Фенотипические и функциональные характеристики лейкоцитов

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
«НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ АКУШЕРСТВА, ГИНЕКОЛОГИИ И
РЕПРОДУКТОЛОГИИ ИМЕНИ Д.О.ОТТА»
__________________________________________________________________________________
на правах рукописи
Михайлова
Валентина Анатольевна
Фенотипические и функциональные характеристики лейкоцитов периферической
крови и их микрочастиц при преэклампсии
14.03.03 - патологическая физиология
14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология
Диссертация
на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Научные руководители:
доктор медицинских наук,
профессор Сельков С.А.
доктор биологических наук
Соколов Д.И.
Санкт-Петербург
2015
2
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………………………………5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………………………..…10
1.1 Иммунологические механизмы контроля физиологического течения беременности……….10
1.1.1
Лейкоциты
периферической
крови
и
основные
пути
их
миграции…………………………………………………………………………….…………..10
1.1.2 Механизмы взаимодействия эндотелиальных клеток и лейкоцитов……………….…11
1.1.3 Роль различных популяций лейкоцитов децидуальной оболочки в иммунологическом
контроле физиологического развития плаценты……………………………………………..16
1.1.3.1 Т-лимфоциты децидуальной оболочки…………………………………………18
1.1.3.2 NK-клетки децидуальной оболочки…………………………………………….24
1.1.3.3 Макрофаги децидуальной оболочки………………………………………..…..28
1.2 Патогенетические механизмы развития преэклампсии……………….………………….……31
1.3 Молекулярные и клеточные механизмы патогенеза преэклампсии…….………………….....36
1.4 Микрочастицы клеточного происхождения при физиологической беременности и при
преэклампсии………………………………………………………………………………………….41
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ………………………………………46
2.1 Общая характеристика обследованных женщин……………………………………………….46
2.2 Культура клеток………………………………………………………....………………………..48
2.3 Методы исследования…………………………………………………………………………….48
2.3.1 Исследование адгезии к эндотелиальным клеткам и трансэндотелиальной миграции
мононуклеаров периферической крови……………………………………………………….48
2.3.2 Оценка экспрессии лейкоцитами периферической крови адгезионных молекул,
хемокиновых рецепторов и рецепторов к ростовым факторам………………….………….51
2.3.3 Оценка функциональной активности NK-клеток периферической крови……….…..53
2.3.3.1 Оценка содержания NK-клеток в периферической крови…………………….53
2.3.3.2 Оценка активности NK-клеток………………………………………………….53
2.3.3.3 Оценка экспрессии TRAIL NK-клеткам периферической крови……………..54
2.3.4
Оценка
количества,
морфометрических
и
фенотипических
характеристик
микрочастиц в периферической крови……………………………………….……………….56
2.3.4.1 Атомно-силовая микроскопия микрочастиц периферической крови……...…56
2.3.4.2 Анализ количества и фенотипических характеристик микрочастиц в
периферической крови…………………………………………………………………...57
2.3.5 Оценка влияния микрочастиц плазмы крови на функциональные свойства клеток
линии THP-1…………………………………………………………………………………….60
3
2.4 Статистический анализ………………………………………………………………………...…61
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ……………………………………………………...62
3.1 Исследование адгезии к эндотелиальным клеткам и трансэндотелиальной миграции
мононуклеаров периферической крови………………………………………………………….….62
3.1.1 Адгезия мононуклеаров периферической крови к эндотелию………………….….…62
3.1.2 Трансэндотелиальная миграция мононуклеаров периферической крови…………….64
3.2 Экспрессия адгезионных молекул, хемокиновых рецепторов и рецепторов к ростовым
факторам лейкоцитами периферической крови………………………………………………….…69
3.2.1 Экспрессия поверхностных молекул Т-лимфоцитами периферической крови……...69
3.2.2 Экспрессия поверхностных молекул NK-клетками периферической крови…….…..78
3.2.3 Экспрессия поверхностных молекул моноцитами периферической крови………….80
3.2.4 Экспрессия
поверхностных
молекул
нейтрофилами
периферической
крови……………………………………………………………………………………....84
3.3
Содержание
и
функциональная
активность
NK-клеток
периферической
крови……………………………………………………………………………………….…….…….85
3.4
Содержание микрочастиц
в периферической
крови и их
морфометрические и
фенотипические характеристики…………………………………………………………………….88
3.4.1 Атомно-силовая микроскопия препаратов микрочастиц, выделенных из плазмы
крови………………………………………………………………………...…………………..88
3.4.2 Содержание микрочастиц в периферической крови и их фенотипические
характеристики…………………………………………………………………………………89
3.5 Оценка влияния микрочастиц плазмы крови на функциональные свойства клеток линии
THP-1 …………………………………………………………………………………………….……92
3.5.1
Оценка
спонтанной
и
предварительно
индуцированной
TNFα
экспрессии
поверхностных рецепторов клетками линии THP-1……………………………..……….….92
3.5.2 Влияние микрочастиц плазмы крови здоровых небеременных женщин на экспрессию
поверхностных рецепторов клетками линии THP-1……………………………………..…..93
3.5.3 Влияние микрочастиц плазмы крови женщин с физиологической беременностью на
