Доклиническое исследование отечественного препарата

74
Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
Äîêëèíè÷åñêîå èññëåäîâàíèå îòå÷åñòâåííîãî ïðåïàðàòà
ñòâîëîâûõ êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè «Êðèîöåë»
Ê.Ã. Ñóðêîâ, Ë.À. Áåëîâà, Â.Ê. Êðàñíÿêîâ
Âñåðîññèéñêèé íàó÷íûé öåíòð ïî áåçîïàñíîñòè áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ âåùåñòâ (ÂÍÖ ÁÀÂ)
Ñàíêò-Ïåòåðáóðãñêîå ÃÓÇ «Ãîðîäñêàÿ ñòàíöèÿ ïåðåëèâàíèÿ êðîâè»
Êëþ÷åâûå ñëîâà: ñòâîëîâûå êëåòêè, ïóïîâèííàÿ êðîâü,
Êðèîöåë.
 ñòàòüå ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èçó÷åíèÿ âëèÿíèÿ îòå÷åñòâåííîãî ïðåïàðàòà Êðèîöåë íà òå÷åíèå èøåìè÷åñêîãî
èíñóëüòà è îñòðîãî èíôàðêòà ìèîêàðäà â ýêñïåðèìåíòå.
Ââåäåíèå
 òå÷åíèå ïîñëåäíèõ äåñÿòèëåòèé ïðîáëåìà ïîèñêà íîâûõ ñðåäñòâ è ñïîñîáîâ êîððåêöèè êàê ñàìèõ îñòðûõ íàðóøåíèé êðîâîîáðàùåíèÿ ñåðäöà è ìîçãà, òàê è ïîñëåäñòâèé
ýòèõ íàðóøåíèé, ïðèîáðåòàåò âñå áîëüøóþ çíà÷èìîñòü â
ñâÿçè ñ âûñîêèì óðîâíåì ëåòàëüíîñòè, çíà÷èòåëüíîé èíâàëèäèçàöèåé è ñîöèàëüíîé äåçàäàïòàöèåé ïàöèåíòîâ. Òàê,
âî âñåì ìèðå èíâàëèäàìè â ðåçóëüòàòå èíñóëüòà ÿâëÿþòñÿ
îêîëî 30 ìëí ÷åëîâåê. Äðóãèì ïðèìåðîì ïîñëåäñòâèé îñòðîé èøåìèè âûñîêîñïåöèàëèçèðîâàííûõ òêàíåé ÿâëÿåòñÿ
ñíèæåíèå ñîêðàòèòåëüíîé ñïîñîáíîñòè ñåðäå÷íîé ìûøöû,
çàêîíîìåðíî ðàçâèâàþùåéñÿ ïîñëå îñòðîãî èíôàðêòà
ìèîêàðäà, êàê ñëåäñòâèå ïðîöåññîâ ðåìîäåëèðîâàíèÿ.
Îñíîâàíèåì äëÿ ïðîâåäåíèÿ äàííîé ðàáîòû ïîñëóæèëè íàêàïëèâàþùèåñÿ äàííûå î âîçìîæíîñòè òåðàïèè ðàçëè÷íûõ
èøåìè÷åñêèõ ñîñòîÿíèé âûñîêîñïåöèàëèçèðîâàííûõ òêàíåé è ïîñëåäñòâèé òàêèõ ñîñòîÿíèé ñ ïîìîùüþ ñòâîëîâûõ
êëåòîê ïóïîâèííîé/ïëàöåíòàðíîé êðîâè ÷åëîâåêà. Êîëè÷åñòâî
ïîïûòîê âîçäåéñòâèÿ íà ñîñòîÿíèÿ, âûçâàííûå äåôèöèòîì
êðîâîñíàáæåíèÿ ñ ïîìîùüþ ñòâîëîâûõ êëåòîê ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè è êîñòíîãî ìîçãà êðîâè â êëèíèêå ðàñòåò. Ïîêàçàíî, ÷òî èíôóçèÿ àóòîãåííûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê êîñòíîãî
ìîçãà â õîäå áàëëîííîé àíãèîïëàñòèêè ïðèâîäèò ê óìåíüøåíèþ çîíû èíôàðêòà ó áîëüíûõ [1]. Â ýêñïåðèìåíòàõ íà
æèâîòíûõ ïîêàçàíî, ÷òî êîñòíîìîçãîâûå êëåòêè [2], ñòâîëîâûå êëåòêè ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè æèâîòíûõ [3] ñïîñîáíû â ìîäåëüíûõ ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íèâåëèðîâàòü
íåâðîëîãè÷åñêèé äåôèöèò, îáóñëîâëåííûé èøåìèåé ãîëîâíîãî ìîçãà. Õîòÿ èìåþòñÿ ðàáîòû, ïîêàçûâàþùèå çíà÷èòåëüíóþ ýôôåêòèâíîñòü ïðåïàðàòîâ êëåòîê ïóïîâèííîé
êðîâè ÷åëîâåêà íà ðàçëè÷íûõ ìîäåëÿõ èøåìèè, íåÿñíî,
íàäîëãî ëè ñîõðàíÿåòñÿ òàêîé ýôôåêò, íåèçâåñòíà åãî äèíàìèêà è âëèÿíèå òàêèõ ïðåïàðàòîâ íà îòäàëåííûå ïîñëåäñòâèÿ èøåìèè.
