СТАФИЛОКОККИ МОЛОКА И ИХ САНИТАРНОЕ ЗНАЧЕНИЕ

%
к
Министерство сельского Хозяйства СССР
вологодский молочный ИНСТИТУТ
На правах рукописи
ч
Г. П. ШАМАНОВА
СТАФИЛОКОККИ МОЛОКА
И ИХ САНИТАРНОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Автореферат
диссертации
на соискание ученой степени
кандидата
, биологических
наук
Научный руководитель — заслуженный деятель
науки РСФСР, доктор ветеринарных наук,
профессор В. В. Сливко.
ВОЛОГДА
1 9 6 7'
JU
Диссертационная работа выполнена в Вологод­
ском молочном институте,
Диссертация представлена на 163 страницах
машинописи, включает 26 таблиц, 3 графика,
1 схему, иллюстрирована 8 фотоснимками,
В работе дан список использованной литерату­
ры в количестве 168 наименований, в том числе
95 отечественной и 73 иностранной.
Защита состоится в Вологодском молочном ин­
ституте '.
1967 г.
Отзывы на автореферат просим направлять по
адресу: г. Вологда, пос. Молочное, Вологодский
• лный институт, ученому секретарю.
V.
В наступившей пятилетке перед молочной промышлен­
ностью поставлены новые огромной важности задачи по даль­
нейшему развитию производства молочных продуктов. В но­
ной пятилетке намечается увеличить производство цельномо­
лочной продукции на 39—49%, сыра и брынзы — более чем
в 2 раза, молочных консервов — на 60%, сухого цельного мо­
лока — на 88%, сухого обезжиренного — более чем в 4 раза.
В настоящее время молоко и молочные продукты занима­
ют одно из ведущих мест в питании населения. Между тем,
следует иметь всегда в виду, что качество молочных продук­
тов, в основном, зависит от качества получаемого молока.
Одним из важнейших показателен качества молока явля­
ется степень бактериальной чистоты. Бактериальная загряз­
ненность молока не только причиняет материальный ущерб
хозяйствам, но н может привести к опасным заболеваниям
людей. Пищевые отравления, вызванные недоброкачествен­
ностью продуктов, к сожалению, все еще имеют место.
В настоящее время большой интерес проявляется к роли
молока и молочных продуктов в распространении стафило­
кокковых интоксикаций. Исследования последних лет указы­
вают на то, что большая часть стафилококковых интоксикаций
возникает при употреблении в пищу молока и молочных про­
дуктов (Е. С. Красницкая; Л. И. Столмакова; Г. П. Попов и
П. Я. Полякова; Munch — Petersen; Hobbs).
Кроме того, стафилококки могут быть возбудителями раз­
личных инфекционных заболеваний у людей (Г. В. Выгодчиков, Г. Н. Чистович, S. Elek), а также маститов у животных
(В. И. Мутовин, Davidson, Wilson).
В странах с развитым молочным животноводством (Ка­
нада, Австралия, Новая Зеландия и др.) маститы стафило­
кокковой этиологии признаны преобладающим видом инфек­
ции в стадах. Цифры указывают, что около 70% всех стад там
Ямтраль.ч;.!! • )".ч,"г.:^л Г. к*) л ил тек* |
Московской о;)Д. ЛадзпаСслмюэ.,
Лкад«вл u.i-A. AfS^T.'>pa3ttt
.
имеют стафилококковые маститы (Е. Coy). Особенно распро­
странена субклиническая форма мастита. По данным И. Л.
Каарде и Э. X. Ридала, их количество достигает 50—75%.
Большой экономический ущерб причиняют маститы живот­
новодству: уменьшается молочная продуктивность коров,
ухудшается качество молока и молочных продуктов, которые
нередко становятся опасными в санитаром отношении.
Гнойные поражения вымени (маститы) представляют пря­
мую опасность заражения молока гноеродной кокковой мик­
рофлорой. Кроме того, люди, страдающие гнойничковыми
поражениями кожи или воспалительными заболеваниями
верхних дыхательных путей стафилококковой природы, могут
быть источниками инфицирования молока и молочных про
дуктов стафилококками.
Случаи пищевых отравлений продуктами, выпускаемыми
молочной промышленностью, выдвигают серьезную задачу
разработки мероприятий по профилактике этих заболеваний.
Отличительным свойством стафилококков, вызывающих
пищевые отравления, является способность продуцировать
ядовитое вещество — энтеротоксин. Этот энтеротоксин тепло­
устойчив, а вырабатывающие его стафилококки широко рас­
пространены среди практически здоровых людей, работа­
ющих на молочных фермах, в пищевой промышленности
и торговой сети, а также у молочных животных (К. И. Туржецкий, Л. И. Столмакова, Courter, Galton, N a k a g a w a ) .
Некоторые исследователи считают, что для накопления энтеротокспна в концентрациях, достаточных для появления при­
знаков отравления у человека, количество стафилококков в
1 грамме продукта должно составлять от 500 тыс. до 1 млн.
и более (Allison, Hobbs).
Во всех имеющихся работах по исследованию источников
и причин обсеменения молока или молочных продуктов пато­
генными стафилококками авторы делали упор, в основном,
на какой-нибудь один источник обсеменения без учета их
взаимосвязи и влияния совокупности различных факторов
внешней среды. Кроме того, исследования охватывали не весь
путь движения молока от мест получения до потребительских
центров, а ограничивались лишь отдельными небольшими
участками или лабораторными экспериментами. Получаемые
при этом данные не отражали динамику обсеменения молока
патогенными стафилококками.
