Диагностика инфекционных болезней импортируемых в Россию

ВЕТЕРИНАРИЯ
Диагностика инфекционных болезней
импортируемых в Россию свиней
Василий Ковалишин, ведущий научный сотрудник лаборатории диагностики особо опасных инфекций, ФГУ ВНИИЗЖ
С 2005 года свиноводческие хозяйства России интенсивно закупа!
ют племенных свиней зарубежной селекции из Канады и европей!
ских стран.
Согласно ветеринарным требованиям, к ввозу в Российскую Федерацию
допускаются здоровые племенные свиньи, рожденные и выращенные в стране-экспортере, не вакцинированные
против классической чумы свиней
(КЧС) и болезни Ауески (БА). В период
карантина страна-экспортер проводит
диагностические исследования в государственной ветеринарной лаборатории на КЧС, репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС), бру44 «Аграрное обозрение» № 5 (39) 2013 год
целлез, БА, хламидиоз, вирусный трансмиссивный гастроэнтерит (ВТГС), туберкулез, везикулярную болезнь свиней
(ВБС), парвовирусную инфекцию
(ПВИС), атрофический ринит и, по
требованию импортера, на другие инфекционные болезни. К ввозу в Россию
допускаются только те племенные животные, которые показали отрицательные результаты во всех диагностических тестах. Несмотря на это, некоторые хозяйства уже в России проводят
выборочные исследования сывороток
крови от закупленных животных на наличие антител к перечисленным патогенам и некоторым другим инфекционным агентам, не входящим в утвержденный список.
Задачей ветеринарных лабораторий
Российской Федерации является проведение мониторинга как по вышеуказанным инфекциям, так и по другим
заболеваниям, актуальным как для
Российской Федерации, так и для
стран – экспортеров племенных свиней. Для этих целей необходимо проводить достоверные широкомасштабные лабораторные исследования, направленные на обнаружение широкого
спектра инфекционных агентов, актуальных для свиноводства.
Проводить такие лабораторные исследования районными, областными и
республиканскими ветеринарными лабораториями не всегда представляется
возможным из-за слабого технического оснащения лабораторий, низкого
уровня квалификации специалистов, а
также из-за отсутствия стандартных
единых тест-систем для всех лабораторий Российской Федерации.
В нашем центре за последние годы
проведена большая работа по разработке и совершенствованию современных высокочувствительных и высокоспецифичных тест-систем ПЦР и ИФА.
В настоящее время в центре разработана и применяется комплексная лабораторная диагностика, включающая
как традиционные, так и современные
тест-системы. Однако в качестве базовых методов используются ПЦР-секвенирование и ИФА (схема).
Для проведения мониторинга по инфекционным болезням импортируемых в Россию свиней разработаны и
используются около 40 ПЦР тест-систем.
Перечень инфекционных агентов бо!
лезней свиней, тестируемых во ВНИ!
ИЗЖ методами ПЦР!секвенирования:
Вирус ящура
Вирус ВБС
Вирус КЧС
Вирус болезни Ауески
Вирус РРСС
www.agroobzor.ru
ВЕТЕРИНАРИЯ
Парвовирус
Коронавирусы
Вирус ТГС
Вирус ЭДС
Респираторный коронавирус
ГА-коронавирус
Энтеровирусы, в том числе:
Болезнь Тешена
Цирковирусы
Аденовирусы
Вирус гриппа
Вирус ЭМК
Цитомегаловирус (ЦМВ)
Лимфотропный герпесвирус (ЛГВ)
Вирус гепатита Е
Ротавирус
Вирус оспы
Pasteurella multocida
Haemophilus parasuis
Actinobacillus pleuropneumoniae
Микоплазмы, в том числе:
M. hyorhinis
M. hyopneumoniae
Erysipelothrix rhusiopthiae
Уреаплазмы
Хламидиии
Колибактерии
Clostridium perfringes
Сальмонеллы
Стрептококки
Стафилококки
Clostridium difficile
Лептоспиры
Листериии
Бордетеллы
Актиномицеты
Lawsonia intracellularis
Простейшие
Некробактерии
А также около 20 тест-систем ИФА
Перечень инфекционных заболеваний
свиней, тестируемых во ВНИИЗЖ се!
