Адеметионин и препараты на его основе. Подтверждение подлинности и количественный хроматографический анализ. Введение Адеметионин часто называют активным метионином, поскольку является производным незаменимой серосодержащей кислоты метионина и аденозинтрифосфата. Он является предшественником незаменимых аминокислот и пептидов, включая цистеин, таурин и глутатион. Препараты на его основе применяют для восстановления функции клеток печени (как гепатопротектор), а также адеметионин используется как антидепрессант, в том числе в качестве биологически активной добавки к пище. Сам адеметионин не сохраняет стойкость в течение длительного времени и для его стабилизации используются различные растворы кислот и солей (органических полианионов) для образования стабильных солей адеметионина, например 1,4бутандисульфоната или п-толуолсульфоната. При образовании стабильных солей достигается еще одна цель - обеспечивается повышение содержания активного S-изомера (именно S-изомер имеет высокую фармакологическую активность). При производстве препаратов используются субстанции -S-аденозилметионин (внутренняя соль), S-аденозилметионина 1,4-бутандисульфонат и S-аденозилметионина дисульфат ди-п-толуолсульфонат. Известные способы получения устойчивых солей адеметионина включают использование токсичных реактивов, что не только требует сложной очистки, но также применение надежных методов контроля качества. К тому же известные соли адеметионина относительно нестабильны, что также требует контроля качества при транспортировке и хранении. Существует несколько распространённых методов качественного и количественного анализа адеметионина и его препаратов, из которых высокоэффективная жидкостная (ВЭЖХ) и ионная хроматографии (ИХ) наиболее информативны, поскольку позволяют не только надежно идентифицировать вещества, но и определить количественное содержание не только активного компонента, но и побочных продуктов и прочие примеси. Поэтому хроматографическое решение, изложенное в данной статье, будет интересным не только производителям субстанции и препаратов на его основе, но и контрольным лабораториям, чья задача оценить качество и подлинность лекарственных средств, представленных на отечественном рынке. В данной статье изложены вопросы идентификации (подтверждения подлинности) препаратов на основе адеметионина, а также определение чистоты субстанции и препарата, количественное определение активного вещества и противоионов методами ВЭЖХ и ИХ. (S)-5'-[(3-Амино-3-карбоксипропил)метилсульфонио]-5-дезоксиаденозин гидроксид (внутренняя соль). Наличие в молекуле адеметионина двух первичных и четырех третичных атомов азота обуславливает его основные свойства. Таким образом, молекула адеметионина может присоединить от одного до 6 протонов. Данное свойство используется для повышения стабильности адеметионина. Известно приготовление стабильных солей адеметионина с солями лития и других катионов. Данные соли стабильны до полугода. Адеметионин и препараты на его основе.docx стр 1 из 5 Более стабильные композиции адеметионина образуются с органическими веществами, в частности с сульфокислотами. Процесс получения данных солей является относительно несложным, соотношение адеметионина к сульфокислоте равно 1:3. Адеметионина п-толуолсульфат дисульфонат. (S–(5´ аденозил)-L-метионин п-толуолсульфат дисульфонат) Двойная соль адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой. Адеметионина 1,4-бутандисульфонат (S-аденозил-L-метионина 1,4-бутандисульфонат). Наиболее распространенная на рынке солевая форма адеметионина. ВЭЖХ определение адеметионина и побочных продуктов На хроматограмме (рис 1.)представлено разделение следующих веществ: Adenine - Аденин SAO – S-аденозил-L-гомоцистеин PSSD4 - Адеметионина 1,4-бутандисульфонат MTA – Метилметионин DecaSAMe – декарбоксилированная форма S-аденозил-L-метионина Разделение осуществлено с использованием утра-ВЭЖХ системы UltiMate3000 RSLC и 2-х микронной колонки Acclaim PA2, отличительной особенностью которой является разделение веществ, как кислотной, основной, так и нейтральной природы и работа в самом широком диапазоне рН от 1.5 до 10. Высокоэффективное изократическое разделение смеси и детектирование на УФ-детекторе при 260 нм позволяет выполнить полный анализ на чистоту преперата и колличественное определение активного вещества всего за 3 минуты. Адеметионин и препараты на его основе.docx стр 2 из 5 Рис.1 Ионохроматографическое определение противоионов в препаратах адеметионина Около половины всех фармпрепаратов производится в виде солевых форм. Образование фармацевтической