RIDASCREEN sIgA - R

RIDASCREEN® sIgA
Код: G09035
1. Предназначение набора
Для диагностики in vitro. Набор RIDASCREEN® sIgA это иммуноферментный тест
для количественного определения секреторных IgA (sIgA) в образцах стула
человека.
2. Общая информация и пояснения к тесту
IgA – это наиболее гетерогенные из иммуноглобулинов человека. Антитела IgA
присутствуют в наружных жидкостях организма и формируют основной защтиный
барьер против различных патогенов. Концентрация секреторных
(sIgA)
в
фекальных массах позволяет сделать вывод об аутоиммунном и
защитном
состоянии слизистых оболочек кишечника.
IgA бывают в форме мономеров (mIgA), полимеров (pIgA) и секреторных димеров
(sIgA). Секреторные IgA (sIgA) состоят из двух мономерных молекул IgA, J – цепи и
секреторного компонента (SC). Секреторный компонент представляет собой
полипептид с молекулярной массой около 70 kDa. Секреторный компонент
синтезируется эпителиальными клетками слизистых оболочек желудочно-кишечного,
респираторного и урогенитального тракта, а так же слюнными, слёзными и
молочными железами. Плазматические клетки субэндотелиального пространства
слизистых оболочек секретируют комплексы, состоящие из двух молекул IgA,
связанных друг с другом посредством белка J. Этот комплекс потом присоединяется
к секреторному компоненту, который расположен на поверхности эпителиальных
клеток. После связывания, sIgA выборочно переносятся через эпителиальные
клетки при помощи эпителиальных рецепторов и выделяются на поверхность
слизистых мембран посредством экзоцитоза. Таким образом, секреторные IgA (sIgA)
переносятся в большом количестве на поверхности слизистых оболочек кишечника.
Кроме того, секреторные IgA можно так же обнаружить и в других секреторных
жидкостях организма, например, в материнском молоке, слюне, слезах и назальной
и трахеобронхиальной слизи.
Определение концентраций sIgA в стуле может дать полезную информацию о
функциональном состоянии лимфоидной ткани в области кишечника (GALT), которая
представляет собой часть иммунной системы кишечника.
sIgA – это своего рода показатель секреторной активности и стимуляции уровня
плазматических клеток в подслизистой кишечника. Дефицит sIgA отражает снижение
иммунной защиты в слизистой оболочке кишечника, в то время, как повышение
уровня sIgA указывает на то, что активность иммунной системы кишечника возросла.
Учитывая ярко выраженные противовоспалительные свйства IgA, повышение
концентрации фекальных sIgA может свидетельствовать о появлении местного
воспалительного процесса в пределах слизистой оболочки кишечника.
RIDASCREEN® sIgA 2014-10-21
2
RIDASCREEN® sIgA это быстрая и достоверная оценка:
Функционального состояния лимфоидной ткани в области кишечника:
o пониженный уровень sIgA: сокращение активной иммунной защиты слизистой
оболочки
o повышенный уровень sIgA: нарастание активной иммунной защиты слизистой
оболочки
Подтверждение нарушения иммунологической барьерной функции слизистой
оболочки кишечника (повышенная восприимчивость к инфекционным и
аллергическим заболеваниям)
• Местные воспалительные процессы в слизистой оболочке кишечника
• Аутоиммунные заболевания
3. Принцип теста
В наборе RIDASCREEN® sIgA специфические антитела задействованы по принципу
сэндвич-метода. Поликлональными антитела к sIgA человека наносятся на
поверхность микролунок в плашках. Суспензию образца стула, предназначенную
для тестирования, вносят в микролунки и инкубируют. За этапом промывки следует
этап второй инкубации с моноклональными антителами, которые коньюгированы с
пероксидазой хрена. В присутствие sIgA формируется сэндвич комплекс, собраный
из иммобилизованных антител, sIgA антигена и коньюгированных антител.
Неприсоединившиеся, меченые ферментом антитела, удаляются во время
следующего этапа промывки. После добавления субстрата, присоединённый
фермент изменяет цвет раствора, находящегося в лунках микротитровальной
плашки, из прежде прозрачного в голубой, в том случае, если тест положительный.
