АКТИВНОСТЬ ИНДИКАТОРНЫХ ФЕРМЕНТОВ СЫВОРОТКИ

ÏÐÎÁËÅÌÛ ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈÈ
Таблица 1
Результаты изучения сывороток крови кроликов и крыс на наличие антител
после введения вирусных антигенов с различными адъювантами
Группы
животных
Вирусный антиген
Адъювант
Титры антител log2
Кролики
Крысы
3,25+0,46
4,25+0,42
1% целлюлозы
4,0+0,57
2,25+0,21
2% целлюлозы
4,25+0,63
2,33+0,33
Эмульсиген (10%) + прополис (1%)
2,25+0,23
3,00+0,55
Эмульсиген (10%) + прополис (2%)
2,5+0,28
2,75+0,34
№6
-
2,66+0,23
3,50+0,26
№7
Эмульсиген (10%)
3,25+0,46
1,25+0,14
№8
1% целлюлозы
2,75+0,47
1,66+0,16
№9
2% целлюлозы
3,40+0,73
1,75+0,22
№1
Эмульсиген (10%)
№2
№3
№4
Вирус ИРТ
№5
№ 10
Вирус диареи
Эмульсиген (10%) + прополис (1%)
2,25+0,23
2,25+0,23
№ 11
Эмульсиген (10%) + прополис (2%)
2,33+0,28
1,50+0,40
№ 12
-
2,50+0,18
1,25+0,11
№ 13
Эмульсиген (10%)
3,50+0,36
4,00+0,42
№ 14
1% целлюлозы
3,50+0,39
3,00+0,30
№ 15
№ 16
Ротавирус
2% целлюлозы
4,50+0,70
3,50+0,63
Эмульсиген (10%) + прополис (1%)
3,25+0,21
5,00+0,25
№ 17
Эмульсиген (10%) + прополис (2%)
3,75+0,44
3,50+0,32
№ 18
-
3,50+0,12
4,50+0,28
№ 19
Эмульсиген (10%)
4,50+0,22
4,80+0,42
№ 21
2% целлюлозы
4,38+0,45
3,38+0,23
№ 22
Эмульсиген (10%) + прополис (1%)
3,25+0,28
3,40+0,22
№ 23
Коронавирус
Эмульсиген (10%) + прополис (2%)
3,50+0,40
3,25+0,25
№ 24
-
4,00+0,42
4,00+0,42
0
0
Контрольная группа
ликов и 3,38 log2 для крыс) и 10% суспензия эмульсигена (титр антител 4,50 log2 для
кроликов и 4,80 log2 для крыс).
Таким образом, для конструирования
инактивированной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диа-
ери, рота- и коронавирусной инфекции
крупного рогатого скота наиболее оптимальными являются 2% суспензия активированной целлюлозы (производства БГУ)
и 10% эмульсия эмульсигена (производства США).
УДК 636.52/58-053.2.2:612.015.1
И.В. Котович (УО Витебская ордена «Знак Почета» государственная
академия ветеринарной медицины, г. Витебск, Республика Беларусь)
АКТИВНОСТЬ ИНДИКАТОРНЫХ ФЕРМЕНТОВ
СЫВОРОТКИ КРОВИ В ВОЗРАСТНОМ АСПЕКТЕ
И ЕЕ СВЯЗЬ С ЖИВОЙ МАССОЙ
ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ
В оценке метаболического статуса организма животных важная роль принадлежит исследованию активности ферменВетеринарная патология. № 2. 2005
тов сыворотки крови. В клинико-биохимической практике широко распространено деление их на индикаторные, секретор55
ÏÐÎÁËÅÌÛ ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈÈ
ные и экскреторные. Среди этих ферментов наиболее широкое практическое применение нашли индикаторные ферменты
– лактатдегидрогеназа (ЛДГ), сорбитолдегидрогеназа (СДГ), изоцитратдегидрогеназа (ИЦЦГ), глутаматдегидрогеназа (ГлДГ),
аспартатаминотрансфераза (АсТ) и аланинаотрансфераза (АлТ) [4]. Ряд исследований посвящен изучению связи активности
этих ферментов с хозяйственно-полезными признаками животных [1–3]. Вместе с
тем, в птицеводстве эти вопросы исследованы недостаточно.
Целью нашей работы было определение активности ЛДГ, СДГ, ИЦЦГ, ГлДГ. АсТ
и АлТ в сыворотке крови в возрастной динамике и установление корреляционных
связей данных ферментов с живой массой
цыплят-бройлеров.
