Авидность антител класса IgG для Toxoplasma gondii

УДК 616.993.192-071-053.2.
Л.В.ПЫПА , О.А.ЯВОРСКИЙ, Е.Н.БАЗИЛЕВИЧ
Винницкий медицинский университет имени М. И.Пирогова,
МЦ ”ВИЛЕНА”, г. Хмельницкий
Авидность антител класса IgG для Toxoplasma gondii – новый
серологический показатель активного токсоплазмоза.
Наиболее часто в современной серодиагностике токсоплазмоза применяется иммуноензиматический тест ELISA , что позволяет определять антитела класса IgG, IgA, IgM i IgE к
Toxoplasma gondii (1,4,5).
Согласно принятым принципам интерпретации результатов иммуноензиматических
тестов, наличие антител класса IgМ и (или) IgА , а также отсутствие антител класса IgG
может указывать на свежую инвазию или означает неспецифичность антител. Наличие низкого уровня IgG (6 - 100 IU/ml, результат в международных единицах на 1 мл сыворотки),
наличие антител IgM и (или) IgA свидетельствует об активном токсоплазмозе. В период
свежей инвазии наличие паразита в организме хозяина стимулирует иммунную
систему к
продукции очень высоких концентраций IgG. В этой фазе заражения, как правило, присутствуют антитела классов IgM и IgA. Тесты ELISA, которые определяют IgM, являются тестами качественными, позволяющие определять только наличие или отсутствие антител этого
класса.
Ранние антитела IgG характеризуются слабой силой связи с антигенами паразита
(низкой родственностью к антигену), то есть низкой авидностью, и, несмотря на большую
концентрацию, имеют низкую способность удалять паразитов из циркуляции. Низкая авидность антител класса IgG характерна именно для свежей инвазии. Продолжительное течение
болезни приводит к образованию антител IgG с большой родственностью к антигенам паразита , которые крепко связываются с антигеном , то есть антител с высокой авидностью, способных активно элиминировать Toxoplasma gondii из кровообращения. В период образования высокоавидных антител IgG постепенно снижается уровень ранних показателей заражения (IgM , IgA), которые в продолжение месяца исчезают. Токсоплазмоз переходит в
хроническую или в латентную фазу, для которой характерное наличие антител класса IgG с
высокой авидностью (3,6).
Несмотря на возможность определения ранних маркеров заражения (антител класса
IgA i IgM), а также наблюдение за динамикой антител класса IgG , серодиагностику токсоплазмоза затрудняют:
1. Продолжительный период высокого уровня IgG ;
2. Наличие у определенного процента популяции феномена продолжительного сохранения – до 48-72
месяцев антител класса IgG и IgA;
3. Появление неспецифичных антител IgM у беременных женщин ;
4. Перекрестные реакции: ложноположительные - антитела класса IgМ могут появляться у лиц с ревматоидным фактором и (или) противоядерными антителами ; ложнонегативные – при определении IgМ в инактивированной сыворотке.
Выполненные с трехнедельными промежутками серологические исследования часто
не позволяют однозначно интерпретировать результаты. Продолжительное ожидание в такой ситуации следующих результатов исследований создают для беременной угрозу несвоевременной диагностики активного токсоплазмоза и трансмиссию большого количества
паразитов к плоду или ненужную антибиотикотерапию. В таких ситуациях есть единый
обоснованный способ определить свежую инвазию – это измерять силу связывания антител
1
IgG с антигенами паразита, то есть авидность антител класса IgG. Тест “Toxo IgG-авидность
“ является иммуноэнзиматическим тестом, в котором антиген паразита, как указывает
B.M.Sobiefzczanska (1999 г. Польша) свободно располагается в пробирке. Специфические
для токсоплазмоза антитела класса IgG , которые находятся в исследуемой сыворотке, связываются с антигеном. Не связанные антитела отмываются. После этого, образованные комплексы антиген-антитело определяют путем соединения с антиглобулиновыми антителами
, которые метятся энзимом. Потом, повторно - составные компоненты реакции, которые не
связаны , - отмываются. На конечном этапе в пробирку добавляется субстрат, который разбавлен энзимом (до цветного или флюоресцентного состоянию) и связывается с антиглобулиновыми антителами. Количество образованного продукта прямо пропорционально количеству антиглобулиновых антител, что практически отвечает количеству связанных с антигеном исследуемых антител. Чем больше в исследуемой сыворотке специфических для
Toxoplasma gondii антител, тем больше в реакции появляется продукта, который определяется спектрофотометрией (6).
Антитела, которые появляются в начале инвазии, образовывают с антигенами
Toxoplasma gondii комплексы, которые удерживаются главным образом через водородные
связи. Антитела IgG, которые входят в такой комплекс, почти все разрывают водородную
связь под влиянием мочевины. Высвобожденные антитела отмываются во время исследования. Высокоавидные антитела IgG, которые входят в комплекс с антигеном паразита, удерживаются не только водородным связями, а также электростатическими силами и связями
Van der Waals. Они не отмываются и вступают в реакцию с меченными энзимом антиглобулиновыми антителами.