При внесении стоп реагента, цвет раствора переходит из голубого в жёлтый.
Величина абсорбции пропорциональна концентрации sIgA, присутствующих в
образце.
®
3 RIDASCREEN sIgA 2014-10-21
4. Поставляемые реагенты
Состав набора реагентов, рассчитанный на 96 определений
Plate
Плашка
96
определений
Ехtract 10x
Экстракт
100 мл
Diluent |3
Дилюент 3
100 мл
Wash 10x
Промывочный
буфер
Calibrator
Калибратор
100 мл
1 мл
Калибратор (для стандартной калибровки); содержит
0,1% NaN3, готов к работе.
1 мл
Высоко положительный контроль; содержит 0,1%
NaN3, готов к работе
1 мл
Слабо положительный контроль; содержит 0,1% NaN3,
готов к работе
Прозрачная
крышка
High control +
Высоко
положительный
контроль
Микротитровальная плашка из 12 микролуночных
стрипов (разборная) в стрип холдере; сорбированная
поликлональными (кроличьими) анителами против
sIgA человека
Буфер для экстракции и разведения (10х концентрат);
для экстракции и первичного разведения образцов
стула; фосфатно-буферный раствор NaCl; содержит
0.1 % Tween и 0,1% NaN3
Буфер для разведения образцов; белково-буферный
раствор NaCl; содержит 0.1% NaN3; готов к работе;
окрашен в красный цвет
Буфер для промывки, (10х концентрат), фосфатнобуферный раствор NaCl; содержит 0.1 % мертиолят и
0,1% детергент
Красная крышка
Low control +
Слабо
положительный
контроль
Зелёная крышка
Conjugate
Коньюгат
12 мл
SeroSC
Субстрат
12 мл
Stop
Стоп реагент
12 мл
Коньюгированные пероксидазой моноклональные
антитела (мышиные) против sIgA человека в
стабилизированном белковом растворе; готовы к
работе
Субстратный раствор, Перекись
водорода/тетраметилбензидин (ТМБ); готов к
использованию
Стоп раствор, 1 N серная кислота, готова к
использованию
Сведения об опасных веществах в соответствии с требованиями к маркировке. Для
получения дополнительной информации см. сведения о безопасности материалов
(MSDS) на веб-сайте www.r-biopharm.com.
RIDASCREEN® sIgA 2014-10-21
4
5. Инструкции по хранению
Набор должен храниться при 2 – 8 °C и может быть использован после открывания
до истечения срока годности, указанного на этикетке. Растворённый промывочный
буфер должен быть использован в течение 4 недель, при условии, что хранится при
2 - 8°C. Не допускается микробная контаминация. Гарантия качества не сохраняется
после окончания срока годности. Упаковку из фольги для микролуночных стрипов
следует открывать таким образом, чтобы не повредить зажим, обеспечивающий
герметичность. Невостребованные микролунки нужно немедленно вернуть назад в
упаковку и хранить при 2 - 8 °C. Бесцветный раствор субстрата следует защищать от
попадания прямого солнечного света чтобы предотвратить его разложение, а так же
нельзя допускать самоокисления с последующим развитием голубой окраски. Если
субстрат стал голубым, его нельзя использовать.
6. Материалы необходимые, но не поставляемые
6.1. Реагенты
дистиллированная или деионизованная вода
6.2. Дополнительные материалы
- Микровесы
- Вортекс-миксер
(по усмотрению, см. Пункт 9.4.)
- Микропипетки с объёмами 50 - 100 л и 1 мл
- Мерный цилиндр (1000 мл)
- Лабораторный таймер
- Промыватель плашек или восьмиканальная пипетка (300 µ)
- Mикроплашечный фотометр (450 нм; референсная длина волны ≥ 620 нм)
- Фильтровальная бумага (лабораторные бумажные полотенца)
- Ёмкость для отходов с 0,5% раствором гипохлорита
7. Предупреждения для пользователей
Только для диагностики in vitro.
Данный тест должен выполняться только обученным лабораторным персоналом.