Работа по выделению и изучению патогенных стафилокок­
ков из молока и молочных продуктов на различных этапах
Ч
, V -
технологического процесса позволит выявить наиболее опас­
ные в санитарном отношении участки и тем самым облегчить
возможность предупреждения пищевых интоксикаций через
молоко и молочные продукты.
В связи с этим нами проведены исследования, в задачи
которых входило изучение следующих вопросов:
1) выделение патогенных стафилококков от здоровых и
больных маститом коров, с учетом количества стафилокок­
ков;
2) источники инфицирования молока патогенными штам­
мами стафилококков в процессе его получения;
3) санитарно-гигиенические условия производства пастери­
зованного молока и возможность обсеменения его патогенны­
ми стафилококками на различных этапах технологического
процесса;
4) свойства стафилококков, выделенных из молока и мо­
лочных продуктов; фаготипирование и чувствительность к
антибиотикам;
5) влияние механизации молочных ферм на степень бакте­
риального обсеменения молока.
Работа по выделению н изучению стафилококков из моло­
ка и молочных продуктов проводилась на молочных фермах
•\ь 1 («Ильипское») и № 2 («Абакшппо») учебно-опытного
хозяйства Вологодского молочного института и на учебноопытном заводе «Молочное» с марта 1964 года по август
1965 года.
Исследования по вопросу «Влияние механизации ферм на
бактериальную обсемененность молока» проводились в Нацио­
нальном научно-исследовательском институте по Молочному
делу в г. Рндпнге (Англия).
1. ВЫДЕЛЕНИЕ ПАТОГЕННЫХ СТАФИЛОКОККОВ
ОТ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ МАСТИТОМ КОРОВ
Для определения частоты выделения патогенных стафи'
лококков от коров с субклиническими формами мастита необ'
ходнмо было, в первую очередь, определить количество таких
коров, затем выявить возбудителей заболевания.
В хозяйствах Хя 1 и № 2 обследовано 203 головы крупного
рогатого скота на наличие субклннических форм маститов.
Все подопытные животные были клинически здоровы к нача­
лу проведения опыта и находились в одинаковых условиях со­
держания.
3
Выявление субклиничсскпх форм маститов производилось
индикаторными карточками с пятнами бромтимолблау и ре­
активом — димастином по общепринятым методикам.
Помимо качественных реакций, молоко из долей, давших
положительную и сомнительную реакции с димастином иссле­
довали микробиологически. Контролем служило молоко иа
здоровых долей вымени.
Полученные в асептических условиях раздельно из каж­
дой доли вымени последние порции паренхнмного молока вы­
севали на следующие питательные среды: МПА с 1% глюко­
зы—для подсчета общего количества бактерий и кровяной
солевой агар (по методике Н. И. Гамовой-Каюковой и Л. Н.
Шустовой)—для учета количества патогенных стафилококков.
Результаты обследования 203 голов крупного рогатого
скота на субклиническую форму мастита с применением ин­
дикаторных карточек и реактива димастина приведены в таб­
лице 1.
Таблица 1
Сравнительная характеристика реакций при диагностике субклинических
маститов коров
Сезоны
года
Весенний
Летний
Осенний
Зимний
В среднем
Кол-во
обследо­
ванных
голов
203
203
203
203
Кол-во
коров,
данших
ПОЛОЖИТ.
реакции с
индикатор­
ными
карточками
29
32
31
34
%
к общему
кол-ву
голов
14,2
15,7
15,2
16,7
15,4
Кол-во
коров,
давших
положит.
реакции
с димас­
тином
RS
79
.95
99
%
к общему
кол-ву
голов
43,3
38,9
46,3
48,7
44,4
Из таблицы 1 видно, что для выявления субклинических
форм мастита на ранних стадиях его развития реакция с ди­
мастином является более наглядной и четкой по сравнению
с реакцией бромтимолблау. Последняя является мало пригодчой для диагностики субклинических маститов, так как выяв­
ляет только меньшую часть больных коров (15,4%)- Как пра­
вило, индикаторные карточки давали положительную реакцию
п тех случаях, когда были видимые изменения в секреции (в
4
последние дни перед запуском коров или при наличии неболь­
шого количества хлопьев в молоке).
Обращает на себя внимание то обстоятельство, что в лет­
ний период количество маститных заболеваний снижается по
сравнению с осенне-зимним и весенним периодами.
Результаты микробиологических исследований проб моло­
ка, давших положительную н сомнительную реакции с димастином, приведены в таблице 2.
Таблица
2
Частота выделения патогенных стафилококков из долей вымени
больных маститом коров
Исследовано больных коров
из них имеющих стафило­
кокковые маститы
Сезоны
года
Весенний
Летний
Осенний
Зимний
В среднем
маститы
всего
88
79
95
90
коров
долей
65
55
61
67
114
101
122
147
1
%
73,8
69,6
64,2
67,7
68,8
коров
23
24
34
32
%
26,2
30,4
35,8
32,3
31,2
Из таблицы 2 следует, что преобладающей формой масти­
та среди обследованной группы коров является стафилококко­
вый мастит. Полученные данные свидетельствуют, что скры­
тыми стафилококковыми маститами в среднем поражено
68,8% коров от количества пораженных маститами коров и
30,5% — от общею количества обследованных коров. Выделе­
ние патогенных стафилококков варьирует в зависимости от
времени года. Наиболее высокий процент инфицированных до­
лей встречается в осенне-зимний и весенний периоды.
