Вирус Эпштейна-Барр (IgM) EUROLINE Anti-EBV

Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgМ), EUROIMMUN AG
1
_____________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2005/1125 от 18.08.2005 г.
Вирус Эпштейна-Барр (IgM) EUROLINE
Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgM)
Набор для определения IgM-антител человека к антигенам VCA gp 125, VCA p19, EBNA-1, p22, EA-D вируса
Эпштейна-Барра (EBV) в сыворотке или плазме крови методом иммуноблотинга.
Номер по каталогу: DN 2790-1601-2 M
Набор рассчитан на 16 определений
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgM) обеспечивает качественное определение in vitro антител
человека к пяти антигенам EBV: VCA gp 125, VCA p19, EBNA-1, p22, EA-D в сыворотке и плазме крови.
ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
Заболевания, связанные с инфекцией, вызванной вирусом Эпштейна-Барр (инфекционный мононуклеоз,
лимфома Беркитта, назофарингеальная карцинома)
ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgM) основан на методе иммуноблотинга. Набор содержит тестовые
стрипы, на которые параллельно нанесены пять различных антигенов EBV: VCA gp 125, VCA p19, EBNA-1,
p22, EA-D. На первой стадии реакции блотовые стрипы инкубируют с образцом разведенной сыворотки или
плазмы пациента. В случае, если образец положительный, специфические антитела класса IgM (а также
классов IgA и IgG) будут связываться с соответствующими антигенами. Для обнаружения связанных
антител проводится вторая инкубация с использованием ферментного конъюгата (антитела к IgM человека,
меченные щелочной фосфатазой), который способен вызывать развитие цветной реакции.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Состав набора
Компонент
Количество
Обозначение
1.
Тестовые стрипы, покрытые антигенами:
VCA gp 125, VCA p19, EBNA-1, p22, EA-D
2.
Положительный контроль
(IgM, человека), 100 Х концентрат
3.
Ферментный конъюгат
Антитела козы к IgM человека, конъюгированные с
щелочной фосфатазой; 10×концентрат
1 × 3 мл
4.
Универсальный буфер
10×концентрат
1 × 50 мл
BUFFER 10×
5.
Блокирующий реагент, готов к использованию
1 х 30 мл
BLOCK BUFFER
6.
1 × 30 мл
SUBSTRATE
7.
Раствор субстрата
Нитроголубой тетразолий хлорид/5-бром-4-хлор-3индолил-фосфат (NBT/BCIP), готов к использованию
Оценочный протокол
8.
Лоток для инкубации
2 × 8 каналов
9.
Пластиковая пленка
1 шт.
10.
Инструкция по применению набора
STRIPS
16 × 1
1 х 0,02 мл
POS CONTROL 100×
CONJUGATE 10×
1 лист
1 буклет
Серия
Температура хранения
Для in vitro диагностики
Невскрытый набор использовать до
Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не
замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока
годности набора.
Утилизация отходов: Неразведенную сыворотку пациентов и блотовые стрипы после инкубации следует
рассматривать как инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Все реагенты
следует утилизировать в соответствии с действующими официальными инструкциями.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgМ), EUROIMMUN AG
2
_____________________________________________________________________________________________________
Если в индивидуальном случае необходима визуальная оценка результатов, соответствующий оценочный
протокол можно заказать под кат. номером DL 2790-2GM.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание: Перед использованием все реагенты необходимо прогреть до комнатной температуры (от
+18 °С до +25 °С) в течение 30 минут. После первого использования реагенты сохраняют стабильность в
течение указанного срока годности, если они хранятся при температуре от +2 °С до +8 °С и защищены от
микробной контаминации. Прочие сведения о стабильности отдельных реагентов указаны ниже.
Стрипы, покрытые антигенами: Готовы к использованию. Во избежание конденсации влаги на стрипах, не
вскрывайте пакет до тех пор, пока он не нагреется до комнатной температуры. Вынув необходимое
количество стрипов, остальные неиспользованные стрипы немедленно плотно закройте в той же защитной
упаковке и храните при температуре от +2 °С до +8 °С.
Положительный контроль: Контроль поставляется в виде 100-кратного концентрата. Разбавляется 1:101
готовым к использованию разведенным универсальным буфером (15 мкл контрольной сыворотки следует
добавить к 1,5 мл готового к использованию разведенного универсального буфера и как следует
перемешать). Готовый положительный контроль следует использовать до конца рабочего дня.
