Противовирусная активность арбидола и его производ-

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2008
УДК 615.281.8.03:616.24-002.1-039-022:578.834.1].076
Р. А. Хамитов, С. Я. Логинова, В. Н. Щукина, С. В. Борисевич, В. А. Максимов, А М. Шустер*
Противовирусная активность арбидола и его производных в отношении возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома в культурах клеток
Филиал ФГУ "48-й Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации" - "Вирусологический центр"; *ЗАО "МАСТЕРЛЕК", Москва
Проведенные экспериментальные исследования арбидола и мезилат арбидола в сравнении с рибавирином
свидетельствуют, что при внесении арбидола, мезилат арбидола и рибавирина в питательную среду культур
клеток GMK-АH-1(Д) после инфицирования в концентрациях 50,25 и 100 мкг/мл соответственно эффективно подавляют репродукцию вируса ТОРС. Показано прямое противовирусное действие арбидола и мезилат
арбидола на ранних этапах репликации вируса в культурах клеток. Перспективным противовирусным средством является мезилат арбидола, который примерно в 5 раз эффективнее арбидола снижает репродукцию
вируса ТОРС в культурах клеток.
Внесение арбидола, мезилат арбидола и рибавирина через 2 ч после инфицирования клеток СПЭВ в среду
культивирования приводило к уменьшению накопления возбудителя на 2,5, 2,1 и 2,6 lg соответственно.
Ключевые слова: арбидол, противовирусная активность, рибавирин, тяжелый острый респираторный синдром
Antiviral activity of arbidol and its derivatives against the pathogen of severe acute respiratory syndrome in the cell cultures
R. A. Khamitov, S. Ya. Loginova, V. N. Shchukina, S. V. Borisevich, V. A. Maksimov, A. M. Shuster*
Virology Center, Branch, Central Research Institute 48, Ministry of Defense of the Russian Federation;
*ZAO "MASTERLEK", Moscow
Experimental studies of arbidol and arbidol mesylate versus ribavirin suggest that insertion of these agents into the
nutrient medium of the cultured cells GMK-AH-1(D) after infection at concentrations of 50, 25, and 100 μg/ml, respectively, is effective in suppressing the reproduction of severe acute respiratory syndrome (SARS) virus. Arbidol
and arbidol mesylate were shown to have a direct antiviral effect in early viral replication in the cultured cells. The
promising antiviral agent is arbidol mesylate that is nearly 5 times as effective as arbidol in reducing the reproduction of SARS virus in the cultured cells.
Insertion of arbidol, arbidol mesylate, and ribavirin into the nutrient medium 2 hours after infection of porcine embryonic renal cells caused a reduction in the accumulation of the pathogen by 2.5, 2.1, and 2.6 lg, respectively.
Key words: arbidol, antiviral activity, ribavirin, severe acute respiratory syndrome
Тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС,
SARS, "атипичная пневмония", болезнь Урбани) - новая
коронавирусная инфекция, характеризующаяся коротким
инкубационным периодом, выраженной лихорадочной
реакцией и появлением симптомов поражения дыхательных путей.
Заболевание впервые зарегистрировано в китайской
провинции Гуандун в середине ноября 2002 г. и в течение
короткого промежутка времени распространилось на территории 32 государств Европы, Азии, Северной и Южной
Америки, Африки и Австралии. В июле 2003 г. сообщалось о 8098 больных и 774 умерших (летальность ~ 10,5%)
- таков итог масштабной эпидемии ТОРС по данным официальной статистики ВОЗ [20]. В России был выявлен 1
больной на Дальнем Востоке с подтвержденным молекулярно-биологическими и вирусологическими методами
диагнозом ТОРС [6].
В январе-марте 2004 г. на территории Китая вновь возникла вспышка ТОРС, в результате которой погиб 1 человек. Всего заболевание было подтверждено в 9 случаях
(летальность 11,1%) [13].
Особенности эпидемиологии ТОРС, а также расширение торгово-экономических связей с Юго-Восточной Азией свидетельствуют о возрастании опасности повторного
заноса возбудителя ТОРС и распространения его на территории нашей страны.
