследований 2.2.1. Изготовление препарата «Геприм для кошек» В связи с отсутствием специфической единой схемы лечение жирового гепатоза кошек, а так же эффективного специфического препарата нами был изготовлен «Геприм для кошек» и включен в общую схему лечения. Для получения экспериментального препарата было выбрано перспективное и развивающееся направление – использование цитотоксических сывороток. Мы использовали сыворотки из крови животных-доноров, путём 9 гипериммунизации их антигенами, приготовленными из тканей печени и селезенки кошки. Применение препарата оказывает стимулирующее воздействие не только на печеночную ткань, но, что особенно важно, на иммунную систему организма. Препарат представляет собой прозрачную слегка опалесцирующую жидкость, соломенно-желтого цвета, без ярко выраженного запаха и без посторонних примесей. Далее была определена оптимальная доза применения препарата, которая составила 0.2 ЕД/кг. Для этого были подобраны три группы кошек с диагнозом жировой гепатоз, от которых была взята кровь для биохимического анализа. Первой группе животных был введен препарат в дозе 0.1 ЕД/кг, второй – 0,2 ЕД/кг, третьей – 0,4 ЕД/кг. Через неделю после введения препарата была взята кровь для повторного биохимического анализа. У первой группы животных были отмечены следующие снижения показателей: АСТ - на 9,1%, АЛТ – на 11,5%, Щелочной фосфатазы – на 9,5%, билирубина – на 10,7%. У второй группы животных снижение всех показателей было более значительное. Так уровень АСТ упал на 24,7%, уровень АЛТ снизился на 27,5%, щелочной фосфатазы – на 29,6%, и билирубина – на 27,3%. В третьей группе животных снижение показателей было приблизительно такое же как у животных второй группы. Так уровень АСТ в крови снизился на 24,4%, АЛТ – на 25,5%, щелочной фосфатазы – на 27,2, и билирубина – на 25,0%. Таким образом оптимальная доза препарата «Геприм для кошек» составила 0,2 ЕД/кг. Препарат введенный в дозе 0.1 ЕД/кг не показал необходимой эффективности. Эффективность введения препарата в дозе 0,4 ЕД/кг, была практически такой же, как и в дозе 0,2 ЕД/кг, но экономически более затратной. Исследование токсических свойства препарата «Геприм для кошек» изучали на 10 белых мышах, 10 белых крысах и 10 кошках. В результате проведенных исследований установлено, что при подкожном введении препарата «Геприм для кошек» в дозе 2 ЕД/кг (доза увеличена в 10 раз от оптимальной) в течение периода наблюдений не вызывала гибели и интоксикации всех видов животных, она не влияла отрицательно на их общее состояние и поведение. Рефлексы у животных оставались сохраненными. Животные были подвижны, с хорошо выраженным аппетитом. При этом нарушений функциональной активности органов пищеварения и мочеотделения у них не наблюдали. 10 На основании экспериментальных данных установлено, что при подкожном способе введения препарата в дозе 2 ЕД/кг живой массы (доза увеличена в 10 раз) отклонений показателей жизнедеятельности не отмечалось и не регистрировалась гибель животных. Согласно существующей классификации химических веществ по степени их воздействия на организм, препарат относится к малотоксичным (4 группа) (Плетнева Т. В. и др., 2000 г.). Хроническую активность препарата «Геприм для кошек» определяли на 10 половозрелых белых мышах и 10 беспородных кошках. В ходе изучения хронической токсичности, когда препарат вводили подкожно в дозе 2 ЕД/кг (доза увеличена в 10 раз от рекомендуемой) в течение 3 дней (Третьяков А.