ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА БЕЛКОВ СЫВОРОТКИ НА АГАРОЗЕ

135 мл этанола 96 %
37.5 мл уксусной кислоты 80 %
127.5 мл дистиллированной
воды
Фиксирующий раствор должен быть подготовлен в течение 15 мин.
перед использованием.
Стабильность: 3 месяца при комнатной температуре в плотно
закрытом флаконе.
5 гелей могут быть обработаны с 300 мл фиксирующего раствора.
Примечание: Различные концентрации уксусной кислоты и/или
этанола также могут быть использованы (например, уксусная
кислота 80%, этанол 70%). Тем не менее, пропорции реагентов и
дистиллированной воды, используемой для приготовления
фиксирующего раствора, должны быть изменены для того, чтобы
сохранить количественный состав фиксирующего раствора
постоянным.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ НАБОР
ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА БЕЛКОВ
СЫВОРОТКИ НА АГАРОЗЕ
6-048, GEL PROTEIN 100
Каталог. №
: 6-048
Производитель: Cormay (Польша)
Методика от 10-2008
Основой при проведении анализа является оригинал
инструкции на английском языке, вложенной в набор.
Номер и дата версии оригинала и перевода
инструкции должны совпадать.
Название набора
CORMAY GEL PROTEIN 100
Состав набора
100 разделений
Агарозные гели: готовы к использованию.
Предупреждения и примечания
ƒ
Продукт предназначен только для использования в in-Vitro
диагностике.
ƒ
Во время электрофореза, буфер может окраситься в цвет от
желтого до коричневого со слегка коричневым осадком без
каких-либо побочных эффектов на его продуктивность.
ƒ
Реагент буфера Трис-барбитала классифицируется как
токсичный!
Состав: барбитал, натрий барбитал, азид натрия
T - Токсичный.
R 22-42/43-61 – оказывает токсическое действие при
попадании в пищеварительную систему. Может вызывать
аллергические реакции при попадании в организм через
дыхательную систему или воздействии на кожу. Может оказывать
вредное действие на плод в чреве матери.
S 1-36/37/39 - Хранить под замком. Носить соответствующую
защитную одежду, перчатки и защиту для глаз/лица.
ƒ
Реагент Amido черный раствор классифицируется как
коррозийный!
Состав: уксусная кислота
C - Едкий.
R 34 - Вызывает ожоги.
S 23-26 - Не вдыхать пары/испаряющуюся жидкость. В случае
попадания в глаза немедленно промыть большим количеством воды
и обратиться к врачу.
Кат. №
6-048
ВВЕДЕНИЕ
Набор CORMAY GEL PROTEIN 100 предназначен для
электрофоретического разделения белков сыворотки на агарозе.
Это позволяет получить шесть фракций сывороточного белка:
- альбумин,
- альфа-1 глобулины,
- альфа-2 глобулины,
- бета-1 глобулины,
- бета-2 глобулины,
- гамма глобулины.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Электрофорез белка представляет собой хорошо отработанную
технику, использующуюся в клинических лабораториях для
скрининга сыворотки. Она основана на принципах зонального
электрофореза, выполненных на подходящей среде поддержки.
Разделенные белки закреплены в смеси кислота/спирт и окрашены
раствором черного amido красителя. Избыток красителя удаляется с
раствором кислоты. Окрашенные электрофоретические разделения
могут быть оценены визуально для шаблона аномалии или с
помощью денситометрии чтобы получить точные определения
относительного количества отдельных зон.
ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ
ƒ
Источник питания и камера для электрофореза производства
фирмы Cormay или система для электрофореза фирмы
Beckman;
ƒ
ледяная уксусная кислота, 96% этанол для приготовления
фиксирующего раствора;
ƒ
общее лабораторное оборудование.
УПАКОВКА
Агарозный гель (пластины с агарозой)
Буфер Трис-Барбитал (концентрированный)
Красящий раствор AMIDO чёрный
(концентрированный)
Обесцвечивающий раствор (концентрированный)
Промокательная бумага
Шаблон для внесения образца
CORMAY GEL PROTEIN
100
10 штук
3 х 100 мл
1 х 100 мл
1 х 100 мл
20 штук
10 штук
БИОЛОГИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ
Сыворотка крови, разбавленная рабочим раствором буфера в
соотношении: 1 часть сыворотки + 6 частей буфера. Не
разбавленную сыворотку можно хранить при температуре 2-8 °C до
3 дней. Сыворотку необходимо развести непосредственно перед
использованием.
Хранить при комнатной температуре в горизонтальном положении
(гель вверх ногами), плотно закрытым. Не замораживать!
Подготовка реагентов
Буфер: 1 флакон концентрированного буфера (Трис-Барбитал)
необходимо разбавить до 1000 мл дистиллированной водой.
После разбавления буфер, хранящийся при комнатной температуре,
стабилен до окончания срока годности, указанного на флаконе.
ПРОВЕДЕНИЕ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
1. Влить по 150 мл (Cormay CU-1, Cormay S20) или по 45 мл
(Beckman) разбавленного буфера в каждую часть камеры.
2. Осторожно вынять гель из пакета, не касаясь его поверхности,
и поместить его на листе бумаги или пресс-папье.