Öåëüþ äàííîé ðàáîòû ÿâèëîñü èçó÷åíèå ñïîñîáíîñòè
îòå÷åñòâåííîãî ïðåïàðàòà Êðèîöåë, (êîíöåíòðàòà ñòâîëîâûõ
êëåòîê ïóïîâèííîé/ïëàöåíòàðíîé êðîâè ÷åëîâåêà) ïðîèçâîäñòâà Ñàíêò-Ïåòåðáóðãñêîãî ÃÓÇ «Ãîðîäñêàÿ ñòàíöèÿ ïåðåëèâàíèÿ êðîâè»:
• âëèÿòü íà äèíàìèêó íåâðîëîãè÷åñêèõ íàðóøåíèé êàê â
áëèçêèå, òàê è â îòäàëåííûå ïåðèîäû ïîñëå îñòðîãî íàðóøåíèÿ ìîçãîâîãî êðîâîîáðàùåíèÿ, âûçâàííîãî îêêëþçèåé
ñðåäèííîé ìîçãîâîé àðòåðèè;
• âëèÿòü íà ðàçâèòèå ñåðäå÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè, çàêîíîìåðíî ðàçâèâàþùåéñÿ ïîñëå èíôàðêòà ìèîêàðäà,
âûçâàííîãî ïåðåâÿçêîé ëåâîé êîðîíàðíîé àðòåðèè.
Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ ¹ 1 (3), 2006
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû
Ïðåïàðàò ñòâîëîâûõ êëåòîê ïóïîâèííîé/ïëàöåíòàðíîé
êðîâè ÷åëîâåêà Êðèîöåë ïðîèçâîäèòñÿ â ñîîòâåòñòâèè ñ «Èíñòðóêöèåé ïî âûäåëåíèþ è õðàíåíèþ êîíöåíòðàòà ñòâîëîâûõ
êëåòîê ïóïîâèííîé/ïëàöåíòàðíîé êðîâè ÷åëîâåêà», óòâåðæäåííîé Ìèíçäðàâîì ÐÔ â 2003 ãîäó. Ïðåïàðàò ïðåäñòàâëÿåò
ñîáîé âçâåñü ìîíîíóêëåàðîâ ïóïîâèííîé/ïëàöåíòàðíîé
êðîâè ÷åëîâåêà, ïîìåùåííóþ â êðèîêîíñåðâèðóþùèé ðàñòâîð è çàìîðîæåííóþ â ïðîãðàììèðóåìîì ðåæèìå äî òåìïåðàòóðû æèäêîãî àçîòà. Ñëåäîâàòåëüíî, ââîäèìûå êëåòêè
ÿâëÿëèñü êñåíîãåííûìè ïî îòíîøåíèþ ê æèâîòíîìó-ðåöèïèåíòó. Êðèîìåøîê ñ ïðåïàðàòîì íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä
ââåäåíèåì ïðåïàðàòà âûíèìàëè èç æèäêîãî àçîòà, ãäå îí
íàõîäèëñÿ, ñïóñòÿ 2-3 ìèíóòû ïîìåùàëè â âîäÿíóþ áàíþ ñ
òåìïåðàòóðîé +37° Ñ è îòòàèâàëè, îñòîðîæíî ðàçäàâëèâàÿ
òàþùèå êðèñòàëëû ëüäà. Ñðàçó ïîñëå òîãî, êàê êðèñòàëëû
ëüäà èñ÷åçàëè, êðèîïàêåò èçâëåêàëè èç âîäÿíîé áàíè.
Ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì ïðåïàðàòà êëåòêè îòìûâàëè îò
êðèîêîíñåðâèðóþùåãî ðàñòâîðà, ñîäåðæàùåãî äèìåòèëñóëüôîêñèä è ðåñóñïåíäèðîâàëè êëåòêè 10% ðàñòâîðîì ðåîïîëèãëþêèíà. Ìåòîäîì âèòàëüíîé îêðàñêè òðèïàíîâûì ñèíèì
îïðåäåëÿëè ïðîöåíò æèçíåñïîñîáíûõ êëåòîê â êàìåðå Ãîðÿåâà. Ïðåïàðàò ïåðåä ââåäåíèåì ðàçâîäèëè äî íóæíîé êîíöåíòðàöèè 0,9%-íûì ñòåðèëüíûì ðàñòâîðîì õëîðèäà íàòðèÿ.
Ýêñïåðèìåíòû ïî ìîäåëèðîâàíèþ èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà ïðîâîäèëè íà áåëûõ êðûñàõ-ñàìöàõ ìàññîé 370-400 ã
ëèíèè Âèñòàð. Èøåìèþ âîñïðîèçâîäèëè ïóòåì ïîñòîÿííîé
îêêëþçèè ëåâîé ñðåäíåé ìîçãîâîé àðòåðèè (ÏÎÑÌÀ) ïîä îáùåé àíåñòåçèåé õëîðàëãèäðàòîì â ñîîòâåòñòâèè ñ ðåêîìåíäàöèÿìè ïî äîêëèíè÷åñêîìó èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ [4], ïðè÷åì îêêëþçèÿ äîñòèãàëàñü ïóòåì
ýëåêòðîêîàãóëÿöèè áåç ðàçðóøåíèÿ ñêóëîâîãî îòðîñòêà. Ïðè
èìèòàöèè îïåðàöèè (ëîæíàÿ ÏÎÑÌÀ) ýëåêòðîêîàãóëÿöèÿ íå
ïðîèçâîäèëàñü.
Ìîäåëèðîâàíèå îñòðîãî èíôàðêòà ìèîêàðäà (ÎÈÌ) îñóùåñòâëÿëîñü ïåðìàíåíòíîé îêêëþçèåé íèñõîäÿùåé âåòâè
ëåâîé êîðîíàðíîé àðòåðèè (ÎËÊÀ) íà ãðàíèöå ñðåäíåé è íèæíåé òðåòè ó êðûñ-ñàìöîâ ìàññîé 230-250 ã ëèíèè Âèñòàð,
íàõîäÿùèõñÿ íà ñàìîñòîÿòåëüíîì äûõàíèè. Ïðè èìèòàöèè
îêêëþçèè ëèãàòóðà ïîä àðòåðèþ íå ïîäâîäèëàñü è, ñîîòâåòñòâåííî, íå ïåðåâÿçûâàëàñü. Â ñëåäóþùèé ýòàï ýêñïåðèìåíòà
âêëþ÷àëèñü æèâîòíûå, ó êîòîðûõ âûÿâëÿëñÿ øèðîêèé çóáåö Q
(áîëåå 0,3 ìÂ), à òàêæå ëîæíîîïåðèðîâàííûå æèâîòíûå, âûæèâøèå â òå÷åíèå 24 ÷àñîâ ïîñëå îïåðàöèè.
Îáúåì ââåäåíèÿ ïðåïàðàòà êàæäîìó æèâîòíîìó ñîñòàâëÿë 2,0 ìë. Ïðåïàðàò Êðèîöåë ââîäèëñÿ îäíîêðàòíî âíóòðèâåííî ñî ñêîðîñòüþ îêîëî 4 ìë â ÷àñ â äâóõ äîçàõ: 2½104
èëè 2½106 êëåòîê. Ïðåïàðàò (èëè ðàñòâîðèòåëü, ñîîòâåòñòâåííî) ââîäèëñÿ ëèáî ÷åðåç 24 ÷àñà ïîñëå îêêëþçèè, ëèáî
÷åðåç íåñêîëüêî äíåé ïîñëå íåå: â ñëó÷àå ýêñïåðèìåíòîâ
Òåìà âûïóñêà: ïóïîâèííàÿ êðîâü
75
íà ìîäåëè ÎÈÌ - ÷åðåç 5 äíåé, â ñëó÷àå ýêñïåðèìåíòîâ íà
ìîäåëè èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà – ÷åðåç 7 äíåé.