Д.,1988), отклонений в состоянии подопытных животных не было обнаружено. В биохимической картине крови кошек показатели колебались в пределах физиологической нормы. Гибели подопытных животных при изучении хронической токсичности отмечено не было. Таким образом, из представленных выше данных видно, что препарат «Геприм для кошек» не обладает острой и хронической токсичностью, и даже в значительно завышенных дозах (10 раз) не оказывает отрицательных воздействий как на отдельные органы и системы, так и на организм в целом. Опыты по изучению эмбриотоксических свойств «Геприм для кошек» проводили на беспородных половозрелых крысах-самках, массой тела 150200г. В ходе исследования не было отмечено статистически достоверных различий в реакции яичников на введение препарата. Так число желтых тел у животных в опытной и контрольной группах находилось практически на одном уровне – 7,5 и 7,8 соответственно. Предимплантационная смертность в обоих группах была практически одинаковой: в опытной группе она составила 3,3%, в контрольной – 2,2%. Постимплантационная смертность в группах была следующая: в опытной группе она составила 8%, в контрольной – 11%. Общая смертность в обоих группах так же практически не отличалась, так в опытной группе этот показатель составил 11,1%, а в контрольной – 12,9%. Таким образом, из представленных выше данных, можно сделать вывод, что препарат «Геприм для кошек» в увеличенной дозе не обладает эмбриотоксическими свойствами. 11 2.2.2. Изучение факторов, влияющих на возникновение жирового гепатоза кошек в городе Магнитогорске Следующим этапом работы было проведение исследования по изучению заболеваемости кошек жировым гепатозом в частной ветеринарной клинике «Биовет» города Магнитогорска Челябинской области. В первую очередь были изучены факторы, влияющие на возникновение и развитие патологического процесса. Была проанализирована зависимость возникновения жирового гепатоза от возраста, пола обследуемых животных, условий кормления и содержания, а также возможной сезонности заболевания. В ходе анализа полученных данных было выявлено, что все случаи гепатоза были зафиксированы у животных в возрастном диапазоне от 6 до 15 лет при чем 55% случаев приходилось на кошек в возрасте от 6 до 10 лет и 45 % - на кошек от 11 до 15 лет. В исследовании зависимости заболевания от половой принадлежности были получены следующие результаты – процент котов с диагнозом жировой гепатоз был равен 64%, а кошек – 36%. В зависимости от типа кормления заболеваемость жировым гепатозом распределилась следующим образом. Наиболее подверженные риску заболевания печеночной патологией оказались животные, находящиеся на натуральном питании – 45,5%. В свою очередь самые низкие риски заболеть патологиями печени имеют животные, находящиеся на кормлении кормами премиум-класса – 18,1%. Животных, рацион которых состоит в основном из кормов эконом-класса, так же находятся в группе риска, и их заболеваемость равна 36,4%. Кроме того, нами были определены состояния предшествующие возникновению данной патологии: ожирение (излишний вес) – 77,3% всех животных; перенесенные ранее заболевания печени воспалительного генеза (холангиты и холангио-гепатиты) – 18,2%; прочие заболевания желудочнокишечного тракта – 4,5% Исследование заболеваемости жировым гепатозом у кошек в зависимости от сезона года показало, что наибольшее число случаев до 81,8% приходится на сентябрь, октябрь (соответственно 40,9% и 40,9%). Вероятнее всего данная статистика связана с особенностями сезонного метаболизма кошек. 12 2.2.3. Дифференциальная диагностика жирового гепатоза Препарат «Геприм для кошек» является высоко специфическим и предназначен для лечения исключительно хронических заболеваний печени. Исходя из этого, особое внимание в наших исследованиях, мы уделили точной постановке диагноза жирового гепатоза печени. У всех животных, поступивших в клинику, с жировым гепатозом, отмечались следующие клинические признаки: частичный или полный отказ от корма, желтушность (иктерус) видимых кожных и слизистых оболочек, рвота, угнетение функции ЦНС, изменение цвета мочи, потеря массы тела. У ряда животных диагностировались все перечисленные симптомы, а у некоторых только отдельные их формы. В ходе гематологических исследований крови были получены следующие результаты. Количество лейкоцитов