на 3 сутки

ГБОУ ВПО «Тюменская госмедакадемия»
Минздравсоцразвития России
ФБУН «Тюменский НИИ краевой инфекционной
патологии» Роспотребнадзора
Эпидемиологические аспекты изменчивости
внутрибольничных штаммов микроорганизмов
под влиянием стрессовых факторов
Марченко А.Н.
Козлов Л.Б., Мефодьев В.В.
Тюмень, 2011г.
1
Состояние проблемы
Одной из основных причин заболеваемости ИСМП
(ВБИ) является селекция и формирование
госпитальных штаммов, обладающих высокой
вирулентностью и множественной лекарственной
устойчивостью.
Под воздействием стрессовых факторов (антибиотики,
дезинфектанты, температура, рН среды, осмотическое
давление и т.д.) окружающей среды, в клетках
происходят адаптационные изменения (Л.В. Львова,
2003; О.В.Бухарин, 2006).
При этом, изменяется культурабельность и иногда даже
значительное количество бактерий могут переходить в
жизнеспособное некультивируемое состояние (ЖНС).
Состояние проблемы
В системе мер профилактики ИСМП качественная
дезинфекция остается важным звеном
(С.И.Савельев с соавт., 2001).
Однако нерациональная тактика дезинфекции,
использование средств с просроченным сроком
годности, неудачный подбор ДС при ротации
(М.Г.Шандала, 2009; Н.Н.Митрофанова, 2009),
являются причинами формирования устойчивых к
дезсредствам госпитальных штаммов.
3
По данным некоторых авторов частота выделения
госпитальных штаммов, устойчивых к
дезинфектантам в стационарах разного профиля,
составляет 9,5-25,0% в зависимости от вида
используемого дезинфицирующего средства
(Н.В. Саперкин, 2010).
В этой связи изучение действия дезинфектантов,
как стрессовых факторов, на патогенные и
условно-патогенные микроорганизмы
циркулирующие в медицинских организациях, с
учетом концепции некультурабельности, является
весьма актуальным.
Цель исследования
-
выявление влияния стрессовых факторов внешней среды
(различные дезинфицирующие средства) на популяции
спорадических и госпитальных штаммов,
циркулирующих в медицинских организациях Тюменской
области.
Задачи:
- Изучить биохимические свойства и чувствительность к
антибиотикам спорадических и госпитальных штаммов
Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Citrobacter
freundii, Hafnia alvei, Staphylococcus aureus, Enterobacter
cloacae, наиболее часто встречающихся в медицинских
организациях Тюменской области;
- Изучить влияние стрессового фактора (рабочие растворы
Дез-Хлора, Слэйбака и Септустина М) на популяции
госпитальных штаммов.
5
Материалы и методы
Изучены по 17 тестам биохимические свойства и
резистентность к 12 антибактериальным препаратам
6 видов спорадических и госпитальных штаммов
микроорганизмов циркулирующих в больничных
учреждениях Тюменской области. На выделенные штаммы
воздействовали рабочими растворами дезсредств и
культивировали на 5% кровяном МПА при 37оС 24 часа,
после чего оставляли при комнатной температуре в течение
10 дней и изучали свойства выросших колоний.
Определение госпитальных штаммов Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus, Enterobacter cloacae проводили по
разработанному нами способу
(патент на изобретение №2433186 от 28.06.2010).
6
Биохимическая активность штаммов изучалась по следующим
тестам: подвижность, образование индола, сероводорода, рост
на среде Симмонса, разложение мочевины, лизина, аргинина,
орнитина, лактозы, сахарозы, маннита, дульцита, салицина,
адонита, инозита, разжижение желатина, рост при 42о С, а
также разложение глюкозы, маннита, лецитиназы для
S.aureus.
Антимикробные препараты
Чувствительность изучалась к следующим антибиотикам:
ампициллину, амоксициллину, цефазолину, цефтазидину,
имипенему, меропенему, гентамицину, амикацину,
налидиксовой кислоте, тетрациклину, хлорамфениколу, котримоксазолу, а также ванкомицину, канамицину,
оксациллину, норфлоксацину, доксициклину, эритромицину
для S.aureus.
