Новые диагностические препараты ГНЦ ПМБ для санитарной и

Новые разработки ФБУН ГНЦПМБ
для диагностики инфекционных
заболеваний
ФБУН ГНЦ прикладной микробиологии и
биотехнологии
Роспотребнадзора, Оболенск
Домотенко Л.В.
Москва
Национальный конгресс бактериологов
23-24 сентября 2015 г.
FT-агар для культивирования выделения
возбудителя туляремии (РУ № ФСР 2007/00899)
Francisella tularensis 15 НИИЭГ
2
Результаты проведения полевых испытаний
Ft-агара на Уральской противочумной станции
Период
исследования
Количество Количество
Время
исследопосевов
появления
ванных
видимого
клещей
роста, сутки
Всего выделено
культур F. tularensis
Кровяной
эритритагар
Ft-агар
1991
12361
292
3-5
22
22
1992
21954
507
2-3
70
71
1993
16040
383
2-4
42
43
Всего
50355
1182
2,3-4
134
136
3
Использование Ft-агара
•
МУ 3.3.2.2124-06. Контроль диагностических питательных сред по
биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры,
сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза.
• Барулина И.С., Саяпина Л. В., Адамова Г. В. Применение Ft-агара для
сохранения стабильности свойств тест-штаммов туляремийного
микроба/ Биопрепараты. - 2007. - № 2. - С. 30-31.
• Соловьёв Е. А., Саяпина Л. В., Бондарев В. П. Изучение основных
свойств туляремийного микроба при культивировании на
различных питательных средах / Биозащита и биобезопасность. –
2013. - № 2. - С. 30-33.
• Мокриевич А.Н., Тимофеев В.С., Кудрявцева Т.Ю., Уланова Г.И.,
Карбышева С.Б., Миронова Р.И., Вахрамеева Г.М., Губарева Т.И.,
Павлов В.М., Дятлов И.А. Выделение среднеазиатского подвида
туляремийного микроба на территории Алтайского края / Проблемы
ООИ. - 2013. - №1. – С.66-69.
4
Туляремия в Ханты-Мансийске (2013 г.)
Ft-агар использован
при выделении
F. tularensis из органов
животных
и из папул
больных людей.
5
Питательная среда для культивирования и
выделения туляремийного микроба,
готовая к применению (РУ № ФСР 2011/10649)
Обеспечивает рост тест-штаммов Francisella
tularensis из разведения 10-7 (100 мк/мл) через
72 ч при 37 ºС в виде беловато-серых блестящих
колоний диаметром не менее 1,0 мм.
6
Тест-системы
для выявления возбудителя туляремии
•
Набор реагентов для иммунохроматографического экспрессвыявления и идентификации возбудителя туляремии
(ИХ тест F. tularensis), Рег. № ФСР 2009/05486
•
Набор реагентов для определения возбудителя туляремии F. tularensis
в реакции латекс-агглютинации, Рег. № ФСР 2011/12157
•
Набор реагентов для выявления возбудителей чумы, сибирской язвы
и туляремии методом ПЦР в режиме реального времени
«MULTI-FLU», Рег. № РЗН 2013/1359
•
Набор реагентов для одновременного определения возбудителей
сибирской язвы и туляремии методом мультиплексного
иммунофлуоресцентного анализа (Тест-система ИФЛА-2BF),
Рег.
№РЗН 2014/1468
7
ЧПС селективная (РУ № ФСР 2012/13297)
Колонии (х40) Y. pestis EV
Колонии (х40) Y. pestis EV
через 24 ч инкубирования при 28 °С
через 48 ч инкубирования при 28 °С
8
Тест-системы
для выявления возбудителя чумы
•
Иммунохроматографический экспресс-тест для серодиагностики чумы
(ИХТ-F1 серодиагностика чумы), Рег. № ФСР 2010/06813
•
Набор реагентов для иммунохроматографического экспрессвыявления и идентификации возбудителя чумы (ИХ тест Y.pestis),
Рег. № ФСР 2009/05487
•
Набор реагентов для выявления возбудителей чумы, сибирской язвы
и туляремии методом ПЦР в режиме реального времени «MULTIFLU», Рег. № РЗН 2013/1359
9
ПС для выделения возбудителя
сибирской язвы (РУ № ФСР 2011/10648)
Колонии (х40) B. anthracis СТИ-1
через 24 ч инкубирования при 37 °С
10
Тест-системы для В.anthracis
•
•
•
•
•
•
•
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и
идентификации спор возбудителя сибирской язвы (ИХ тест В.anthracis),
Рег. № ФСР 2009/05485
Диагностический фаг-тест-набор для идентификации сибиреязвенного
возбудителя (Фаг-тест-набор «Оболенск R1»), Рег. № ФСР 2009/05474
Набор реагентов для определения спор В.anthracis в реакции латексагглютинации, Рег. № ФСР 2011/12159
Набор реагентов для выявления возбудителей чумы, сибирской язвы и
туляремии методом ПЦР в режиме реального времени «MULTI-FLU»,
Рег. № РЗН 2013/1359
Набор реагентов для определения протективного антигена возбудителя
сибирской язвы методом иммуно-ПЦР (Тест-система ИПЦР-ПА),
Рег.