Ó æèâîòíûõ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì èíñóëüòîì (èëè ëîæíîé îïåðàöèåé) íàðóøåíèÿ êîîðäèíàöèè âûÿâëÿëè â òåñòå
«âðàùàþùèéñÿ ñòåðæåíü». Äëÿ ýòîãî ðåãèñòðèðîâàëè âðåìÿ óäåðæèâàíèÿ æèâîòíûõ íà áàðàáàíå, âðàùàþùåìñÿ ñî
ñêîðîñòüþ 18 îá/ìèí. Çà 2 äíÿ äî òåñòèðîâàíèÿ æèâîòíûõ
ïðåäâàðèòåëüíî òðåíèðîâàëè ïî 5 ìèí ïðè ñêîðîñòè âðàùåíèÿ áàðàáàíà 9 îá/ìèí. Çà 1 äåíü ïåðåä îïåðàöèåé æèâîòíûå òðèæäû ïðîõîäèëè òåñò, ñðåäíåå âðåìÿ ýòèõ òåñòîâ
(â ñåêóíäàõ) ðåãèñòðèðîâàëîñü êàê ïåðâîíà÷àëüíîå äëÿ äàííîãî æèâîòíîãî. Èíäèâèäóàëüíîå âðåìÿ êàæäîãî æèâîòíîãî,
çàðåãèñòðèðîâàííîãî â ýòîì æå òåñòå ïîñëå îïåðàöèè, îïðåäåëÿëè êàê äîëþ îò ïåðâîíà÷àëüíîãî çíà÷åíèÿ (äî îïåðàöèè) äëÿ äàííîãî æèâîòíîãî. Âðàùàòåëüíóþ àñèììåòðèþ
èññëåäîâàëè íà ðîòîìåòðå â «àïî-òåñòå». Äëÿ ýòîãî àïîìîðôèí ââîäèëè â äîçå 0,5 ìã/êã âíóòðèáðþøèííî çà 30 ìèí
äî òåñòà. Ðåãèñòðèðîâàëè ðàçíèöó ìåæäó êîëè÷åñòâîì îáîðîòîâ âëåâî è êîëè÷åñòâîì îáîðîòîâ âïðàâî, ñîâåðøåííûõ
æèâîòíûì â òå÷åíèå 30 ìèíóò. Íåâðîëîãè÷åñêèé äåôèöèò
îöåíèâàëñÿ ïî øêàëå Menzies [5]. Êîãíèòèâíûå ðàññòðîéñòâà îöåíèâàëèñü â òåñòå íà âûðàáîòêó óñëîâíîãî ðåôëåêñà
ïàññèâíîãî èçáåãàíèÿ (ÓÐÏÈ) â ñîîòâåòñòâèè ñ ðåêîìåíäàöèÿìè ïî äîêëèíè÷åñêîìó èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ [4]. Æèâîòíîå ïîìåùàëè íà ïëàòôîðìó, óñòàíîâëåííóþ â öåíòðå êàìåðû ñ ýëåêòðèôèöèðîâàííûì
ïîëîì. Îáó÷åíèå êðûñ ïðîèçâîäèëè ïóòåì ýëåêòðîáîëåâîãî
ðàçäðàæåíèÿ ïóòåì ïîäà÷è òîêà ñèëîé 0,3 ìÀ íà ðåøåòêó
ïîëà. Æèâîòíîå ïåðåõîäèëî íà áåçîïàñíóþ ïëàòôîðìó è
äîëæíî áûëî îñòàâàòüñÿ íà íåé â òå÷åíèå 10 ìèíóò. Âîñïðîèçâåäåíèå ðåôëåêñà îöåíèâàëîñü ÷åðåç 24 ÷àñà ïîñëå
îáó÷åíèÿ, ïóòåì ïîìåùåíèÿ æèâîòíîãî íà áåçîïàñíóþ ïëàòôîðìó. Ôèêñèðîâàëè ëàòåíòíîå âðåìÿ ñõîäà æèâîòíîãî ñ
ïëàòôîðìû íà ïîë êàìåðû. Îöåíêà ïî âûøåóêàçàííûì òåñòàì ïðîâîäèëàñü íà 2-é è 10-é íåäåëå ïîñëå îïåðàöèè.
