Инструкция для скачивания.

Тест «Калидос»
предназначен для определения остаточного количества антибиотиков,
сульфаниламидов и ингибирующих веществ в молоке. Применяется для
анализа коровьего, овечьего и козьего молока.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Неправильное использование антибиотиков в скотоводстве и в производстве кормов может
привести к их накоплению в биологических жидкостях и тканях животных. Существуют опасения
связанные с потенциальным канцерогенным и генно- токсическим эффектом антибиотиков на
организм человека, а также возникновением устойчивой резистентности микроорганизмов к
антибиотикам из-за
потребления человека пищи, контаминированной этими опасными
загрязнителями. Поэтому такие лекарства запрещены для использования в выращивании
сельскохозяйственных животных в странах Евросоюза, или же уровень таких лекарств жестко
регулируется.
Существуют экспресс - тесты предназначенные для выявления опасных контаминантов в
продуктах питания. Тест для сырого молока Kalidos (Калидос) имеет высокую чувствительность к
широкому спектру антимикробных препаратов, включая антибиотики бета- лактамной,
тетрациклиновой и сульфонамидной и др.групп. Принцип его действия основан на ферментации
сахара (глюкозы) бактерией bacillus stearothermophilus calidolactis в присутствии индикатора,
меняющего свою окраску с фиолетового на желтый.
Время, затрачиваемое на анализ – от 2 часов 30 минут до 3 часов.
2. ПРИНЦИП ТЕСТА
Тест Калидос оснащен ампулами, собранными в микропластины, в которых содержится
среда агара. Среда агара культивированная спорами bacillus stearothermophilus calidolactis
содержит глюкозу и рН- нидикатор бромокрезоловый пурпурный. Тест готов к использованию и
не требует предварительной активации и дополнительных реагентов. Для проведения теста нужно
всего лишь нанести образец тестируемого молока на поверхность агара и инкубировать тест в
течении 2 часов 30 минут до 3 часов в водяной бане, или сухом термостате при температуре 65Со
(требуется предварительное термостатирование козьего, овечьего молока). При отсутствии или
при незначительном содержании в образце антимикробных субстанций, бактерии начинают
развиваться и в процессе роста метаболизируют сахар, превращая его в кислоту. Образовавшаяся
кислота меняет цвет индикатора бромокрезолового пурпурного с фиолетового на насыщенный
желтый цвет. В присутствии антимикробных субстанций в молоке, развитие спор бактерий
ингибируются. В этом случае не произойдет ферментации глюкозы и она не превратиться в
кислоту, в результате индикатор среды не поменяет своей первоначальной окраски.
3. КОМПОНЕНТЫ ТЕСТ-НАБОРА
- ампулы, собранные в микропластины, готовые к использованию (4х100);
- пипетки объемом 100 мкл -100 шт.;
4. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Хранить при 4-8 Со (хранение при температуре ниже +4Со - недопустимо);
Не использовать тесты, в которых изменилась окраска среды в лунках.
5.
ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ НЕВКЛЮЧЕННЫЕ В
НАБОР
- водяная баня с крышкой, с поддержанием температуры 65+- 2С;
- термостатический блок (термостат) (код EMK 20AGA, Euroclone)
- дозаторы на 100 мкл со стерильными наконечниками.
6. ПРОБОПОДГОТОВКА
Пробоподготовка молока не требуется. Образцы для исследования: сырое молоко, молоко,
подвергнутое тепловой обработке, восстановленное сухое молоко. Сырое молоко должно быть
протестировано сразу после доения и сбора.
Для анализа может быть использовано козье и овечье молоко.
7. ПОРЯДОК РАБОТЫ
1. Перед проведением анализа доведите температуру исследуемых образцов и ампул теста
до комнатной температуры. Нагрейте воду в водной бане до 65Со , достаньте из пакета
микропластину о отрежьте от неѐ требуемое количество ампул, снимите с них защитное покрытие
из фольги. Оставшиеся ампулы уберите обратно в холодильник.