В качестве основного противовирусного препарата для
лечения ТОРС наиболее широко применялся рибавирин в
сочетании со стероидными препаратами, интерфероном
[14-19, 21, 22]. Однако отсутствие контролируемых испытаний не позволило до настоящего времени рекомендовать
схемы и способы его введения.
В декабре 2003 г. специалисты Министерства обороны
США первыми опубликовали экспериментальные резуль-
таты оценки in vitro противовирусной эффективности различных лекарственных препаратов в отношении ТОРС
[19]. Были представлены данные по эффективности подавления цитопатического действия вируса в культуре клеток
Vero Е6 аналогами нуклеозидов, таких как ацикловир, ганцикловир и рибавирин, а также ингибиторами обратной
транскриптазы (зидовудин и ламивудин), ингибиторами
протеаз (индинавир, нелфинавир, саквинавир) и нейраминидаз (занамивир, осельтамивир). Кроме того, была показана противовирусная активность ряда интерферонов (роферон, интрон А, веллферон, алферон, ребиф, бетаферон и
человеческий лейкоцитарный интерферон), а также амантадина, фоскарнета [19]. Установлено, что полное ингибирование цитопатического действия на культуру клеток
вируса ТОРС оказывают интерфероны: бетаферон, веллферон, алферон и человеческий лейкоцитарный интерферон. Рибавирин подавляет цитопатическую активность
вируса ТОРС только в очень высоких концентрациях (5005000 мкг/мл), хотя в отношении ряда других инфекций
этот препарат эффективен уже в концентрации 1-50 мкг/мл
[17].
Таким образом, за рубежом выявлен определенный
спектр противовирусных препаратов, эффективных в отношении ТОРС на первом этапе их доклинической оценки
in vitro. В связи с этим актуален поиск эффективных отечественных лекарственных препаратов и проведение их доклинической оценки для профилактики и лечения ТОРС.
Одним из наиболее перспективных противовирусных
препаратов широкого спектра действия является арбидол,
который оказывает прямое противовирусное действие на
вирусы гриппа типа А и герпеса. Ингибируя их репликацию, он подавляет слияние липидной оболочки вируса с
клеточными мембранами при контакте вируса с клеткой.
Препарат оказывает влияние на Т- и В-лимфоциты, нормализует соотношение Т-хелперов и Т-супрессоров, стимулирует фагоцитарное звено иммунитета, повышает устойчивость организма к вирусным инфекциям [1-3]. Учитывая
высокую защитную эффективность арбидола в отношении
острых респираторных заболеваний, целесообразно оценить противовирусную активность препарата и его производных в культуре клеток.
Материалы и методы
Вирус. В работе использовали вирус ТОРС, штамм
СоД, выделенный специалистами филиала ФГУ "48-й
ЦНИИ Минобороны России" - "Вирусологический центр"
из носоглоточного смыва больного ТОРС из Благовещенска [10]. Структурная организация генома вируса ТОРС,
штамм СоД, в сравнении с другими штаммами одноименного возбудителя изучена сотрудниками ГУ НИИ физикохимической медицины Минздравсоцразвития РФ [7]. Полная нуклеотидная последовательность к ДНК штамма СоД
SARS-ассоциированного коронавируса длиной 29715 нуклеотидов представлена в американской базе данных
(NCBI, N AY461660, приоритет от 23.11.03). Согласно международной таксономии вирусов, выделенный изолят,
штамм СоД, отнесен под № 03.019.0.01.014.00.180.001 к
SARS-Coronavirus SoD [23]. Возбудитель хранится в филиале ФГУ ”48 ЦНИИ Минобороны России" - "Вирусологический центр" при -70,0 ± 10,0°С в лиофилизированном
виде.
Культуры клеток. В работе использованы перевиваемые культуры клеток почек африканских зеленых мартышек - GMK-AH-1(D) и Vero Е6, а также культуры клеток
почек эмбриона свиньи (СПЭВ), хранящиеся в коллекции
клеточных культур в жидком азоте. В качестве ростовой
среды и среды поддержания использовали полусинтетическую среду (ПС-4) на растворе Хенкса, содержащую 7,5 и
2,0% сыворотки крупного рогатого скота соответственно.