экспрессию поверхностных рецепторов клетками линии THP-1……………………..…….97
3.5.4 Влияние микрочастиц плазмы крови беременных женщин с преэклампсией на
экспрессию поверхностных рецепторов клетками линии THP-1……………...……………99
3.5.5 Сравнение влияния микрочастиц плазмы крови женщин разных групп на экспрессию
поверхностных рецепторов клетками линии THP-1………………………..………………102
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ……………………………………………………………………...…..104
ЗАКЛЮЧЕНИЕ…..………………………………………………………………………………….135
4
ВЫВОДЫ…………………………………………………………………………………………….138
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………………………………………….139
Приложение А……………………………………………………………………………………….142
Приложение Б…………………………………………………………………………………..……144
Приложение В………………………………………………………………………………………..145
Приложение Г……………………………………………………………………………………..…146
Приложение Д………………………………………………………………………………………..148
Приложение Е……………………………………………………………………………………..…150
Приложение Ж……………………………………………………………………………....….……152
Приложение З………………………………………………………………………………….….…154
Приложение И…………………………………………………………………………………….…156
Приложение К…………………………………………………………………………...………...…157
Приложение Л……………………………………………………………………………………..…158
Список литературы……………………………………………………………………………...…..160
5
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы исследования
Одним из распространенных осложнений беременности является
преэклампсия,
патогенез которой во многом связан с нарушением перфузии маточно-плацентарного ложа. Эта
патология развивается после 20 недели беременности и для неё характерно развитие
полиорганной
недостаточности
[1].
Развитие
патофизиологического
процесса
при
преэклампсии сопровождается изменением основных популяций лейкоцитов в периферической
крови [19] и децидуальной оболочке [347]. Изменение состава и функциональных
характеристик лейкоцитов децидуальной оболочки приводит к развитию воспалительной
реакции в зоне маточно-плацентарного контакта, которая может приобретать системный
характер и приводить к манифестации клинических проявлений преэклампсии [19]. При
беременности, осложненной преэклампсией, для эндотелиальных клеток в зоне маточноплацентарного контакта характерна экспрессия адгезионных молекул ICAM-1, VCAM-1,
PECAM-1 [323], что, наряду с изменением секреции хемокинов клетками децидуальной
оболочки и плаценты, может способствовать хемотаксису, адгезии и трансэндотелиальной
миграции лейкоцитов из периферической крови в маточно-плацентарный комплекс. В
литературе имеются разрозненные данные о фенотипических характеристиках лейкоцитов
периферической крови матери при преэклампсии, тогда как их функциональные свойства
остаются практически неисследованными, что определяет актуальность определения паттернов
экспрессии адгезионных молекул и хемокиновых рецепторов лейкоцитами периферической
крови и проведения функциональных тестов адгезии и трансэндотелиальной миграции
лейкоцитов. Одной из популяций лейкоцитов, присутствующих в децидуальной оболочке на
протяжении всей беременности, являются NK-клетки. При преэклампсии NK-клетки могут
вносить вклад в развитие воспаления в зоне маточно-плацентарного контакта за счет
секретируемых цитокинов и цитотоксической активности [133]. В настоящее время в
литературе представлены противоречивые данные о функциональной активности NK-клеток
при преэклампсии, с чем связана актуальность изучения данной популяции лейкоцитов.
В настоящее время одним из новых направлений исследований становится изучение
феномена образования микровезикул (микрочастиц) эукариотическими клетками и их участие
в межклеточных взаимодействиях. Как физиологическая беременность, так и беременность,
осложненная преэклампсией, сопровождается повышением количества микрочастиц в плазме
крови [60]. При развитии воспаления в децидуальной оболочке возможно образование
лейкоцитами микрочастиц, однако их фенотип, а также их влияние на свойства лейкоцитов при
преэклампсии
не
изучены.
Изменение
функционального
состояния
лейкоцитов
при
6
преэклампсии может быть связано с различием в характеристиках микрочастиц клеток,
присутствующих в периферической крови, поэтому исследование состава микрочастиц и
эффектов, оказываемых ими на клетки, представляется актуальным.
Целью работы явилось изучение характеристик лейкоцитов и их микрочастиц,
выделенных из периферической крови женщин с беременностью, осложненной преэклампсией.
Задачи исследования:
1. Оценить in vitro особенности адгезии и трансэндотелиальной миграции мононуклеаров
периферической крови женщин с физиологической беременностью и беременностью,
осложненной преэклампсией.
2.
Охарактеризовать
экспрессию
поверхностных
рецепторов
лейкоцитами
периферической крови у женщин с физиологической беременностью и беременностью,
осложненной преэклампсией.
3. Изучить активность NK-клеток периферической крови женщин с физиологической
беременностью и беременностью, осложненной преэклампсией.
4. Оценить характеристики микрочастиц плазмы периферической крови женщин с
физиологической беременностью и беременностью, осложненной преэклампсией.
