Патогенные свойства штаммов грибов рода Candida при

38
Тема номера: ПУЛЬМОНОЛОГИЯ. АЛЛЕРГОЛОГИЯ
4. Елисютина О. Г. Роль Staphylococcus aureus в патогенезе атопического дерматита / О. Г. Елисютина, Е. С. Феденко // Российский аллергологический журнал. — 2004. — № 1. — С. 17-20.
5. Микрофлора слизистой носа при аллергическом круглогодичном и
инфекционном ринитах / Э. Е. Романенко, А. П. Батуро, А. М. Мокроносова [и др.] // Журнал микробиологии и эпидемиологии. — 2003. — № 3. —
С. 66-71.
6. Leung, D. Y. M. Role of Staphylococcus aureus in atopic dermatitis /
‘4 (23) октябрь 2007 г.
D. Y. M. Leung // Atopic dermatitis edited by T. Bieber, D. Y. M. Leung, MarcelDekker, Inc. New-York-Basil, 2002, № 7. — P. 410-418.
7. Prevalence of producers of enterotoxins and toxic schock syndrome toxin1 among Staphylococcus aureus strains isolated from atopic dermatitis lesions
/ H. Akiyama, Y. Toi, H. Kansaki [et al.] // Arch. Dermatol. Res. — 1996. — Vol.
288, № 7. — P. 418-420.
8. Коротяев А. И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. — СПб.: Спецлит., 1998. — 580 с.
Патогенные свойства штаммов грибов рода
Candida при инфекциях верхних дыхательных
путей
С. А. ЛИСОВСКАЯ, Н. И. ГЛУШКО, Е. В. ХАЛДЕЕВА,
ФГУН Казанский НИИЭМ Роспотребнадзора, Казань
Инфекции верхних дыхательных путей и слизистых зева обычно возникают и развиваются в условиях микробных ассоциаций,
связанных с наличием у больных носительства условно-патогенных микроорганизмов, в том числе и грибов рода Candida. В процессе обычных схем лечения широко применяются антибиотики
избирательного или широкого спектра действия. Их вмешательство в отношения микробов — ассоциантов может привести к подавлению роста бактерий и размножению грибов рода Candida,
которое способствует развитию микозов. В последнее время во
всех странах мира отмечается неуклонный рост числа заболеваний, вызванных грибами рода Candida. Принято считать, что
в патогенезе кандидозной инфекции решающую роль играет
состояние макроорганизма. Однако в связи с широким распространением грибов и способностью их в определенных условиях
проявлять свой патогенный потенциал возникает необходимость
в изучение факторов грибковой агрессии; что поможет правильно
оценить значимость грибов в этиологии заболеваний зева и верхних дыхательных путей [1].
Существуют два основных аспекта взаимодействия дрожжеподобных грибов с макроорганизмом: адгезия к клеткам и тканям
и иммуномодуляция иммунного ответа.
Адгезивность является одним из основных факторов, определяющих поведение микроорганизмов в биоценозах, и она же
определяет способность их перехода к паразитическому образу
существования. Известно, что колонизация организма грибами
рода Candida, в отличие от кандиданосительства, обусловлена
адгезией клеток гриба к эпителию, где основную роль выполняют адгезины клеточной стенки, представленные в частности,
маннопротеинами клеточной стенки, осуществляющих как специфическое, так и неспецифическое связывание. Антигенами
у грибов рода Candida, на долю которых приходится основная
роль в формировании иммунного ответа, также являются высокомолекулярные комплексы маннопротеинов, равномерно распределенные по всей поверхности клеточной стенки [2].
В связи с вышеизложенным, интерес представляет изучение
частоты распространения грибов рода Candida на слизистой оболочке миндалин и зева, а также определение степени патогенности данных грибов на основании исследования двух основных
факторов вирулентности (уровень адгезии и количество маннопротеидных антигенов).
Материалы и методы
Обследовано 214 человек, в том числе 187 больных с хроническим течением заболеваний и в период обострения и 27 клинически здоровых лиц — контрольная группа.
Материал для исследования брали с помощью стерильного
ватного тампона с последующим смывом дистиллированной водой по периметру наиболее свежих поражений. Затем тампон помещали в стерильную пробирку с 2 мл дистиллированной воды.