Культивирование клеток проводили в стеклянных матрасах, объемом 1 л.
Исследуемые препараты. Арбидол - низкомолекулярный индуктор интерферона (ИИФ) (эфир1- метил-2фенилтиометил-4-диметиламинометил-5-окси-6броминдол-З-карбоновой кислоты гидрохлорид моногидрат) производства фирмы "ERREGIERRE", Италия, поставщик ЗАО "МАСТЕРЛЕК", серия 0203001.
Мезилат
арбидола
производное
арбидола
(C23H29BrN2О6S2) - изготовлен НПФ "СИНБИАС ФАРМА",
Донецк, Украина, поставщик ЗАО "МАСТЕРЛЕК", серия
010503.
Безилат
арбидола
производное
арбидола
(C28H33BrN2О7S2) - синтезирован в Институте молекулярной биологии РАН.
Тозилат
арбидола
производное
арбидола
(C29H35BrN2О7S2) - синтезирован в Институте молекулярной биологии РАН.
Рибавирин - химиопрепарат (l-β-D-рибофуранозил1,2,4-триазол-3-карбоксамид) производства "Dragon Hwa
ChemPharm Co. Limited", серия 20031110.
Виразол (рибавирин) капсулированный производства
"ICN Pharmac." (США).
Ларифан (дсРНК фага f2 Е. coli) - высокомолекулярный
индуктор интерферона производства Института микробиологии им. Кирхенштейна, Латвия.
Система оценки противовирусного действия веществ в
культуре клеток включала в себя количественное изучение
подавления формирования негативных колоний в культурах клеток (БОЕ/мл), а также угнетающего влияния на репродукцию вируса в культурах клеток (%).
Противовирусную эффективность препаратов in vitro
оценивали по следующим общепринятым показателям [5,
8, 11, 12]: снижение уровня накопления вируса под воздействием препарата (Δ, lg); коэффициент ингибирования (Ки,
%).
Снижение уровня накопления вируса под влиянием
препарата (Δ, lg) определяли по формуле 1:
Δ = Ак - Ао
(1),
где Ак - уровень накопления вируса при культивировании без внесения в питательную среду изучаемого препарата (lg БОЕ/мл); Ао - уровень накопления вируса при
культивировании с внесением в питательную среду изучаемого препарата (lg БОЕ/мл).
Коэффициент ингибирования (Ки, %) рассчитывают по
формуле 2:
Ки = ((Аконтр – Аоп)/Аконтр)*100%
(2),
где Аконтр - уровень накопления вируса при культивировании без внесения в питательную среду изучаемого препарата (БОЕ/мл); Аоп - уровень накопления вируса при
культивировании с внесением в питательную среду изучаемого препарата (БОЕ/мл).
Оценку противовирусной эффективности используемых лекарственных препаратов осуществляли в соответствии с требованиями Фармакологического государственного комитета РФ [10] и в обоснованных ранее культурах
клеток Vero Е6, GМК-АН-1(Д) и СПЭВ [4].
Результаты и обсуждение
На первом этапе исследований оценили противовирусное действие арбидола и его производных по подавлению
формирования негативных колоний в культуре клеток Vero
Е6. В качестве инфицирующего препарата использовали
лизат инфицированной культуры клеток Vero Е6 с биологической активностью 5,0 lg БОЕ/мл. Схемы введения
препарата включали: внесение препарата в среду до инфицирования, в момент инфицирования и в агаровое покрытие. Ростовую среду заменяли свежей питательной средой,
содержащей исследуемые дозы препаратов.
В связи с тем, что арбидол нерастворим в воде, препарат предварительно растворяли в минимальном объеме
концентрированного DMSO и далее готовили разведения
необходимой концентрации на соответствующей питательной среде. Мезилат арбидола плохо растворим в воде,
поэтому исходное разведение препарата готовили на 10%
водном растворе DMSO, далее также, как арбидол. Конечная концентрация DMSO не превышала 0,01% и являлась,
нетоксичной для используемых культур клеток.
