Chloride Reagent Set Каталожный № HTI-С7501 Каталожные номера: Нитрат ртути 0,105 ммоль Тиоционат ртути 1,01 ммоль Нитрат железа 37,63 ммоль В растворенной кислоте с метанолом. HTI-С7501-125 HTI-С7501-500 HTI-С7501-1000 Предостережения Назначение Предназначен для количественного определения хлоридов в сыворотке крови. История метода В 1978 году хлориды определяли по преципитации анионов, таких как хлорид серебра, и определению избытка нитрата серебра со стандартизацией по тиоционатному раствору. С этого времени было предложено много методов, включая ртутное титрование с использованием в качестве индикатора дифенилкарбазона. Электрический метод впервые был представлен в 1950 году. Он основан на выделении в кислой среде электродами ионов серебра при воздействии хлорного раствора. Время, необходимое для образования преципитатов, например хлорида серебра, прямо пропорционально концентрации хлоридов в исследуемом образце. Настоящий метод был предложен в 1950 году и несколько позже был адаптирован для Technicon Auto Analyser. Это наиболее часто используемый метод, который адаптирован для многих автоматических анализаторов. Принцип метода Hg(SCN)2 + 2Cl3SCN- + Fe+3 HgCl2 + 2SCNFe(SCN)3 (красное окрашивание) Ионы хлора замещают тиоционат из неионизированного тиоционата ртути, при этом образуются хлориды ртути и ионы тиоционата. Образовавшиеся ионы тиоционата реагируют с ионами железа с формированием окрашенного комплекса, абсорбция измеряется при 480 нм. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации хлоридов в исследуемой сыворотке крови. Реагенты Реагент хлоридов (активные ингредиенты): 1. Только для in vitro диагностики. 2. Реагенты токсичны и обладают раздражающими свойствами. Избегать контакта реагентов с кожей и одеждой. В случае попадания реагентов на кожу или одежду промыть большим количеством воды. 3. Не набирать реагенты ртом. При необходимости – обратиться за медицинской помощью. Подготовка реагентов Реагенты полностью готовы к использованию Хранение реагентов Неоткрытый набор можно хранить при комнатной температуре. Избегать воздействия прямого солнечного излучения. Непригодные для анализа реагенты Не использовать реагенты если: Реагент имеет красно-коричневую окраску и/или есть мутность. Раствор должен быть прозрачным, иметь слабое светло-желтое окрашивание. Сбор и хранение образцов 1. Использовать свежие образцы сыворотки крови. 2. Не использовать гемолизированные образцы сыворотки крови, так как это может быть причиной получения ложно заниженных результатов. 3. Избегать попадания тканевой жидкости в кровь. 4. Хранить образцы сыворотки крови в пробирках с плотно закрытой крышкой. 5. Концентрация хлоридов в сыворотке крови стабильна в течение одного дня при комнатной температуре (18250С) и три месяца в холодильнике при -200С. Влияние других соединений 1. Наличие бромидов и флюоридов может быть причиной получения ложных завышенных результатов определения концентрации хлоридов. 2. Наличие липемичности и иктеричности в образцах сыворотки крови не влияет на результаты анализа. Chloride Reagent Set Каталожный № HTI-С7501 1. Реагент хлоридов 2. Бланк хлора 3. Стандарт хлора Материалы необходимые, но не поставляемые 1. 2. 3. 4. Автоматические пипетки Таймер Пробирки Биохимический анализатор, для измерения абсорбции при длине волны 460-550 нм с подходящей для анализа кюветой. Автоматический метод определения См. соответствующие инструкции к биохимическому анализатору. Ручной метод определения 1. Пометить соответствующие пробирки: «Бланк», «Стандарт», «Контроль», «Пациент». 2. Внести по 1,0 мл реагента хлоридов во все пробирки. 3. Внести в соответствующие пробирки по 10 мкл калибраторов и исследуемых образцов сыворотки крови. Перемешать. 4. Инкубировать в течение 5 минут при 18-250С. 5. Настроить спектрофотометр на «0» по воде при 480 нм (460-550 нм). 6. После инкубации измерить абсорбцию. 7. Высчитать концентрацию хлоридов в исследуемых образцах. См. «Подсчет результатов». Внимание: окрашивание стабильно в течение 30 минут. Калибровка 1. Реакция обладает линейностью в диапазоне 80-120 mEq/L. 2. Необходимо определить линейный диапазон на анализаторе до того, как будут проведены исследования. Для определения линейного диапазона нужно построить калибровочную кривую: на оси Х отложить концентрации в стандартах (80-120 mEq/L), на оси У – абсорбцию в соответствующих стандартах. Рекомендовано для этой процедуры использовать коммерческие стандарты/калибраторы. 3. После того, как определен линейный диапазон, для стандартизации реакции можно использовать только один стандарт, который входит в состав тест-набора. См. раздел «Подсчет результатов». Абсорбция. Материалы, входящие в состав набора Концентрация. Контроль качества Рекомендовано при каждом проведении серии анализов включать коммерческие контрольные сыворотки (патологические и нормальные) с известной концентрацией хлоридов. Рекомендовано в каждой лаборатории устанавливать свою частоту проведения контроля качества. Подсчет результатов Abs = абсорбция Abs неизв. обр. / Abs калибр. Х конц. калибр. = конц. хлоридов (mEq/l) Пример подсчета: Abs калибр. = 0,550, Abs неизв. = 0,450, тогда, 0,450/0,550Х100= 82 mEq/l Ограничения 1. Если в исследуемом образце предполагаемая концентрация хлоридов выше, чем 120 mEq/l мг/дл, то необходимо провести разведение: 1 объем исследуемой сыворотки на 1 объем дистиллированной воды. Полученные результаты необходимо умножить на 2. 2. Не дотрагиваться пальцами до наконечников пипеток, так как испарение хлоридов с кожи может влиять на результаты анализа. 3. Испарение соляной кислоты может быть причиной получения ложных завышенных результатов. Концентрация у практически здоровых лиц Хлориды (сыворотка крови) 88-106 ммоль/л. В каждой лаборатории необходимо устанавливать свои границы нормальных значений. Концентрация хлоридов у Chloride Reagent Set Каталожный № HTI-С7501 практически здоровых лиц варьирует в зависимости от характера питания, пола, возраста, времени суток, физической активности, менструального цикла, беременности и других факторов. Характеристики теста Линейность: 80-120 ммоль/л Сравнение Проведен корреляционный анализ результатов, полученных на данных тест-наборах и другого коммерческого тест-набора. Коэффициент корреляции составил 0,991, регрессионный анализ: у=1,01Х+0,11. Точность Внутри серии Среднее S.D. 97 0.9 111 1.2 C.V.% 0.9 1.1 От серии к серии Среднее S.D. 97 1.4 109 1.6 Произведено High Technology Inc. 109 Production Rd Walpole, MA 02081 USA Fax: 1 508 660-22-24 e-mail: [email protected] C.V.% 1.4 1.5