№ РЗН 2014/1464
Набор реагентов для одновременного определения протективного антигена и
летального фактора возбудителя сибирской язвы методом мультиплексного
иммунофлуоресцентного анализа (Тест-система ИФЛА-1Ba),
Рег. № РЗН 2014/1460
Набор реагентов для одновременного определения возбудителей сибирской
язвы и туляремии методом мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа
(Тест-система ИФЛА-2BF), Рег. № РЗН 2014/1468
РЗН 2014/1460
11
Питательная среда
для культивирования легионелл (Легионелбакагар)
Legionella pneumophila Philadelphia 1
Legionella micdadei NCTC 11371
Тест-системы для L. pneumophilla
•
Набор реагентов для быстрой идентификации L. pneumophilla в
реакции латекс-агглютинации, жидкий (Латексная тест-система
L. pneumophilla серотип 1), Рег. № РЗН 2013/1278
•
Набор реагентов для быстрой идентификации возбудителя
легионеллеза «Тест-полоска Legionella pneumophilla 1»,
Рег. № РЗН 2013/742
13
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ХОЛЕРЫ И ДРУГИХ
ЭНТЕРОПАТОГЕННЫХ ВИБРИОНОВ (TCBS-АГАР)
Высокие
концентрации
натрия цитрата,
желчи, а также
щелочная среда в
значительной
степени подавляют
рост
сопутствующей
микрофлоры.
Для выделения и культивирования возбудителя холеры и других энтеропатогенных
вибрионов от больных, а также из объектов внешней среды при проведении
бактериологических исследований
МУК 4.2.1793-03 Лабораторная диагностика
заболеваний, вызываемых парагемолитическими
и другими патогенными для человека вибрионами
14
ПЕПТОН ОСНОВНОЙ
ЩЕЛОЧНОЙ АГАР
Формирование
типичных
колоний
холерных
вибрионов на
щелочном
агаре после
накопления и
высева из
основного
пептона
ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В КЛИНИЧЕСКОЙ И САНИТАРНОЙ
МИКРОБИОЛОГИИ
с целью накопления
холерного вибриона
с целью культивирования холерного
вибриона и выделения его из
инфицированного материала
15
Тест-системы для возбудителя холеры
•
Набор реагентов для быстрой идентификации возбудителя холеры О1
группы «Тест-полоска V. cholerae О1», Рег. № РЗН 2013/270
•
Набор реагентов для быстрой идентификации токсигенных штаммов
возбудителя холеры «Тест-полоска V. cholerae tox+»
16
Питательные среды для выделения
основных возбудителей ГБМ
• Питательная среда для культивирования и выделения
гемофильной палочки, готовая к применению (Гемофилус агар,
рег. № ФСР 2011/11118)
• Питательная среда для выделения возбудителей гнойных
бактериальных менингитов, готовая к применению (Шоколадный
агар, рег. № ФСР 2012/13081)
• Питательная среда для выделения возбудителей гнойных
бактериальных менингитов, сухая (ГБМ-агар)
Тест-система для возбудителей ГБМ
Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации
возбудителей гнойных бактериальных менингитов –
• Haemophilus influenzae тип b,
• Streptococcus pneumoniae,
• Neisseria meningitidis тип A,
• Neisseria meningitidis тип B,
• Neisseria meningitidis тип С и
• Neisseria meningitidis тип W 135
в реакции латекс-агглютинации, жидкий
(Латексная тест-система ГБМ), Рег. № РЗН 2014/2268
18
Сульфитный агар
для выявления клостридий по
сульфитредуцирующему признаку
(РУ ФСР 2009/05626)
Аналог
сред Вильсона-Блера,
железо-сульфитного агара,
железо-сульфитной среды
