Инфекции органов репродукции грамотная диагностика = эффективное лечение

Инфекции органов
репродукции
грамотная диагностика =
эффективное лечение
О чем эта презентация?
1. Преаналитический этап ПЦР-диагностики.
Диагностика начинается в кабинете врача.
2. ПЦР как метод лабораторной диагностики
инфекций органов репродукции
3. Комплексные ПЦР-тесты для диагностики
инфекций органов репродукции
4. ВПЧ-тестирование
ПЦР – полимеразная цепная реакция; прямой
метод выявления возбудителя
по его уникальной ДНК
Почему «полимеразная»?
Потому что в состав реакционной смеси входит
фермент – ДНК-полимераза
Почему «цепная»?
Потому что продукты одного цикла реакции
становятся субстратами для следующего и т.д. –
получается «цепная реакция»
ПЦР – это способ найти
иголку в стоге сена и
сделать из нее стог иголок
Клинический материал
ДНК
Амплификация
Детекция
Варианты ПЦР по формату детекции
Электрофоретическая
детекция
(Eph)
Флуоресцентная
детекция
в реальном времени
real-time
(FRT)
по конечной точке
end point
(FEP)
ПЦР – полимеразная цепная реакция
Качественный
Количественный
формат
формат
Результат:
«возбудитель обнаружен/
не обнаружен»
Результат:
«концентрация возбудителя =
…»
для безусловных патогенов
(ИППП)
для условно патогенных
микроорганизмов (уреаплазмы,
кандиды, возбудители гнойносептических осложнений)
ПЦР – самодостаточный метод диагностики
стал применяться для диагностики более 20 лет назад
широко используется в России и за рубежом
результат ПЦР не требует подтверждения
традиционными методами
постепенно входит в Российские стандарты
диагностики и лечения различных заболеваний
Почему именно ПЦР?
ПЦР – один из молекулярно-биологических методов
(МБМ) – единственных, рекомендованных
Клиническими рекомендациями РОДВК 2012 года
для диагностики всех урогенитальных инфекций
Инфекция
Гонококковая инфекция
Методы, рекомендуемые для диагностики
(N )
Микроскопия, Культуральное исследование, МБМ
Хламидийная инфекция (C)
МБМ, Культуральное исследование
Урогенитальные заболевания,
вызванные M. genitalium (M)
МБМ
Урогенитальный трихомониаз (T)
Микроскопия, МБМ, Культуральное исследование
Урогенитальный кандидоз
Микроскопия, Культуральное исследование, МБМ
Бактериальный вагиноз
Микроскопия, Культуральное исследование, МБМ
Урогенитальные заболевания,
вызванные Ureaplasma spp.,
Mycoplasma hominis
МБМ, Культуральное исследование
Почему именно ПЦР?
 ведущий метод диагностики ИППП, согласно
рекомендациям CDC и IUSTI/WHO
 универсальная методология
 высокая аналитическая чувствительность и
специфичность, не зависящая от природы возбудителя
 объективный метод
 высокая скорость анализа
 хранение исследования в электронном виде
неограниченно долго
Флороценоз:
рациональная диагностика
вагинальных инфекций
Что такое Флороценоз?
Группа тестов на основе мультиплексной ПЦР в реальном
времени для выявления урогенитальных инфекций у женщин
1 образец
5 наборов реагентов
5 ПЦР-пробирок
Результат:
NCMT (ИППП)
 5 тестов
Кандиды
 8 нозологических
единиц
Бактериальный вагиноз
 19 параметров
Микоплазмы
Аэробы
Флороценоз – NCMT
ПЦР-тест №1
NCMT-инфекции – это:
Neisseria gonorrhoeae
Chlamydia trachomatis
Mycoplasma genitalium
Trichomonas vaginalis
Почему именно эти 4 патогена объединены в группу?
1. Клинические проявления неспецифичны для всех
четырех инфекций (если эти проявления есть).
Необходимо проводить дифференциальную
диагностику между всеми четырьмя.
2. Все четыре инфекции – это облигатно патогенные
микроорганизмы, требующие лечения вне
зависимости от наличия или отсутствии
жалоб/симптомов у инфицированного лица.
3. Для проведения эффективного, экономичного и
безопасного лечения необходимо знать природу
этиологического агента заболевания.
АмплиСенс-NCMT
Почему именно эти 4 патогена?
