Микрофлора – непременный симбионт мак

Т.2.№2, 2014
Науково-технічний бюлетень
НДЦ біобезпеки та екологічного контролю ресурсів АПК
УДК: 579:591.434:639.215.2(477.42)
ВИДОВОЙ СОСТАВ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА КАРПА (CYPRINUS CARPIO L.)
И ВОДЫ ИЗ ВОДОЕМОВ ЖИТОМИРСКОЙ ОБЛАСТИ
ГАРКУША И.Е., аспирант *
Национальный университет биоресурсов и
природоиспользования Украины,
г. Киев,
[email protected]
В данной статье представлены результаты исследования бактериофлоры кишечника однолетних и двухлетних карпов из природной среды обитания. Опыты проводились в Житомирской
области. Непосредственно исследовалась рыба из реки Тетерев. Тригорского водохранилища и
прудов Коростышевского района. В статье в виде диаграмм показано разнообразие родов и их
количественные показатели
Карп, микроорганизмы, симбионтная микрофлора, микрофлора кишечника, вода, водоем,
макрорганизм, рыбы
Микрофлора – непременный симбионт макроорганизма. Благодаря симбионтным бактериям возможность проникновения и размножения патогенных микроорганизмов уменьшается. Также эти бактерии обладают набором
специфичных ферментов, позволяющих гидролизовать субстраты, которые могут быть
недоступны ферментам макроорганизма.
Определенные резидентные бактерии кишечника ответственны за бактериальный антагонизм и колонизационную устойчивость, поскольку эти бактерии тесно связаны с кишечным эпителием и формируют барьер, служащий первой защитой, ограничивающей прямое
прикрепление или взаимодействие патогенных
бактерий с мукозой [5].
У большинства пресноводных рыб в пищеварительном тракте преобладают аэробные
грамотрицательные микроорганизмы родов
Pseudomonas, Enterobacter, Aeromonas,
Acinetobacter, а также анаэробные бактерии
родов Vibrio и Clostridium. Также встречаются
Escherihia, Klebsiella, Proteus, Serratia,
Alcaligines, Eikenella, Bacteroides, Citrobacter
freundii, Hafnia alvei, Cytophaga/Flexibacter,
Bacillus, Listeria, Propionobacterium,
Staphilococcus, Moraxella, Pseudomonas [4, 6,
8].
Для микрофлоры рыб нехарактерно такое
разнообразие организмов, как у наземных теплокровных животных [2, 7]. Если в кишечнике
жвачных животных обитает более 600 видов
микроорганизмов [1], то у рыб, даже бентофагов, их значительно меньше, у хищных видов
в кишечнике набор видов еще уже [3]. Очевидно, что это связано с менее широким диапазоном пищевых источников у рыб и спецификой обитания водных организмов и наземных животных.
Несмотря на более узкий, по сравнению с
сельскохозяйственными животными, спектр
микроорганизмов, населяющих кишечники
рыб, и преобладание у них грамотрицательных бактерий, в естественных условиях у пресноводных видов тем не менее присутствуют
лакто- и бифидобактерии [1, 7], которые у теплокровных животных являются основой нормальной микрофлоры.
Цель исследования: исследовать микробный пейзаж кишечника годовиков и двугодичных карпов (CYPRINUS CARPIO L.), исследование воды из р. Тетерев, Тригирского
водохранилища и некоторых прудов расположенных в Коростышевском районе.
Материалы и методы исследований.
Работа выполнена в период с 2013 по 2014
годы в межрайонной государственной лаборатории ветеринарной медицины города Коростышев.
Исследовалась рыба из естественных условий обитания.
Карп анализировался в районе р. Тетерев,
Тригирского водохранилища и местных прудов. Вода исследовалась в тех же районах и в
Т.2.№2, 2014
Науково-технічний бюлетень
НДЦ біобезпеки та екологічного контролю ресурсів АПК
черте г. Коростышев. Было исследовано 60
экз. здоровых рыб. Всего за период проведения работы обработано 108 бактериологических проб, собранных из всех отделов кишечника. Параллельно отобрано 20 проб воды на
наличие в ней условно патогенной микрофлоры.