Ó êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì ÎÈÌ (èëè ëîæíîé îïåðàöèåé) ÷åðåç 45 äíåé ïîñëå âìåøàòåëüñòâà ïðîâîäèëè îöåíêó
èíòîëåðàíòíîñòè ê ôèçè÷åñêèì íàãðóçêàì â òåñòå «ïðèíóäèòåëüíîãî ïëàâàíèÿ» ñ ãðóçîì. Ôèêñèðîâàëîñü âðåìÿ äî íà÷àëà ïîãðóæåíèÿ êðûñû. Äëÿ îöåíêè ñòåïåíè êîìïåíñàòîðíîé ãèïåðòðîôèè ìèîêàðäà îïðåäåëÿëîñü ñîîòíîøåíèå
ìàññû ñåðäöà ê ìàññå òåëà æèâîòíîãî. Äëÿ ýòîãî ÷åðåç 2 äíÿ
ïîñëå ïðîâåäåíèÿ òåñòà «ïðèíóäèòåëüíîãî ïëàâàíèÿ» æèâîòíûå âçâåøèâàëèñü è ïîäâåðãàëèñü ýâòàíàçèè ìåòîäîì
äåêàïèòàöèè. Íåïîñðåäñòâåííî ïîñëå ýâòàíàçèè ñåðäöå
èçâëåêàëîñü èç ãðóäíîé êëåòêè è âçâåøèâàëîñü.
Ðèñ. 1. Âëèÿíèå ïðåïàðàòà íà âîññòàíîâëåíèå
êîîðäèíàöèè â òåñòå «âðàùàþùèéñÿ ñòåðæåíü»
Ãðóïïû: 1 - ÏÎÑÌÀ + ïðåïàðàò 2½104 êë.; 2 - ÏÎÑÌÀ +
ïðåïàðàò 2½106 êë.; 3 - ÏÎÑÌÀ + ðàñòâîðèòåëü; 4 - ëîæíàÿ
îïåðàöèÿ + ðàñòâîðèòåëü
Ðèñ. 2. Âëèÿíèå ïðåïàðàòà íà ðåäóêöèþ íåâðîëîãè÷åñêîãî
äåôèöèòà
Ãðóïïû: 1 - ÏÎÑÌÀ + ïðåïàðàò 2½104 êë.; 2 - ÏÎÑÌÀ +
ïðåïàðàò 2½106 êë.; 3 - ÏÎÑÌÀ + ðàñòâîðèòåëü; 4 - ëîæíàÿ
îïåðàöèÿ + ðàñòâîðèòåëü
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå
Ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòîâ ïðåäñòàâëåíû íà ðèñ. 1-6. Êàê
âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ, ïðåïàðàò ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì èíñóëüòå âûçûâàë çíà÷èòåëüíîå óñêîðåíèå âîññòàíîâëåíèÿ íàðóøåííûõ ôóíêöèé. Ê 10-é íåäåëå æèâîòíûå,
ïîëó÷èâøèå ïðåïàðàò, ïðàêòè÷åñêè íå îòëè÷àëèñü îò ëîæíîîïåðèðîâàííûõ æèâîòíûõ. Ê êîíöó èññëåäîâàíèÿ ðàçëè÷èÿ
ìåæäó ãðóïïàìè ëîæíîîïåðèðîâàííûõ æèâîòíûõ è æèâîòíûõ,
ïîëó÷èâøèõ ïðåïàðàò, âûÿâëÿëèñü òîëüêî â íàãðóçî÷íîì òåñòå íà âðàùàòåëüíóþ àñèììåòðèþ («àïî-òåñò») (ðèñ. 3).
 ýêñïåðèìåíòàõ íà ìîäåëè ÎÈÌ ïðåïàðàò â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè óìåíüøàë ðàçâèòèå ãèïåðòðîôèè ìèîêàðäà (ðèñ.
5). Ïðè àíàëèçå âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà ïðåäîòâðàùåíèå ðàçâèòèÿ èíòîëåðàíòíîñòè ê ôèçè÷åñêîé íàãðóçêå âûÿâëåíû òå
æå çàêîíîìåðíîñòè (ðèñ. 6).
Ïðè ýòîì ââåäåíèå ïðåïàðàòà Êðèîöåë â îáåèõ ìîäåëüíûõ ñèñòåìàõ â áîëüøåé äîçå è/èëè â áîëåå ðàííèå ñðîêè
îò ìîìåíòà âîçíèêíîâåíèÿ èøåìèè ïðèâîäèëî ê áîëåå âûðàæåííîìó ýôôåêòó. Êàêèõ-ëèáî íåãàòèâíûõ ýôôåêòîâ,
ñâÿçàííûõ ñ ââåäåíèåì ïðåïàðàòà, íå îòìå÷àëîñü.