Посев смыва проводился на агаризованную среду Сабуро в две
чашки Петри, причем в одну чашку добавлялся стрептомицин
в количестве 70 ед./мл среды. Расчет численности клеток Candida
spp. в смыве производили с 1 тампона на 1 мл дистиллированной
воды. Идентификацию грибов проводили микроскопическими
и биохимическими методами, проводили тесты на трубки прорастания и хламидоспоры, ферментацию углеводов [3].
Исследовали 48-часовые культуры C. albicans, выращенные
на среде Сабуро при температуре 30 °С. Определение адгезивных
свойств выделенных штаммов C. albicans проводилось по ранее
разработанной авторами модели адгезии клеток гриба на нитроцеллюлозную пленку с иммобилизированным гемоглобином [4].
Полученную пленку площадью 7 см2 инкубировали при температуре 30 °С с 3 мл суспензии клеток гриба в 0,1 М фосфатном
буфере в течение двух часов. Определение уровня адгезии проводили по разнице начальной и конечной оптической плотности
суспензии клеток, а также прямым подсчетом клеток в суспензии
с помощью микроскопа Биолам Р-11 при увеличении 10 х 20, подсчитывали не менее 10 полей зрения.
Определение количества антигена (АГ) проводили с помощью
амперометрического иммуноферментного сенсора [5], в состав
биочувствительной части которого входят антитела к антигену
С. albicans и фермент бутирилхолинэстераза.
Результаты и их обсуждения
Микологическое исследование показало доминирующее положение четырех основных видов рода Candida: C. albicans (82%),
C. parapsilosis (9%), C. tropicalis (6%), C. krusei (3%) (рис. 1.). На
слизистой оболочке зева у больных с хроническими воспалительными процессами, грибы рода Candida в ассоциациях с гемолитическими или зеленящими стрептококками и стафилококками
определялись в 44,2% случаев. В период обострения хронического заболевания количество грибов в этих ассоциациях возрастало
до 73,2%. В контрольной группе грибы высевались лишь в 12,3%
случаев, причем всегда в незначительном количестве.
Обсемененность дрожжеподобными грибами слизистых зева
у больных в период обострения заболевания составила 1х105
КОЕ/мл, у больных с хроническим течением заболевания —
1х103 КОЕ/мл. По видимому, значительное число клеток Candida
spp. в зеве объясняется хроническим течением заболевания при котором на фоне сниженного иммунологического реагирования имеет
‘4 (23) октябрь 2007 г.
Тема номера: ПУЛЬМОНОЛОГИЯ. АЛЛЕРГОЛОГИЯ
место изменение видового состава микробиоценозов организма. Некоторые авторы считают что такие условия способствуют усилению
вирулентности и повышению ферментативной активности грибов,
которые в свою очередь, отягощают основное заболевание [6].
Также исследования микрофлоры слизистых зева показали преобладание среди грибов вида С. albicans, который в свою
очередь по мнению многих исследователей обладает широким
спектром патогенных свойств. В связи с этим, в дальнейшем, изучение свойств патогенности грибов проводились на штаммах
С. albicans.
Исследовано 127 штаммов С. albicans из них 118 штаммов выделенных от больных с хроническим течением заболевания и в
период обострения и 9 клинически здоровых лиц — контрольная
группа.
В результате исследования адгезивности клеток показано, что
все штаммы обладали способностью к адгезии. Максимальный
процент адгезии (до 64%) отмечался у штаммов, выделенных
у больных в период обострения хронического заболевания, вне
стадии обострения — в 2,1 раза меньше. Минимальный процент
адгезии был отмечен у штаммов, выделенных от клинически здоровых лиц. Таким образом, степень проявления адгезивных свойств
гриба коррелировала с длительностью и тяжестью заболевания
(рис. 2). Полученные результаты свидетельствуют о повышении
уровня адгезии штаммов гриба при развитии кандидоза. Низкий
уровень адгезии (менее 7%) и небольшое число клеток менее 1х102
КОЕ/мл, выделенных при посеве, позволили трактовать наличие
гриба как кандиданосительство или контаминацию.
Рис. 1. Виды грибов рода Candida встречаемые
в ротовой полости.