Необходимо соблюдать рекомендации по методам работы в медицинских
лабораториях. Необходимо соблюдать руководство с инструкциями по процедуре
теста. Не допускайте попадания проб или реагентов в рот. Избегайте контакта с
поврежденной кожей или слизистыми оболочками. Во время работы с реагентами
либо пробами надевайте соответствующие средства защиты (перчатки,
лабораторный халат, защитные очки) и мойте руки после завершения процедуры
®
5 RIDASCREEN sIgA 2014-10-21
теста. Не курите, не ешьте и не пейте в зонах, где ведется работа с пробами или
реагентами.
Для получения дополнительной
информации
см.
сведения о
безопасности
материалов (MSDS) на веб-сайте www.r-biopharm.com
Образцы стула надо рассматривать, как потенциально инфекционный материал, и
обращаться с ним в соответствии с национальными правилами безопасности.
В концентрате промывочного буфера в качестве консерванта содержится 0,1%
мертиолят. Нельзя допускать, чтобы это вещество попадало на кожу или слизистые
мембраны.
Калибратор, контрольные сыворотки (высоко- и слабо- положительные контроли),
буфер для экстракции и разведения образцов содержат в качестве консерванта
0,1% NaN3. Не допускайте попадания этих веществ на кожу и слизистые мембраны.
Перекись водорода (субстрат) может вызвать ожоги. Обращаться с особой
осторожнотью.
Стоп-реагент содержит 1N серную кислоту. Не допускайте контакта с кожей и
одеждой. Если кислота попала на кожные покровы, смойте её избыточным
количеством воды.
Все реагенты и материалы, находившиеся в контакте с потенциально
инфекционными
образцами,
должны
быть
обработаны
доступными
дезинфектантами или автоклавированы при 121 °C в течение 1 часа. ВНИМАНИЕ:
чтобы предотвратить образование ядовитых газов, любые остатки жидкостей,
содержащих стоп-реагнет, необходимо сначала нейтрализовать, и только потом
сливать в раствор гипохлорита.
Все использованные реагенты и материалы должны утилизироваться надлежащим
образом. Для получения дополнительной информации об утилизации см.
соответствующие национальные требования
8. Сбор и хранение образцов
Образцы стула должны быть доставлены в лабораторию как можно скорее, и до
тестирования храниться при 2 - 8 °C . Рекомендуется сразу же обработать пробу
или поместить ее на хранение при температуре –20 °С или ниже.
Не допускается повторное замораживание и оттаивание. Не следует собирать
образцы стула в контейнеры, содержащие транспортные среды с консервантами,
сыворотку животных, ионы металлов, окисляющие агенты или детергенты, поскольку
эти вещества могут вызвать интерференцию при тестировании на наборе
RIDASCREEN® sIgA .
RIDASCREEN® sIgA 2014-10-21
6
9. Ход работы
9.1. Общая информация
Все реагенты и микролунки перед работой следует довести до комнатной
температуры (20 – 25 °C). Микролуночные стрипы нельзя извлекать из упаковки до
тех пор, пока они не достигнут комнатной температуры. Перед самым
использованием, тщательно перемешайте реагенты. По окончании работы
микролуночные стрипы в упаковке из фольги с герметичным зажимом и все реагенты
необходимо немедленно поместить в холодильник и хранить при 2 - 8 °C.
Микролуночные стрипы могут быть использованы только один раз. Нельзя
использовать реагенты и стрипы, если упаковка повреждена или произошла утечка
реагентов из флаконов. Чтобы не допустить перекрёстной контаминации, образцы
не должны соприкасаться с компонентами набора. Тестирование может не пройти
при попадании прямого солнечного света. Рекомендуется накрывать плашки во
время инкубации или запечатывать клейкой плёнкой, во избежание испарения и
потерь.
9.2. Подготовка промывочного буфера
Смешайте 1 часть концентрированного промывочного буфера Wash 10x с 9 частями
дистиллированной воды (в соотношении 1:10).
Для этого внесите 100 мл
концентрата в мерный цилиндр на 1000 мл и доведите дистиллированной водой
объём до метки 1000 мл. Если в концентрате присутствуют кристаллы соли, их надо
растворить заранее, нагревая раствор на водяной бане при 37 °C.