Культуру клеток инкубировали при 37 ± 0,5°С. В качестве референс-препаратов использовали виразол (химиопрепарат) и высокомолекулярный индуктор интерферона ларифан. Культуру клеток Vero Е6 инфицировали одной
дозой вируса из расчета 50-100 БОЕ на монослой, адсорбцию вируса проводили в течение 60 мин при 37 ± 0,5°С,
затем вносили агаровое покрытие. Учет формирования
негативных колоний осуществляли через 72 ч после инфицирования. По результатам титрования рассчитывали коэффициент ингибирования формирования негативных колоний вирусом под воздействием исследуемых препаратов.
Результаты, представленные в табл. 1, свидетельствуют
о том, что арбидол и его производное мезилат арбидола
наиболее эффективны при внесении их в питательную среду за 2 ч до инфицирования. Эффективность их по подавлению формирования негативных колоний составила в
среднем 52,7 и 67,1% соответственно.
Таблица 1. Влияние арбидола и его производных на уровень
накопления вируса ТОРС в культуре клеток Vero Е6
ПодавлеДоза
Уровень наКоэффиние репропрепакопления
циент инПрепарат
дукции
рата,
вируса, lg
гибировавируса, Δ,
мкг/мл
БОЕ/мл
ния, %
lg
Арбидол
50
6,2
0,4
62,7
Мезилат
10
5,7
0,9
87,5
арбидола
10
6,8
0
0
Безилат
арбидола
50
6,6
0,2
32,2
Тозилат
арбидола
10
6,7
0,1
29
50
6,4
0,4
59,7
Примечание. Исследуемые препараты вводили за 4—6 ч до инфицирования.
Необходимо отметить, что противовирусная эффективность мезилата арбидола и арбидола была практически
равной. При этом концентрация мезилат арбидола была в 5
раз меньше (10 мкг/мл), нежели арбидола (50 мкг/мл).
Виразол также умеренно эффективно подавлял формирование негативных колоний вирусом ТОРС, при этом
максимальная эффективность выявлена при внесении препарата либо в момент инфицирования (86,6%), либо за 2 ч
до инфицирования (77,1%).
Оценка цитотоксичности арбидола и мезилата арбидола
в культуре клеток выявила, что низкомолекулярный индуктор интерферона арбидол в концентрации 100 мкг/мл
полностью разрушал монослой всех изученных культур
клеток. В концентрации 25 мкг/мл оказывал токсическое
действие только в культуре клеток НеР-2. Максимально
переносимая доза (МПД) для культур клеток СПЭВ и Vero
Е6 составила 50 мкг/мл; HeLa, GMK-AH-1(Д) и ДК ЛЭЧ
КЛ-17 - 25 мкг/мл; НеР-2 - 12,5 мкг/мл. Таким образом,
арбидол обладает повышенной токсичностью для культур
клеток по сравнению с высокомолекулярными индукторами интерферона, такими как ридостин и ларифан.
Мезилат арбидола (производное арбидола) менее токсичен для клеток, чем исходный препарат. Величина МПД
колебалась в пределах 25-75 мкг/мл. Для культур клеток
СПЭВ, GMK-AH-1(Д) и Vero Е6 МПД составила 75
мкг/мл. Наиболее чувствительны к мезилату арбидолу
клетки HeLa (МПД = 25 мкг/мл).