Согласно литературным данным, наиболее активные штаммы
обладают способностью проникать в межклеточное пространство
и выделять антигены с иммуномодулирующими свойствами. Наличие антигена в биологических жидкостях свидетельствует об
инвазивном характере процесса и в последнее время рассматривается в качестве важного диагностического критерия при кандидозе.
В связи с этим в ходе дальнейших исследований мы измеряли количество антигенов (АГ), выделяемых данными штаммами.
При сравнении количества АГ у штаммов, выделенных из ротовой
полости от больных с клиническими проявлениями заболевания
и от лиц-кандиданосителей, было обнаружено, что содержание
АГ в клетках у штаммов, выделенных из зева больных было в три
раза выше, чем у предположительно непатогенных штаммов кандиданосителей (115,7х10-10 и 43,6х10-10 мг/мл соответственно).
Обнаружена положительная корреляция между уровнем адгезии клеток гриба и количеством антигена в штаммах C. albicans.
Штаммы с более высоким уровнем адгезии содержат и выделяют в среду количество антигена в 30 раз больше, по сравнению
со штаммами с низким уровнем адгезии (содержание в клетках
115,7х10-10 и 0,99х10-10 мг/мл соответственно; в среде 100х10-3 и 5,75х10-3 мг/мл соответственно).
Изученные факторы патогенности характеризуют не только
уровень патогенности гриба, но и тяжесть проявления заболе-
39
Рис. 2. Уровень адгезии штаммов C. albicans,
выделенных со слизистых ротовой полости
Примечания:
1 — Штаммы, выделенные от больных в период обострения
хронического заболевания.
2 — Штаммы, выделенные от больных
с хроническим течением заболевания.
3 — Штаммы, выделенные от клинически здоровых лиц.
вания. Так, при более выраженных патогенных свойствах гриба
(высокой адгезивной способности, повышенным уровнем антигена в клетке), заболевание имеет более яркую клиническую картину и характеризуется острым течением.
Следует учитывать, что при остром инфекций зева и верхних
дыхательных путей лечение больного обычно успешно протекает
по известным схемам антибактериальной терапии, в то время как
при хроническом течении заболевания слизистых зева, в условиях микробных ассоциаций достаточно трудно правильно оценить
этиологическую роль гриба. В связи с этим необходимо проведение лабораторной диагностики, позволяющей дифференцировать грибковую инфекцию и нормальное пребывание грибов
на слизистых. Изучение патогенных свойств грибов позволяет
решить эту задачу и делает возможным правильно оценить роль
гриба в инфекционном процессе.
Однако грань между транзиторным кандидоносительством и
кандидозом остается весьма тонкой. Представляется полезным
санирование кандидоносителей, особенно — в группах риска при
выявлении штаммов с повышенными адгезивными свойствами и
высоким содержанием антигена в клетке [7].
Литература
1. Реброва Р. Н. Грибы рода Candida при заболеваниях негрибковой этиологии. — М., Медицина, 1989. С. 123.
2. Сергеев А. Ю.; Сергеев Ю. В. Кандидоз. — М.: Триада-Х, 2000. — 472 с.
3. Аравийский Р. А., Климко Н. Н., Васильева Н. В. Диагностика микозов. — Санкт-Петербург: Издательский дом СПбМАПО, 2004. — С. 186.
4. Лисовская С. А., Глушко Н. И., Халдеева Е. В. Лабораторная модель
для определения адгезивных свойств дрожжеподобных грибов. // Проблемы медицинской микологии. — 2006. — Т. 8, № 3. — С. 36-39.
5. Кутырева М. П., Халдеева Е. В., Медянцева Э. П., Глушко Н. И.,
Будников Г. К. Определение антигена Candida albicans с помощью амперометрического иммуноферментного сенсора. // Вопросы медицинской химии. — 1998. — Т. 44, № 2. — С. 172-178.
6. Мавлянова Ш. З., Баженов Л. Г. Некоторые виды Candida, выделенные в Узбекистане, от пациентов с заболеваниями кожи и слизистых
оболочек. // Проблемы медицинской микологии. — 2001. — Т. 3, № 3. —
С. 26-27.
7. Шевяков М. А. Кандидоз слизистых оболочек пищеварительного
тракта (лекция). // Проблемы медицинской микологии. — 2000. — Т. 2,
№ 2. — С. 6-10.