ДНК-экспресс

Особенности наборов НПФ “Литех” для ПЦРдиагностики возбудителей инфекционных
заболеваний
Методы диагностики инфекционных заболеваний
• Прямые
- Микроскопия
- Бактериологический посев
- Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ)
-Амплификационные (ПЦР) и гибридизационные
методы
-MALDI-TOF-масс-спектрометрия
•Непрямые
-ИФА
Преимущества ПЦР-диагностики

Прямой метод– анализируется непосредственно ГЕНЕТИЧЕСКИЙ
МАТЕРИАЛ возбудителя

Возможность АНАЛИЗА НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫХ или трудно
культивируемых организмов

ВЫСОКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ– от единичных копий возбудителя в
пробе!

Возможность надежной ДИАГНОСТИКИ инфекций НА РАННИХ
СТАДИЯХ!

Препараты генетического материала не патогенны –
БЕЗОПАСНОСТЬ СОТРУДНИКОВ!
Наборы реагентов для ПЦР
1
1) Реагенты для выделения ДНК или
РНК из биологических проб –
ДНК-экспресс
ДНК-экспресс-кровь-вирус
РНК-экспресс
2
2) Наборы реагентов для проведения
амплификации (ПЦР)
Реагенты для выделения
ДНК/РНК
Что такое «ДНК-экспресс»?
2 в 1!
Расфасованный в пробирки
реактив для пробоподготовки
1. Транспортная среда
2. Реактив для выделения ДНК
Взятие образца
Транспортировка
Выделение ДНК
Биологический материал для выделения ДНК
реагентом “ДНК-экспресс”:
• Эпителиальные клетки (мазки, соскобы)
• Секрет простаты, сперма (20-30 мкл)
• Моча (промытый физ. раствором осадок)
• Слюна, ликвор, синовиальная жидкость(20-30 мкл осадка после
центрифугирования)
• Мокрота, плевральная жидкость
(с использованием реагента NALC для разжижения)
• Лейкоцитарная масса крови (отмытая буфером)
Универсален для разных биологических материалов !!!
Реагент для выделения ДНК « ДНК-ЭКСПРЕСС»
•
выделение ДНК в закрытой пробирке
•
всего 3 стадии
•
20 минут
•
экономия одноразового пластика
Преимущества ДНК-экспресс в сравнении
с другими наборами
+ Не требуется отдельной транспортной среды!
+ Отсутствие контакта персонала лаборатории с
инфекционными агентами
+ Низкий риск контаминации
+ Высокий и стабильный выход ДНК
+ Не требуется дополнительного расхода одноразового
пластика и реактивов
+ Быстрота и простота пробоподготовки
ДНК-экспресс-кровь-вирус
Реагент в пробирках для выделения ДНК из биопроб, содержащих ДНКвирусы, с целью последующего анализа методом ПЦР
Cостав комплекта:
100 пробирок вместимостью 1,5 мл с защелкивающейся крышкой, содержащие по 300 мкл реагента
для выделения ДНК
Биологический материал для выделения ДНК:
•сыворотка и плазма крови
Реагент позволяет с высокой эффективностью выделять ДНК ДНК-содержащих
вирусов, в том числе вируса гепатита В и герпесвирусов
Схема выделения ДНК из плазмы крови
РНК-экспресс
Реагент в пробирках для выделения РНК из биопроб с
целью последующего анализа методом обратной
транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР)
Состав комплекта:
110 пробирок вместимостью 1,5 мл
с защелкивающейся крышкой,
содержащие по 200 мкл реагента для выделения РНК
5 пробирок по 300 мкл – отрицательный контрольный
образец
Биологический материал для выделения РНК:
•Сыворотка или плазма крови
В состав реагента входит внутренний контрольный образец, позволяющий
выявлять ингибирование и контролировать процессы пробоподготовки и
амплификации
Схема выделения РНК
Наборы реагентов для проведения ПЦР
Что нужно для ПЦР?
Матрица ДНК
____________________________
Масло
Taq-полимераза
Реакционная смесь:
•
•
•
•
ПЦР-буфер
MgCl2
дНТФ
праймеры
Минеральное масло
ПЦР-смесь
В качестве ДНК-матрицы служит ДНК инфекционного агента, выделенная
реагентами «ДНК-Экспресс» или «ДНК-Экспресс-кровь-вирус» из
биологического образца
ФОРМАТЫ наборов для ПЦР
формат
кол-во
реакций
БАЗОВЫЙ
100
OneStep
60 (54)
Р05
60 (54)
Р02
состав
степень
готовности к
проведению реакции
1. Реакционная смесь
2. Разбавитель
3. Taq-полимераза
4. Минеральное масло
5. Положительный
контроль
Предварительное
смешивание
компонентов
1. Пробирки с готовой
смесью для ПЦР
под слоем масла
2. Пробирки с фоновой
смесью
3. Готовый
положительный
контрольный образец
4. Разбавитель (К-)
Полностью
готовые к
применению
смеси,
расфасованные в
пробирки для ПЦР
Формат OneStep
ПОЛНОСТЬЮ ГОТОВАЯ СМЕСЬ для амплификации для проведения анализа в пробирку ДОБАВЛЯЕТСЯ
ТОЛЬКО ПРОБА !!!
МИНИМУМ МАНИПУЛЯЦИЙ –
снижение влияния субъективного
фактора, экономия времени
просто
ДОБАВИТЬ…
ПРОБУ
Методы детекции продуктов амплификации
Электрофорез
Детекция по
конечной точке
Детекция в реальном
времени
Флуоресцентные методы детекции
Флуоресцентная детекция продуктов ПЦР
Флуорофор
Флуоресцентный зонд
Праймер
Амплифицируемый
фрагмент ДНК
Tag-полимераза
Гаситель
Методы детекции продуктов амплификации