соли – это крайне важный шаг в разработке стабильного лексредства, с пониженной токсичностью и гигроскопичностью. Хотя доля солей сульфокислот как противоионов активных инградиентов не столь велика, по сравнению с другими солевыми формами, их использование увеличивается в разы за последние двадцать лет. Определение концентрации противоионов в субстанции необходимо для установления стехиометрии, правильной молекулярной массы вещества и полноты образования солевой формы. Не менее важно по противоиону подтверждать подлинность субстанции. Ионная хроматография зарекомендовала себя как надежный, чувствительный и селективный метод определения широкого круга как неорганических, так и органических ионов в различных объектах, включая фармацевтические средства. Весь накопленный опыт этого метода демонстрирует его способность определять противоионы, примеси и продукты деградации ионного характера в различных субстанциях и готовых лекарственных формах. Ионохроматографическое определение 1,4-бутандисульфоновой кислоты (в виде 1,4бутандисульфоната) и других сульфокислот. Существует как минимум два детально отработанных варианта определения 1,4бутандисульфоната. Вариант с ион-парной хроматографией в сочетании с кондуктометрическим детектированием с подавлением фонового сигнала осуществлен на колонке IonPac NS1. Данная колонка является полимерной обращенно-фазной колонкой, специально предназначенной для ион-парных разделений высокомолекулярных органических веществ ионной природы таких, как органические кислоты и сульфоктанты, чье разделение по ионо-обменному механизму не Адеметионин и препараты на его основе.docx стр 3 из 5 всегда осуществимо. На рис.2 приведена хроматограмма разделения алифатических сульфокислот с использованием тетрабутиламоний гидроксида в качестве ион-парного реагента. Где 1- метансульфоновая кислота, а 7декансульфоновая кислота. Рис.2. Поскольку сульфокислоты, как правило, являются сильными кислотами, в воде они полностью диссоциируют с образованием сульфонатов, которые в свою очередь можно разделить по ионо-обменному механизму и продетектировать на кондуктометрическом детекторе с подавлением фонового сигнала элюента. Т.о. второй вариант определения сульфокислот – ионная хроматография с подавлением. Здесь, в свою очередь также возможны два варианта – непосредственно определение сульфокислот и определение сульфокислот в лекарственных формах с предварительным удалением матрицы. На рис.3 приведен вариант прямого определения 1,4бутандисульфоната с использованием ионообменной колонки IonPac AS9-SC и кондуктометрического детектора с мембранным саморегенерируемым подавителем ASRS. Элюент 5 мМ NaCO3/1,8 mM NaHCO3, скорость 2 мл/мин, объем инжекции 100мкл. Пики: 1 -1,4-бутандисульфонат; 2- 1,2-этандисульфонат (вн. стандарт). Рис.3. Однако для контроля качества готовых лекарственных форм возможно интересным решением будет использование автоматической пробоподготовки (удаление матрицы) для определения сульфокислот в составе препарата. Для экстракции сульфокислоты из сухого препарата обычно используют смесь вода:метанол 20:80. Для этого 25 мг образца тщательно растворяют в 250 мл экстрагента для получения раствора препарата с концентрацией 10 мг/л. Полученный экстракт фильтруют через 0,45 мкм шприцевой фильтр до инжекции в ионный хроматограф. В качестве колонки для удаления матрицы используется IonPac NG1 колонка, которая удерживает водонерастворимые гидрофобные компоненты экстракта и пропускает через себя водорастворимые, такие как сульфокислоты. Которые, в свою очередь, поступают на аналитическую анионообменную колонку для разделения и детектирования на кондуктометрическом детекторе с подавлением. Адеметионин и препараты на его основе.docx стр 4 из 5 На рис.4 приведены хроматограммы определения п-толуолсульфоната в составе лекарственной формы с использованием ионообменной колонки IonPac AS22* и кондуктометрического детектора с мембранным саморегенерируемым подавителем ASRS. Элюент 4,5 мМ NaCO3/1,4 mM NaHCO3, скорость 1,2 мл/мин, объем инжекции 25мкл. Хроматограммы: А- бланк, В-стандарт 20 мг/л, Собразец лекарственной формы 1, D- образец лекарственной формы 2. Рис.4. Использование колонки AS9-SC дает схожие аналитические результаты. * Для дополнительной информации и/или запроса коммерческого предложения, просим обращаться по адресу: Представительство Abacus Analytical Systems GmbH, Рыбаковой Е.В. Россия, Москва, 127106, Гостиничный пр-д, д.4Б, оф.413 Тел.: (495) 726 5540 Факс: (495) 726 5541 Email [email protected] www.abacus-lab.ru Адеметионин и препараты на его основе.docx стр 5 из 5