Результаты и обсуждение
Сравнительная характеристика биохимических свойств
спорадических и госпитальных штаммов микроорганизмов
Род и вид
микроорганизма
Биохимический
тест
Спорадический
штамм
Госпитальный
штамм
Proteus mirabilis
Орнитин
+
--
Симмонса
+
+(на 3 сутки)
Citrobacter
freundii
Сероводород
+
+(на 2 сутки)
Pseudomonas
aeruginosa
Аргинин
+
--
Желатина
+
+(на 3 сутки)
Рост при 42оС
+
+(на 2 сутки)
8
Наименование
Свойства исходной
биохимического теста популяции штамма
Индол
Свойства штамма
после обработки
дезраствором
++
+
Симмонса
+ (на 1 сутки)
+ (на 3 сутки)
Рост при 42о С
+ (на 1 сутки)
+ (на 2 сутки)
+
--
+ (на 1 сутки)
+ (на 3 сутки)
Дульцит
Желатина
Результаты изучения чувствительности к
антибиотикам колоний, выросших на 5-е сутки после
обработки госпитального штамма Pseudomonas
aeruginosa Септустином М
Наименование
антибиотика
Свойства исходной
популяции штамма
Свойства штамма после
обработки дезраствором
Ампициллин
Ч
У
Цефазолин
Ч
У
Тетрациклин
Ч
У
«Атипичный» штамм после обработки биоцидом был
устойчив к 10 антибиотикам, и, по сравнению с исходной
популяцией бактерий он приобрел устойчивость
дополнительно к 3-м антибиотикам.
10
Биохимические свойства колонии, выросшей на 7-е
сутки после обработки Дез-Хлором госпитального
штамма Proteus mirabilis
Наименование
биохимического теста
Симмонса
Свойства исходной
популяции штамма
+ (на 1 сутки)
Свойства штамма
после обработки
дезраствором
+ (на 4 сутки)
Сероводород
+
+ (на 2 сутки)
Подвижность
+
+ (на 3 сутки)
Дульцит
+
--
Лизин
+
+ (на 2 сутки)
На 7 сутки после обработки Дез-Хлором госпитального штамма
Proteus mirabilis сформировались колонии, проявившие
биохимическую активность на 2-4 сутки,
т.е. штамм стал атипичным.
11
Чувствительности к антибактериальным препаратам
колонии, выросшей на 7-е сутки после обработки
Дез-Хлором госпитального штамма Proteus mirabilis
Наименование
антибиотика
Свойства исходной
популяции штамма
Свойства штамма после
обработки дезраствором
Цефазолин
ч
у
Меропенем
ч
у
Тетрациклин
ч
у
Налидиксовая к-та
ч
у
После обработки Дез-Хлором атипичный штамм Proteus mirabilis
обладал большим спектром устойчивости к антибактериальным
препаратам. По сравнению с исходной популяцией атипичный
штамм приобрел дополнительно устойчивость
к 4 антибиотикам.
12
Проведенные исследования свидетельствуют о том, что
популяции госпитальных штаммов Ps. aeruginosa и P. mirabilis
не обладают стабильными биохимическими свойствами и
воздействие на эти бактерии препаратами Септустин М и Дезхлор оказывало селективное действие на микробные
популяции. Под воздействием испытанных биоцидов
«внутриклеточный взрыв» происходил не во всей микробной
популяции, а у отдельных бактерий. Как полагают Amor et all.
и Schraufstätter et all. в подобных ситуациях срабатывают
механизмы клеточной защиты микроорганизмов от
повреждающего действия стрессовых факторов.
Устойчивые к дезсредствам бактерии одновременно снизили
свою ферментативную активность и дополнительно
приобрели устойчивость к нескольким антибактериальным
препаратам. Таким образом, установлена гетерогенность по
признаку жизнеспособности отдельных микробных клеток в
популяции.
Появление подобных «атипичных» госпитальных
штаммов и формирование жизнеспособного
некультурабельного состояния бактерий, которые
при определенных условиях могут восстановить
свою репродуктивную активность, с
эпидемиологической точки зрения является
неблагоприятным прогностическим признаком
ухудшения эпидемической ситуации по ВБИ.
Происходит адаптация возбудителей к известным и
новым биоцидам. Это должно быть поводом для
изменения тактики проведения дезинфекционных
мероприятий (ротация дезсредств, использование
средств разрушающих биопленку и т.п.).
Необходимы регулярный мониторинг устойчивости
к дезинфицирующим средствам микроорганизмов,
циркулирующих в медицинских организациях,
а также разработка новые экспресс-методов
контроля качества рабочих растворов
дезинфицирующих средств (прежде всего
определение наличия остаточной
жизнеспособности и ЖНС бактерий в растворах
дезинфекционных средств).
Необходимо дальнейшее усовершенствование
эпидемиологического надзора ВБИ, в том числе
путем пересмотра (оптимизации) существующих
подходов к проведению дезинфекционных
мероприятий.
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