9.3. Подготовка буфера для экстракции
Смешайте 1 часть концентрированного буфера для экстракции Extract 10x с 9
частями дистиллированной воды (в соотношении 1:10). Для этого внесите 100 мл
концентрата в мерный цилиндр на 1000 мл и доведите дистиллированной водой
объём до метки 1000 мл. Если в концентрате присутствуют кристаллы соли, их надо
растворть заранее, нагревая раствор на водяной бане при
37 °C.
9.4. Подготовка образцов
9.4.1. Навеска и суспензия образца
Рекомендуется хранить пробы кала до обработки при температуре –20 °С.
Отвесьте ровно 100 мг образца стула в маркированную тестовую пробирку , после
чего, используя пипетку, добавьте ровно 5 мл разбавленного буфера для экстракции
(т.о. конечное соотношение будет 1:50).
Как альтернатива, можно отвесить от 80 до 130 мг образца стула и
ресуспендировать в соответственно увеличенном или уменьшенном объёме (см.
Таблицу 1) разбавленного буфера для экстракции (убедитесь, что соотношение
объёмов для разведения сохраняется строго 1:50).
®
7 RIDASCREEN sIgA 2014-10-21
Таблица 1. Данные по требуемым количествам разбавленного буфера для
экстракции, в зависимости от навески стула (для сохранения коэффициента
разведения 1:50)
Навеска [ мг ]
80
85
90
95
100
105
110
115
120
125
130
Объём [ мл ]
4.00
4.25
4.50
4.75
5.00
5.25
5.50
5.75
6.00
6.25
6.50
Если образец стула ресуспендируется в неизменном объёме - 5 мл буфера для
экстракции, при
оценке следует принимать в расчёт изменяемый коэффициент
разведения (см. Таблицу 2).
Таблица 2. Спецификации коэффициента разведения при добавлении неизменного
объёма буфера для экстракции (5 мл) в зависимости от навески образца стула
Навеска [ мг ]
80
85
90
95
100
105
110
115
120
125
130
Фактор разведения
62.50
58.82
55.55
52.63
50.00
47.62
45.45
43.45
41.66
40.05
38.46
Суспензию стула тщательно гомогенизируют на вихревом вортексе-миксере,
независимо от того, какая была взята навеска образца стула. Если стул – жидкой
консистенции, мы рекомендуем воспользоваться пипеткой, для того чтобы отмерить
точно 100 мкл и ресуспендировать их в точном объёме 5 мл разбавленного буфера
для экстракции.
RIDASCREEN® sIgA 2014-10-21
8
Отцентрифугируйте гомогенизированную суспензию при 3000 g в течение 10 минут,
для того чтобы осадить крупные частички стула. После чего, полученный
супернатант экстракта надо разбавить и немедленно использовть для тестирования.
Рекомендуется хранить аликвотные жидкие пробы при температуре –20 °С или
ниже.
9.4.2. Мануальное разведение образцов
Разбавьте 50 µл прозрачного супернатанта (см. Пункт 9.4.1) в 950 µл разбавленного
буфера для экстракции (1:20) и взболтайте образец на вортексе. После чего,
следует дальнейшее разведение образца, для этого 100 µл первого разведения
смешивают с 900 µл RIDASCREEN® sample dilution buffer Diluent | 3 в соотношении
(1:10) с последующим вортексированием образца. Это конечное разведение образца
стула (1:10000) и именно оно берётся в работу.
Допускается альтернативный описанному выше, способ подготовки материала из
образцов. Это система для пробоподготовки, поствляемая компанией Roche
Diagnostics, Mannheim (Кат. No.: 745804). По вашему запросу, R-Biopharm AG может
любезно предоставить подробную инструкцию по использованию этого метода.
9.4.3. Автоматическое разведение образцов
Если тестирование выполняется на полностью автоматизированной системе DSXELISA system, поставляемой Dynex, R-Biopharm AG предоставит необходимый
алгоритм исследования и инсталлирует его в систему. По этому алгоритму образец
разбавляется автоматически, протокол разбавления приведён ниже:
Прозрачный супернатант в объёме 25 µл пипетируют в лунки глубоких микроплашек
(deep-well plate) на автоматизированной системе ELISA и разводят в 975 µл
разбавленного буфера для экстракции (1:40). Далее следуют два цикла
перемешивания.