Согласно результатам исследований производителя теста (bioMerieux, Франция), низкая авидность (индекс <0,200) характеризует 74% случаев активного токсоплазмоза, который
имеет продолжительность до 4 месяцев и только 26% случаев поражения длятся большее 4
месяцев. Высокая авидность антител класса IgG (индекс >0,300) в 100% случаев характеризует хроническое (давнее) инфицирование, предельные показатели авидности ( >0,300 i
<0,200 ) касаются 87% токсоплазмоза, который длится больше 4 месяцев.
Определено, что применение антибиотиков во время свежей инвазии нарушает процесс “ созревания “ иммунологического ответа. Согласно Sensini (1996), исследование авидности антител класса IgG в двух группах больных на токсоплазмоз давали большие отличия
между теми, которые лечилось в период активной инвазии и лицами, которые не получало
лекарства. Авидность IgG была значительно ниже и держалась на таком уровне намного
дольше в группе больных , которые принимало антибиотики, в особенности в сравнении с
нелеченными. Механизм торможения антибиотиками “созревания “ авидности антител неизвестный. Достоверно, что антибиотики быстро уменьшают количество циркулирующих паразитов, уменьшают количество доступного антигена, который супресивно влияет на иммунную систему. Влияние антибиотиков обязательно надо принимать во внимание при определении авидности антител IgG при токсоплазмозе. Нет данных о проведении исследований, которые определяли бы возможность применения теста авидности IgG к Toxoplasma
gondii в случаях реактивации токсоплазмоза.
Не исследована пригодность определения авидности антител класса IgG при врожденном токсоплазмозе. Вероятно, в этом случае определение авидности IgG ребенка может
иметь значение только в случае, если активная инвазия паразита случилась в ІІ или ІІІ триместре беременности матери. Заражение матери до беременности или в І триместре становится причиной того, что антитела IgG, которые передаются через плаценту, будут високоавидными, даже если организм ребенка будет синтезировать специфические антитела с низкой авидностью – в тесте на определение авидности в реакцию с антигеном вступят только
антитела с сильной связью с антигеном, то есть антитела матери. Заражение матери в ІІ ли ІІІ
триместре беременности достоверно станет причиной передачи ребенку через плаценту антител IgG с низкой или пограничной авидностью. Необходимо также принимать во внима2
ние, что у матери, которая во время беременности лечилась антибиотиками, будет определяться низкий индекс авидности IgG, что ложно будет указывать на активный токсоплазмоз.
Целью нашего исследования было изучение авидности антител класса IgG у больных
с токсоплазмозом.
Материалы и методы.
Изучали авидность антител класса IgG у 12 больных с токсоплазмозом, из них 8 детей, 2 беременных женщины и 2 взрослых больных. У 2-х больных ( из них в 1-й беременной) имел место острый токсоплазмоз, о чем свидетельствовали положительные результаты
анализов на специфические антитела класса IgM i IgG при отрицательных результатах обследований на ревматоидный фактор. У 2-х беременных женщин острое течение болезни
подтверждено лишь лабораторно, у 1-го ребенка (12 л.) острая токсоплазмозная инфекция
имела клинически выраженное мононуклеозоподобное течение. У других 3-х детей розрастом 7,9,14 лет имел место глазной токсоплазмоз, подтвержденный характерными изменениями на глазном дне, ростом титра антител IgG в динамике в 2,5 р., эффективностью специфической терапии. В одном случае (ребенок 7л.) выявлен 2-сторонний процесс, который
указывает на врожденную инфекцию, в 2-х других – односторонний. У 4-х больных подтверждена токсоплазмозная природа очаговой (2) и тотальной (2) аллопеции. У 2-х обследованных имел место латентный токсоплазмоз с умеренным увеличением (в 2,3 р.) титра антител класса IgG, который удерживался без перемен при обследовании в динамике.
Определение авидности антител для Toxoplasma gondii проводили с помощью наиболее современного автоматического иммуноферментнофлюоресцентного анализатора mini
VIDAS фирмы bioMerieux (Франция).
Результаты исследования и их обсуждение.
В результате проведенного обследования 12-ти больных с острым (3), латентным (2) и
хр. токсоплазмозом (3 с глазным токсоплазмозом и 4 с нейротрофической формой токсоплазмоза, которая проявилась аллопецией) на определение авидности антител специфических IgG, нами получены результаты, которые представленные в таблице 1.
Табл.№1.
Авидность антител IgG у больных токсоплазмозной инфекцией.