Ферментный конъюгат: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Для приготовления готового к
использованию разведенного раствора ферментного конъюгата отберите необходимое количество
жидкости из флакона с концентратом с помощью чистой пипетки и разведите 1:10 готовым к использованию
разведенным универсальным буфером. Например, для проведения анализа на 1 тестовом стрипе
разведите 0,15 мл концентрата ферментного конъюгата в 1,35 мл готового к использованию
универсального буфера. Разведенный раствор ферментного конъюгата следует использовать до конца
рабочего дня.
Блокирующий реагент: Готов к использованию.
Универсальный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Для приготовления готового к
использованию универсального буфера взболтайте содержимое флакона (50 мл). Отберите необходимое
количество жидкости из флакона с концентратом с помощью чистой пипетки и разведите 1:10
деионизированной или дистиллированной водой. Например, для проведения анализа на 1 тестовом стрипе
разведите 2,0 мл концентрата универсального буфера в 18,0 мл деионизированной или дистиллированной
воды. Разведенный универсальный буфер следует использовать до конца рабочего дня.
Раствор субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента из флакона
немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету.
Предостережение: Некоторые реагенты набора содержат ядовитые вещества (буфер, раствор субстрата).
Избегайте контакта с кожей.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ
Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека.
Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования этим методом, можно хранить до
14 дней при температуре от +2 оС до +8 оС. Разведенные образцы необходимо использовать в течение
одного рабочего дня.
Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:101 разведенным универсальным буфером.
Например: разведите 15 мкл образца в 1,5 мл разведенного универсального буфера и тщательно
перемешайте на вортексе (пипетки для этого не подходят).
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
Предварительная обработка
Выньте из упаковки требуемое количество блотовых стрипов и поместите каждый стрип в отдельную лунку.
При этом должен быть виден номер каждого стрипа. Заполните лунки пластикового лотка для инкубации в
соответствии с количеством исследуемых образцов пациентов блокирующим реагентом (по 1,5 мл на одну
лунку). Инкубируйте 15 минут при комнатной температуре на шейкере рокерного типа. Затем аспирируйте
всю жидкость из каждой лунки.
Инкубация с образцом (1 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл разведенного образца сыворотки или плазмы и инкубируйте при
комнатной температуре (от +18 °С до +25 °С) в течение 60 минут на шейкере рокерного типа.
Промывка
Аспирируйте жидкость из каждой лунки и затем промойте 3 раза по 5 минут, добавляя по 1,5 мл
разведенного универсального буфера на лунку.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgМ), EUROIMMUN AG
3
_____________________________________________________________________________________________________
Инкубация с конъюгатом (2 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл разведенного ферментного конъюгата (меченные щелочной фосфатазой
антитела к IgM человека). Инкубируйте в течение 60 минут при комнатной температуре (от +18 °С до +25
°С) на шейкере рокерного типа.
Промывка
Аспирируйте жидкость из каждой лунки и затем промойте 3 раза по 5 минут, добавляя по 1,5 мл
разведенного универсального буфера на лунку.
Инкубация с субстратом (3 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл раствора субстрата. Инкубируйте в течение 20 минут при комнатной
температуре на шейкере рокерного типа.
Остановка реакции
Аспирируйте жидкость из каждой лунки и затем промойте каждый стрип 3 раза по 1 минуте
деионизированной или дистиллированной водой.
Оценка результатов реакции
Поместите тестовый стрип на оценочный протокол, высушите на воздухе и проведите оценку.
При постановке на автоматическом анализаторе EUROBlotMaster выберите программу EURO03 EBV EL60.
ОЦЕНКА И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Регистрация результатов реакции
Поместите инкубированные влажные блотовые стрипы в соответствующее место, расположенное на
разлинованном поле оценочного протокола, покрытого листом прозрачного пластика, и совместите с
разметкой. Пока стрип влажный, его можно на пластике двигать. После высыхания блотовые стрипы прочно
закрепятся на пластике. Осторожно прижмите их листом фильтровальной бумаги. После этого приложите
оценочный шаблон к блотовым стрипам на пластике и все ясно различимые полосы на блотовых стрипах,
совпадающие с отмеченными полосами антигенов контрольного стрипа, занесите в оценочный протокол.
Если вы собираетесь получить результат в цифровом выражении, сканируя стрип с помощью
EUROLINEScan, поместите стрипы на пластик, как описано выше. После сканирования высохших блотовых
стрипов их следует для дальнейшего хранения закрыть сверху листом пластиковой пленки. Код для входа в
тестирующую программу EUROLINESCAN – EBV2 EL (EBV Profile (5 antigens) EUROLINE).