19
Сульфитный агар (модификации)
•
ГОСТ 29185-91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения
количества сульфитредуцирующих бактерий
•
МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарнопаразитологический анализ воды поверхностных водных объектов»
•
МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды»
Модификация 1
Модификация 2
Модификация 3
1,5 г/л агара
7 г/л агара
15 г/л агара
Бордетелагар
для культивирования и выделения коклюшного
микроба (РУ ФСР 2012/13688)
Bordetella pertussis 143
Bordetella pertussis 688
Аналог казеиново-угольного агара
21
Рост B. pertussis 688 на разных средах
Charcoal agar
(BD)
Bordet Gengou Agar Base (BD)
+1% глицерина
+15% бараньей крови
Бордетелагар
22
ПС для определения чувствительности
микроорганизмов к антибактериальным
препаратам (РУ № ФСР 2012/13687)
P. aeruginosa ATCC 27853
E. coli ATCC 25922
23
ПС для определения чувствительности
микроорганизмов к АБП - 2
 Аналог среды АГВ
 Но используется специальный гидролизат, который позволяет
получать среду, удовлетворяющую требованиям нормативных
документов (НД) по содержанию ионов:
Са – 20-25 мкг/мл и Mg – 10-12,5 мкг/мл
 Ограничения для тестирования чувствительности к
сульфаниламидным препаратам из-за повышенного содержания
тимина/ тимидина.
Диаметры зон ингибиции для ко-тримоксазол/ сульфаметоксазола
и Е. faecalis АТСС 29212 ниже предельных значений
Диск с АБП
Триметоприм/
Сульфаметоксазол
Требования
НД, мм
МУК: > 20
Клинич. реком.:
26-34
Оболенск
АГВ
М-Х агар
(BD), мм
М-Х агар
(НИЦФ),
мм
---
---
28-30
---
Нормативные документы в РФ
• Методические указания по определению
чувствительности микроорганизмов к
антибактериальным препаратам, МУК 4.2.1890-04
(на основе требований CLSI)
• Клинические рекомендации «Определение
чувствительности микроорганизмов к
антимикробным препаратам», ноябрь, 2014
(на основе требований EUCAST)
25
Содержание кальция и магния
в питательных средах
Наименование среды
рН
Ca, мг/л
Mg, мг/л
7,2-7,4
20-25
10-12,5
ПС Оболенск с.1
7,25
19,2
9,7
ПС Оболенск с.2
7,3
20,9
12,4
ПС Оболенск с.3
7,25
20,1
10,4
ПС Оболенск с.4
7,25
21,2
13,0
АГВ
7,4
18,4
33,0
МХА ( BD)
7,2
17,5
10,2
МХА (HiMedia)
7,2
31,2
11,0
МХА ( НИЦФ)
7,3
5,4
1,6
Требования CLSI, EUCAST,
МУК 4.12.1890-04
Диаметры зон подавления роста (мм)
P. aeruginosa ATCC 27853 на разных средах
Диск с АБП
Гентамицин
10 мкг
Тобрамицин
10 мкг
Амикацин
По
требованиям
CLSI,
EUCAST
Оболенск
АГВ
М-Х
агар
(BD)
М-Х
агар
(HiM)
М-Х
агар
(НИЦФ)
CLSI:
16-21
EUCAST: 17-23
18-21
21-25
16-20
19-23
27-30
CLSI:
19-25
EUCAST: 20-26
22-25
23-25
20-21
22-24
24-28
18-26
22-23
23-28
21-22
22-24
29-30
25-33
27-30
31-33
26-28
29-30
34-36
CLSI:
22-29
EUCAST: 21-27
24-27
25-27
23-24
25-26
24-26
30 мкг
Ципрофлоксацин
5 мкг
Цефтазидим
30 мкг
ТБ тест-набор
для ускоренного определения лекарственной
чувствительности и первичной идентификации
M. tuberculosis (РУ ФСР № 2007/01366)
28
XDR-тест
для диагностики экстра устойчивого туберкулеза
(РУ № РЗН 2013/902)
XDR-тест
Анализ M. tuberculosis H37Rv
с помощью XDR-теста
29
PZA тест для определения чувствительности
M. tuberculosis к пиразинамиду
(РУ № ФСР 2011/10830)
30
Благодарю за внимание!
31