Исследования проведены на цыплятахбройлерах кросса «Смена-2» Витебской
бройлерной птицефабрики 1-, 10-, 20-, 30-,
40- и 46-дневного возраста. В каждый возрастной период были сформированы по 2
группы цыплят: 1-я — с живой массой, соответствующей технологической норме и
2-я — с живой массой ниже плановых производственных показателей (табл. 1).
Активность ЛДГ определяли по методу Bucher Т. et al. (1962) [6] в нашей модификации. Реакционная смесь содержала 2,7
мл 0,1 М трис-HCl буфера (рН 7,45), 0,1 мл
сыворотки крови; 0,1 мл 4 мМ пирувата натрия. Реакцию запускали добавлением 0,1
мл 4 мМ НАДН производства фирмы “Reanal” (Венгрия) и регистрировали снижение оптической плотности за 1 мин. при
температуре 42° С. Конечное разведение
сыворотки крови составило 1:30.
Активность СДГ определяли по методу
Gerlach U., Hiby W. (1974) в нашей модификации. Реакционная смесь включала 2,2 мл
0,1 М трис-HCl буфера, 0,1 мл 6 мМ НАДН
и 0,4 мл сыворотки крови. Смесь выдерживали 45 минут для предотвращения исполь-
зования НАДН в других реакциях (например, восстановления пирувата) и добавляли 0,2 мл 1,65 М фруктозы. О протекании
реакции судили по убыли в реакционной
смеси НАДН в течение 1 мин при температуре 42° С. Конечное разведение сыворотки крови составило 1:7,5.
Активность НАДФ-ИЦДГ определяли по методу Wolfson S.K., Williams-Ashman (1957) в нашей модификации. Реакционная смесь состояла из 2,2 мл 0,1 М трисHCl буфера, 0,3 мл раствора 0,01 М МnСl2,
0,3 мл 0,05 М тринатриевой соли изолимонной кислоты фирмы “Sigma” (Германия) и
0,1 мл сыворотки крови. Реакцию начинали добавлением 0,1 мл 10 мМ НАДФ производства фирмы “Reanal” (Венгрия) и
регистрировали увеличение оптической
плотности за 2 мин. при температуре 42° С.
Конечное разведение сыворотки крови составило 1:30.
Активность ГлДГ и аминотрансфераз определяли с использованием наборов
НТК « Анализ-Х» с учетом температуры
(42° С) и времени инкубации (1 мин). Конечное разведение сыворотки крови составило при определении активности аминотрансфераз 1:11, а ГлДГ — 1:6.
Проведенные нами исследования показали, что наибольшей активностью среди исследованных индикаторных ферментов обладает ЛДГ, который катализирует
обратимую реакцию превращения пирувата в L-лактат, регулирует скорость и направленность интегрального процесса гликолиз-глюконеогенез в тканях организма
животных. В первые 20 дней жизни цыплят
отмечается увеличение активности этого
фермента, причем более существенно (на
16,11% в 1-й и на 12,17% во 2-й группе) —
в период наибольшей относительной скорости роста бройлеров. В 30- и 40-дневном
возрасте (снижение темпов роста) наблюдается уменьшение активности фермента
(соответственно на 12,09 и 16,67% у цыплят
Таблица 1
Динамика живой массы цыплят-бройлеров кросса «Смена-2»
Возраст, дней
К-во цыплят в
каждой группе
1
50
10
20
20
20
30
10
40
8
46
8
56
Относительная скорость роста,%
Живая масса, г
1 группа
2 группа
1 группа
2 группа
41,28±0,28
34,42±0,28
-
-
190,91±1,43
147,36±2,57
128,89
124,26
566,90±4,50
404,30±1,51
99,23
93,15
1015,60±3,85
651,30±4,63
56,71
46,80
1582,63±7,47
972,25±10,23
43,65
39,54
1940,63±13,14
1166,88±6,13
20,32
18,20
Ветеринарная патология. № 2. 2005
ÏÐÎÁËÅÌÛ ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈÈ
Таблица 2
Активность индикаторных ферментов сыворотки крови цыплят-бройлеров разного возраста
Ферменты
АДГ,
нкат/л
СДГ,
нкат/л
ИЦДГ,
нкат/л
ГлДГ,
нкат/л
АсТ,
нкат/л
АлТ,
нкат/л
Группы
цыплят
Возраст, дней
1
10
20
30
40
46
1
10274,11±581,57 11929,26±377,58 13118,97±427,94 11704,18±333,96 10032,16±319,93 11012,86±261,72
2
9324,76±209,58 10450,16±251,65* 11623,80±317,09* 9983,92±265,88** 8327,97±377,56** 8954,92±403,20**
1
132,63±10,25
192,92±13,63
217,04±11,72
269,27±8,04
281,35±22,91
253,21±15,04
2
116,55±7,52*
156,75±9,85*
196,94±13,33
221,06±8,99**
261,25±6,35
245,18±11,72
1
458,20±9,85
313,51±40,55
361,73±25,42
401,93±33,63
434,08±15,04
393,89±23,44
2
369,78±19,69**
241,16±17,98
297,43±16,08
313,50±15,04*
369,78±26,67*
345,66±20,43
1
259,70±13,83