Микролуночные стрипы в необходимом количестве вставляют в специальную рамку
микротитровальной плашки Plate из набора RIDASCREEN® sIgA.
Индивидуальные разведения образцов в объёме 20 µл переносят из глубоких лунок
(deep-well plate) в микротитровальную плашку Plate набора RIDASCREEN® sIgA и
разбавляют ещё раз в 80 µл буфера для разведения образцов из набора
(RIDASCREEN® Diluent | 3 ) (1:5; конечное разведение 1:10,000).
Пожалуйста, обратитесь в R-Biopharm AG, чтобы получить инструкцию о том, как
проводить тестирование на других иммуноферментных (ELISA) системах с
автоматическим пипетированием.
9.5. Первая инкубация
Отберите необходимое для анализа количество микролунок и закрепите их в
холдере, добавьте согласно схеме, в соответственные лунки по 100 мкл калибратора
®
9 RIDASCREEN sIgA 2014-10-21
Calibrator (в дублях), буфера для разведения образцов Diluent | 3 (= вместо
отрицательного контроля), высоко положительного контроля Control | + и суспензии
стула. При необходимости, в соответственные лунки можно так же внести по 100 мкл
слабо положительного контроля Low control | + После чего, инкубируйте плашку при
комнатной темепратуре (20 - 25 °C)
в течение 1 часа.
9.6. Первая промывка
Тщательная промывка очень важна для получения правильных результатов,
поэтому необходимо строго соблюдать все рекомендации инструкции. Содержимое
лунок следует слить в контейнер для отходов, содержащий раствор гипохлорита
натрия,
для обеззараживания.
После чего, следует промакнуть плашку на
фильтровальной бумаге для полного удаления жидкости. Затем плашку отмывают 5
раза, каждый раз заполняя лунки 300 µл разбавленного промывочного буфера (см.
Пункт 9.2). Убедитесь, что лунки не содержат остатков жидкости, для этого после
каждой промывки просушите их на чистой фильтровальной бумаге или
лабораторном полотенце.
Если используется плашечный промыватель, подберите правильный
протокол промывки для типа используемой плашки. Кроме того, перед первой
промывкой следует вручную отобрать образцы стула, содержащие плотные
частицы, чтобы не допустить засорения иголок промывателя. Так же
убедитесь, что вся жидкость полностью удалена во время аспирации. После
финального этапа промывки, промакните плашку на фильтровальной бумаге,
чтобы полностью удалить остатки влаги.
9.7. Вторая инкубация
Внесите по 100 µл коньюгата Conjugate в каждую лунку. После чего инкубируйте
при комнатной температуре (20-25 °C) в течение 1 часа.
9.8.Вторая промывка
Содержимое лунок надо слить в контейнер для отходов, содержащий раствор
гипохлорита натрия, для обеззараживания. После чего, следует промакнуть плашку
на фильтровальной бумаге для полного удаления жидкости. Затем
плашку
отмывают 5 раз, каждый раз заполняя лунки 300 µл разбавленного промывочного
буфера. Убедитесь, что лунки не содержат остатков жидкости, для этого после
каждой промывки просушите их на чистой фильтровальной бумаге или
лабораторном полотенце.
9.9. Третья инкубация
Внесите в каждую лунку по 100 µл субстрата SeroSC. Оставьте на инкубацию при
комнатной температуре (20 - 25 °C) в темноте, в течение 15 минут. После чего,
остановите реакцию, добавляя в каждую лунку по 50 µл стоп реагента Stop .
RIDASCREEN® sIgA 2014-10-21
10
Аккуратно перемешайте (легко потряхивая плашку на ровной поверхности) и на
плашечном фотометре измерьте абсорбцию при 450 нм (с референсной длиной
волны ≥ 620 нм).
Внимание: В высоко положительных образцах пациентов может выпадать чёрный
перципитат субстрата. Такие образцы следует опять развести 1:10, (конечное
разведение образца стула при этом будет 1:100000) и выполнить повторное
тестирование. (см. Пункт 9.5).