Дальнейшие наблюдения за опытными животными показа­
ли, что у 34 коров, имеющих субклшшческую форму мастита.
заболевание перешло в клиническую форму. На протяжении
опыта наблюдались 32 острые вспышки стафилококковых ма­
ститов у коров фермы № 2. Из всех пораженных долей выме­
ни были выделены золотистые стафилококки в чистой культу­
ре. Оказалось, что выделенные стафилококки были идентич­
ными, так как принадлежали к одному и тому же фаготипу
5
6/42Е/75/77/42Д. Гакнс же острые вспышки зарегистрирова­
ны у 27 коров фермы № 1 . Однако па этой ферме стафило­
кокки были другого фаготипа AC1/42A/102/I07/13G3/SG и
55/71/7/42Е/42Д. "
Представляют интерес полученные нами данные о зависи­
мости между силой реакции с димастином от общего коли­
чества выделенных микроорганизмов и патогенных стафило­
кокков. (Таблица 3 ) .
Всего исследовано 644 пробы иаренхимного молока; из них
311 проб молока, давших с димастнном положительную ре­
акцию, 173 — сомнительную и 160 проб молока — нормальную
(из здоровых долей вымени).
Та б л л ц а 3
Зависимость силы реакции с димастином от количества микроорганизмов
в 1 мл паренхи.много молока
Микробное
число
Общее -гол-во бактерий Кол-во патогенных стафи­
в 1 мл молока при ре- лококков в 1 мл молока при
акции с димастином
реакци и с димастином
сом- нормаль­ положи- сомни- нормальг"
положн- иитетельн.
тельн.
тельи. ЛЫ1.
ной
ной
__
0—10
10—50
50—100
ICO—5G0
500—10ОС
,1000—1500
1500—2000
2СС0—3000
ЗССС—5000
5000—1СО0О
10000—I50CO
15000—20СОЭ
20000—25000
250СО0
5
12
11
24
17
36
57
122
С
5
4
2
Всего
511
—
3
21
09
32
18
_-
173
139
19
2
—
...
7
57
70
95
35
19
13
13
9
3
66
68
20
13
1-15
14
7
-
—
—
._
._
.._
._
...
—
—
_
__
—
—
._
.._
_.
—
....
-
_..
—
1L0
511
173
100
Примечание: положительная реакция — гель алого
пунцевого цвета;
сомнительная реакция -— слабый гель красного или
розового цвета;
6
нормальное молоко — отсутствие геля, цвет оранже­
вый.
Как показывают данные таблицы 3, существует корреля­
ция между общим количеством микроорганизмов, выделен­
ных из больных долей вымени, и показанием положительной
реакции с димастпном.
При положительной реакции (четыре и три креста) наи­
большее число больных долен содержит в 1 мл паренхимного
молока от 5 до 10 тыс. микроорганизмов, в то время как при
сомнительной реакции максимум долей вымени содержит от
100 до 500 бактерий в 1 мл молока.
При бактериологическом исследовании 160 проб молока из
здоровых долей вымени в 139 пробах (87%) роста бактерий
не было обнаружено или найдены единичные клетки.
2. ИСТОЧНИКИ ИНФИЦИРОВАНИЯ МОЛОКА
ПАТОГЕННЫМИ СТАФИЛОКОККАМИ В ПРОЦЕССЕ
ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ
Д л я решения этого вопроса нами был поставлен опыт с
двумя группами коров:
1 группа — 25 коров, имеющих субклиническнй стафило­
кокковый мастит,
2 группа — 25 здоровых коров (контроль).
Смывы с кожи вымени коров, рук доярок, доильных ма­
шин, доильных ведер, халатов, салфеток и т. д. отбирались
стерильными ватными тампонами и погружались в пробирки
с 3 мл стерильного лакмусового молока. Такой объем зара­
женного молока условно считался исходным материалом.
Кроме того, были взяты для исследования вода фермы
и воздух доильного помещения в процессе дойки.
Бактериологическое исследование воздуха производили седиментационным методом.
Опытная и контрольная группы были подвергнуты трех­
кратному обследованию. (Таблица 4).
Анализируя данные таблицы 3 и 4, можно считать что ос­
новным резервуаром патогенных стафилококков является
ткань молочной железы вымени коров, больных субклшшческим стафилококковым маститом, и кожа вымени и сосков.
Бактериологические исследования показали, что при пиодермиях, дерматитах и других повреждениях кожных покроЕЮВ вымени молоко может обсеменяться патогенными стафи­
лококками в большом количестве (более 8000 в 1 мл смыва),
Таблица
4
Высеваемость патогенных стафилококков из смывов,
воды и воздуха молочных ферм
Кол-во микроор<аннзмов в 1 мл смыва
в среднем
Контролируемые
с
с
объект
1. Смывы с кожи вымени маститных коров
2. Смывы с кожи вымени здо­
ровых коров
3. Смывы с рук доярок
4. Смывы с доильных аппара­
тов
5. Смывы с инвентаря н обору­
дования
6. Вода
7. Воздух
всего
содержат.