Авидность
Інтерпритація
Больные
N=12
%
Индекс <= 0,200
Низкая авидность
3
25
0,200 >индекс<0,300
Предельная авидность
2
16,7
Индекс>=0,300
Высокая авидность
7
58,3
Низкая авидность антител, то есть функционально неполноценные антитела выявлены
у 3-х больных, из них у 2-х с острой токсоплазмозной инфекцией и у беременной, у которой
IgМ был отрицательным, у 2-х больных имели место предельные показатели авидности, что
свидетельствует о недавно перенесенной острой инфекции ( 1 больная с аллопецией и 1 ребенок с латентным токсоплазмозом), у 7-ми больных определялись високоавидные антитела
( у 3-х с глазным токсоплазмозом, у 4-х с аллопецией и в случае латентного токсоплазмоза).
У обеих беременных острую форму токсоплазмоза диагностировано в конце 2-го триместра, назначено специфическое лечение (ровамицин), которое могло привести к тому, что,
не смотря на исчезновение IgМ и умеренный рост IgG в динамике, авидность антител оставалась низкой (<0,200) до конца беременности.
Подытоживая результаты исследований токсоплазмоза, можно прийти к заключению
– во всех случаях хронического или латентного течения токсоплазмоза: средний и повышенный уровень IgG, отсутствие IgM и IgA или сомнительный результат IgМ и низкий уровень
IgА - авидность IgG высокая. В случаях свежей инвазии – низкий и средний уровень IgG, а
3
также высокая концентрация IgA, высокий индекс IgM, авидность IgG – низкая (индекс<0,200).
Определение авидности IgG для Toxoplasma gondii является рекомендованным в странах Западной Европы тестом и используется для рутинной диагностики токсоплазмоза, в
особенности у беременных женщин, как исследование, которое разрешает определить риск
врожденного токсоплазмоза. Toxo IgG Avidity дополняет серодиагностику токсоплазмоза и
во многих случаях позволяет установить диагноз после одного исследования. Поэтому он
особенно рекомендуется в случаях, если есть только один образец сыворотки. Возможность
быстрого выявления случаев свежей инвазии Toxoplasma gondii и организация лечения серопозитивних женщин (беременных), благодаря определению авидности IgG, может существенно уменьшить количество случаев врожденного токсоплазмоза. Тест определения авидности IgG должен выполняться как стандарт обследования серопозитивных беременных
женщин.
4
Литература:
1.Кислых Э.Н., Максименок Е.В., Ватаманюк М.Ю., Лузан Д.П. Применение иммуноферментных тест-систем для выявления маркеров оппортунистических инфекций и иммунного статуса в ВИЧ- инфицированных // Лаб.диагностика.- N3.-1999.-С.33-35.
2.Лукьянова Т.А. Серодиагностика токсоплазмоза методом ИФА у детей // Педиатрия.- N4.-1996.- С.30-33.
3.Малашенкова И.К., Дидковский Н.А., Гевондян В.С. и др. Авидность антител – важнейший показатель состояния иммунитета при хронической респираторной инфекции. //
Сб.науч. трудов. 7 Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Москва. 2-5 июля
1997 г.
4.Падюков Л.Н. Иммунохимические методы диагностики // Современные методы
иммунохимической и молекулярно-биологической диагностики в медицине.- Г.: АМН
СССР,1992.- С.3-6.
5.Яковлев А.Т., Зыкин Л.Ф., Рыбкин В.С. Иммуноферментный анализ в микробиологии. Издательство Саратовского университета. 1990.-С.112.
6.Sensini / Cein . Microbiol. Infect.Dis. / 1996; 2(1); 25-29/
УДК 616.993.192-071-053.2.
Авидность антител класса IgG для Toxoplasma Gondii – новый серологический показатель активного токсоплазмоза.
Л.В.Пыпа, О.А.Яворский, Е.Н.Базилевич.
Изучен новый метод диагностики токсоплазмоза – авидность антител класса IgG. Выявлено низкую авидность антитела IgG(<0,200) при остром течении токсоплазмоза и высокую (>0,300) – при хроническом течении или латентном токсоплазмозе, полученные результаты свидетельствуют, что Toxo IgG Avidity дополняет серодиагностику токсоплазмоза и
должен выполняться как стандарт обследования серопозитивних беременных женщин и новорожденных детей при выявлении в них антител класса IgG.
УДК 616.993.192-071-053.2.
Aviditi of Ig G antibodies for toxoplasma gondii – new serologic index of active toxoplasmosis.
Pypa L.V. and et.
New method of toxodiagnosis – avidity of Ig G antibodies has been studied. Low avidity of IgG
antibodies for acute course of toxoplasmosis and high ( 0,300 ) – for chronic and latent infections
have been revealed.
Toxo IgG avidity supplements the toxoserodiagnosis and must be fulfiled as the standard for examination of seropositive pregnant women and infants when IgG antibodies are revealed.
5