рологическими методами (ИФА и др.):
Ящур
ВБС
КЧС
РРСС
Цирковирус-2
Болезнь Ауески
Грипп
ПарвоВИС
РотаВИС
КоронаВИС (респират.)
ТГС, ЭДС
Гепатит Е
Пастереллез
Сальмонеллез
Актинобациллез
Гемофилез
Микоплазмоз (М. hyopneumoniae)
Лептоспироз
Хламидиоз
ПЦР является высокочувствительной и высокоспецифической реакцией, способной обнаружить инфекwww.agroobzor.ru
Схема комплексной лабораторной диагностики в ФГУ ВНИИЗЖ
Схема исследования патматериала на наличие бактерий семейства Pasteurellaceae
Определение типа капсульного антигена Pasteurella multocida методом мультиплексной ПЦР
45 «Аграрное обозрение» № 5 (39) 2013 год
ВЕТЕРИНАРИЯ
Диаграмма 1. Частота выявления инфекционных агентов у свиней с респираторным
синдромом
Диаграмма 2. Частота выявления инфекционных агентов у свиней с диарейным синдромом
ционный агент в концентрации, которую невозможно обнаружить другими
традиционными методами.
Секвенирование. Сущность метода
заключается в изучении генетической
характеристики инфекционного агента и используется для определения видовой и штаммовой принадлежности
патогена, а также для определения
происхождения агента и источника
инфекции.
Для ускорения лабораторной диагностики в центре разработаны и широко используются мультиплексная
ПЦР, сущность которой заключается в
одновременном определении нескольких инфекционных агентов в одной
пробе.
Мультиплексная ПЦР также используется для определения типовой и видовой принадлежности бактерий.
Для определения роли патогенов в
инфекционной патологии необходимо
определять патогенные свойства и
концентрацию инфекционных агентов. Патогенные свойства ряда бактерий (Е.coli, Clostridium perfringens,
стрептококки и др.) определяются с
помощью мультиплексной ПЦР, направленной на обнаружение факторов
патогенности (токсинов Sta, STb, LT и
адгезинов F41, K88, K99 и других).
Для определения концентрации инфекционных агентов разработаны и
используются количественные ПЦР
тест-системы (ПЦР в режиме реального времени).
С помощью разработанных тест-систем проведены лабораторные исследования более 4000 проб патматериала
от свиней разных возрастных групп с
респираторной, диарейной и репродуктивной патологией, результаты
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СЫВОРОТОК КРОВИ ОТ ИМПОРТИРОВАННЫХ ПЛЕМЕННЫХ СВИНЕЙ НА НАЛИЧИЕ АНТИТЕЛ
К РАЗЛИЧНЫМ ИНФЕКЦИОННЫМ АГЕНТАМ
Страна)экспортер
КЧС
Канада
Франция
Австрия
Польша
Ирландия
Венгрия
Дания
Англия
Германия
Чехия
Литва
Испания
Эстония
Всего проб
Положительных
РРСС
2319/0 2616/0
352/0 657/0
20/0
)
1258/0 1585/0
20/0
737/0
265/0
)
5318/0 6282/0
170/0 250/0
1253/0 1576/0
257/0 277/0
29/0
126/0
)
183/0
83
87
11344
14376
0%
0%
БА
Тест)система ИФА
ЦВС)2
ТГС
РКВС
2306/0
386/0
)
794/0
4821/0
)
5441/0
152/0
1339/0
182/0
126/0
183/0
87
15817
0%
805/477 1120/0 476/249
694/416 46/0
46/0
20/17
20/0
20/9
1132/689 259/0 259/247
76/38
)
)
110/59
)
)
370/189
45/0
45/8
211/112
70/0
70/41
175/111
)
)
73/63
)
)
126/61
)
)
)
)
)
87/79
)
)
3879/2311 1580/0 916/554
59,6%
0%
60,5%
Грипп
Н1N1
Н3N2
98/17
98/23
23/8
11/0
)
)
)
)
)
)
)
)
)
)
36/0
)
)
)
)
)
)
)
)
)
)
)
121/25
109/23
20,6%
21,0%
M.hyopn.