патоген.
стафилок.
Кол-во проб
Н
общее
патогенных
стафило­
кокков
75
58
77,8
48G600
51760
75
23
32
14
42,6
60,8
316800
16С243
6930
4917
88
71
81,0
1002143
67099
81
£2
33
9
0
1
10,9
—
3,3
94536
94
—
80
—
—
даже если внутри вымени инфекция отсутствует. Патогенные
стафилококки, выделенные из гнойных очагов, являются устой­
чивыми микроорганизмами; обработка вымени дезинфициру­
ющими растворами резко снижает их количество, но не унич­
тожает их.
Полученные данные свидетельствуют о том, что вторым ис­
точником инфицирования молока являются руки операторовдоярок. Кроме того, руки являются и средством распростра­
нения стафилококков в окружающую среду.
Проведенные нами исследования вновь подтверждают уже
высказанное предположение о том, что основным фактором
распространения стафилококков от коровы к корове являют­
ся доильные аппараты, которые недостаточно очищаются и де­
зинфицируются. Перенос стафилококков от коровы к корове и
от одной доли вымени к другой происходит во время дойки,
Необходимо отметить, что инфицирование стафилококками
доильных ведер и прочего инвентаря является вторичным по
отношению к инфекции вымени. Наличие патогенных стафи­
лококков в 10,9% смывов с доильных ведер и прочего инвен­
таря обусловлено распространением их доильными аппара­
тами, салфетками и обслуживающим персоналом фермы.
По нашим данНым, вода не является источником патоген­
ных стафилококков. Что касается воздуха, то из 33 исследуе­
мых проб патогенный стафилококк обнаружен только в одной
пробе (3,3%).
В результате исследования нами выделено 558 штаммов
стафилококков, из них 140 — из молока и вымени здоровых
коров, 217 — из молока и вымени маститных коров, 48 — с
рук персонала, 113 — с доильных аппаратов и прочих пред­
метов ухода, 18—'из воды и 22 — из воздуха.
3. САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ
ПРОИЗВОДСТВА ПАСТЕРИЗОВАННОГО МОЛОКА
На предприятиях молочной промышленности лежит боль­
шая ответственность за снабжение населения доброкачествен­
ным и безопасным в санитарно-гигиеническом отношении мо­
локом. Молоко с одного предприятия могут употреблять а
лищу сотни и тысячи людей, поэтому возможность распро­
странения болезней и интоксикаций через молоко очень ве­
лика.
В связи с этим вопрос о выживании патогенных стафило­
кокков в пастеризованном молоке приобретает особую важ­
ность.
Нами были изучены санитарно-гигиенические условия про­
изводства пастеризованного фляжного и бутылочного молока
на учебно-опытном заводе «Молочное» Вологодской области.
Сырьем для выработки пастеризованного молока служило
молоко ферм № 1 и № 2. На указанных фермах нами деталь­
но изучены источники инфицирования молока патогенными
стафилококками в процессе доения, факторы распространения
стафилококков в окружающей среде и их количество в образ­
цах молока и смывах.
В дальнейшем нас интересовали следующие вопросы:
а) какое количество патогенных стафилококков выживает
в молоке после пастеризации;
б) возможность экзогенного заражения пастеризованного
молока стафилококками на различных этапах производствен­
ного процесса;
в) обсемененность патогенными стафилококками продажлого пастеризованного фляжного и бутылочного молока;
г) какие штаммы стафилококков выделяются из готовой
продукции, являются ли они стафилококками животного про­
исхождения, попавшими в молоко от больных животных и вы9
державших тепловую обработку, или это штаммы человече­
ского происхождения, попавшие в продукты от персонала фер­
мы или завода при нарушении санитарно-гигиенических Пра­
ги л.
Микробиологический контроль производства пастеризован­
ного фляжного и бутылочного молока осуществляли путем ис­
следования проб сырого и пастеризованного молока на раз­
личных этапах технологического процесса.
Санитарно-гигиеническое состояние производства выясня­
ли путем исследования смывов с рук обслуживающего пер­
сонала, оборудования, тары и инвентаря. Бактериологическо­
му исследованию подвергались также вода и воздух произ­
водственных цехов.
Для более полной оценки санитарного состояния производ­
ства во всех исследуемых образцах, помимо патогенной мик­
рофлоры, определяли общее количество бактерий и бактерии
группы кишечной палочки.
Всего было исследовано 9 партий фляжного и 12 партий
бутылочного пастеризованного молока. Необходимо отметить,
что пастеризация молока осуществлялась при температуре
87—90" С на трубчатом пастеризаторе, после этого молоко ох­
лаждалось до температуры 13°С и поступало в молокохранильный танк. Из танка молоко разливали во фляги вручную.
Мойка фляг производилась на тоннельной фляго.моечиой ма­
шине.
При выработке бутылочного молока нормализованная
смесь последовательно проходила: трубчатый пастеризатор,
промежуточный бачок, гомогенизатор, универсальный танки
разливочно-укупорочный автомат. Температура пастеризаций
в трубчатом аппарате 75° С, выдержка в универсальном танке
при температуре 95° С—40 минут.
Мойка бутылок осуществлялась на бутыло-моечнон маши­
не производительностью 2000 бутылок в час.