Êàê ïîêàçàíî â ðàáîòàõ çàðóáåæíûõ èññëåäîâàòåëåé,
ïðèæèâëåíèå ââåäåííûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè
â îðãàíèçìå ðåöèïèåíòà íå ÿâëÿåòñÿ îáÿçàòåëüíûì äëÿ ïîëó÷åíèÿ òåðàïåâòè÷åñêîãî ýôôåêòà [6]. Òàê, ââåäåíèå ïðåïàðàòà ÷åëîâå÷åñêèõ ñòâîëîâûõ êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè
æèâîòíûì (êðûñàì) ñ ïåðåâÿçàííîé ëåâîé ñðåäíåé ìîçãîâîé àðòåðèåé ïðèâîäèëî ê óìåíüøåíèþ çîíû íåêðîçà è óñêîðåííîìó âîññòàíîâëåíèþ íåâðîëîãè÷åñêèõ ôóíêöèé, ïî
ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé [7, 8, 9]. Íà ìîäåëè îñòðîãî èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà ó ìûøåé ïîêàçàíî, ÷òî ââåäåíèå CD 34+ êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè ÷åëîâåêà ìîæåò óñèëèâàòü àíãèîãåíåç, íåéðîãåíåç, ìîðôîëîãè÷åñêîå è
ôóíêöèîíàëüíîå âîññòàíîâëåíèå ìîçãà [10]. Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ ýôôåêòèâíîñòè ñòâîëîâûõ êëåòîê íà
ìîäåëè èíôàðêòà ìèîêàðäà ó æèâîòíûõ ïîêàçàëè îïðåäå-
Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ ¹ 1 (3), 2006
76
Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
ëåííóþ ýôôåêòèâíîñòü äàííîãî ìåòîäà [11, 12]. Òàêæå óëó÷øåíèå êðîâîñíàáæåíèÿ è/èëè âîññòàíîâëåíèå ôóíêöèè ïðè
âîçäåéñòâèè ïðåïàðàòà ñòâîëîâûõ êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè ÷åëîâåêà áûëî ïîëó÷åíî â ýêñïåðèìåíòå äëÿ èøåìèçèðîâàííûõ êîíå÷íîñòåé æèâîòíûõ [13, 14].
Çàêëþ÷åíèå
 íàñòîÿùåé ðàáîòå âïåðâûå ïîêàçàíà ýôôåêòèâíîñòü
ïðåïàðàòà êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè ÷åëîâåêà (îòå÷åñòâåííûé ïðåïàðàò Êðèîöåë) â îòíîøåíèè ñíèæåíèÿ âûðàæåííîñòè êàê ðàííèõ, òàê è îòäàëåííûõ ïîñëåäñòâèé èøåìè÷åñêîãî ïîðàæåíèÿ ñåðäöà è ìîçãà. Ïðè ýòîì ïðåïàðàò ïîêàçàë
ñâîþ ýôôåêòèâíîñòü ïðè åãî ïðèìåíåíèè, êàê â ðàííèå, òàê
è â ïîçäíèå ñðîêè îò ìîìåíòà âîçíèêíîâåíèÿ èøåìèè. Íà
ìîäåëè îñòðîãî èíôàðêòà ìèîêàðäà ïîêàçàíî ñíèæåíèå
âûðàæåííîñòè êîìïåíñàòîðíîé ïîñòèíôàðêòíîé ãèïåðòðîôèè ìèîêàðäà è íåäîñòàòî÷íîñòè êðîâîîáðàùåíèÿ, çàêîíîìåðíî âîçíèêàþùèõ â ïðîöåññå ïîñòèíôàðêòíûõ èçìåíåíèé ñåðäå÷íîé ìûøöû. Ïðè ëå÷åíèè ýêñïåðèìåíòàëüíîãî
èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà ïðîäåìîíñòðèðîâàíî áîëåå ïîëíîå
è óñêîðåííîå âîññòàíîâëåíèå íåðâíûõ ôóíêöèé, âêëþ÷àÿ
êîãíèòèâíûå è êîîðäèíàöèîííûå ðàññòðîéñòâà. Â êëèíèêå
ïðåïàðàò ìîæåò ïðåäñòàâëÿòü ñîáîé ýôôåêòèâíîå ñðåäñòâî
ïðîôèëàêòèêè è/èëè ëå÷åíèÿ ïîñëåäñòâèé èíôàðêòà ìèîêàðäà è èíñóëüòà, äëÿ ÷åãî íåîáõîäèìû ñîîòâåòñòâóþùèå
êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ.