При изучении выделенных изолятов микроорганизмов при исследовании микробного
пейзажа использовали методы, принятые в
бактериологии (Акулов, и др., 1975; Лобинская, 1978; Биргер, 1982; Мусселиус, 1983).
Для определения бактерий использовался Определитель бактерий Берджи в 2-х томах
(Хоулт Дж., Криг Н. М.: Мир, 1997).
Для выделения вибрионов применялось
обогащение проб в 1-ой и 2-ой пептонной воде. Для обнаружения сальмонелл воду фильтровали через мембранные фильтры № 3 и № 5.
В качестве селективных сред при исследовании воды и карпа использовались агары Эндо
и Плоскирева.
При идентификации энтеробактерий использовались монографии С.А. Голубевой с
соавторами (1985), псевдомонад - по В. В.
Смирнову и Е. А. Киприановой (1990).
Объектами исследования послужили микроорганизмы, обитающие в кишечнике здоровых
Lactobacillus; 8
особей карпа. По отношению к температурному фактору – это мезофильная группа микроорганизмов, культивируемая на питательных
средах при комнатной температуре в течении
трех, пяти и семи дней с момента посева.
Исследуемая рыба в систематическом отношении занимают следующее положение: семейство Cyprinidae, род Cyprinus, вид Cyprinus
carpio.
Перед началом отбора фрагментов кишечника тело рыбы было обработано спиртом.
Вскрытие производилось стерильными инструментами. Образцы помещались в заранее
подготовленные стерильные флаконы.
Посев с фрагментов кишечника производился путем отпечатывания образца на поверхности агара. При этом чашка была разделена на четыре сектора.
По окончании инкубирования был произведен рассев полученных газонов с целью получения изолированных колоний и последующего описания. Для этого был применен метод
штриха. Производилась покраска по Грамму.
Результаты исследований.
Из воды выше указанных районов выделена
микрофлора, состоящая из 20-видов и 11 родов: Aeromonas, Edwarsiella, Enterobacter, Es-
Aeromonas; 9
Citrobacter; 5
Enterobacter; 5
Bacillus; 20
Esherichia; 15
Clostridium; 3
Flavobacterium; 2
Alcaligenes; 4
Actinobacillus; 1
Moraxella; 1
Proteus; 29
Acinetobacter; 8
Pseudomonas; 10
Vibrio; 6
Рис.1. Видовое разнообразие кишечника годовиков карпа
Т.2.№2, 2014
Науково-технічний бюлетень
НДЦ біобезпеки та екологічного контролю ресурсів АПК
Lactobacillus; 15
Aeromonas; 10
Citrobacter; 11
Enterobacter; 9
Bacillus; 25
Esherichia; 25
Clostridium; 6
Flavobacterium; 4
Alcaligenes; 5
Actinobacillus; 2
Salmonella; 1
Acinetobacter; 21
Pseudomonas; 9
Proteus; 51
Vibrio; 3
Рис.2. Микробный пейзаж кишечника двухгодичных карпов
cherichia, Citrobacter, Klebsiella, Moraxella,
Proteus, Pseudomonas, Vibrio, Serratia.
Из отобранных проб из кишечника исследуемой рыбы выделено 28 видов бактерий, относящихся к 13 родам: Aerouonas, Actinobacillus, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia,
Acinetobacter, Flavobacterium, Micrococcus,
Moraxella, Proteus, Pseudomonas, Serratia, Salmonella, Bacillus.
Семейство Enterobacteriaceae по числу выделенных родов и видов доминировали в микрофлоре карпа и в воде водохранилища. Всего
было обнаружено 156 изолятов этого семейства.
В статье приведены характеристики этих
видов и родов, построенные на оригинальных
материалах моих отборов с указанием частоты
встречаемости каждого вида в воде и рыбе.
Данные исследований приведены в виде
диаграмм. Цифрами указано количество изолятов полученных из отобранных проб.