Примечание: При правильно проведенной инкубации наблюдается интенсивное окрашивание
контрольной полосы. Если контрольная полоса слабо окрашена или не окрашена совсем,
результаты считаются не действительными и исследование следует повторить.
Антигены и их размещение на стрипах: Тестовые стрипы EUROLINE покрыты следующими антигенами:
Антиген
Источник
VCA
VCA gp125
Нативный VCA gp125, очищенный аффинной хроматографией
VCA p19
Рекомбинантный антиген VCA p19
EBNA
EBNA-1
Рекомбинантный антиген EBNA-1
p22
Рекомбинантный антиген p22. р22 является капсидным антигеном. Антитела к
антигену р22, подобно анти-EBNA-1, образуются на поздней стадии инфекции.
EA
EA-D
Рекомбинантный антиген EA-D
Контрольная
полоса
Основываясь на интенсивности сигнала, результаты постановки реакции с набором Anti-EBV-Profile 2
EUROLINE (IgM) можно разделить на отрицательные, неопределенные и положительные.
Сигнал
Сигнал отсутствует
Очень слабая полоса
Полоса по интенсивности от средней до сильной
Очень сильная полоса, сравнимая по интенсивности окраски с контрольной
Результат
Отрицательный
Неопределенный
Положительный
Сильно-положительный
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgМ), EUROIMMUN AG
4
_____________________________________________________________________________________________________
Интерпретация результатов по антителам класса IgG к вирусу Эпштейна-Барр
Антиген
Результат
Отрицательный
VCA
Положительный
Отрицательный
EBNA-1
EA
Положительный
Отрицательный
Положительный
Характеристика
Обе полосы (VCA gp125, VCA p19) отрицательные или слабо
положительные.
По крайней мере одна из полос VCA (VCA gp125, VCA p19)
умеренно- или сильно-положительная.
Полоса антигена EBNA-1 отрицательная или слабо
положительная.
Примечание: Если полоса EBNA-1 отрицательная, а свежая
инфекция исключена (результат по IgM-антителам к антигену
VCA отрицательный), средняя по интенсивности или сильная
реакция в зоне полосы р22 указывает на позднюю фазу
инфекции с “потерей” антител к антигену EBNA-1 .
Полоса EBNA-1 умеренно- или сильно положительная.
Полоса EA отрицательная или слабо положительная.
Полоса EA умеренно - или сильно положительная.
Интерпретация результатов по антителам класса IgМ к вирусу Эпштейна-Барра
Антиген
Результат
Отрицательный
VCA
Положительный
Характеристика
Обе полосы (VCA gp125, VCA p19) отрицательные или слабо
положительные.
По крайней мере одна из полос VCA (VCA gp125, VCA p19)
умеренно- или сильно-положительная.
Интерпретация результатов теста Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE по статусу инфекции
Результат теста Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE
Инфекционный статус
IgG-антитела к антигенам EBNA-1, VCA и EA – отрицательный ответ
Отсутствие инфекции
и
IgМ-антитела к антигенам VCA – отрицательный ответ
IgG-антитела к антигенам EBNA-1 – отрицательный ответ и
Острая стадия
к антигенам VCA – положительный ответ (часто отмечается положительный
инфекции (свежая,
ответ IgG к антигенам ЕА)
первичная инфекция)
и
IgМ-антитела к антигенам VCA – положительный ответ
*
Возможно
затруднение
при
интерпретации
результатов
серологических тестов вследствие отсутствия информации о динамике
IgM антител против VCA в острую стадию ВЭБ инфекции.
IgG-антитела к антигенам EBNA-1 и VCA – положительный ответ
и
IgМ-антитела к антигенам VCA – отрицательный ответ
IgG-антитела к антигенам EBNA-1 – отрицательный ответ, но полоса р22
умеренно или сильно положительная, полоса VCA положительная, а полоса
ЕА отрицательная
и
IgМ-антитела к антигенам VCA – отрицательный ответ
*
Возможно
затруднение
при
интерпретации
результатов
серологических тестов вследствие персистирования IgM антител
против VCA.
Для
характеристики
реактивации
ВЭБ
инфекции
у
людей
с
иммуносупрессией или у людей с ослабленной иммунной системой
рекомендовано определение вирусной нагрузки, так как результаты
серологических исследований часто не коррелируют с результатами прямых
тестов.