10. Контроль качества – признаки нестабильности или порчи реагентов
Для контроля качества, каждый раз при выполнении тестирования надо
использовать калибратор Calibrator (в дублях), буфер для разведения образцов
Diluent | 3 в качестве отрицательного контроля и высоко положительный контроль
Control | + . Использование слабо положительного контроля Low control | + не
является обязательным.
Тестирование считается выполненным корректно, если экстинкция (ОП)
отрицательного контроля 450 нм/620 нм меньше 0.05 и, если определённые
экстинкции (ОП) калибратора вписывается в лот-специфичные пределы, указанные
в прилагаемом листке данных. Высоко положительный контроль должен
вписываться в лот-специфичные пределы концентрации, которые тоже указаны в
листке данных.
Если тестирование RIDASCREEN® sIgA выполняется на иммуноферментных линиях
(ЕLISA processors), измеренное значение ОП калибратора Calibrator может
отличаться от значения, приведённого в лот-специфичном листке данных. Это
зависит от используемого аппарата. Поэтому для валидации результатов,
решающим оказывается высоко положительный контроль. Он всегда должен
использоваться при выполнении тестирования на иммуноферментных линиях (ELISA
processors). Использование слабо положительного контроля Low control | + не
является обязательным.
Если значения отличаются от рекомендуемых, если субстрат стал мутным, или
приобрёл голубой цвет до внесения в лунки, это может означать, что реагенты стали
непригодными. Если полученные значения не соответствуют предусмотренным
выше величинам, то перед повторным тестированием необходимо проверить
следующие моменты:
Срок годности используемых реагентов
Работоспособность используемого оборудования (например, калибровка)
Правильность хода работы
Визуальная проверка компонентов набора на отсутствие контаминации или
протекания реагентов – раствор субстрата, который стал голубым, нельзя
использовать для тестирования.
Если и после повторного тестирования с соблюдением всех, выше перечисленных
условий, результаты не удовлетворяют требованиям, пожалуйста, свяжитесь с
Вашим местным представителем R-Biopharm.
11. Оценка и интерпретация результатов
11.1. Количественный учёт результатов в одной точке по 4 параметровой
логистической логарифмической модели
®
11 RIDASCREEN sIgA 2014-10-21
Концентрация sIgA в µг / г стула, определяемая на наборах RIDASCREEN® sIgA,
рассчитывaется по 4 параметровой логистической логарифмической модели (4PL).
Для того, чтобы правильно рассчитать результаты, необходима их оценка при
помощи специализированного программного обеспечения RIDA®SOFT Win.net
Программу RIDA®SOFT Win.net или её адаптации можно получить от R-Biopharm AG
или в местном представительстве R-Biopharm.
(A - D) параметры стандартного графика, необходимые для 4PL рассчётов и для
того, чтобы установить значения калибратора, высоко положительного контроля и
слабо положительного контроля, приведены в лот-специфичном листке данных,
который поставляется в каждом наборе. Эти данные должны сравниваться со
значениями в оценке программного обеспечения и
каждого измерения с
использованием соответственной информации этого листка данных.
В компании R-Biopharm AG при проведении финального контроля качества, уже
определили стандартный график, (включая параметры A - D), а так же установочное
значение и допустимые пределы калибратора, высоко положительного контроля и
слабо положительного контроля при оптимальных для каждого набора данной серии
условиях.
Калибратор проверяют в рутинных условиях, для того чтобы компенсировать
отклонения в тесте и для того, чтобы проверить качество каждого тестирования.
Высоко положительный контроль является решающим параметром для валидации
результатов тестирования.
Поправочный коэффициент F рассчитывается внутри программы RIDA®SOFT Win.net
по среднему значению определённых в дублях калибратора, контроля и их
установочного значения, согласующегося с абсорбцией образцов стула. Безопасная
и достоверная оценка результатов может быть гарантирована только в пределах
стандартного графика.
Как альтернатива RIDA®SOFT Win.net, может использоваться любая другая
программа оценки результатов, которая позволяет проводить вычисления по 4
параметровой логистической логарифмической модели.