Исследования показали, что режим пастеризации, приме­
няемый на данном предприятии, полностью обеспечивает унич- с
тожение патогенных микроорганизмов и кишечной палочки, а
также резко снижает общее количество микроорганизмов, на­
ходящихся в молоке.
Однако следует отметить, что из-за нарушения санитар­
ного режима при прохождении молока через охладитель про­
исходило повторное обсеменение его микрофлорой, в том чис­
ле и патогенными стафилококками.
10
Опыты показали, что, помимо охладителя, пастеризован­
ное молоко в большинстве случаев обсеменялось стафилокок­
ками в молокохранильных танках и флягах. Ввиду плохой
мойки и дезинфекции танков и фляг фляжное молоко по каче­
ственному составу микрофлоры почти не отличалось от сыро­
го. Патогенные стафилококки содержались в 66% исследуемых
партий фляжного молока.
Таким образом, пет сомнения в том, что фляжное пастери­
зованное молоко может оказаться при определенных услови­
ях потенциально опасным для здоровья потребителей.
Следует подчеркнуть, что бутылочное молоко было добро­
качественным в санитарном отношении.
Результаты произведенного нами бактериологического ис­
следования 208 смывов с рук персонала, оборудования, аппа­
ратуры и инвентаря молочного завода показали, что патоген­
ные стафилококки обнаружены в 37 смывах, что составляет
17,8%. (Таблица 5).
Контролируе­
мый объект
0 ИССЛ.
)В
Таблица 5
Обсемененность кишечной палочкой и стафилококками аппаратуры,
оборудования и рук персонала молочного завода
м
i
13 псслед. смывах обнаруж.
кишечная
палочка
патогенные
стафилококки
Кол-во бактерии
в 1 мл смыва в
среднем (в тыс.)
аз
Фляги
63
Бутылки
30
Смывы с труб
2о
и кранов
Танки МХО,
29
ванны и пр.
Разливочный
45
автомат
Руки персонала 18
208
Всего
кол-во
29
0
%
46
0
!>
39,1
8
27,6
3
2
0,7
11,1
51
2-4,5
кол-во
%
26
0
41,3
0
6
общее
стафплок.
1037, }
0,13
129,8
0
20,1
5,6
0,0
2
0,9
5О—30О
2-1,0
0
3
37
0
16,6
17,8
0, 1
7, i
0
0,8
Выяснено, что в смывах с бутылок и частей разливочного
автомата патогенные стафилококки отсутствовали.
Результаты анализов показали, что 14 проб воздуха и
8 проб воды, используемой в производстве для технологиче­
ских нужд, не содержали патогенных стафилококков.
11
Полученные данные свидетельствуют о том, что оосемененность фляжного молока в торговой сети зависит исключитель­
но от условий производства его на молочном предприятии.
При изучении санитарно-гигиенических условий производ­
ства пастеризованного молока нами выделено 295 штаммов
стафилококков. Из них: 91 —из сырого молока, 66—из пас­
теризованного фляжного молока, 30 — из молока после охла­
дителя, СО — нз смывов с фляг, 28 — с молокопроводов и тан­
ков МХО, 18 — с рук персонала и 2 — из воздуха.
Результаты фаготипирования показали, что патогенные
стафилококки, выделенные нз фляжного молока, имели иден­
тичную фагоформулу со штаммами стафилококков, выделен­
ных из сырого молока 42Д/102/107/1363/56/29 и из смывов с
фляг, предназначенных для разлива молока 42Д/102/1363/883.
Все эти штаммы являются штаммами животного происхож­
дения.
4. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ СТАФИЛОКОККОВ,
ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ МОЛОКА
Нами изучено 853 штамма стафилококков в отношении их
морфологических, биохимических и биологических свойств. Из
них: 558 штаммов из молока и окружающей обстановки мо­
лочных ферм и 295 — из молока и внешней обстановки молоч­
ного завода. Кроме того, произведена дифференциация штам­
мов патогенных стафилококков с помощью Международного
набора типовых человеческих стафилококковых бактериофа­
гов и набора фагов животного происхождения, любезно пре­
доставленного нам Дэвидсоном (Англия).
Производилось также определение чувствительности пато­
генных стафилококков к различным антибиотикам.
Дифференциацию патогенных стафилококков от апатогенлых производили с помощью следующих общепринятых тес­
тов: реакции плазмокоагуляции, реакции чашечного гемолиза»
ферментации маннита н дермонекротической реакции. Необходимолишь отметить, что постановку дермонекротической ре­
акции мы осуществляли параллельно на кроликах и мышах
с целью определения пригодности последних для постановки
данной реакции.
Способность штаммов стафилококков продуцировать энтеротоксин (25 штаммов) определяли путем постановки биоло­
гической пробы на котятах, в возрасте 1,5—2,5 месяцев, взрос­
лых кошках и мышах. (По методу А. И. Столмаковой).
Фаготипирование производили но методике, предложенной
институтом эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи.
Чувствительность к антибиотикам (пенициллин, стрептоми­
цин, биомицин, левомицитин и террамицин) определяли мето­
дом индикаторных дисков.
Исследования показали, что морфологически штаммы ста­
филококков представляют собой круглые клетки, размещен­
ные в виде кучек с тенденцией складываться в гроздья, грамноложительны, неподвижны, не образуют спор. Токснгенные
штаммы — очень мелкие кокки, более мелкие по сравнению с
сапрофитами. На картофеле стафилококки дают пышный рост
и прекрасно продуцируют пигмент. Установлено, что наиболь­
шее количество стафилококков, имеющих золотистый пигмент,
выделено из молока и вымени маститных коров и рук обслу­
живающего персонала (87,5%).
