удк 619 : 579.842.23 создание ветеринарных препаратов на

УДК 619 : 579.842.23
СОЗДАНИЕ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ
МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS
И YERSINIA ENTEROCOLITICA
С.В. ИВАЩЕНКО
Ключевые слова: Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, мембранные
белки, эритроцитарный антигенный диагностикум
Аннотация: Эритроцитарные антигенные диагностические препараты были
созданы на основе мембранных белков Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia
enterocolitica, их чувствительность и специфичность были исследованы.
Созданные
препараты
показали
более
высокую
чувствительность
по сравнению с коммерческими препаратами. Табл. -, Библ. 3, Рис. -.
Сведения об авторе:
ИВАЩЕНКО Сергей Владимирович – доцент Саратовского государственного
аграрного университета, кандидат биологических наук,
Адрес:
ул. Чехова,
11,
кв. 56,
г. Саратов,
410035,
тел. 89085533057,
[email protected]
Официально утвержденные в 1996 году санитарные и ветеринарные
правила по профилактике и борьбе с псевдотуберкулезом и кишечным
иерсиниозом животных обязывают ветеринарных врачей к своевременному
выявлению этого заболевания. Однако диагностика псевдотуберкулёза и
кишечного
иерсиниоза
осложняется
скрытым
течением
заболевания
у взрослых животных, трудоёмкостью бактериологического исследования,
недостаточным ассортиментом ветеринарных диагностических препаратов.
Поэтому в ветеринарии ощущается острая необходимость в разработке
новых систем для диагностики псевдотуберкулёза и кишечного иерсиниоза,
обеспечивающих
высокую
чувствительность,
специфичность,
эффективность, экономичность, позволяющих быстро получать результат и
не требующих для своей реализации дорогостоящих оборудования и
материалов [1, 2, 3].
Клетки иерсиний содержат достаточно широкий спектр обладающих
антигенными свойствами белков, различия в специфичности которых
позволяют использовать их при построении различных диагностических
систем.
В
настоящее
время
возможности
использования
белков
псевдотуберкулезного и кишечноиерсиниозного микробов для построения
систем диагностики реализованы далеко не полностью, что делает
актуальными дальнейшие исследования в этой области [2, 3].
В
связи
с
эритроцитарных
мембранных
этим
нами
антигенных
белков
была
предпринята
диагностических
псевдотуберкулезного
попытка
препаратов
и
создания
на
основе
кишечноиерсиниозного
микробов.
В работе был использован штамм Yersinia pseudotuberculosis III
сероварианта
и
Yersinia enterocolitica
от сельскохозяйственных
животных
с
О:3
сероварианта,
признаками
выделенные
диареи,
а
также
Yersinia enterocolitica О:3; О:5; О:6 и О:9 серовариантов из музейной
коллекции
кафедры
микробиологии,
вирусологии
и
иммунологии
проводили
выращивание
Саратовского государственного аграрного университета.
Для
получения
бактериальной
массы
Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica на питательных средах
при 26 °С. Разрушение бактериальной массы проводили ультразвуковым
методом с последующим разделением на фракции дифференциальным
центрифугированием.
Экстракцию мембранных белков из клеточных оболочек проводили
с помощью додецилсульфата натрия, а удаление не связавшегося детергента
осуществлялось диализом в проточной воде в течение 2 суток.
Наличие белка в субстратах контролировали спектрофотометрически.
Полученные
таким
замораживанию.
образом
белковые
Эритроцитарные
препараты
антигенные
подвергались
диагностикумы
конструировались по известным, предложенным Коральником и Шмутером
схемам, основанным на обработке танином бараньих формализированных
эритроцитов, сенсибилизации их установленной дозой антигена, закреплении
сентитина формалином, удалении не связавшегося антигена и консервации
полученного диагностического препарата.
В
процессе
антигенный
непрямой
испытаний
экспериментальный
псевдотуберкулезный
гемоагглютинации
туберкулезными
диагностикум
(РНГА)
с
диагностическими
эритроцитарный
выявлял
в
реакции
поливалентными
псевдо-
иммуноглобулинами
антитела
в наивысшем титре 1:409600.
Экспериментальный
эритроцитарный
антигенный
кишечно-
иерсиниозный диагностикум, созданный на основе белков свежевыделенного
штамма микроба О:3 сероварианта, показал высокую чувствительность
в РНГА
с
коммерческими
диагностическими
агглютинирующими
кишечноиерсиниозными сыворотками. С сывороткой к О:3 сероварианту он
реагировал в наивысшем титре 1:12800, а с сывороткой к О:9 сероварианту в наивысшем титре 1:204800.