355,67±21,12
406,48±14,39
378,25±16,94
395,19±29,61
361,32±20,74
2
293,57±11,29
316,15±33,87
350,02±11,29*
321,79±19,14
299,21±24,61*
265,34±27,66*
1
560,02±20,84
784,03±48,07
925,51±30,35
819,40±34,12
896,03±23,94
837,08±15,03
2
**
624,87±9,75
719,19±22,06
825,30±27,96*
695,61±37,97
*
789,92±41,26
*
1
147,37±13,18
188,64±7,22
229,90±11,03
209,27±17,68
250,54±13,18
271,17±11,03
168,01±7,52
212,22±23,58
238,74±15,03
2
194,51±11,79
159,16±15,03
185,69±8,84
*
719,19±30,35**
* Р<0,05; ** Р<0,01 по сравнению с цыплятами, имеющими живую массу, соответствующую технологической норме
с живой массой, соответствующей технологической норме и на 16,43 и 19,88% у бройлеров, имевших живую массу ниже необходимых производственных показателей). К
концу выращивания активность ЛДГ в обеих группах цыплят несколько увеличивается (10,74% — 1-я и 8,69% — 2-я). Вероятно
это связано с большими энергетическими
затратами, необходимыми для роста организма в этот период.
Ключевой этап сорбитолового пути метаболизма глюкозы протекает при
участии СДГ. Активность данного энзима
в сыворотке крови незначительна. В течение первых 40 дней онтогенеза активность
фермента возрастает, однако неравномерно. Наиболее высокие значения отмечаются в 10 дней (увеличение на 45,46% в 1-й
группе и на 34,49% во 2-й), 20 дней (25,64%
во 2-й группе) и 30 дней (24,06% в 1-й группе цыплят).
К 46-дневному возрасту активность
СДГ снижается (в 1-й группе на 11,11% и
на 6,56% во 2-й). Данные изменения на заключительном этапе выращивания бройлеров вероятно обусловлены снижением
интенсивности сорбитолового пути обмена углеводов в тканях цыплят. Как и ЛДГ,
активность СДГ более высока у бройлеров с живой массой, соответствующей нормативным критериям. Наиболее существенная разница между группами установлена в 10- (23,07%) и 30-дневном возрасте
(21,81%).
Важным регуляторным этапом цикла
трикарбоновых кислот является изоцитВетеринарная патология. № 2. 2005
ратдегидрогеназная реакция, связанная с
биосинтетическими и энергетическими
процессами организма. В течение первой
декады жизни цыплят активность данного энзима снижается (на 46,45% в 1-й группе и на 53,33% во 2-й по сравнению с бройлерами суточного возраста), что вероятно
связано с невысокой скоростью липогенеза в этот период. Далее активность фермента вплоть до 40 дней увеличивается и
несколько снижается к 46-дневному возрасту. Сравнивая показатели активности
фермента между цыплятами обеих групп в
каждый возрастной период следует отметить, что она значительно выше у бройлеров с более высокой живой массой.
Интенсивность метаболизма белков в
организме животных в определенной степени характеризуют показатели активности ферментов, участвующих в процессах
трансаминирования, восстанавительного
аминирования и дезаминирования — АсТ,
АлТ и ГлДГ.
В период наиболее высокой интенсивности роста отмечается рост активности
аминотрансфераз и ГлДГ. Увеличение активности АсТ составило у бройлеров 1-й
группы 40,00%, АлТ — 28,00% и ГлДГ —
36,95%. У цыплят с низкой живой массой
активность АсТ и ГлДГ возрастает (соответственно на 7,69% и 15,09%), а АлТ —
снижается (на 22,21%). В 20-дневном возрасте рост активности замедляется, а в 30дневном - наблюдается снижение активности данных ферментов. Возможно, это
связано с переходом цыплят на новый ра57
ÏÐÎÁËÅÌÛ ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈÈ
цион кормления и адаптацией к новым условиям ферментных систем организма. Во
2-й половине периода выращивания бройлеров активность АсТ и ГлДГ изменяется
волнообразно. Некоторое увеличение активности этих ферментов к 40 дням жизни
цыплят (соответственно на 9,35 и 4,48% в
1-й группе) сменяется понижением активности в 46-дневном возрасте (на 7,04% и
9,37%). Активность же АлТ в эти периоды возрастает (на 19,72% и 7,99%). У цыплят с живой массой, ниже технологической
нормы активность ГлДГ начиная с 30 дней
и до конца периода выращивания бройлеров снижается. Характер изменения активности АсТ и АлТ аналогичен цыплятам с
более высокой живой массой.