В следующей серии экспериментов оценили влияние
арбидола и мезилата арбидола на репродукцию вируса
ТОРС в культуре клеток Vero Е6. Результаты, представленные в табл. 2, свидетельствуют о том, что арбидол и его
производное дают практически одинаковый эффект при
внесении их в разные сроки до инфицирования. Более эффективным оказался мезилат арбидола, доза которого была
более чем в 3 раза меньше, чем арбидола. Максимальная
эффективность мезилат арбидола по подавлению репродукции вируса составила 90% при внесении его в питательную среду за 2 ч до инфицирования. Безилат и тозилат
арбидола значительно менее эффективно подавляют размножение возбудителя ТОРС в культуре клеток Vero Е6,
чем арбидол и мезилат арбидола. Виразол проявил умеренную противовирусную эффективность при внесении
его через 2 ч после инфицирования (97,5%). Ларифан умеренно эффективен только при внесении его в культуральную среду за 24 ч до инфицирования. На основании полученных данных можно сделать заключение, что антивирусный эффект арбидола обусловлен блокированием наиболее ранних стадий вирусной репликации. Клетки Vero
Е6 практически не способны к продукции интерферона,
поэтому для оценки комбинированного действия исследуемых препаратов необходимо использовать и другие
клеточные культуры с сохраненными интерферонпродуцирующими свойствами.
Таблица 2. Противовирусная эффективность лекарственных средств в отношении вируса ТОРС в культуре клеток Vero Е6
Препарат
Арбидол
Мезилат арбидола
Рибавирин
Ларифан
Контроль дозы вируса (без
препарата)
Контроль дозы вируса (без
препарата) + 0,01% DMSO
Доза препарата,
мкг/мл
25
За 24 ч
Уровень накопления вируса, lg
БОЕ/мл
6,2
Подавление репродукции вируса, Δ,
lg
0,5
Коэффициент
ингибирования,
%
71
За 6 ч
6,1
0,6
77,7
За 2 ч
6,3
0,4
62,7
0ч
6,2
0,5
74,9
За 24 ч
5,7
1
88,4
За 6 ч
5,9
0,8
83,7
За 2 ч
5,9
0,8
83,7
0ч
5,9
0,8
84,7
За 24 ч
6,4
0,3
52,7
За 6 ч
6
0,7
79,5
За 2 ч
5,7
1
88,5
0ч
5,3
1,4
95,8
За 24 ч
6
0,7
80
За 6 ч
6,5
0,2
36
За 2 ч
6,6
0,1
20
—
—
6,7
—
—
—
—
6,7
—
—
5
50
100
Схема внесения препарата до инфицирования
Необходимо отметить, что при внесении арбидола в
агаровое покрытие в концентрации, соответствующей 1/2
максимально переносимой концентрации, не обнаружена
значимая противовирусная эффективность, поэтому дозозависимое отображение снижения концентрации препарата
не являлось целесообразным. В культуре клеток Vero Е6
также ни один из исследуемых препаратов не проявил значимой (> 1,25 lg) эффективности в отношении вируса
ТОРС. В культурах-клеток СПЭВ и GMK-AH-1(D) эффективность арбидола установлена при внесении препарата в
максимально переносимой концентрации.
В опытах на культуре клеток GMK-AH-1(D) была показана зависимость активности арбидола от времени внесения препарата относительно срока инфицирования (табл.
3). Так, в дозе 50 мкг/мл арбидол снижал уровень накопления возбудителя при внесении его после инфицирования
на 2,3 lg по сравнению с контролем. Коэффициент ингибирования арбидола при внесении препарата в момент инфицирования или после составил 98,8- 99,9% соответственно.
Таблица 3. Изучение противовирусной эффективности лекарственных средств в отношении вируса ТОРС в культуре клеток
GMK-AH-1(D) (n = 3)
Препарат
Доза препаСхема внесения препарата
Уровень накопления Подавление репроКоэффициент
рата, мкг/мл
вируса, lg БОЕ/мл
дукции вируса, Δ, lg
ингибирования,
%
Арбидол
50
За 4 ч до инфицирования
2,5
1,3
95,3
0ч
1,9
1,9
98,8
После инфицирования
0,5
2,3
99,9
Мезилат арбидола
25
За 4 ч до инфицирования
2,8
1
90
0ч
2,4
1,4
96,1
После инфицирования
1,4
2,4
99,6
Рибавирин
50
За 4 ч до инфицирования
2,7
1,1
92
0ч
2,9
0,9
87,5
После инфицирования
1,7
2,1
99,2
100
За 4 ч до инфицирования
2,8
1
90
0ч
2,6
1,2
93,8
После инфицирования
1
2,8
99,8
Контроль дозы ви—
—
3,8
—
руса (без препарата)
Контроль дозы ви—
—
3,8
—
—
руса (без препарата)
+ 0,01% DMSO
Примечание. Инфицирующая доза вируса составила в среднем 0,0003 БОЕ на 1 клетку, срок инкубации — 48 ч; уровень накопления вируса оценивали
титрованием проб методом негативных колоний в культуре клеток Vero Е6.