Электрофорез
Детекция по
конечной точке
Детекция в реальном
времени
Флуоресцентные методы детекции
НПФ ’’Литех’’ разработаны ПЦР-наборы для различных методов детекции
продуктов амплификации!
Амплификаторы ПЦР-РВ
BioRad:
iQ5
MiniOpticon
CFX 96
iCycler
БиоМедСиб:
ПЦР БИОМС-01
ДНК-технология:
ДТ-96 и -322
Roche:
Corbett Research:
Cobas TaqMan 48 Rotor-Gene 3000
Rotor-Gene 6000
Наборы адаптированы для разных моделей приборов
различных производителей!
Система внутреннего контроля
в наборах НПФ «Литех»
Формат “Флуоропол”
• В качестве внутреннего контроля выступает геномная ДНК человека
• В реакционную смесь добавлены праймеры для амплификации
определенного участка геномной ДНК человека
• Детекция сигнала от внутреннего контроля происходит по каналу Hex (Yellow)
(специфический сигнал – каналы Fam, Rox)
• Наличие сигнала от внутреннего контроля подтверждает правильность забора
биопробы, выделения НК и отсутствие ингибирования ПЦР
• Сигнала от внутреннего контроля в отрицательных контрольных образцах
быть не должно
Наборы для проведения ПЦР-РВ
БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ
Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis, genitallium
Ureaplasma spp., urealyticum, parvum
Gardnerella vaginalis
Neisseria gonorrhoeae
Atopobium vaginae
New!
E.coli; Proteus spp.
Enterobacter spp.; Serratia spp.
Pseudomonas aeroginosa
Staphylococcus aureus
Enterococcus faecalis, faecium
Streptococcus spp.
Наборы для проведения ПЦР-РВ
ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ДРУГИЕ ИНФЕКЦИИ
Herpes simplex virus 1+2
Trichomonas vaginalis
Herpes simplex virus 1
Toxoplasma gondii
Herpes simplex virus 2
Human papilloma virus16/18
Human papilloma virus 16
Human papilloma virus 18
Candida albicans
Комплексный набор для диагностики
бактериального вагиноза:
Cytomegalovirus
Lactobacillus spp.;
Epstein-Barr virus
Gardnerella vag.,
Hepatitis B virus
Ureaplasma ur.,
Hepatitis C virus
Mycoplasma hom.,
Bacteroides spp.,
Mobiluncus cur.
Набор для ПЦР-диагностики бактериального вагиноза
• Детекция
- Lactobacillus spp.
106
- Mycoplasma hominis 104
- Ureaplasma spp.
104
- Gardnerella vaginalis 106
- Mobiluncus curtisii
104
- Bacteroides spp.
104
• Состав: 60 пробирок с готовой смесью
(6х10), т.е. на каждый вид бактерий по 10
пробирок
• Отдельно вложены положительные контроли
для каждого микроорганизма
• Отдельно вложен отрицательный контроль
Диагностика мочеполовых
инфекций у мужчин
Тест-системы для выявления основных
возбудителей бактериального простатита
! 35-50% мужчин трудоспособного и репродуктивного возраста болеют
простатитом. На долю хронического бактериального простатита приходится
5 -15% случаев.
65-80%
• Escherichia coli
• Enterobacter spp.
12%
• Proteus spp.
• Serratia spp.
6%
• Pseudomonas aeruginosa
7%
• Enterococcus faecalis/faecium
У некоторых
пациентов
• Staphylococcus aureus
•Streptococcus spp.
Комплексный набор “Мужское здоровье”
• Единая программа амплификации для всех возбудителей
• Чувствительность: >104 геном-экв/мл для каждого из 8 возбудителей
• Внутренний контроль – геномная ДНК человека
Резистентность микроорганизмов к антибиотикам
Набор реагентов
«ЭНТЕРОЦЕФ»
Определение резистентности семейства
Enterobacteriaceae (Escherichia, Enterobacter,
Klebsiella, Proteus, Serratia) к цефалоспоринам,
Набор реагентов
«СТАФИЛОЦЕФ»
Определение «метициллинрезистентности»
стафилококков (устойчивость к цефалоспоринам)
Исследуемый биоматериал с учетом
предполагаемого диагноза:
ОРХИТ, ЭПИДИДИМИТ - исследуется сперма
ПРОСТАТИТ - исследуется секрет простаты,
полученный по технологии 4х стаканной пробы по Meares и Stamey
ЦИСТИТ - исследуется осадок второй порции утренней мочи или
осадок мочи взятой катетером из мочевого пузыря
УРЕТРИТ - исследуется соскоб из уретры или осадок утренней первой
порции мочи
Комплект позволяет проводить дифференциальную диагностику
инфекций мочеполового тракта у мужчин путем исследования
различных биологических материалов !
Возможности ПЦР-диагностики
• Диагностика инфекционных заболеваний
• Вирусные инфекции
• Бактериальные инфекции
• Другие инфекционные агенты
• Диагностика наследственных заболеваний
• Выявление групп риска возникновения
наследственных и приобретенных заболеваний
Преимущества ПЦР-наборов
производства НПФ «Литех»
• Стоимость
ПЦР-наборов НПФ «Литех» значительно ниже,
чем у других производителей
• Цены на протяжении уже нескольких лет не повышаются!
• Ассортимент наборов постоянно увеличивается. Активно
ведется разработка и оптимизация новых наборов для
обнаружения
инфекционных
агентов,
устойчивости
микроорганизмов к антибиотикам, а также генетических мутаций
(SNP) человека
Будьте здоровы!