Экспериментальные кишечноиерсиниозные диагностикумы, созданные
на основе белков музейных штаммов микробов О:3, О:5, О:6 и О:9
серовариантов,
показали
с коммерческими
высокую
чувствительность
диагностическими
агглютинирующими
в
РНГА
кишечно-
иерсиниозными сыворотками. С сывороткой к О:3 сероварианту микроба они
реагировали
в
наивысших
титрах
1:6400-1:51200,
с
сывороткой
к О:5 сероварианту – в наивысших титрах 1:12800-1:25600, с сывороткой
к О:6 сероварианту – в наивысших титрах 1:400-1:3200, с сывороткой
к О:9 сероварианту – в наивысших титрах 1:51200-1:102400.
Высокую чувствительность со всеми использованными в опыте
кишечноиерсиниозными
диагностикум,
сыворотками
сконструированный
Yersinia enterocolitica.
Его
на
проявил
основе
чувствительность
эксперементальный
О:6
составила
сероварианта
с
сывороткой
к О:3 сероварианту микроба титр 1:51200, с сывороткой к О:5 сероварианту -
титр 1:25600, с сывороткой к О:6 сероварианту - титр 1:3200, с сывороткой
к О:9 сероварианту - титр 1:51200.
Коммерческие
псевдотуберкулезный
и
кишечноиерсиниозные
препараты, сконструированные на основе липополисахарида и выпускаемые
по
лицензии
Минздрава
РФ
(С.-Петербургский
НИИВС),
проявили
значительно меньшую чувствительность, чем предлагаемые диагностикумы.
Коммерческий
эритроцитарный
антигенный
псевдотуберкулезный
диагностикум выявлял в РНГА с поливалентными псевдотуберкулезными
диагностическими иммуноглобулинами антитела в наивысшем титре 1:3200.
Коммерческие кишечноиерсиниозные диагностикумы О:3 и О:9
серовариантов
реагировали
с
родственными
кишечноиерсиниозными
сыворотками в наивысших титрах 1:1600 и 1:3200 соответственно.
Испытания специфичности созданных диагностических препаратов
проводились на псевдотуберкулёзной, эшерихиозной, сальмонеллёзной,
бруцеллезной, холерной гипериммунных поливалентных сыворотках и
на кишечноиерсиниозных сыворотках О:3 и О:9 серовариантов.
При испытаниях экспериментального псевдотуберкулёзного препарата
на специфичность в РНГА отмечалось наличие перекрестных реакций
с холерной и бруцеллезной сыворотками в наивысшем титре 1:200,
с кишечноиерсиниозной О:3 сероварианта и эшерихиозной сыворотками
в наивысшем титре 1:400.
Экспериментальные
диагностикумы
эритроцитарные
реагировали
с
кишечноиерсиниозные
псевдотуберкулезной
сывороткой
в наибольшем титре 1:1600.
Таким образом, на основе мембранных белков псевдотуберкулёзного и
кишечноиерсиниозного микробов созданы эритроцитарные диагностические
препараты, показавшие высокую чувствительность в РНГА. Данные
препараты могут быть рекомендованы для использования в серологических
реакциях
при
анализе
сывороток
на наличие иерсиниозных инфекций.
сельскохозяйственных
животных
Литература.
1. Зыкин Л.Ф., Щербаков А.А. Кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулёз
в патологии сельскохозяйственных животных / Матер. научно-производ.
конфер. по актуал. проблемам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 2001. Ч. 1.
С. 35-38.
2. Псевдотуберкулёз / Шурыгина И.А. [и др.]. Новосибирск: Наука, 2003. 320 с.
3. Иерсиниозы / Ющук Н.Д. [и др.] М: Медицина, 2003. 208 с.
UDC 619 : 579.842.23
CREATION OF THE VETERINARY PREPARATIONS ON THE BASIS
OF THE MEMBRANE PROTEINS OF YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS
AND YERSINIA ENTEROCOLITICA
Data about the author:
IVASCHENKO Sergey V. Candidate of Biological Sciences, Saratov State
Agricultural University
Address: 56 apart, 11, Chekhov Str, Saratov, 410035, tel. 89085533057,
[email protected]
Keyword: Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, membrane proteins,
erythrocytic antigenic diagnosticum
Summary: The erythrocytic antigenic diagnostic preparations have been created
on the basis of the membrane proteins of Yersinia pseudotuberculosis and Yersinia
enterocolitica, their sensitivity and specificity has been investigated. The created
preparations have shown higher sensitivity comparison with commercial
preparations. Tabl. -, Ref. 3, Fig. -.
BIBLIOGRAPHIC REFERENCES:
1. Zykin L.F., Scherbakov А.А. Intestinal yersiniosis and a pseudotuberculosis
in a pathology of agricultural animals / Materials research-and-production
conference on the actual problems of veterinary science and zootechny. Kazan,
2001. Vol. 1. P. 35-38.
2. Pseudotuberculosis / Shurygina I.A. and others. Novosibirsk: Nauka, 2003. 320 p.
3. Yersinioses / Juschhuk N.D. and others. M: Medicine, 2003. 208 p.