Одним из факторов, влияющих на скорость выхода ферментов в кровь из тканей
является градиент концентрации. На основании определенной ранее активности
ферментов в тканях цыплят [5], мы рассчитали этот показатель на примере суточных бройлеров (табл. 3). Наиболее высокие соотношения печень/сыворотка крови (СК) характерны для СДГ и ИЦДГ. Далее в порядке убывания следуют ГлДГ, АсТ,
ЛДГ и АлТ. Такая же последовательность
характерна и при соотношении почки/СК,
но эти показатели (особенно у СДГ и ИЦДГ) заметно ниже. Соотношение сердце/
СК по активности ферментов самое высокое у ИЦДГ, а самое низкое — у АлТ, селезенка/СК и поджелудочная железа (ПЖ)/
СК — соответственно у СДГ и АлТ. Таким
образом, с одной стороны можно говорить
о высокой органной специфичности СДГ и
ИЦДГ, а с другой стороны, что сывороточные формы этих ферментов имеют в основном печеночное происхождение.
Наиболее высокие и стабильные кор-
реляционные связи активности ферментов
с живой массой цыплят-бройлеров установлены у ЛДГ, АсТ и ИЦДГ (табл. 4).
В каждом возрастном периоде четко
прослеживаются более высокие показатели корреляции ЛДГ у бройлеров, имеющих живую массу, соответствующую необходимым технологическим параметрам. Такая же тенденция (за исключением суточного возраста) характерна и для
АсТ. Причем у цыплят, имеющих живую
массу, соответствующую необходимым
технологическим параметрам, корреляционые связи между этим показателем и активностью АсТ несколько выше по сравнению с ЛДГ.
У ИЦДГ несмотря на высокую взаимосвязь между активностью фермента и
живой массой бройлеров, разница между
группами цыплят незначительна.
Для ГлДГ также в целом выявлена высокая корреляция с живой массой бройлеров. Наиболее существенная разница между группами характерна для 10- (выше у
цыплят 1-й группы) и 20-дневного возраста (выше во 2-й группе). У АлТ связь активности фермента с живой массой наиболее выражена в 1-, 30- и 40-дневном возрасте цыплят.
Активность СДГ имеет устойчивую отрицательную корреляционную связь с живой массой на протяжении всего периода
выращивания бройлеров (за исключением
суточного возраста у цыплят 2-й группы).
Проведенные экспериментальные исследования позволяют сделать следующие
выводы:
1. Динамика активности индикаторных ферментов сыворотки крови цыплятбройлеров находится в зависимости от интенсивности их роста.