Клиническими рекомендациями РОДВК 2012 года
предписана дифференциальная диагностика этих
четырех инфекций друг относительно друга
Chlamydia trachomatis
C
Neisseria
gonorrhoeae
M
N
T
Trichomonas vaginalis
Mycoplasma
genitalium
Флороценоз - NCMT
 Первый и обязательный тест в алгоритме расшифровки
причин патологических выделений и для скрининга на
ИППП
 Единственный ПЦР-тест российского производства,
валидированный в референсной лаборатории CDC, США:
Флороценоз –
Кандиды
Флороценоз - Кандиды
 Только клинически значимые
виды кандид (5 видов)
 Количественная оценка
Валидирован
относительно
метода посева
на среду Сабуро
 чувствительность >95%,
специфичность >99%
 Видовая дифференциация (разные виды кандид
имеют разную чувствительность к антимикотикам):
Флороценоз –
Микоплазмы
Флороценоз - Микоплазмы
 Три вида условно патогенных
микоплазм
 Видовая дифференциация
Валидирован
относительно теста
«Микоплазма ДУО»
(Био-Рад, США)
 чувствительность >96%,
специфичность >97%
 Количественная оценка, определяющая клиническую
значимость лабораторной находки:
Флороценоз –
Бактериальный
вагиноз
Флороценоз – Бактериальный вагиноз
 Необходимый и достаточный для диагностики БВ спектр
микроорганизмов-маркеров
 Анализ количества отдельных групп микроорганизмов по
экспертному алгоритму
 Выдача формализованного заключения (бактериальный
вагиноз выявлен/не выявлен)
 Валидация относительно «золотого стандарта»
(клинические критерии Амсель, критерии Ньюджент):
Флороценоз –
Аэробы
Флороценоз – Аэробы
 Три группы аэробных микроорганизмов, количество
которых повышается при аэробном вагините
 Количественная оценка лактобацилл (снижены при
аэробном вагините)
 Современное средство для
дифференциальной диагностики
аэробного вагинита:
Пример результатов
теста «Флороценоз»
ВПЧ
Новые тесты –
новые возможности
- вирус (структура из белков и ДНК)
- передается половым путем
- инфицирует эпителий шейки матки
ВПЧ
- не лечится медикаментами
- обычно происходит самопроизвольное излечение
- в некоторых случаях вирус остается и вызывает
патологии эпителия шейки матки
- в части случаев ВПЧ-измененный эпителий развивается в
рак шейки матки (РШМ)
Рак шейки матки можно предотвратить, регулярно проводя ВПЧ-тесты
ВПЧ-тест – это не тест на очередную
урогенитальную инфекцию
это тест, результат которого определяет риск женщины
получить рак шейки матки и ее дальнейшие действия в связи с этим
Тест, призванный предотвращать рак –
это большая ответственность
такой тест должен быть апробирован, валидирован,
воспроизводим, словом – на 100% надежен
Как изменяются наборы АмплиСенс на ВПЧ?
• дифференциация
16/18/45 генотипов
• + 2 генотипа
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР скрин-титр
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР скрин-титр
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР генотип
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР генотип-титр
• количественность
• + 2 генотипа
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР скрин-титр
•
•
•
14 генотипов ВПЧ высокого
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР генотип-титр
•
14 генотипов ВПЧ высокого
канцерогенного риска
канцерогенного риска
определяются суммарно,
определяются каждый
количественно
индивидуально, количественно
из этих четырнадцати генотипов
•
контроль качества взятия
ВПЧ 16, 18 и 45 определяются
материала и экстракции
индивидуально, количественно
(геномная ДНК человека)
контроль качества взятия
материала и экстракции (геномная
ДНК человека)
оптимально
для скрининга
скрининг и
генотипирование
одновременно
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР скрин-титр
дизайн, реализованный ведущими
производителями ВПЧ-тестов в соответствии
с мировыми рекомендациями
• 14 важнейших генотипов ВПЧ ВКР определяются количественно, суммарно
• генотипы 16 и 18 типируются и определяются количественно, отдельно
• геномная ДНК человека в качестве контроля качества анализа
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР скрин-титр
широкие возможности
• Количественная оценка
• Генотипирование вируса (16, 18, 45)
• Выявление интегрированных форм вируса
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР скрин-титр
Почему так важно типировать генотипы 16 и 18?
HPV16
HPV18
12 976 случаев (возраст >30 лет)
с отрицательным результатом
цитологии при включении
HPV, но не 16 или 18
HPV не выявлен
Генотипы 16 и 18 намного агрессивнее других
генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска!
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР скрин-титр
Почему мы не расширяем набор до выявления 15, 21 и более генотипов?
По результатам длительного (6 лет) анализа при тяжелых
дисплазиях и РШМ обнаруживаются всего 10-14 генотипов!
АмплиСенс®
ВПЧ ВКР скрин-титр
• Единственный российский ВПЧ-тест, для которого
проведена валидация согласно международным
рекомендациям
(Guidelines for human papillomavirus DNA test requirements for
primary cervical cancer screening in women of 30 years and older)
Известны диагностическая чувствительность и специфичность
Валидация
Уверенность в качестве теста
Возможность использования в
цервикальном скрининге
Публикация coming soon!
Цервикальный скрининг – средство предотвратить РШМ
Широкая
доступность
Надежная
методика
Грамотная
интерпретация
предотвращение РШМ у
большинства женщин
Уровни организации цервикального скрининга
Цервикальный скрининг может осуществляться
на нескольких уровнях:
Национальный
Охватывает целые
страны (Финляндия,
Швеция). В России –
отсутствует.
Региональный/
Муниципальный
Охватывает женское
население региона
или города. В России
– отсутствует.
Локальный
Профосмотры в
различных трудовых
коллективах.
Распространен.
«Индивидуальный»
Активность отдельных
женщин, желающих
проверить свое здоровье.
Наиболее распространен.
До национального скрининга мы пока не доросли
Пора создавать локальные и региональные
программы скрининга РШМ