По остальным биохимическим свойствам (ферментация уг­
леводов, рост на МПБ, редуцирующая способность, образова­
ние индола и т. д.) выделенные нами стафилококки не отлича­
лись от свойств стафилококков, описанных ранее другими ис­
следователями (Г. В. Выгодчиков, Н. П. Пефедьева, Г. Н. Чистович).
Результаты испытаний выделенных культур по четырем
тестам (гемолиз, плазмокоагуляция, дермонскротическая ре­
акция и ферментация маннита) представлены и таблице 6.
Таблица
6
Результаты реакций, поставленных со штаммами стафилококков,
выделенных на молочных фермах и молочном заводе
Из различных
объектов па
молочной
ферме
И з различных
объектов на
молочном
заводе
Итого
558
295
853
292
67
359
202
161
32
234
42
203
фермен­
тация
манни­
та
153
73
226
122
31
153
биохимиче­
ски неак­
тивных
реакция
гемо­
лиза
Кол-во штаммов:
биохимиче­
ски актив­
ных
штаммы
штаммов
дермоиекротическая
реакция
Всего
выделены
реакция
плазмокоагуляции
Число положительных находок
Откуда
436
264
700
13
П р и м е ч а н и е : к группе биохимически1 активных
штаммов относились штаммы, которые коагулировали
плазму крови до 3-х часов, давали полный гемолиз
, ( + + + + ) на кровяном агаре, вызывали некроз при внутрикожном введении мышам и ферментировали маннит.
Все биохимически активные штаммы были отнесены к па­
тогенным. Таким образом, нам удалось установить, что из 558
изученных штаммов стафилококков, выделенных из молока ко­
ров, рук персонала и оборудования молочных ферм, а также
из 295 штаммов, выделенных на молочном заводе 122 (21%)
н 31 (10,5%) оказались патогенными."
Опыты подтвердили возможность использования мышеи
ьместо кроликов для постановки дермонекротической реакции.
Доза для инъекции—0,1 мл 2 млрд. суспензии суточной ага­
ровой культуры стафилококка внутрикожно в область бедра—
является вполне достаточной для получения реакции.
Всего было испытано 25 штаммов стафилококков на спо­
собность продуцировать энтеротоксин; все проверенные штам­
мы оказались энтсротоксичными.
Сравнивая результаты типирования 153 штаммов стафи­
лококков с помощью набора Международных типовых фагов
и набора Дэвидсона, необходимо подчеркнуть, что в первом
случае удалось установить фаготнп для 107 (69,9%), а во вто­
р о м — для 138 (82,5%) штаммов.
Нами выяснено, что патогенные стафилококки, выделенные
с различных объектов на молочных фермах и молочном заво­
де, были резистентны соответственно к следующим антибио­
тикам: к пенициллину—3 (2,4%) и 5 (1,6%), к стрептомици­
ну — 99 (81%) и 7 (2,2%), биомицину—15 (12,2%) и 5 (1,6%),
лепомицитину—10 (8,2%) и 14 (4,5%) и террампцнну —
6 (4,9%) и б" (1,9%).
Обращает на себя внимание высокая резистентность к
стрептомицину штаммов, выделенных из молока здоровых и
больных маститом коров, оборудования и предметов ухода
на молочных фермах*.
5. ВЛИЯНИЕ Л\ЕХАНИЗЛЦИН ЛЮЛОЧНЫХ ФЕРЛ\
НА БАКТЕРИАЛЬНУЮ ОБСЕМЕНЕННОСТЬ МОЛОКА
Решение вопроса получения молока высокого санитарного
качества имеет большое значение.
Изложенные и предыдущих разделах факты со всей оче­
видностью показывают громадную значимость санитарии на
И
.молочных фермах и выдвигают задачу внедрения комплекса
санитарных мероприятий, обеспечивающих повышение качест­
ва молока.
В связи с этим мы поставили перед собой задачу приме­
нить на полностью механизированной ферме («Хаикопс») пол­
ным комплекс санитарно-гигиенических мероприятии (назы­
ваемый методом «высокой гигиены») и сравнить его с обыч­
ным методом, применяемым па молочных фермах. Метод «вы­
сокой гигиены» включает следующие мероприятия:
1) первичная обработка вымени теплой водой из шланга
со специальным разбрызгивающим наконечником;
2) применение антисептических средств для обмывания вы­
мени коров (0,01% раствор гипохлорита натрия), с использо­
ванием пластмассовых ведер;
3) применение индивидуальных бумажных салфеток для
мойки и обтирания вымени (разовое);
4) использование доярами резиновых перчаток из тонкой
прочной резины, что исключает соприкосновение рук непосред­
ственно с выменем;
5) сдаивание первых порций молока в специальную круж­
ку с резиновым кружком черного цвета;
6) погружение сосков вымени в дезинфицирующий рас­
твор (4% раствор гипохлорита натрия, с содержанием 0,05%
едкого натрия) по окончании донки на 1—2 сек.;
7) антибиотикотерапия всех коров в сухостойный период
(0,2 гр. орбешша в каждую долю вымени);
8) регулярный осмотр состояния сосков вымени животных
на наличие трещин, царапин н нагноений (1 раз в 10 дней);
9) доение инфицированных коров в последнюю очередь;
10) автоматическая мойка доильных аппаратов и молокопроводов растворами азотной или сульфамидной кислот (цир­
куляция кислотного раствора при температуре 90°С);
11) автоматическая мойка танков для охлаждения молока
иодофором;
12) немедленное охлаждение молока до температуры
4° С.