Кроме здоровых особей были исследованы
5 рыб с признаками различных заболеваний
разной этиологии. Было установлено обеднение количественных и качественных показателей их микрофлоры.
Выводы. 1. Видовое разнообразие кишечной микрофлоры рыб существенно беднее , чем у теплокровных. В то время то время
как пищеварительный тракт теплокровных ко-
лонизирован в основном облигатными анаэробами, преобладающие роды, изолированные
из кишечника карпов - аэробы и факультативные анаэробы.
2. В бактериофлоре кишечника карпа преобладают грамотрицательные виды (более
60%).
3. Исследования проводились в летнее и
зимнее время и было выявлено что общая численность микроорганизмов в кишечнике карпов колебалась в зависимости от интенсивности питания и в зимнее время рост на живительных средах был в разы беднее чем в период с июня по август (во время летних исследований).
4. При исследовании 5 особей больных бактериальными болезнями было выявлено обеднение видового разнообразия бактерий, обитающих в кишечнике рыб. Возможно при более глубоком анализе этого явления этот признак возможно использовать для оценки здоровья рыб, еще до начала внешних проявлений болезней и возникновения вспышек.
5. В результате исследования кишечника
были выявлены бактерии вида Bacillus subtillis. Данный вид бактерий повсеместно используется как пробиотик для продуктивных животных. Дальнейшее исследование связано с
применением пробиотика на основе сенной
палочки карпам.
Т.2.№2, 2014
Науково-технічний бюлетень
НДЦ біобезпеки та екологічного контролю ресурсів АПК
ЛІТЕРАТУРА
1. Воробьев А. А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойстваи защитные
функции / А. А. Воробьев, Е. А Лыкова // Микробиология – 1999. – №6. – С. 102–105.
2. Кузьмина В. В. Бактерии желудочнокишечного тракта и их роль в процессах пищеварения у рыб / В. В. Кузьмина, Е. Г. Скворцова // Успехи совр. биол. – 2002. – Т. 122. №6. –
С. 569–579.
3. Ларцева Л. В. Рыбы и гидробионты резервенты грамнегативной неферментирующей микрофлоры. Ее санитарно-эпизоотологическая и
эпидемиологическая значимость // Информ.
пакет. – Рыбное хоз-во. Сер. Аквакультура. –
1997. – В. 1. – С. 1 – 27.
4. Austin B. Fish need doctoring too / Austin
B. // Microbiology today, 2002. – Vol. 27. –
P.171–173.
5. Cahill M. M. Bacterial flora of fishes: a
review / M. M. Cahill // Microbiol. Ecology. –
Vol: 19. – №1. – 1990. – P. 21–41.
6. Clements K. D. Fermentation and
gastrointestinal microorganisms in fishes / K. D.
Clements // Gastrointestinal microbiology. –
London and New York: New York, 1997. – V. l.
– P. 156–198.
7. Ringo E. Intestinal microflora of salmonids:
a review / E. Ringo, E. Strem, J.A. Tabachek //
Aquaculture Research – 1995. – V. 26. – P. 773–
789.
8. Syvokiene J. The impact of municipal
wastewater and heavy metal mixture on larvae of
rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) / J.
Syvokiene, Р. Stasitinaite, L. Mickeniene // Acta
Zoologica Lituanica, 2003. – V. 13. – № 3. – P.
372–378.
ВИДОВИЙ СКЛАД МІКРОФЛОРИ КИШЕЧНИКУ КОРОПА (CYPRINUS CARPIO L.) І
ВОДИ ІЗ ВОДОЙМ ЖИТОМИРСЬКОЇ ОБЛАСТІ
Гаркуша І.Є.
У даній статті представлені результати дослідів бактеріофлори кишківника однорічних та
дворічних коропів з природного середовища перебування. Досліди проводилися у Житомирській
області. Безпосередньо досліджувалася риба з річки Тетерів. Тригірського водосховища та
ставків Коростишівського району. У статті у вигляді діаграм показано розмаїття родів та їх
кількісні показники
Короп, мікроорганізми, симбіонтна мікрофлора, мікрофлора кишечнику, вода, водойма,
макрорганізм, риби