АПП
1018/1
391/0
1556/30
92/0
)
)
1218/3
)
)
92/79
)
90/70
1235/152
46/12
261/114
94/2
291/27
23/6
102/0
79/8
126/56
62/61
266/164
)
)
)
6073/547 969/168
9,0%
17,3%
Примечание: исследованных/положительных сывороток
46 «Аграрное обозрение» № 5 (39) 2013 год
www.agroobzor.ru
ВЕТЕРИНАРИЯ
которых отражены на диаграммах
1, 2, 3.
По результатам анализа лабораторных исследований патматериала методом ПЦР можно заключить следующее.
1. При респираторной патологии ведущую роль играют вирусы РРСС,
ЦВС 2-го типа, микоплазмы, Haemophilus parasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae и Pasteurella multocida.
2. При кишечной патологии ведущую роль играют Clostridium perfringens, Clostridium difficile и энтеротоксигенная кишечная палочка.
3. При репродуктивной патологии
ведущее место занимают стрептококки
и вирус РРСС.
Однако следует отметить, что и другие инфекционные агенты
могут
играть существенную роль в инфекционной патологии свиней.
В период с 2005 года нами были исследованы сыворотки крови племенных свиней, завезенных в свиноводческие хозяйства Российской Федерации
из 13 стран Европы и Канады. По запросу хозяйств-импортеров на наличие антител к вирусу РРСС исследовали 14376 сывороток, вирусу КЧС –
11344, ЦВС-2 – 3879, БА – 15817 и
M. hyopneumoniae – 6073 пробы. Исследования проводили с использованием ИФА тест-систем, разработанных в
ФГУ ВНИИЗЖ, и коммерческих наборов Ceditest PRV (Нидерланды), Chekit
CSF-SERO (Германия) (таблица).
Как видно из таблицы, импортированные свиньи из Канады и стран Европы не имели специфических антител к вирусам классической чумы свиней, репродуктивно-респираторного
синдрома, болезни Ауески и трансмис-
48 «Аграрное обозрение» № 5 (39) 2013 год
Диаграмма 3. Частота выявления инфекционных агентов у свиней
с репродуктивным синдромом
сивного гастроэнтерита (ТГС). Тогда
как к цирковирусу 2-го типа, Mycoplasma hyopneumoniae, респираторному
коронавирусу свиней (РКВС), вирусу
гриппа свиней (ВГС) и Actinobacillus
pleuropneumoniae (АПП) животные
были серопозитивными (59,6%, 9%,
60,5%, 21,0% и 17,0% соответственно).
Антитела к цирковирусу 2-го типа были обнаружены у исследованных животных из свиноводческих хозяйств
Канады и стран Европы, что свидетельствует как о широком распространении ЦВС-2, так и о трудностях борьбы с цирковирусной инфекцией свиней. Антитела к вирусу гриппа обнаружены у свиней из Канады и Франции,
тогда как антитела к АПП в сыворот-
ках крови свиней из этих стран не выявляли.
Согласно «Ветеринарным требованиям при импорте в РФ племенных и
пользовательных свиней» ЦВС-2 не
входит в обязательный список патогенов, и серодиагностика на эту инфекцию проводится только по требованию
импортера.
Антитела к Mycoplasma hyopneumoniae обнаруживали в сыворотках крови
свиней из Франции, Польши, Дании,
Англии, Германии, Литвы и Испании.
Не выявляли специфических антител к
Mycoplasma hyopneumoniae в сыворотках крови животных из Канады и Чехии. Необходимо также отметить, что
M. hyopneumoniae не входит в обязательный список патогенов, от которых
должны быть свободны ввозимые в
Россию свиньи, и поэтому нарушений
со стороны экспортера в данном случае нет.
Таким образом, проведенные нами
диагностические исследования показали, что ввозимые из-за границы племенные свиньи не имеют антител к вирусам РРСС, КЧС и БА, однако многие животные серопозитивны в отношении ЦВС-2 и M. hyopneumoniae.
Однако следует отметить, что в странах-экспортерах имеются разные категории хозяйств (племенные или товарные) с разным иммунным статусом животных. В связи с этим при закупке племенных свиней необходимо учитывать
категорию свиноводческих хозяйств.
В общем и целом страны-экспортеры
поставляют в Россию племенных свиней, удовлетворяющих ветеринарным
требованиям РФ, что подтверждается
нашими исследованиями.
www.agroobzor.ru