11.2. Результаты тестирования
Пределы нормы sIgA составляют 100 – 1200 µг sIgA/г стула. Если результаты ниже
100 µг sIgA / г стула, это значит, что у пациента наблюдается понижение уровня sIgA.
Результаты, превышающие 1200 µг sIgA / г стула, свидетельствуют о повышении
уровня sIgA.
Мы рекомендуем каждой лаборатории установить свои стандартные пределы.
12. Ограничения метода
Набор RIDASCREEN® sIgA улавливает эпитопы sIgA человека в образцах стула. Для
установления диагноза нельзя основываться только на определении концентрации
sIgA, необходимо так же принимать во внимание историю болезни, симптомы и
клиническую картину.
RIDASCREEN® sIgA 2014-10-21
12
13. Технические характеристики
13.1. Предел детекции
Предел детекции набора RIDASCREEN® sIgA был рассчитан при сложении значения
B0
и его двойного стандартного отклонения. Значение B0
это среднее
арифметическое,
полученное
при
множественных
определениях
(n=84)
отрицательного контроля (=Diluent | 3 ).
В результате, предел детекции sIgA человека составил 171 µг/г (17.1 нг/мл) стула.
13.2. Точность
Внутри-лабораторная воспроизводимость набора RIDASCREEN® sIgA была
выявлена при многочисленных определениях в разные дни. По значениям ОП, были
рассчитаны концентрации sIgA. Каждый раз были рассчитаны среднее значение
(MV), стандартное отклонение (SD) и коэффициент вариации (CV) для каждого
образца. Результаты приведены в таблице 3 и 4.
Таблица 3: Внутри-лабораторная воспроизводимость (n=16)
RIDASCREEN® sIgA
Intra-Assay
1. Концентрация[660 µг/г]
MV (ОП)
SD
CV %
2. Концентрация [1500 µг/г]
674
45,6
6,8
1380
55,80
4,0
Таблица 4: Меж-лабораторная воспроизводимость (n=8)
RIDASCREEN® sIgA
Intеr-Assay
1. Концентрация[660 µг/г]
MV (ОП)
SD
CV %
677
79,7
11,8
3. Концентрация [1500 µг/г]
1461
85,5
5,9
13.3 Линиейность
Чтобы проверить линейность набора RIDASCREEN® sIgA были подготовлены
серийные разведения нескольких образцов стула, в которых содержались sIgA.
Навески образцов и суспензии, а так же первичные разведения стула были
протестированы, как указано в инструкции (см. Пункт 9.4.). Серийные разведения
были подготовлены на основе RIDASCREEN® sample dilution buffer Diluent | 3 .
Концентрации были определены при тестировании и их сравнили с ожидаемыми
расчётными концентрациями. Результаты приведены в таблице 5.
®
13 RIDASCREEN sIgA 2014-10-21
Таблица 5: Линейность
Образец
Разведение
Определённая
концентрация (мкг/г)
Ожидаемая
концентрация (мкг/г)
Соотношение
14. Список литературы
1. Brand S, Gerritzen A. Evaluation eines neuen Enzym-Immuno-Assays zum Nachweis
von sekretorischem IgA im Stuhl. Poster DGKL 2010.
2. Brandtzaeg P. Update on mucosal immunoglobulin A in gastrointestinal disease. Curr
Opinion Gastroent 2010; 26: 554–563.
3. Goldblum RM. The role of IgA in local immune protection. J Clin Immun 1990; 10(6):
64S- 71S.
4. Mestecky Y et al. Intestinal IgA: novel views on its function in the defence of the largest
mucosal surface. Gut 1999; 44: 2-5.
5. Motegi Y et al. Role of secretory component, and eosinophils in mucosal inflammation.
Int Arch Allergy Immunol 2000;122(suppl 1): 25–27.
6. Rüssmann H et al. IgA/IgM and secretory immunity. Sepsis 1999; 3: 219-234.
7. Russel MW et al. Molecular heterogeneity of human IgA antibodies during an immune
response. Clin Exp Immunol 1992; 87: 1-6.
RIDASCREEN® sIgA 2014-10-21
14