В задачу опыта с применением метода «высокой гигиены»
входило следующее:
а) определение степени обеззараживания поверхности
вымени;
б) снижение передачи перекрестных инфекций во время
процесса доения, а следовательно, и случаев клинических и
субклиничеекпх форм маститов;
15
в) снижение бактериальной обсемененности получаемого
молока и сведение до минимума в нем патогенных бактерии.
Экспериментальное стадо (ферма «Хайкопс») состояло иг
51 головы крупного рогатого скота. Контрольное стадо (фер­
ма «Арбофилд Холл») состояло из 52 голов крупного рогато­
го скота. В контрольном стаде применяли обычные методы об­
работки животных: чистой водой (без антисептиков) обтира­
ли вымя коров, без употребления индивидуальных салфеток.
После окончания дойки соски вымени не погружались в рас­
твор дезпнфектанта, дояры не пользовались резиновыми пер­
чатками. Мойка доильных аппаратов и танков для охлажде­
ния молока производилась 0,5% раствором кальцинированной
соды и 0,1% раствором гипохлорита натрия. Температура мо­
ющего раствора 62 3 С. Контрольная мойка производилась по
той же методике, что и опытная.
Качестоо мойки оценивали по результатам бактериологи­
ческих анализов смывов с молочного оборудования и образ­
цов молока, взятого из танков до и после охлаждения.
Содержание коров на обеих фермах — беспривязное с ис­
пользованием пастбища, доение — машинное, двухразовое в
доильном зале.
На основании проведенных опытов мы установили, что в
результате проведения полной гигиенической обработки в
опытном стаде резко снизилось количество долей вымени, ин­
фицированных патогенными микроорганизмами (с 66% до
19%).
Применение метода «высокой гигиены» позволило резко
сократить трансмиссию патогенных микроорганизмов во вре­
мя дойки. Погружение сосков вымени в раствор дезпнфектан­
та резко снижает содержание микрофлоры на их поверхности.
Кроме того, применение дезинфицирующих средств для об­
работки вымени привело к резкому сокращению числа бакте­
рий в свежевыдоенном молоке. Пробы молока от коров опыт­
ной группы содержали в среднем 6000 микроорганизмов в
1 мл, в то время как пробы молока от коров контрольной
группы —• 700 000 в 1 мл.
Опыты показали, что автоматическая мойка доильных ап­
паратов и молокопроводов горячими растворами азотной и
сульфамидной кислот имеет значительные преимущества пе­
ред щелочной. Количество бактерий группы кишечной палоч­
ки сводится к минимальному. Патогенные стафилококки в
смывах с оборудования в результате кислотной мойки обна­
ружены не были.
16
" •
~
Аналогичные результаты получены и при мойке танков для
охлаждения молока иодофором, в то время как при обычно
применяемом способе мойки (кальцинированная сода с гнпохлоритом натрия) кишечная палочка была выделена из смы­
вов с оборудования и танков для охлаждения молока в 100%
II 91,7% проб соответственно.
Изучив динамику обсеменения молока патогенными стафи­
лококками на пути движения его от мест получения до потре­
бительских центров, свойства выделенных штаммов стафило­
кокков и факторы, обуславливающие.резкое снижение их ко­
личества, можно сделать следующие выводы.
ВЫВОДЫ
1. Преобладающая роль в этиологии маститов коров при­
надлежит Staphylococcus aureus. Скрытыми стафилококковы­
ми маститами в среднем было поражено 68,8% коров от коли­
чества пораженных маститами коров и 30,5% — от общего ко­
личества обследованных коров.
2. При субклннических стафилококковых маститах в 1 мл
паренхимисго молока содержится значительное количество
микроорганизмов (от 5 до 10 тыс.), в том числе патогенных
стафилококков (500—1000); в молоке здоровых долей выме­
ни найдены единичные клетки бактерий.
3. Реактив димастип является чувствительным препаратом
для диагностики субклинических маститов. Патогенные ста­
филококки выделены в 100% проб молока, давших положи­
тельную реакцию с димастнном, в то время как при сомни­
тельной реакции и при отсутствии ее в нормальном молоке,
эти цифры были значительно ниже: соответственно 38,1% и
9,3%.
4. Главным источником обсеменения молока патогенными
стафилококками является вымя коров, больных стафилокок­
ковым маститом; при пиодермпях, дерматитах и др. повреж­
дениях кожных покровов вымени молоко может обсеменяться
патогенными стафилококками в большом количестве.
5. Доильные аппараты при недостаточной очистке и дезин­
фекции являются также источником обсеменения молока па­
тогенными стафилококками.
6. Руки операторов-доярок и салфетки, используемые для
обработки вымени, могут также быть источниками инфициро­
вания молока патогенными стафилококками.
