R-6018 ИХТ Flu Тест A для выявления антигенов вируса гриппа А
advertisement
28 Pierre Köenig St., Talpiot Industrial Area P.O.B 53231 Jerusalem 91531 ISRAEL Phone: 972-2-6781861; Fax : 972-2-6781852 e-mail: info@novamed.co.il ЭКСПРЕСС-АНАЛИЗ НА ВИРУС ГРИППА типa А ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ОДНОЭТАПНОГО ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ ВИРУСА ГРИППА типa А В МАТЕРИАЛЕ ИЗ НОСОГЛОТКИ ЧЕЛОВЕКА. Номер Каталога: R-6018 (20 определений). Инструкция по эксплуатации моноклональные антитела специфические к вирусу гриппа типa А. Поликлональные анти-антитела зафиксированы в контрольной НАЗНАЧЕНИЕ Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль представляет собой бесприборный одношаговый иммунохроматографический зоне полоски. Антигены вируса гриппа типa А содержащиеся в анализ проб мазков, смывов и и выделений из носоглотки пробе реагируют с меченными моноклональными антителами, человека с целью качественного определения антигенов вируса формируя комплекс антиген-антитело, который мигрирует по гриппа Influenza типа A (влючая подтипы A(H1N1) и A(H3N2)). мембране, образуя в тестовой зоне красную цветную линию, что оценивается как положительный результат. Непрореагировавший конъюгат мигрирует далее к контрольной зоне, где КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ Грипп - это острая вирусная болезнь, передается воздушнозахватывается поликлональными анти-антителами, формируя капельным путем. Характеризуется острым началом, лихорадкой, зеленую линию в контрольной зоне. Зеленая контрольная линия общей интоксикацией и поражением респираторного тракта. появляется всегда. Наличие контрольной линии подтверждает Возбудители гриппа относятся к семейству ортомиксовирусов, корректность результатов теста (правильный объем пробы, которые в зависимости от содержания отдельных белков в необходимый темп миграции, требуемое качество реагентов). оболочке подразделяется на типы А, В и С: А - встречается у птиц и животных, В - только у человека, и С - у человека, свиньи, КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА собаки. Influenza A имеет 2 подтипа, имеющих клиническую В состав набора входит: значимость для людей: (H3N2) и (H1N1), ответственных за - 20 тест-систем (кассет) для выявления антигенов вируса гриппа большинство смертельных случаев. С учетом антигенных типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль, различий поверхностных белков вируса, называемых упакованных в индивидуальные алюминиевые пакетики с гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N), выделяют подтипы одноразовыми пластиковыми пипетками. вирусов гриппа. Всего известно 15 подтипов Н (Н1- Н15) и 9 - Пластиковая бутылочка-капельница содержащая растворитель подтипов N (N1- N9). Благодаря такой генетической пробы В; разнородности структуры вирус гриппа чрезвычайно изменчив. - 20 одноразовых пластиковых пробирок для тестирования; Каждое изменение антигенной структуры вируса гриппа - 20 стерильных тампонов; приводит к развитию новых эпидемий. Важнейшей функцией - инструкция к применению. белка Н является его способность «прикреплять» вирус к клетке эпителия верхних дыхательных путей (полость носа, носоглотка, ХРАНЕНИЕ трахея). Белок N в свою очередь облегчает выход новых вирусов Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типa А после размножения из зараженной клетки и обеспечивает их производства компании Novаmed Ltd, Израиль должна храниться дальнейшее распространение. Воротами инфекции являются при температуре 2-25оС. верхние отделы респираторного тракта. Вирус гриппа Не замораживать! избирательно поражает цилиндрический эпителий дыхательных При правильном хранении набор реагентов может быть путей, особенно трахеи. По-вышение проницаемости сосудистой использован до конца срока годности, отпечатанного на упаковке. стенки привoдит к нарушению микроциркуляции и возникновению геморрагического синдрома (кровохарканье, ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ носовые кровотечения, геморрагическая пневмония, -Не допускается использование набора и его компонентов после энцефалопатия). Инкубационный период продолжается от 12 до истечения срока годности. 48 ч. Типичный грипп начинается остро, нередко с озноба или -Набор предназначен только для проффессионального познабливания, быстро повышается температура тела, и уже в использования in vitro в целях лабораторной диагностики. первые сутки лихорадка достигает максимального уровня (38–40 -Исследование проб регламентируется правилами работы с гр. С). инфекционными агентами. -Не проводить исследование, используя компоненты наборов разных серий. ПРИНЦИП Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типa А -Нарушение временного и температурного режимов инкубации производства компании Novаmed Ltd, Израиль представляет при проведении исследования может привести к получению собой помещенную в пластиковый футляр (кассету) полоску ошибочных результатов. нитроцеллюлозной мембраны с фиксированными на ней в -Тест должен