находилось в пределах нормы, что означало отсутствии острых воспалительных процессов. Количество эритроцитов в среднем по группе было снижено на 12,1 %. Содержание гемоглобина, находилось на нижней границе физиологической нормы. Данные изменения картины красной крови часто встречаются при хронически протекающих патологических процессах. При биохимическом исследовании крови у обследуемых животных были отмечены следующие изменения: уровень АЛТ в плазме был превышен в 5,9 раз, что указывало на обширное паренхиматозное поражение печени. Уровень АСТ превысил норму в 6,3 раза. Коэффициент Ритиса составил 0,63, что так же указывало на паренхиматозное поражение печени. Содержание общего билирубина было превышено в 4,7 раз, щелочной фосфатазы – в 4.6 раз, что могло указывать как на паренхиматозные поражения печени, так и состояние холестаза. Уровень альфа-амилазы был превышен в 1,2 раза. Показатели работы почек - количество мочевины и креатинина находились в пределах физиологической нормы. Исходя из полученных нами данных в ходе ультразвукового исследования были сделаны следующие выводы - у всех обследованных животных присутствовали признаки жирового гепатоза, такие как увеличение границ печени, повышение эхогенности, зернистость структуры, а также снижение визуализации сосудистого рисунка органа. Нами при изучении мазков, полученных при проведении тонкоигольной аспирационной биопсии, были получены следующие результаты. У 100% животных обнаружена вакуолизация в биоптатах печени, в разной степени. 13 Данные изменения полностью подтвердили предварительно поставленный диагноз-жировой гепатоз. Кроме того, у 23% животных не были обнаружены ядра в более чем 50% гепатоцитах с жировой вакуолизацией. Данный фактор указывал на тяжело протекающие процессы в организме больных кошек, и полностью совпадал с наличием симптомокоплекса у данных животных. Именно у этих животных наблюдалось особо тяжелое течение болезни, отображенных в таблице. Таблица 1 – морфо-биохимические показатели крови у больных кошек. № Показатели Норма Среднее значение у № группы животных 1 АсАТ, Ед/л 10,0-50,0 315,8±28,03 2 АлАТ, Ед/л 20,0-85,0 503,4±59,21 3 Билирубин общий, 0,5-10,0 46,8±5,76 мкмоль/л 4 Щелочная 13,0-150,0 694,0±85,24 фосфатаза, Ед/л 5 Альфа-амилаза, 531,0-1660,0 1999,1±179,90 Ед/л 6 Глюкоза, ммоль/л 2,6-8,4 6,3±0,36 7 Креатинин, 50,0-160,0 134,9±5,37 мкмоль/л 8 Мочевина, ммоль/л 5,5-11,0 10,4±0,40 9 9 WBC, 10 кл/л 5,5-19,5 12,1±0,65 10 RBC, 1012кл/л 5,8-10,7 5,1±0,08 11 HGB, г/л 90,0-156,0 97,9±2,52 12 PLT, 109кл/л 300,0-800,0 352,1±10,21 2.3 Влияние препарата «Геприм для кошек» на биохимические и гематологические показатели крови больных гепатозом кошек За период с 2010 по 2012 годы жировой гепатоз печени у кошек был диагностирован и подтвержден у 22 животных. Данные животные были разделены на 6 групп: 3 группы были контрольными и 3 группы опытными. Во всех контрольных группах было по четыре головы; в первой и второй опытных группах было по 3 головы, а в третьей опытной - 4. Критерием разделения животных на группы являлась степень поражения печени и изменение 14 биохимических показателей крови: АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза, билирубин. Все животные находились на амбулаторном лечение в течение 14 дней, с ежедневным осмотром и проведением необходимых мероприятий. Первая опытная и первая контрольная группы включали в себя животных с наиболее выраженными изменениями биохимических показателей сыворотки крови, а так же с ярко выраженными клиническими признаками печеночной патологии. Вторая опытная и вторая контрольная группы состояли из животных с умеренно повышенными показателями биохимического анализа крови и выраженными клиническими признаками поражения печени. Третья опытная и третья контрольная группы были сформированы из животных с незначительным повышением показателей биохимического анализа крови, отвечающих за работу печени, а также с не ярко выраженными симптомами поражения печени. В контрольных группах все животные получали общепринятую схему лечения при жировом гепатозе печени. В нее входили: 1. Поддерживающая терапия – внутривенные инфузии: a. Солевые растворы: Физиологический раствор, Рингера раствор из расчета 10-20 мл/кг в зависимости от степени дегидратации. b. Питательные растворы: Раствор глюкозы 5%, Дюфалайт из расчета 6-20 мл/кг в зависимости от степени истощения. 