Во избежание высыхания геля и связанных с этим
аналитических
проблем
рекомендуется
вскрывать
упаковку
из
фольги
непосредственно
перед
употреблением, когда все оборудование готово к
использованию
и
сыворотки
разбавлены
соответствующим образом.
3. Осушить место нанесения проб путем быстрого приложения
бумажной полоски. Влажную бумагу тут же осторожно удалить.
4. На осушенном месте расположить фольгу для нанесения проб
(размещая две ее крайние щели к соответствующим двум
отметкам на пластинке), легко прижимая её к основанию и
разглаживая пальцем. Фольга должна плотно прилегать к
гелю!
5. Отпипетировать 5 мкл разбавленной сыворотки в каждый
вырез фольги и оставить на 5 мин, считая с момента нанесения
последней пробы
6. Удалить избыток сыворотки полоской бумаги.
7. Осторожно снять фольгу.
Красящий раствор: 1 флакон концентрированного раствора
черный)
необходимо
разбавить
до
300
мл
(AMIDO
дистиллированной водой.
После разбавления красящий раствор, хранящийся при комнатной
температуре, стабилен до окончания срока годности, указанного на
флаконе.
10 гелей могут быть окрашены с 300 мл разбавленного красящего
раствора.
Обесцвечивающий раствор: 1 флакон концентрированного
обесцвечивающего раствора необходимо разбавить до 10 литров
дистиллированной водой (или 10 мл до 1000 мл).
Стабильность: 1 месяц при комнатной температуре.
Фиксирующий раствор: смешать
135 мл этанола 96 %
30 мл ледяной уксусной
кислоты
135 мл дистиллированной
воды
или
1 8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Согнуть пластинку с агарозой и поместить её в камеру гелем
вниз, чтобы места нанесения сывороток находились от стороны
катода.
Закрыть камеру крышкой.
Проводить электрофорез в течение 20 мин. при напряжении
100 В (Cormay CU-1, Cormay S20) или в течение 15 мин. при
напряжении 100 В (Beckman).
После окончания электрофореза вынять пластинку и погрузить
её в раствор фиксатора на 15 мин. в вертикальном
положении.
Сушить пластинку в сушилке при температуре до 80 °С или в
струе жаркого воздуха.
Погрузить пластинку в краситель на 10 минут, затем
обесцвечивать её в 2 - 3 последовательных ваннах
обесцвечивающим раствором.
Обесцвеченную пластинку полоскать дистиллированной водой
и высушить в сушилке или с помощью горячего воздуха при
температуре до 80 °C.
Интерпретация может быть сделано визуально или с помощью
денситометра.
При необходимости очистите обратную сторону пластины с
мокрой бумагой.
СРЕДНИЕ ЗНАЧЕНИЯ
альбумины
50 - 62 %
альфа-1 глобулины
2.5 - 6.0 %
альфа-2 глобулины
6 - 12 %
бета-1 глобулины
5 – 10 %
бета-2 глобулины
3 – 7.5 %
гамма-глобулины
12 – 22 %
Рекомендуется для каждой лаборатории установить собственные
нормы для данной популяции.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ƒ
Воспроизводимость
Белковая фракция
альбумины
альфа-1 глобулины
альфа-2 глобулины
бета-1 глобулины
бета-2 глобулины
гамма-глобулины
ƒ
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
CORMAY GEL PROTEIN 100 позволяет отчетливо разделить белки
сыворотки крови на 6 фракций. Благодаря высокой разрешающей
способности пластинок CORMAY GEL PROTEIN 100 можна выявить
присутствие моноклональных белков, главным образом в зоне
гамма, а также бета.
Для подтверждения присутствия
моноклональных белков и их идентификации следует применять
метод иммунофиксации.
Воспроизводимость
в геле
CV %
1,0
4,3
2,2
2,9
3,8
2,3
Воспроизводимость
между гелями
CV %
3,0
5,4
3,4
5,9
7,0
3,7
Чувствительность/Предел обнаружения: чувствительность
определяется как наименьшая плотность белков, которая
видна в виде полоски, - 0.03 г/л на полоске.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
В соответствии с локальными требованиями.
Пример разделения белков сыворотки:
ОФИЦИАЛЬНЫЙ ДИСТРИБЬЮТОР
ООО «ДИАМЕБ»
ул.Чорновола, 97
г. Ивано-Франковск, 76005
тел.: +38 (0342) 775 122
факс: +38 (0342) 775 123
e-mail: [email protected]
www.diameb.com
1 - альбумин
2 - альфа-1 глобулины
3 - альфа-2 глобулины
4 - ß-1 глобулины,
5 - ß-2 глобулины,
6 – γ- глобулины.
Пример денситограммы белков сыворотки:
Фракция:
АЛЬБУМИНЫ
АЛЬФА-1 ГЛОБУЛИНЫ
АЛЬФА-2 ГЛОБУЛИНЫ
БЕТА-1 ГЛОБУЛИНЫ
БЕТА-2 ГЛОБУЛИНЫ
ГАММА-ГЛОБУЛИНЫ
Про.[%]
55.75
3.41
8.19
8.17
4.61
19.88
© Перевод на русский язык ООО «ДИАМЕБ»
2