быть проведен в течение двух часов после вскрытия области добавления пробы мышинными моноклональными индивидуальной упаковки. антителами к вирусy гриппа типa А конъюгированными с окрашенными в красный цвет микросферами. В области тестового окошка мембраны зафиксированы мышинные _________________________________________________________ СБОР И РАБОТА С ИССЛЕДУЕМЫМ МАТЕРИАЛОМ Мазки из носоглотки. Мазки из носоглотки забирают сухими стерильными стандартными тампонами для взятия мазков. Рекомендуются тампоны с пластмассовой рукояткой и накрученными на одном из ее концов синтетическими волокнами из вискозы или дакрона. Не использовать тампоны из натуральной ваты или тампоны помещенные в какую-либо транспортную среду, содержащую уголь, агар или желатин! Перед взятием материала полость носа необходимо очистить от слизи, лейкоцитов, слущенных клеток эпителия. Тампон ввести легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем тампон слегка опустить книзу, ввести в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, сделать вращательное движение и удалить вдоль наружной стенки носа. Мазок берётся из обеих полостей носа. Мазки должны быть забраны таким образом, чтобы в них содержались клетки, имеющие диагностическое значение - цилиндрический эпителий из глубоких отделов носа, в котором размножаются вирусы. Мазки, содержащие клетки плоского и переходного эпителия из наружных отделов носа не информативны и исследованию не подлежат. После взятия материала тампон следует исследовать как можно скорее. Смывы из полости носа. Сбор материала производят в положении больного сидя с отклоненной назад головой. Для получения смыва из полости носа в оба носовых хода поочередно с помощью одноразового шприца вводят по 3-5 мл теплого стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида. Промывную жидкость из обоих носовых ходов собирают через воронку в одну стерильную пробирку или контейнер. Для этого пациент должен наклонить голову, и смыв со слизью вытечет из полости носа в пробирку или контейнер. Носоглоточный аспират Аспирировать носоглоточные секреты через катетер, соединенный с контейнером-сборником для слизи и источником вакуума. Влить несколько капель стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида в каждую ноздрю. Катетер вводится в ноздрю параллельно небу. Привести в действие источник вакуума и медленно вынуть катетер вращательными движениями. Слизь из другой ноздри берется тем же катетером аналогичным способом. После взятия слизи из обеих ноздрей катетер заливается 3 мл транспортной среды. Материал для исследования следует немедленно отправить в лабораторию (чувствительность теста снижается по прохождении времени). Материал для исследования следует хранить или транспортировать в лабораторию в условиях охлаждения 2º-4ºC. Образцы могут храниться в холодильнике при температуре 2-4°С не более 8 часов. ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА Перед началом тестирования тестовую кассету и материал для исследованиа довести до комнатной температуры (15-30ºC). Не вскрывать индивидуальную упаковку теста до начала исследования. Маркировать тестовую кассету инициалами или идентификационным номером пациента. Исследование мазков из носоглотки (Рисунок 1) 1. Поместить 15 капель расстворителя пробы В из прилагаемой к набору пластиковой бутылочки-капельницы в пустую тестовую пробирку; 2. Тампон с исследуемым материалом перенести в тестовую пробирку содержащую растворитель В, тщательно перемешать содержимое пробирки вращательными движениями тампона не менее 10 раз, отжать содержимое тампона нажатием пальцев на внешние стенки пробирки и утилизировать тампон в баке для биологических отходов. 2. С помощью одноразовой пластиковой пипетки внести 4 капли или 100 микролитров тестируемой суспензии в окошко для пробы (S) тестовой кассеты. 3. Прочесть результат через 10 минут после внесения пробы. Исследование смывов из полости носа и носоглоточных аспиратов (Рисунок 2) 1.Поместить 6 капель или 300 микролитров смыва из полости носа и носоглоточного аспирата в чистую тестовую пробирку. 2.Добавить 3 капли или 150 микролитров прилагаемого к набору растворителя В. Суспендировать пробу энергичным встряхиванием пробирки не менее 10 раз. 3.Поместить 4 капли или 100 микролитров приготовленной суспензии в окошко для пробы (S) тестовой кассеты. 4.