2. Витаминотерапия: катозал – из расчета 0,5-2.5мл на животное в зависимости от индивидуального состояния, аскорбиновая кислота. 3. Гепатопротективная терапия - Эссенциале форте Н 4. Антибиотикотерапия - амоксициллин (Кламоксил LA) из расчета 1 мл на 10 кг веса. 5. Противорвотные средства, при необходимости – Церукал (Метоклопрамид) из расчета 0,05 мл/кг. Схема лечения для опытных групп животных отличалась от контрольных заменой гепатопротектора Эссенциале форте Н на разработанный нами препарат для лечения жирового гепатоза «Геприм для кошек». Для определения результативности лечения отмечали день наступления улучшения и период клинического выздоровления. 15 Однако в первой и второй контрольных группах, несмотря на проводимое интенсивное лечение пало по 1 кошке, с наиболее тяжелым течением. В свою очередь в опытных группах гибели животных отмечено не было. В ходе наблюдений были получены следующие данные. Период наступления клинического улучшения и выздоровления у животных всех опытных групп оказался ниже аналогичного показателя у животных контрольных групп. Так в первой опытной группе данные показатели были ниже на 29,8% и 26,8% соответственно. Во второй опытной группе данные показатели снижены на 24,6% и 24,4 % соответственно. В третьей опытной группе - на 36,4% и 16,7% соответственно. Через 4 недели была взята кровь для гематологического и биохимического анализов крови, с целью детального изучения влияния препарата «Геприм для кошек» на состояние организма. Анализ данных полученных в результате повторного морфологического анализа крови показал следующие результаты: У животных первой контрольной группы после полученного лечения общее количество лейкоцитов (WBC) увеличилось на 7,3%, количество эритроцитов (RBC) увеличилось на 22,0%, содержание гемоглобина (HGB) – на 15,1%, тромбоцитов – на 4,1%. У животных опытной группы, в свою очередь, количество лейкоцитов возросло на 4,5%, количество эритроцитов увеличилось на 44,0%, а гемоглобина выросло на 49,0%, тромбоцитов - на 11,3%. Таким образом, улучшение гематологических показателей у животных опытной группы по отношению к контрольной показало увеличение количества эритроцитов в 2 раза, а количества гемоглобина в 3,2 раза. Количество эритроцитов во второй контрольной группе увеличилось на 16%, а количество гемоглобина на – 19,9%. В свою очередь во второй опытной группе увеличение количества эритроцитов было отмечено на 44,9%, а увеличение количества гемоглобина – на 37,3%. В контрольной группе увеличение количества лейкоцитов и тромбоцитов составило 10,5% и 9,4% соответственно. В опытной группе эти изменения были 8,3% и 7,5% соответственно. Из выше представленных данных можно сделать вывод, что в опытной группе у животных процессы восстановления картины «красной» крови шли интенсивнее, чем у животных контрольной группы. Так увеличение количества эритроцитов у животных опытной группы было больше в 2.8 раз, а увеличение количества гемоглобина – в 1.9 раз. 16 Количество эритроцитов в третьей контрольной группе увеличилось на 18,9% по отношению к первичным показателям; количество гемоглобина увеличилось на 18,7%. У животных в третьей опытной группе количество эритроцитов выросло на 43,4%, количество гемоглобина повысилось на 39,2%. Изменения количества лейкоцитов и тромбоцитов, как и в предыдущих случаях было незначительно. Так количество лейкоцитов осталось без изменений, а