Высокую противовирусную эффективность показал мезилат арбидола в культуре клеток GMK-AH-1(D) в концентрации 25 мкг/мл при внесении препарата после инфицирования. Уровень подавления репродукции вируса ТОРС
составил 2,4 lg, коэффициент ингибирования - 99,6%.
Рибавирин подавлял репродукцию вируса при внесении
препарата в культуральную среду сразу после инфицирования в концентрации 50 мкг/мл на 2,1 lg; 100 мкг/мл - на
2,8 lg, коэффициент ингибирования составил 99,2 и 98,8%.
Исследования противовирусной эффективности арбидола, мезилат арбидола и рибавирина в культуре клеток
СПЭВ показали, что в используемых концентрациях препараты высокоэффективно (99,7, 99,2 и 99,8% соответственно) подавляют репродукцию вируса ТОРС при внесении их после инфицирования (табл. 4).
Таблица 4. Определение противовирусной эффективности
лекарственных средств в отношении вируса ТОРС в культуре клеток СПЭВ
Препарат
Доза
Уровень
ПодавлеКоэффипренакопления
ние рециент
паравируса, lg
продукингибита,
БОЕ/мл
ции вирования.
мкг/м
руса, Δ,
%
л
lg
Арбидол, серия
50
2,8
2,5
99,7
02.03.2003
Мезилат арби25
3,2
2,1
99,2
дола, серия
01.05.03
Рибавирин,
100
2,7
2,6
99,8
партия 0102-02
Контроль дозы
—
5,3
—
—
вируса (без
препарата)
Контроль дозы
—
5,3
—
вируса (без
препарата) +
0,01% DMSO
Примечание. Инфицирующая доза вируса составила в среднем 0,0003
БОЕ на 1 клетку, срок инкубации — 72 ч; уровень накопления вируса
оценивали титрованием проб методом негативных колоний в культуре
клеток Vero Е6; схема внесения препаратов — через 2 ч после инфицирования монослоя клеток.
При сочетанном применении арбидола и мезилат арбидола с рибавирином не отмечено ни аддитивного, ни синергидного действия препаратов.
Следовательно, арбидол и его производное мезилат арбидола, а также рибавирин при внесении их в питательную
среду культур клеток GMK-AH-1(Д) и СПЭВ в больших
концентрациях через 2 ч после инфицирования эффективно подавляют репродукцию вируса ТОРС.
Установлено прямое противовирусное действие арбидола и его производного мезилат арбидола в отношении
вируса ТОРС в культуре клеток Vero Е 6.
Таким образом, выявлена противовирусная эффективность in vitro отечественных лекарственных препаратов
(арбидола, мезилат арбидола) и рибавирина.
ЛИТЕРАТУРА
1. Глушков Р. Г., Фадеева Н. И., Ленева И. А. и др. Молекулярнобиологические особенности действия арбидола - нового противовирусного препарата // Хим.-фармац. журн. - 1992. - № 2.
- С. 8-15.
2. Глушков Р. Г., Гуськова Т. А. Арбидол - новый отечественный
иммуномодулятор (обзор) // Новые лекарственные препараты.
- 1994. - Вып. 1. - С. 9-31.
3. Гуськова Т. А., Сускова В. С. Новые аспекты применения арбидола // Фармацевт, вестн. - 1998. - № 8. - С. 27.
4. Логинова С. Я., Фалдина В. Н., Борисевич С. В. и др. Изучение
динамики и уровня репродукции вируса тяжелого острого
респираторного синдрома в перевиваемых культурах клеток //
Материалы тезисов Всероссийской науч. конф. "Противочумные учреждения России и их роль в обеспечении эпидемиологического благополучия населения страны", посвящ. 70летию Противочумного центра. - М., 2004. - С. 213-214.