2. При каждом анализе используйте один или более отрицательных контролей (образцы
молока свободные от антибиотиков).
3. При помощи пипетки (дозатора) со стерильными одноразовыми наконечниками, внесите
в каждую лунку по 100 мкл образца молока. В целях предотвращения перекрестной контаминации
всегда меняйте наконечник дозатора перед забором нового образца. Аккуратно покройте лунки
клейкой лентой, или другим гидроизолирующим покрытием.
Установите планшет с лунками на водяной бане, или сухом термостате и инкубируйте в
течении 2 часов 30 минут до 3 часов при 65С.
Примечание: температура инкубации является важным фактором, влияющим на
результат тестирования, поэтому температура водяной бани во время инкубации должна
поддерживаться на точно установленном уровне.
8. ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТА
После инкубации, извлеките планшет с лунками из инкубатора и охладите его в течение
1-2 мин при комнатной температуре, предварительно удалив клейкую ленту. Слегка постучите
лунки об фильтровальную бумагу для удаления капель воды. Оцените изменение первоначальной
окраски среды в лунках.
- Негативный образец и негативный контроль: образцы без антибиотиков и образец с
отрицательным контролем - среда в лунках изменила цвет с фиолетового на желтый.
- Позитивный образец: образец с антибиотиком - цвет среды не изменился.
Если по истечении 3 часов инкубации, лунки с негативным контролем не изменили
исходной окраски на ярко- желтый цвет, проверьте температуру инкубатора и продлите процесс
инкубации еще на 15 мин. В течение дополнительного времени инкубации проверяйте окраску
лунок каждые 5 мин. Пробы, получившие всевозможные комбинации оттенков фиолетового или
желтого, будут относиться к сомнительным результатам и должны быть перепроверены другими
методами анализа.. Такое может произойти, в случае, когда в образце содержались антибиотики в
количестве, не превышающем порог чувствительности теста.
Например, положительный образец можно дополнительно протестировать на наличие
пенициллинов. Для этого в данный образец вносят известное количество пенициллина и затем
тестируют методом микробиологического анализа. Если пенициллин присутствовал, но позже был
ликвидирован пеннициллиназой, в таком случае образец нужно считать отрицательным.
9. ПРЕДЕЛ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ* В КОРОВЬЕМ МОЛОКЕ (* Предел чувствительности соответствует
минимальному количеству антибиотика в пробе, которое способно ингибировать рост бактерий в условиях анализа.)
Наименование антибиотика
Амоксицилин
Наименьший предел опрделения Ед/г (мкг/г)
0,003
Ампицилин
0,003
Бацитрацин
1,5
Бензилпеницилин
-
Гентамицин
0,025
Данофлоксацин
0,8
Дапсон
-
Доксициклин
-
Дигидрострептомицин
0,2
Диклоксациллин
0,01
Канамицин
0,15
Клоксацилин
0,015
Линкомицин
-
Марофлоксацин
0,8
Мономицин
-
Нафциллин
0,005
Неомицин
0,05
Оксацилилин
0,01
Окситетрациклин
0,1
Олеандомицин
-
Пеницилин G
0,002
Пиперацилин
-
Рифамицин
-
Рифампицин
0,1
Спирамицин
0,6
Спектиномици
0,2
Стрептомицин
0,4
Сульфадиазин
0,025
Сульфадиметоксин
0,025
Сульфакиноксалин
0,025
Сульфамеразин
0,025
Сульфаметазин
0,1
Сульфаметоксазол
0,025
Сульфаметоксипиридазин
-
Сульфатиазол
-
Тетрациклин
0,1
Тилозин
0,04
Триметоприн
0,1
Хорамфеникол( левомицитин)
2,5
Хлортетрациклин
0,1
Цефазолин
-
Цефалексин
-
Цефалониум
-
Цефаперин
-
Цефацетрил
-
Цефкином
-
Цефтиофур
-
Цефуроксим
-
Эритромицин
0,1