Ðèñ. 3. Âëèÿíèå ïðåïàðàòà íà ðåäóêöèþ äâèãàòåëüíîé
àññèìåòðèè â «àïî-òåñòå»
Ãðóïïû: 1 - ÏÎÑÌÀ + ïðåïàðàò 2½104 êë.; 2 - ÏÎÑÌÀ +
ïðåïàðàò 2½106 êë.; 3 - ÏÎÑÌÀ + ðàñòâîðèòåëü; 4 - ëîæíàÿ
îïåðàöèÿ + ðàñòâîðèòåëü
Ðèñ. 4. Âëèÿíèå ïðåïàðàòà íà äèíàìèêó âîññòàíîâëåíèÿ
êîãíèòèâíûõ ôóíêöèé â òåñòå ÓÐÏÈ
Ãðóïïû: 1 - ÏÎÑÌÀ + ïðåïàðàò 2½104 êë.; 2 - ÏÎÑÌÀ +
ïðåïàðàò 2½106 êë.; 3 - ÏÎÑÌÀ + ðàñòâîðèòåëü; 4 - ëîæíàÿ
îïåðàöèÿ + ðàñòâîðèòåëü
Ðèñ. 5. Âëèÿíèå ïðåïàðàòà íà ïîñòèíôàðêòíóþ ãèïåðòðîôèþ
ìèîêàðäà
Ãðóïïû: 1 - ÎËÊÀ + ïðåïàðàò 2½104 êë.; 2 - ÎËÊÀ + ïðåïàðàò
2½106 êë.; 3 - ÎËÊÀ + ðàñòâîðèòåëü; 4 - ëîæíàÿ îïåðàöèÿ +
ïðåïàðàò 2½104 êë.; 5 – ëîæíàÿ îïåðàöèÿ + ïðåïàðàò 2½106 êë.;
6 - ëîæíàÿ îïåðàöèÿ + ðàñòâîðèòåëü
Ðèñ. 6. Âëèÿíèå ïðåïàðàòà íà èíòîëåðàíòíîñòü ê ôèçè÷åñêîé
íàãðóçêå â òåñòå «ïðèíóäèòåëüíîå ïëàâàíèå»
Ãðóïïû: 1 - ÎËÊÀ + ïðåïàðàò 2½104 êë.; 2 - ÎËÊÀ + ïðåïàðàò
2½106 êë.; 3 - ÎËÊÀ + ðàñòâîðèòåëü; 4 - ëîæíàÿ îïåðàöèÿ +
ïðåïàðàò 2½104 êë.; 5 – ëîæíàÿ îïåðàöèÿ + ïðåïàðàò 2½106 êë.;
6 - ëîæíàÿ îïåðàöèÿ + ðàñòâîðèòåëü
Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ ¹ 1 (3), 2006
Òåìà âûïóñêà: ïóïîâèííàÿ êðîâü
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ:
1. Strauer B.E., Brehm M., Zeus T. et al. Repair of infarcted myocardium by
autologous intracoronary mononuclear bone marrow cell transplantation in
humans. Circulation 2002; 106(15): 1913-8.
2. Chen J., Li Y., Katakowski M. et al. Intravenous bone marrow stromal cell
therapy reduces apoptosis and promotes endogenous cell proliferation after
stroke in female rat. J. Neurosci. Res. 2003; 73(6): 778-86.
3. Willing A.E., Vendrame M., Mallery J. et al. Mobilized peripheral blood cells
administered intravenously produce functional recovery in stroke. Cell Transplant.
2003; 12(4): 449-54.
4. Àðçàìàñöåâ Å.Â. è äð. Ìåòîäè÷åñêèå óêàçàíèÿ ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó
èçó÷åíèþ ïðåïàðàòîâ äëÿ ëå÷åíèÿ íàðóøåíèé ìîçãîâîãî êðîâîîáðàùåíèé.
Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ
ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ. Ì., 2000: 159-61.
5. Menzies S.A., Hoff J.T., Betz A.L. Middle cerebral artery occlusion in rats: a
neurological and pathological evaluation of a reproducible model. Neurosurgery
1992; 31(1): 100-6.
6. Borlongan C.V., Hadman M., Sanberg C.D., Sanberg P.R. Central nervous
system entry of peripherally injected umbilical cord blood cells is not required for
neuroprotection in stroke. Stroke 2004; 35(10): 2385-9.
77
7. Chen J., Sanberg P.R., Li Y. et al. Intravenous administration of human
umbilical cord blood reduces behavioral deficits after stroke in rats. Stroke 2001;
32(11): 2682-8.
8. Vendrame M., Cassady J., Newcomb J. et al. Infusion of human umbilical
cord blood cells in a rat model of stroke dose-dependently rescues behavioral
deficits and reduces infarct volume. Stroke 2004; 35(10): 2390-5.