уровень тромбоцитов повысился на 4,8%. В опытной группе количество лейкоцитов увеличилось на 4,8%, а количество тромбоцитов – на 8,0%. Наиболее выраженные изменения в картине гематологического анализа крови были отмены у животных опытной группы. Так количество эритроцитов по сравнению с контрольной группой увеличилось в 2,3 раза, количества гемоглобина – в 2,1 раза. Полученные данные указывают о положительном влиянии препарата «Геприм для кошек» на эритропоэз, а так же на насыщаемость эритроцитов гемоглобином. В ходе анализа данных повторного биохимического исследования сыворотки крови были получены следующие результаты: В первой контрольной группе уровень АСТ снизился на 48,0%, уровень АЛТ - на 44,7%, уровень щелочной фосфатазы упал на 43,5%, уровень билирубина – на 35,7%. Другие показатели не имели выраженного снижения. Уровень альфа-амилазы в крови снизился на 23,5%, уровень глюкозы в крови стал ниже на 1,6%, уровень креатинина – на 3,6%, мочевины – на 9,2%. У животных опытной группы уровень АСТ упал на 68,9%, а АЛТ - на 69,3%, уровень щелочной фосфатазы снизился на 82,9%, уровень билирубина – на 63,8%. Уровень альфа-амилазы крови показал снижение на 4,9%, глюкозы на 10,7%. Показатели, отражающие работу почек напротив незначительно выросли: уровень креатинина в крови животных опытной группы вырос на 7,8%, а уровень мочевины – на 29,2%. Во второй контрольной группе животный уровень АСТ снизился на 41,7%, уровень АЛТ - на 36,2%, щелочной фосфатазы – на 37,3%, билирубина – на 38,4%. Уровень альфа-амилазы крови у животных второй контрольной группы показал рост на 17,6%, а уровень глюкозы в крови упал на 17,1%. Значение креатинина снизилось на 2,5%, мочевины – на 11,8%. У животных второй опытной группы уровень АСТ снизился на 52,9%, АЛТ - на 52,0%, щелочной фосфатазы – на 64,7%, билирубина – на 76,3%. 17 Уровень альфа амилазы у животных данной группы снизился на 8,1%, глюкозы - на 15,4%. Почечные показатели, как и в первой опытной группе имели тенденцию к росту: уровень креатинина вырос на 3,2%, мочевины – на 10,5%. У животных третей контрольной группы уровень АСТ уменьшился на 26,7%, уровень АЛТ уменьшился на 38,4%, уровень щелочной фосфатазы – на 40,0%, билирубина – на 43,5%. Уровень альфа амилазы остался практически без изменений (снижение на 5,4 %). Уровень глюкозы так же показал снижение – на 15,0%. В показателях, отражающих работу почек было отмечено так же снижение уровня: креатинина на 9,6%, мочевины - на 5,2%. У животных третьей опытной группы уровень АСТ в крови снизился на 39,6%, уровень АЛТ снизился 47,7%, уровень щелочной фосфатазы – на 53,5%, уровень билирубина – на 55,0. Уровень альфа-амилазы отклонился незначительно – увеличение произошло на 1,4%. Уровень глюкозы в крови снизился на 20%. Почечные показатели колебались в пределах нормы: уровень креатинина увеличился на 0,2%, а уровень мочевины понизился на 2,9%. Из результатов вторичных анализов крови видно, что наибольшие изменения произошли в показателях, отвечающих за работу печени, при этом эти изменения были ярче выражены у животных опытной группы, что указывает на благоприятное воздействие препарата «Геприм для кошек» на ткани печени, а также на более интенсивные регенеративные процессы, происходящие в органе. Кроме того, у животных первой и второй групп было отмечено повышение уровня креатинина и мочевины по отношению к первичному анализу (7,8%, 29,2% и 3,2%, 10,5% соответственно), что указывает на усиление белкового обмена. Кроме того, применение разработанного нами препарата экономически выгодно, оно сокращает срок выздоровления больных кошек на 22,6% и снижает стоимость лечения на 38 рублей (стоимость 1 мл Эссенциале Форте Н равна 30 рублей, в среднем на курс лечения на 1 животное расходуется 1.4 мл препарата, отсюда общая стоимость равна 42 рубля. Стоимость 1 мл «Геприм для кошек» равна 1 рубль, в среднем на 1 животное тратится 4 мл препарата, отсюда затраты на препарат составляют 4 рубля). Таким образом, исходя из полученных данных рекомендуем применять для лечения жирового гепатоза кошек, разработанную нами схему, включающую в себя общепринятую терапию, а также препарат «Геприм для кошек» с целью повышения эффективности лечебных мероприятий. 