П^ат^льчйя lla-r-WM !.;15лиотем'
17
7. Результаты исследований 12 партий бутылочного и 9 пар­
тий фляжного молока показали, что все пробы сырого мо­
лока по окончании дойки содержали патогенные стафилокок­
ки в среднем 62 тыс. клеток в 1 мл. Общее количество мик­
роорганизмов в 1 мл сырого молока колебалось в пределах
от 800 тыс. до 9 млн.; титр кишечной палочки был равен
0,0001 мл.
8. Применяемый режим пастеризации (87—90 Э С) полно­
стью обезвреживает молоко от патогенных стафилококков,
а также резко снижает общее количество микроорганизмов.
9. Патогенные стафилококки содержались в 66% исследуе­
мых партий фляжного молока, в среднем 14 560 клеток в 1 мл,
ь то время как бутылочное молоко было доброкачественным
м санитарном отношении.
10. Из 558 изученных штаммов стафилококков, выделен­
ных из молока коров, рук персонала и оборудования молоч­
ных ферм, а также из 295 штаммов, выделенных на молочном
заводе, 122 (21%) и 31 (10,5%) штаммов оказались патоген­
ными.
И . Сравнивая результаты типирования 153 штаммов пато­
генных стафилококков с помощью набора Международных
типовых фагов и набора Дэвидсона, необходимо подчеркнуть,
что в первом случае удалось установить фаготип для 107
(69,9%), а во втором—'Для 138 (82,5%) штаммов.
12. Отмечена высокая резистентность к стрептомицину
(69,3%) штаммов стафилококков, выделенных из молока ко­
ров, оборудования и предметов ухода на молочных фермах.
13. Применение метода «высокой гигиены» позволило сни­
зить количество коров, инфицированных патогенными стафи­
лококками и мастнтнымн стрептококками (с 66 до 19%).
14. Автоматическая циркуляционная мойка доильных ап­
паратов и молокопроводов растворами азотной и сульфамид­
ной кислот (температура 90° С) имеет значительные преиму­
щества перед щелочной, так как полностью убивает патоген­
ные стафилококки и сводит к минимуму количество бактерий
кишечной палочки.
15. Использование подофоров для мойки танков, изготов­
ленных из нержавеющей стали, имеет большие преимущества
перед другими методами мойки благодаря сильному стерили­
зующему действию.
18
РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Основными мероприятиями по предупреждению обсеме­
нения молока и молочных продуктов стафилококками явля­
ются:
а) выявление мастита в самой начальной стадии возник­
новения (т. е. в субклпнической форме) с помощью реактива
димастина;
б) пастеризация молока при переработке в молочные про­
дукты до температуры 85—90° С с последующим охлажде­
нием;
в) регулярный осмотр работников ферм и молочных пред­
приятий на наличие гнойничковых заболеваний;
г) соблюдение действующих санитарных правил и техно­
логии при выработке молочных продуктов, надлежащий уход
за оборудованием и инвентарем.
2. С целью снижения бактериального обсеменения молока,
в том числе патогенными стафилококками, необходимо:
а) применять дезинфицирующие растворы (0,01% раствор
гнпохлорита натрия) для обмывания вымени перед дойкой с
использованием бумажных салфеток и пластмассовых ведер;
б) погружение сосков вымени в более крепкий раствор дезннфектанта по окончании дойки — на 1—2 сек.;
в) осуществлять автоматическую мойку доильных устано­
вок кислотными растворами с температурой 90°С при усло­
вии использования оборудования из нержавеющей стали или
пластмасс;
г) немедленно охлаждать молоко в ваннах после дойки до
температуры 4° С.
3. Для обоснования допустимых норм содержания стафи­
лококков в молочных продуктах работу по выделению и изуче­
нию стафилококков из молочных продуктов целесообразно
продолжать.
4. Бактериологическое исследование рук работников пред­
приятий, оборудования и выпускаемой продукции на присут­
ствие стафилококков должно войти в практику систематиче­
ского санитарного обследования.
5. С целью изыскания эффективных моющих средств, сле­
дует продолжать исследования в направлении изучения без­
разборной мойки доильных установок, а также оборудования
и инвентаря молочных предприятий на базе выпускаемой ча­
шей промышленностью моющих средств «А», «Б», «В» и гипохлоритов кальция и натрия.
19
* *
*
Основное содержание диссертации изложено в статьях:
1. К вопросу об инфицировании молока патогенными ста­
филококками.
Доклады научной конференции по вопросам технологии и
микробиологии молока и молочных продуктов. Вологодский
молочный институт. 1964 год.
2. Inhibitory substances in dry secretions. University of Rea­
ding. National Institute for Research in Dairying. Report 1966.
3. Характеристика стафилококков, выделенных из различ­
ных источников (биохимические и биологические свойства).
Журнал «Ветеринария» № 3, 1967 г.
4. Санитарно-гигиенические условия производства пастери­
зованного молока.
Труды Вологодского молочного института. Выпуск 53.
1967 г. (в печати).
По материалам диссертации были сделаны доклады: на
научной конференции Вологодского молочного института и на
ученом Совете Вологодской Государственной сельскохозяйст­
венной опытной станции.
\
Ответственный за выпуск А. А. Кудряков
ГЕ00951. Подписано к печати 27.3.1967 г. Бумага 60x84 >/•
Бум. листов 0,625. Печ. листов 1,25. Тир. 200. Зак. 1535
Областная типография, г. Вологда, ул. Калинина, 3.