Поздняя стадия
инфекции
Поздняя стадия
инфекции со
снижением уровня
антител к антигену
EBNA-1
Реактивация
инфекции
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgМ), EUROIMMUN AG
5
_____________________________________________________________________________________________________
Краткий обзор
Ассоциированные антитела
Анти-VCA
Анти-EBNA-1
Анти-p22
(IgM)
(IgG)
(IgG)
Инфекционный статус
Анти-VCA
(IgG)
Анти-EA-D
(IgG)
Отсутствие инфекции
Острая стадия
инфекции
Поздняя стадия
инфекции
Реактивация инфекции
+
+
-
-
+
+
-
+
+
-
Для характеристики реактивации ВЭБ инфекции у людей с иммуносупрессией
или у людей с ослабленной иммунной системой рекомендовано определение
вирусной нагрузки, так как результаты серологических исследований часто не
коррелируют с результатами прямых тестов.
* (Превалирование различных антител смотрите в разделе характеристики теста/ исследования)
Схема диагностики EBV-инфекции
Отрицательный
ответ
по EBNA-1-IgG
Положительный
ответ по EBNA-1 IgG
Положительный
ответ
по VCA-IgG
Отрицательный
ответ
по VCA-IgG
Положительный
ответ по VCA-IgG
Инфекция отсутствует
Положительный
ответ
по VCA-IgM
Отрицательный
ответ
по VCA-IgM
Указывает на прошедшую
инфекцию
Указывает на
первичную инфекцию
Положительный
ответ по р22 IgG
Указывает на
снижение антител
против EBNA-1
при прошедшей
инфекции
Отрицательный
ответ по р22 IgG
Указывает на
первичную инфекцию
без образования IgM
против VCA (требуется
определение
авидности )
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgМ), EUROIMMUN AG
6
_____________________________________________________________________________________________________
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Диапазон определения: Метод EUROLINE является качественным, диапазон определения не дается.
Принято, что предельный титр антител наблюдается при разведении образца 1:101.
Перекрестные реакции: Качество используемых антигенных субстратов (отдельных антигенов и
источников антигенов) гарантирует высокую аналитическую специфичность системы. Данный тест
EUROLINE специфически выявляет антитела класса IgМ к антигенам VCA gp125, VCA p19, EBNA-1, p22 и
EA-D. Перекрестных реакций с другими аутоантителами не обнаружено.
Вещества, мешающие определению: На результаты анализа данного теста EUROLINE не влияли
гемолиз, повышенное содержание липидов и признаки желтухи в образцах с концентрациями гемоглобина
вплоть до 5 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл и билирубина – до 0,4 мг/мл.
Вариации результатов в разных опытах и в одном опыте: Вариации результатов в разных опытах
оценивали многократным повторным исследованием одних и тех же охарактеризованных образцов в
течение нескольких дней, вариации в одном опыте – многократным исследованием охарактеризованных
образцов в течение одного дня. В каждом случае интенсивность полос находилась в пределах
установленного диапазона. Таким образом, данный тест EUROLINE показывает очень высокую
воспроизводимость в пределах одной постановки и между постановками.
Проведенные исследования: Образцы сыворотки от 127 пациентов с различными стадиями ВЭБинфекции (охарактеризованные клинически и серологически: д-ром Гартнером, госпиталь при университете
в Саарланде; компания EUROIMMUN AG) исследовали с помощью наборов Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE на
наличие IgG- и IgM-антител к антигенам VCA gp125, VCA p19, EBNA-1, p22 и EA-D. Найдена следующая
распространенность этих антител (в %%) на различных стадиях инфекции:
Инфекционный
статус
Поздняя стадия
инфекции (n = 72)
Свежая инфекция
(n = 22)
Отсутствие
инфекции (n = 8)
Реактивация (n=25)
Положительные Положительные Положительные Положительные Положительные
по аnti-VCA-IgG
по аnti-VCA-IgM
по аnti-EBNA-1
по аnti-p22
по аnti-EA-D
100
13
99
97
19
100
96
9
27
72
13
0
0
0
0
100
8
92
100
68
Позднюю стадию инфекции можно идентифицировать по антителам класса IgG к антигенам VCA gp125
и/или р19, а также по антителам к EBNA-1. При вторичном снижении уровня антител к ENBA-1 присутствие
антител класса IgG к VCA р22 является указанием на позднюю стадию инфекции.
