ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ НЕКОТОРЫХ

ÁÈÎÒÅÕÍÎËÎÃÈß
Summary
The article contain both characteruid nitrogen hybrid cell line pig x horse
istics before and after keeping in liq(A 4 ×L).
Литература
1. Л.П. Дьяконов, В.И. Ситьков. Животная
клетка в культуре. М., 2000.
2. Е.В. Майджи. Гибриды соматических клеток
сельскохозяйственных животных и их чувствительность к некоторым вирусам. М., 1987.
3. Ш.М. Тугизов. Структурно-функциональный анализ мембранных белков вирусов в
генетически трансформированных клетках.
Автореф. дисс. докт. биол. наук. М., 1996.
4. Ш.М. Тугизов. Мутантные и гибридные клетки К.Р.С. и свиньи для вирусологических исследований. Дисс. канд. биол. наук. М., 1985.
5. Л.П. Дьяконов, А.А Кущ., К.П. Юров и др.
Штамм гибридных культивируемых клеток
почки эмбриона Suis domestica и лимфоцитов Eguus caballus L. для культивирования
вирусов лошадей. Авторское свид. СССР
№ 1417475. 1988.
УДК 578.085.23.002
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ НЕКОТОРЫХ
ПРЕПАРАТОВ С АНТИАРИТМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ С
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ПОСТОЯННЫХ КУЛЬТУР КЛЕТОК
С.Г. Колесникова
Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева,
Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии
им. Я.Р. Коваленко
Современные подходы фармакотерапии при выборе лекарственных
средств в той или иной ситуации
ориентированы прежде всего на
безопасность препарата, поскольку
способные развиться негативные
побочные эффекты зачастую превалируют над терапевтическими и могут представлять серьезную угрозу для жизни больного. Особенно
остро данная проблема просматривается в фармакотерапии антиаритмических состояний. Этим диктуется необходимость постоянного расширения арсенала методов доклинических испытаний безопасности
препаратов.
В число рекомендуемых Всемирной организацией здравоохранения
методов испытаний токсичности веществ, включая лекарственные препараты, входят тест-системы in vitro с
привлечением культур клеток.
В данной работе приведен анализ
цитотоксичности на культурах клеток
МДБК (культура эмбриональной почки теленка) и КСТ (культура сосудов
70
сердца теленка) антиаритмических
препаратов с разными типами реализации данного эффекта: этацизина
– классического антиаритмика, влияющего на электрофизиологию кардиомиоцитов – и мексидола – препарата метаболического типа действия,
антиоксиданта.
Материалы и методы
Клетки выращивали в пенициллиновых флаконах на покровных стеклах.
Концентрация клеток в суспензии при
посеве составляла 100 тыс. кл/мл. Объем суспензии с ростовой средой — 1,5–
2,0 мл. Подсчет и морфологию клеток
в культурах контролировали при помощи светового микроскопа МБИ-15
(об. 8; 20, ок. 10). Индекс цитотоксичности вычисляли как отношение числа
изначально засеянных клеток к числу
живых, оставшихся после экспонирования с препаратами, клеток. Определяли степень цитотоксичности при однократном и длительном воздействии
этацизина, мексидола и их комбинированного применения на клеточные линии МДБК и КСТ.
Ветеринарная патология. № 1. 2003.
ÁÈÎÒÅÕÍÎËÎÃÈß
Результаты исследований.
Результаты определения степени
цитотоксичности препаратов при однократном воздействии на суточный
монослой культур МДБК и КСТ, представленые на рисунке 1, показали, что
наибольший цитотоксический эффект
в обеих культурах отмечался на фоне
Рис.1. Степень цитотоксичности этацизина, мексидола и их комбинации при разных
сроках воздействия в культурах клеток МДБК (вверху) и КСТ (внизу).
* — отличия от контроля достоверны при р<0,05.
Ветеринарная патология. № 1. 2003.
71
ÁÈÎÒÅÕÍÎËÎÃÈß
этацизина (20,0 мкг/мл): индекс цитотоксичности (ИЦ) был ниже контроля
для линии МДБК в 32 раза; для линии
КСТ — в 5 раз. ИЦ мексидола (100,0)
был меньше относительно контроля в
2,2 раза для МДБК и в 3,5 раза — для
КСТ (р<0,05). 20-кратные терапевтическим дозы обоих препаратов вызвали дегенеративные изменения и,
в конечном итоге, гибель культур.
Постоянная клеточная линия МДВК
проявила большую чувствительность
к воздействию высокой дозы этацизина (20,0 мкг/мл) в сравнении с мексидолом (100,0 мкг/мл).
Этацизин в эквитерапевтической
дозе 1,0 мкг/мл в 1,3 раза увеличивал цитотоксичность инкубационной
среды в обеих культурах (р<0,05). ИЦ
эквитерапевтических доз мексидола (5,0; 10,0 мкг/мл) для клеточных
культур КСТ и МДБК был сравним с
контрольными значениями (р>0,05).
Препарат обнаруживал цитотоксическое влияние на растущий клеточный
монослой в обеих культурах, снижая
некоторые культуральные показатели
линий, но при однократном воздействии все же не препятствовал дальнейшему развитию суточного монослоя до плотного клеточного пласта.
Мексидол при однократном воздействии на клеточные линии в дозах,
являющихся эквивалентами терапевтических, не оказывал отрицательного влияния на их развитие и тем
самым не проявил цитотоксических
эффектов.