Таблица 3
Соотношение активности ферментов тканей и сыворотки крови у цыплят-бройлеров
Ферменты
Показатели
Группы
цыплят
ЛДГ
СДГ
Печень/
СК
1
205,50±11,41
2
214,05±3,92
Почки/СК
1
ИЦДГ
ГлДГ
4497,98±148,59
2428,18±106,33
4457,75±166,57
2559,53±129,60
162,16±8,79
2011,99±150,58
2
163,15±3,98
2072,17±75,81
Сердце/СК
1
174,77±9,57
2
Селезенка/СК
1
ПЖ/СК
58
АсТ
АлТ
257,49±14,96
206,87±5,19
171,84±11,17
247,89±7,35
198,07±4,09
140,66±6,32
606,29±33,04
196,71±6,42
180,40±5,60
98,83±8,45
839,08±38,57
185,96±4,72
170,53±2,60
82,57±3,78
232,43±18,19
1502,43±26,01
100,53±7,34
175,62±6,00
29,32±2,95
167,39±4,43
246,75±13,23
1762,52±76,56
91,60±3,03
163,33±2,31
22,79±2,20
92,78±4,83
199,87±15,27
191,99±16,20
93,68±5,27
73,45±2,14
7,20±0,82
2
95,28±2,94
222,75±10,16
263,47±12,60
85,37±3,13
68,44±1,66
5,63±0,46
1
84,88±6,05
269,74±21,39
11,44±1,84
71,34±3,54
36,41±0,92
8,84±0,96
2
83,07±3,33
322,50±17,12
16,29±1,56
67,36±2,59
34,47±0,73
6,99±1,24
Ветеринарная патология. № 2. 2005
ÏÐÎÁËÅÌÛ ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈÈ
Таблица 4
Корреляционные связи между активностью индикаторных ферментов сыворотки
крови и живой массой цыплят-бройлеров в возрастной динамике
Возраст, дней / Коэффициент корреляции
Группы
цыплят*
1
ЛДГ сыворотки крови — живая масса
1
0,55
0,75
0,61
0,75
0,81
0,86
2
0,45
0,68
0,28
0,46
0,45
0,68
СДГ сыворотки крови — живая масса
1
-0,20
-0,62
-0,86
-0,68
-0,29
-0,49
2
0,17
-0,35
-0,69
-0,49
-0,56
-0,55
ИЦДГ сыворотки крови — живая масса
1
0,50
0,42
0,56
0,65
0,62
0,67
2
0,43
0,37
0,46
0,58
0,59
0,64
ГлДГ сыворотки крови — живая масса
1
0,72
0,70
0,09
0,89
0,86
0,82
2
0,89
0,29
0,85
0,82
0,74
0,73
АсТ сыворотки крови — живая масса
1
0,71
0,75
0,83
0,82
0,85
0,87
2
0,85
0,56
0,20
0,31
0,64
0,57
АлТ сыворотки крови — живая масса
1
0,67
0,10
0,54
0,45
0,83
0,24
2
0,58
-0,70
0,70
0,17
0,63
0,33
Сравниваемые величины
10
20
30
40
46
*1 группа — цыплята с живой массой, соответствующей технологической норме; 2 группа — цыплята с живой массой ниже технологической нормы
2. Наиболее высокие соотношения пе3. Определение активности ЛДГ и АсТ
чень/сыворотка крови характерны для
сыворотки крови можно использовать для
СДГ и ИЦДГ, что свидетельствует о выпрогнозирования энергии роста и продуксокой органной специфичности этих фертивности цыплят-бройлеров кросса «Смементов.
на-2».
Литература
1. Авдалян Я.В. Особенности формирования мясосальных качеств свиней крупной белой породы //
Зоотехния. 2003. № 4. С. 26–28.
2. Владимиров В.Л., Милушев Р.К. Биохимические
процессы у чистопородных и помесных телок в
онтогенезе // Физиолого-биохимические основы повышения продуктивности с.-х. животных.
/ Всерос. науч.-исслед. ин-т жив-ва. - Дубровицы,
1992. С. 96–99.
3. Гришин В.Н. Связь активности аминотрансфераз
с энергией роста кроликов // Акт. проблемы вет.
науки: Тез. докл. / Моск. гос. акад. вет. мед. и биотехнологии. М., 1999. С. 230–231.
4. Титов В.Н. Патофизиологические основы лабораторной диагностики печени // Клиническая лабораторная диагностика. 1996. № 1. С. 3–9.
5. Котович И.В., Баран В.П., Холод В.М., Бирман
Б.Я. Ферментные адаптации суточных цыплятбройлеров // Птицеводство Беларуси. 2002. № 3.
С. 14–16.
УДК 636.52/58-0.53.2:612.015.1
В.П. Баран, И.В. Котович, В.М. Холод (УО «Витебская ордена «Знак Почета»
государственная академия ветеринарной медицины», г. Витебск, Республика
Беларусь)
Б.Я. Бирман (РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии
им. С.Н. Вышелесского Национальной академии наук Беларуси», г. Минск,
Республика Беларусь)
АКТИВНОСТЬ ХОЛИНЭСТЕРАЗЫ
И ТРАНСАМИНАЗ В ТКАНЯХ
ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ В ПЕРВЫЙ МЕСЯЦ ЖИЗНИ
Холинэстераза (КФ 3.1.1.8) осуществляет гидролиз эфиров бутирилхолина и
ацетилхолина. Она продуцируется печенью (где синтезируется и откуда выделяется в сыворотку крови вместе с альбумином,
поскольку вырабатывается в одном с ним
Ветеринарная патология. № 2. 2005
локусе), постоянно обнаруживается в плазме (сыворотке), крови, присутствует также
в поджелудочной железе, в слизистой оболочке кишечника, в легких и в других органах. Уровень активности ХЭ используется как показатель синтетической актив59