Первичная инфекция характеризуется наличием антител класса IgG и IgM к антигенам VCA gp125 и/или
р19. Могут также присутствовать антитела класса IgG к антигену EA-D.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgМ), EUROIMMUN AG
7
_____________________________________________________________________________________________________
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Вирус Эпштейна-Барр (EBV) и вирус простого герпеса 1 и 2 типа относятся к герпесвирусам человека и
являются одними из наиболее распространенных вирусов в популяции взрослых людей. Вирус ЭштейнаБарр является возбудителем инфекционного мононуклеоза, заболевания, характеризующегося лихорадкой,
фарингитом и лимфоаденопатией, и часто ассоциированного с гепатоспленомегалией и иногда с
экзантемой. Однако эту инфекцию находят при лимфоме Беркитта и назофарингеальной карциноме.
Инфекционный мононуклеоз следует дифференцировать от цитомегалии и токсоплазмоза и, в случае
нетипичного прогрессирования заболевания, также от ВИЧ или от других инфекций.
Заражение ВЭБ во время беременности с явной трансплацентарной передачей вызывает поражение
сердца, глаз, печени плода. Инфекция ВЭБ также может вызывать различные повреждения почек
варьирующие от микроскопической гематурии до острой почечной недостаточности.
Обнаружение IgG антител против EBV-CA (капсидного антигена ВЭБ) указывает на инфекцию ВЭБ.
Недавняя инфекция ВЭБ может характеризоваться повышением титра IgG антител. По меньшей мере
двукратное повышение титра антител при одновременном отсутствии антител против EBNA-1 (ядерного
антигена 1 ВЭБ) характеризует раннюю стадию инфекции. Иммунный ответ с образованием IgM антител
против EBV-CA и повышение титра IgG антител среди гетерофильных антител и наличие антител против
EBV-EA (раннего антигена ВЭБ) является указанием на наличие недавней ВЭБ инфекции, хотя не
обязательным. Антитела против EBNA (ядерного антигена ВЭБ) выявляются преимущественно в позднюю
стадию ВЭБ инфекции.
У более 90 % пациентов с недавней ВЭБ инфекцией выявлялись низкоавидные IgG антитела против EBVCA в первые 10 дней после появления симптомов заболевания, через 30 дней - у 50 %.
IgA антитела против ранних белков ВЭБ редко выявляют при первичной инфекции или при ее реактивации.
Антитела к раннему антигену ВЭБ (EBV –EA) выявляют у 70 – 80 % пациентов с инфекционным
мононуклеозом, хотя только временно во время острой стадии. Высокие титры антител к ЕА указывают на
хроническую инфекцию или ее реактивацию. Однако, их находят также при лимфоме Беркитта и
назофарингеальной карциноме.
Хотя EBNA антигены 1 и 6 образуются раньше, чем другие антигены ВЭБ (EBV –EA и EBV-CA) после
инфицирования, они презентируются иммунной системе только после разрушения В-клеток, поэтому
хронологически антитела против EBV –EA и EBV-CA выявляются раньше, чем антитела против EBNA.
Серологическая дифференциация между первичной инфекцией ВЭБ и реактивацией не всегда возможна.
Если присутствуют антитела против EBV –EA и отсутствуют против EBV-CA или EBNA, можно
предположить наличие первичной инфекции. Если одновременно выявляют антитела против EBNA – это
указывает на наличие реактивации.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Anti-EBV-Profile2_Euroline_DN2790-2M.doc
7/13/2009 10:20:36 AM
Оригинал DN_2790-2M_A_UK_C05.doc
Version: 06/03/2009 14:56:23
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Anti-EBV-Profile 2 EUROLINE (IgМ), EUROIMMUN AG
8
_____________________________________________________________________________________________________
EUROIMMUN Anti-EBV Profile 2_EUROLINE (IgМ)
Протокол инкубации
Предварительная обработка
Поместите блотовый стрип в лунку лотка для инкубации
и заполните
каждую лунку 1,5 мл блокирующего реагента
15 мин
Встряхните
1. Инкубация образца
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл разведенного образца сыворотки (1:101)
60 мин
Встряхните
Промывка: 3 × 5 мин
Аспирируйте жидкость, промойте 3 раза по 5 минут, внося по
1,5 мл разведенного универсального буфера на лунку
2. Инкубация с конъюгатом
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл разведенного ферментного конъюгата
60 мин
Встряхните
Промывка: 3 × 5 мин
Аспирируйте жидкость, промойте 3 раза по 5 минут, внося по
1,5 мл разведенного универсального буфера на лунку
3. Инкубация с субстратом
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл раствора субстрата
20 мин
Встряхните
Остановка реакции
Аспирируйте жидкость, промойте 3 раза по 1,5 мл
деионизированной воды
Визуальная оценка
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]