5. Методические вопросы научной разработки противовирусных
средств / Под ред. В. И. Вотякова. - Минск, 1977.
6. Онищенко Г. Г., Васильев Я. Т., Максимов В. А. и др. Выделение и идентификация возбудителя тяжелого острого респираторного заболевания от больного атипичной пневмонией //
Журн. микробиол. - 2003. - № 5. - С. 109-112.
7. Онищенко Г. Г., Говорун В. М., Сергиенко В. И. и др. Структурная организация генома SARS-ассоциированного коронавируса (штамм СоД), выделенного на территории Российской
Федерации // Бюл. экспер. биол. - 2004. - Т. 137, № 2. - С. 197199.
8. Первичное изучение антивирусных свойств синтетических и
природных соединений: Метод. рекомендации / Вотяков В.
И., Галегов Г. А., Бореко Е. И. и др. - Минск, 1986.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000.
10. Сыромятникова С. Я., Писцов М. Н., Степанов Н. Н. и др.
Патент Российской Федерации на изобретение "Штамм СоД
вируса тяжелого острого респираторного синдрома рода
Coronavirus, предназначенный для разработки средств и методов биологической защиты". Пат. № 2263144, РФ. Приоритет изобретения ВЦ НИИМ МО РФ от 17 декабря 2003 г.
11. Чижов Н. П., Носков Ф. С. Схема первичного отбора противовирусных препаратов // Молекулярная биология вирусов,
химиотерапия и химиопрофилактика вирусных инфекций. Минск, 1974. - С. 217-219.
12. Чижов Н. П., Ершов Ф. И., Индулен М. К. Основы экспериментальной химиотерапии вирусных инфекций. - Рига, 1988.
13. China confirms SARS infection in two previously reported cases update 4, 29 April 2004. http://www.who.int/
14. Hensley L., Fritz E., Jahrling P. et al. Interferon-β la and SARS
coronavirus replication // Emerg. Infect. Dis. - 2004. - Vol. 10, N
2. - P. 317-319.
15. Koren G., King S., Knowles S., Phillips E. Ribavirin in treatment
of SARS: A new trick for an old drug? // Can. Med. Assoc. J. 2003. - Vol. 168, N 10. - P. 1231.
16. Kuiken Т., Fouchier R. A., Schutten M. et al. Newly discovered
coronavirus as the primary cause of severe acute respiratory syndrome// Lancet. - 2003. - Vol. 362, N 9380. - P. 263-270.
17. Liu Z. Y., Li T. S., Wang Z. et al. Clinical features and therapy of
106 cases of severe acute respiratory syndrome // Zhonghua Wai
Ke Za Zhi. - 2003. - Vol. 42. - P. 373-377.
18. Рак C., Lam C., Li A. et al. Inflammatory cytokine profile in children with severe acute respiratory syndrome // Pediatrics. - 2004. Vol. 113, N 1. - P. 7-14.
19. Tan E. L. C., Ooi E. E., Tan H. C. et al. Inhibition of SARS coronavirus infection in vitro with clinical approved antiviral drugs //
Emerg. Infect. Dis. - 2004. - Vol. 10, N 4. - P. 581-586.
20. World Health Organization. Severe acute respiratory syndrome
(SARS) // Weekly Epidemiol. Rec. - 2003. - Vol. 78. - P. 81-83.
21. Zhao Z., Zhang F., Xu M. et al. Description and clinical treatment
of an early outbreak of severe acute respiratory syndrome (SARS)
in Guangzhou, PR Chine // J. Med. Microbiol. - 2003. - Vol. 52, N
8. - P. 715-720.
22. Zhaori G. Antiviral treatment of SARS: Can we draw any conclusions? // Can. Med. Assoc. J. - 2003. - Vol. 169, N 11. - P. 11651166.
23. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/ICTVdB/SARSI094.htm
Поступила 01.10.07