Совместное применение препаратов (мексидол, 2,5 мкг/мл + этацизин,
1,0 мкг/мл) привело к менее выраженному цитотоксическому эффекту
по сравнению с влиянием этацизина
(1,0 мкг/мл). ИЦ инкубационной среды со смесью препаратов был статистически меньше контроля в 1,1 раза
в обеих клеточных культурах, но в 1,2
раза превосходил значения данного
показателя для этацизина (р<0,05),
что, по-видимому, может быть обусловлено протекторными эффектами
72
мексидола.
Длительное культивирование препаратов с культурами МДБК и КСТ
привело к иным результатам (рис.1).
Для мексидола (5,0 мкг/мл) при
длительном культивировании с линиями МДБК и КСТ цитотоксический
эффект не выявлен. Значения ИЦ на
фоне препарата были сравнимы с контрольными (р>0,05).
Для этацизина (1,0 мкг/мл) показана значительная степень цитотоксичности относительно контроля в
обеих клеточных линиях. Культура
МДБК проявила большую чувствительность к препарату в сравнении с
линией КСТ. ИЦ для культуры МДБК
был ниже нормы в 4,8 раза, для КСТ
— в 1,3 раза (р<0,05). Линия МДВК к
концу 4 пассажа вследствие негативных изменений утратила способность
формировать клеточный монослой и
подверглась активным дегенеративным процессам. Линия КСТ сохраняла способность к образованию клеточного пласта, но со значительным
отставанием от контроля и варианта
с мексидолом.
На фоне совместного применения
препаратов ИЦ также достоверно снижался относительно нормы в культуре
МДБК в 3,7 раза, в культуре КСТ в 1,3
раза, но следует отметить, что показатель на статистически значимую величину был меньше ИЦ на фоне этацизина (1,0 мкг/мл) в культуре МДБК в
1,29 раза; в КСТ — в 1,1 раза.
Полученные результаты исследования кратковременного и длительного культивирования клеточных линий
МДБК и КСТ с этацизином, мексидолом и их комбинацией показали достоверное отрицательное влияние этацизина на обе клеточные линии. Отмечен
выраженный цитотоксический эффект
препарата. Мексидол не проявил цитотоксических эффектов в обеих клеточных линиях, не изменял культуральноморфологические свойства культур
клеток при инкубации в течение одного пассажа и при длительном культиВетеринарная патология. № 1. 2003.
ÁÈÎÒÅÕÍÎËÎÃÈß
вировании с ним, а также в значительной степени ослаблял цитотоксиче-
ское влияние этацизина при совместном применении препаратов.
УДК 619:616.98.578/579.573.086.83
ЭМИЦИДИН —
АНТИОКСИДАНТНАЯ ЗАЩИТА МЕМБРАН КЛЕТОК
В.И. Мельниченко
(ТЕЗИСЫ)
Поиск лечебных средств, действие
которых направлено на устранение
базисных механизмов патогенеза различных групп заболеваний, является
актуальной задачей.
Последние годы ознаменовались
появлением новой области науки
— свободнорадикальной биологии
дающей ответ на многие вопросы в
механизме мембранноклеточной патологии.
Обладая высокой электрофильностью, свободные радикалы оказывают
повреждающее действие на белки и
липиды клетки и клеточных мембран,
могут вызывать модификацию нуклеиновых кислот и ферментов, изменять структуру и свойства гормонов
и их рецепторов.
Свободные радикалы инициируют перекисное окисления липидов в
мембранах (ПОЛ), что приводит к нарушению структурно-функционального состояния клеточной стенки.
Таким образом, свободнорадикальное
окисление является универсальным
неспецифическим молекулярным механизмом повреждения клеточных
мембран. Усиление свободнорадикального окисления наблюдается при
всех патологических состояниях, которые сопровождаются выраженной
стрессорной и воспалительной реакциями, гипоксическими или ишемическими состояниями. Активизация
ПОЛ отмечается также при старении
клеток и тканей.
Повреждающему действию свободных радикалов противостоит собственная, эндогенная антиоксидантная система организма. Однако при
Ветеринарная патология. № 1. 2003.
интенсивном образовании свободных
радикалов и развитии заболевания,
или при старении, резервы антиоксидантной защиты истощаются и поэтому требуется поступление антиоксидантов из внешней среды.
Восполнение природных антиоксидантов, прежде всего витаминов Е
и С, не может обеспечить лечебного
эффекта при заболеваниях и поэтому последние используются как профилактические или дополнительные
средства.
В противоположность им синтетические антиоксиданты обладают
более выраженным антиокислительным действием и используются для
лечения широкого круга заболеваний.
К числу таких препаратов относится
новый ветеринарный антиоксидант
— эмицидин (2-этил-6-метил-3-оксипиридина сукцинат), представляющий собой соединение из группы
3-оксипиридинов (3-ОП) регистрационный номер ПВР-2-1.1/00643. Эмицидин является структурным аналогом витамина В6, что определяет его
биогенный характер.
Изучая фармакологические свойства 3-ОП (Воронина Т.А. с соавт.,
1990, 1998, Смирнов Л.Д. с соавт.,
1992), установили, что это соединение обладает оригинальным механизмом действия, отличающимся от
механизма действия известных лечебных препаратов. Принципиальным отличием от большинства из них
является отсутствие специфического
связывания с рецепторами.
В свете современных представлений о веществах нового типа, не от73