Прочесть результат через 10 минут после внесения пробы. Рисунок 1. Исследование мазков из носоглотки Add the nasopharyngeal sample (6 drops) Add diluent B (3 drops) and mix 100uL of the mixture S SAMPLE Рисунок 2. Исследование смывов из полости носа и носоглоточных аспиратов 100uL of the mixture (1) (2) (3) S (4) ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ (Рисунок 3): Рисунок 3. Influenza A NEGATIVE INVALID Отрицательный результат: одна зеленая линия появляется в контрольной зоне (С) тестовой кассеты; Положительный результат: в дополнение к зеленой контрольной линии появляется красная линия в тестовой зоне (Т); Недействительный результат: отсутствие зеленой контрольной линии (С) вне зависимости от наличия или отсутствия красной линии в тестовой зоне (Т). Неправильный объем пробы, несоблюдение процедуры тестирования или качество реагентов – наиболее частые причины отсутствия контрольной линии. Проанализируйте процедуру тестирования и повторите ее с использованием новой тест-кассеты. Если проблема остается, следует прекратить тестирование и связаться с местным дистрибьютором. Замечания по интерпретации результатов Интенсивность окраски красной линии в тестовой зоне кассеты меняется в зависимости от концентрации антигенов в образце. Однако ни количественное содержание антигенов, ни степень их возрастания не могут быть установлены с помощью данного качественного теста. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА _________________________________________________________ 1. Тест предусматривает внутренний контроль за правильностью проведения процедуры. Зеленая линия появляющаяся в контрольной зоне (C) тестовой кассеты, указывает на правильность проведения процедуры теста. 2. Результаты теста не учитывают в случае если неясный фон мешает интерпретировать результаты. 2. ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ Эпидемии гриппа случаются каждый год обычно в холодное время года и поражают до 15% населения земного шара. Грипп и ОРВИ составляют 95% всех инфекционных заболеваний в мире. Ежегодно в мире заболевают до 500 млн. человек, 2 миллиона из которых умирают. В России ежегодно регистрируют от 27,3 до 41,2 млн. заболевших гриппом и другими ОРВИ. 4. 3. Newman A.P. et al. Human Case of Swine Influenza A (H1N1) Triple Reassortant Virus Infection, Wisconsin. Emerging Infectious Diseases, Sept 2008, Vol 14, No. 9, pp1470-1472 Andreea C. Cazacu, Gail J. Demmler et al. Comparison of a New Lateral-Flow Chromatographic Membrane Immunoassay to Viral Culture for Rapid Detection and Differentiation of Influenza A and B Viruses in Respiratory Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Aug. 2004, p. 3661–3664 Vol. 42, No. 8. Kenneth E. Irmen and James J. Kelleher. Use of Monoclonal Antibodies for Rapid Diagnosis of Respiratory Viruses in a Community Hospital. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, May 2000, p. 396–403 Vol. 7, No. 3. УТВЕРЖДАЮ Генеральный директор ООО «ГЕМ» _____________С.А. Гольдберг ХАРАКТЕРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕСТА Чувствительность и специфичность теста Различные разведения вирусов приготовленные в типовом растворителе или в отрицательном материале из носа были тестированы тест-системой для выявления антигенов вируса гриппа типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Выявление вирусов гриппа типа А с помощью тест-системы для выявления антигенов вируса гриппа типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль показало чувствительность> 99 % и специфичность > 99 % по сравнению с другим коммерческим одношаговым иммунохроматографическим тестом. Перекрестное реагирование При исследовании проб, содержащих заведомо известные антигены аденовируса и респираторно-синцитиального вируса были получены отрицательные результаты в тест-системе для выявления антигенов вируса гриппа типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль . «23» июня 2010 г. Представительство в РФ: ООО «ГЕМ» г.Москва, 8 Марта, д.1,стр.12,эт.3, ком.11 Тел/факс: (499)651-91-35 sale@hemltd.ru IFU-Influenza A -R6018c-HEM-russ-v.1-14.02.12 ОГРАНИЧЕНИЯ 1.Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль является скрининговым тестом для качественного определения присутствия вируса гриппа типa А в исследуемом материале и применяется только для определения антигенов вируса гриппа А в образцах из носоглотки человека ( мазки, смывы и аспираты из носоглотки). Ни количественное содержание антигенов, ни степень их возрастания не могут быть установлены с помощью данного качественного теста. 2.В случаях несовместимости результатов Тест-системы для выявления антигенов вируса гриппа типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль с клиническими проявлениями, рекомендуется провести дополнительные иссследования с помощью других клинических методов. Отрицательный результат полученный с помощью Тест-системы для выявления антигенов вируса гриппа типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль не исключает возможность присутствия инфекции гриппа А. 3.Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типa А производства компании Novаmed Ltd, Израиль дает лишь предполагаемый диагноз грипповой инфекции. Только лечащий врач должен оценивать полученные результаты в свете других клинических данных, включая результаты других лабораторных исследований. ЛИТЕРАТУРА: 1. Daniel E. Noyola, et al. Comparison of a New Neuraminidase Detection Assay with an Enzyme Immunoassay, Immunofluorescence, and Culture for Rapid Detection of Influenza A and B Viruses in Nasal Wash Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Mar. 2000, p. 1161–1165 Vol. 38, No. 3 _________________________________________________________