18 ВЫВОДЫ 1. По принципу цитотоксической сыворотки А. А. Богомольца изготовлен препарат «Геприм для кошек», путём гипериммунизации лошадей-доноров антигенами, полученными из тканей печени и селезенки здоровых кошек. Данный препарат относится с гепатопротекторам. 2. Проведенными исследованиями установлено отсутствие у препарата «Геприм для кошек» острой и хронической токсичности, а также эмбриотоксического действия. 3. Разработана схема лечения жирового гепатоза кошек, включающая в себя общепринятые методы терапии (инфузионная, антибиотикотерапия, витаминотерапия, диетотерапия и т.д.), с введением препарата «Геприм для кошек» однократно в дозе 0,2 ЕД/кг подкожно. 4. После введения препарата у больных жировым гепатозом кошек нормализуется количество эритроцитов и тромбоцитов, стабилизируется уровень гемоглобина, снижается уровень АСТ на 15%, АЛТ – на 16,6%, щелочной фосфатазы – на 26,8%, билирубина – на 25,8%, по сравнению с животными контрольных групп, что указывает на улучшение функционального состояния печени. 5. Комплексная схема лечения жирового гепатоза кошек с применением препарата «Геприм для кошек» позволяет сократить сроки выздоровления животных на 16,7 – 26,8 % по сравнению с традиционными методами лечения данной патологии, в зависимости от тяжести заболевания. 6. Применение препарата «Геприм для кошек» вместо «Эссенциале Форте Н» позволяет сократить затраты на гепатопротектор в 10,5 раза. 1. 2. 3. Практические предложения Препарат «Геприм для кошек» рекомендуется применять однократно в дозе 0,2 Ед/кг живой массы подкожно вместе с основной терапией, в целях повышения эффективности схемы лечения жирового гепатоза кошек. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе по дисциплинам ветеринарная фармакология и токсикология, ветеринарная диагностика и терапия. Разработаны «Рекомендации по совершенствованию схемы лечения жирового гепатоза кошек (Челябинск 2013) 19 Список опубликованных работ по теме диссертации. В РЕЦЕНЗИРУЕМЫХ ЖУРНАЛАХ, РЕКОМЕНДУЕМЫХ ВАК РОССИИ 1. Ращектаев, А. С. Методы диагностики жирового гепатоза, их эффективность / А. С. Ращектаев, П. Н. Щербаков// АГАУ. Вестник Алтайского аграрного университета: научный журнал. - 2013. - № 2. - С. 88-91. 2. Ращектаев, А. С. Заболевания печени у кошек в городе Магнитогорске / А. С. Ращектаев, П. Н. Щербаков// АГАУ. Вестник Алтайского аграрного университета: научный журнал. - 2013. - № 3. - С. 90-92. 3. Ращектаев А.С. Эффективность применения препарата на основе цитотоксина в составе комплексной терапии при жировом гепатозе кошек. Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные. – 2013. - № 6. – С. 50-53. 4. Пат. 2527700 Российская Федерация, Способ лечения жирового гепатоза кошек [текст]/ Щербаков П. Н., Щербакова Т. Б., Ращектаев А. С., Щербакова Е. П.. заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Уральская государственная академия ветеринарной медицины" (RU). - №2013132682/15; заявл. 15.07.2013; опубл. 10.09.2014, бюл. 25. В НАУЧНЫХ ИЗДАНИЯХ 5. Ращектаев А.С., Щербаков П.Н. Тонкоигольная аспирационная биопсия печени при диагностики жирового гепатоза кошек. ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ВЕТЕРИНАРИИ, БИОЛОГИИ И ЭКОЛОГИИ Часть 2. Материалы международной научно – практической конференции Троицк. - 2013. – с 78.82. 6. Ращектаев А.С., Щербаков П.Н. Диагностика заболеваний печени у кошек. Ветеринарная клиника. – 2013. - № 12. – С. 12-13. 7. Ращектаев А.С., Щербаков П.Н. Основные принципы лечения кошек при заболевании печени. Ветеринарная клиника. – 2013. - № 11. – С. 12-13. 20