9. Willing A.E., Lixian J., Milliken M. et al. Intravenous versus intrastriatal cord
blood administration in a rodent model of stroke. J. Neurosci. Res. 2003; 73(1):
296-307.
10 .Taguchi A. et al. Administration of ÑD 34+ cells after stroke enhances
neurogenesis via angiogenesis in a mouse model. J. Clin. Invest. 2004; 114: 330-8.
11. Henning R.J. et al. Human umbilical cord blood mononuclear cells for the
treatment of acute myocardial infarction. Cell Transplant. 2004; 13: 729-39.
12. Hirata Y. et al. Human umbilical cord blood cells improve cardiac function
after myocardial infarction. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005; 327: 609-14.
13. Yang C. et al. [Transplantation of cord blood endothelial progenitor cells
ameliorates limbischemia] Zhonghua Yi Xue Za Zhi 2003; 83: 1437-41 [Article
in Chinese].
14. Madeddu P. et al. Transplantation of low dose CD34+KDR+ cells promotes
vascular and muscular regeneration in ischemic limbs. FASEB J 2004;18: 1737
ÎÎÎ «ÊýìÁèî» - îôèöèàëüíûé
äèñòðèáüþòîð êîìïàíèè
StemCell Technology Inc.
íà òåððèòîðèè ÐÔ ïðåäñòàâëÿåò:
RobosepTM - ñèñòåìó äëÿ àâòîìàòè÷åñêîãî âûäåëåíèÿ ñòâîëîâûõ êëåòîê
íà îñíîâå EasySepR òåõíîëîãèè:
• Ïðèáîð ïîçâîëÿåò èñïîëüçîâàòü ïîçèòèâíûé è íåãàòèâíûé ìåòîä âûäåëåíèÿ êëåòîê
• Îäíîâðåìåííîå âûäåëåíèå êëåòîê èç 4 ðàçíûõ îáðàçöîâ.
• Ìàêñèìàëüíîå êîëè÷åñòâî êëåòîê â êàæäîì îáðàçöå 2½109 êëåòîê.
• Âûäåëåíèå ïðîâîäÿòñÿ áåç èñïîëüçîâàíèÿ êîëîíîê.
• Ïðèáîð ïîçâîëÿåò âûäåëÿòü êëåòêè (ÑD3+, CD4+, CD8+, CD14+, CD15+, CD19+, CD33+, CD34+, CD56+,
CD66b+, CD33+ & CD66B+) èç öåëüíîé êðîâè.
• Èñïîëüçóþòñÿ FACS-cîâìåñòèìûå ìàãíèòíûå íàíî÷àñòèöû
• Ïðîòîêîëû âûäåëåíèÿ ìîãóò áûòü îïòèìèçèðîâàíû ïîä ýêñïåðèìåíòû ïîëüçîâàòåëÿ
RosetteSepR-ñèñòåìà äëÿ âûäåëåíèÿ ñòâîëîâûõ êëåòîê èç öåëüíîé êðîâè.
Ñïåöèàëèçèðîâàííûå ñðåäû äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ ãåìîïîýòè÷åñêèõ êëåòîê:
MethoCultR- ñðåäû íà îñíîâå ìåòèëöåëëþëîçû,
MegaCultR-ñðåäû íà îñíîâå êîëëàãåíà,
MyeloCultR-ñðåäû äëÿ äëèòåëüíîãî êóëüòèâèðîâàíèÿ
Ìåçåíõèìàëüíûõ (MesenCultR) êëåòîê,
Íåðâíûõ (NeuroCultR) êëåòîê,
Öèòîêèíû (BMP-4, EGF, EPO, FGF-b, G-CSF, GM-CSF, IGF-1,IL-2, M-CSF, OSM, PRL è äð.)
Aíòèòåëà (ÑD2, ÑD3, CD4, CD11b, CD90, CD45, CD38 CD34, HLA-G è äð.)
StemSpanR SFEM , StemSpanR H3000 – cïåöèàëèçèðîâàííûå ñðåäû íå ñîäåðæàùèå ñûâîðîòêè
Ñûâîðîòêè (FBS) äëÿ ãåìîïîýòè÷åñêèõ, ìåçåíõèìàëüíûõ êëåòîê
Ñïåöèàëèçèðîâàííûå àòëàñû (Colony Atlas, Human Hematopoetic Colony Slides, Basic Cell Culture Protocols, Human
Hematopoetic Colonies in Health and Disease)
Òåë.: (495) 223-92-79, (495) 223-92-89
www.chembio.ru
Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ ¹ 1 (3), 2006