5. Изучить in vitro влияние микрочастиц плазмы крови женщин с физиологической
беременностью и беременностью, осложненной преэклампсией, на функциональные свойства
моноцитоподобных клеток линии THP-1.
Научная новизна. Впервые проведено комплексное изучение функциональных
характеристик, связанных со способностью лимфоцитов и моноцитов к адгезии и
трансмиграции in vitro, у женщин с физиологической беременностью и с преэклампсией.
Показано, что интенсификация функции адгезии к эндотелиальным клеткам мононуклеаров
беременных женщин с преэклампсией не ведет к усилению функции транэндотелиальной
миграции in vitro. Впервые проведенный комплексный сравнительный анализ экспрессии
адгезионных молекул и рецепторов для цитокинов лейкоцитами периферической крови
женщин с физиологической беременностью и беременностью, осложненной преэклампсией,
выявил повышение экспрессии адгезионных молекул CD18 CD8+ Т-лимфоцитами, CD11с NKклетками, рецептора к IFNγ (CD119) моноцитами. Проведенный анализ функциональной
активности NK-клеток периферической крови in vitro выявил снижение экспрессии
гликопротеина CD107a, ассоциированного с лизосомальными мембранами.
Выявлена
повышенная экспрессия TRAIL NK-клетками периферической крови при преэклампсии.
Впервые проведена комплексная оценка поверхностных рецепторов, представленных на
мембранах микрочастиц плазмы периферической крови женщин с физиологической
беременностью и беременностью, осложненной преэклампсией. Впервые проведено изучение
7
влияния
микрочастиц
плазмы
периферической
крови
женщин
с
физиологической
беременностью и беременностью, осложненной преэклампсией, на моноцитоподобные клетки
линии THP-1.
Теоретическая и практическая значимость. Выявленная при преэклампсии по
сравнению с физиологической беременностью повышенная экспрессия адгезионных молекул
CD8+ Т-лимфоцитами, моноцитами и повышенное количество CD11c+ NK-клеток в
периферической крови свидетельствует об изменении функциональной активности этих
клеток. Повышенная при преэклампсии экспрессия рецепторов к IFNγ моноцитами и
нейтрофилами
отражает
активированное
состояние
этих
лейкоцитов.
Следствием
активированного состояния моноцитов и повышенной экспрессии адгезионных молекул
лимфоцитами может являться установленная нами повышенная адгезия лимфоцитов и
моноцитов к активированному эндотелию. Впервые на основании оценки экспрессии NKклетками CD107a и TRAIL, установлено, что преэклампсия сопровождается изменением
функционального состояния NK-клеток периферической крови, при котором основным
механизмом индукции апоптоза клеток-мишеней становится TRAIL-зависимый путь.
Впервые проведенная комплексная оценка фенотипических характеристик микрочастиц
плазмы крови позволила установить, что преэклампсия сопровождается повышением
содержания в периферической крови микрочастиц с фенотипом CD45+CD16+CD56-. Впервые
установлено, что микрочастицы плазмы крови женщин с преэклампсией в отличие от
микрочастиц плазмы крови женщин с физиологической беременностью снижают экспрессию
молекул CD18 и CD54 моноцитоподобными клетками линии THP-1, что отражает наличие
регуляторной функции у микрочастиц.
Обнаруженные различия экспрессии поверхностных молекул популяциями лейкоцитов, а
также различия в содержании в периферической крови микрочастиц с определенным
фенотипом у женщин с физиологической беременностью и женщин с преэклампсией в
дальнейшем могут лечь в основу разработки методов выявления пациентов группы риска по
развитию преэклампсии.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Преэклампсия сопровождается повышенной экспрессией CD18 CD8+ Т-лимфоцитами,
CD11с NK-клетками и CD119 моноцитами периферической крови и повышенной функцией
адгезии лимфоцитов и моноцитов in vitro как к интактному, так и к активированному
эндотелию. Данные фенотипические и функциональные характеристики лимфоцитов и
моноцитов при преэклампсии могут определять их миграцию в децидуальную оболочку и их
участие в развитии воспаления.
8
2. При преэклампсии происходит смена стратегии цитотоксических эффектов NK-клеток,
отражающаяся в снижении способности реализовывать цитотоксический ответ с образованием
гранзимов и перфорина, что характеризуется сниженной по сравнению с физиологической
беременностью экспрессией CD107a NK-клетками после активации. Преэклампсия по
сравнению
с
физиологической
беременностью
характеризуется
присутствием
в
периферической крови повышенного количества TRAIL+ NK-клеток, что указывает на
предрасположенность NK-клеток индуцировать TRAIL-опосредованный апоптоз клетокмишеней.
3. Повышенное у женщин с физиологической беременностью по сравнению с
небеременными женщинами количество микрочастиц с фенотипом CD45+CD16+CD56+ может
отражать
гибель
цитотоксических
NK-клеток.
Развивающаяся
при
преэклампсии
воспалительная реакция отражается в присутствии в кровеносном русле повышенного
количества
микрочастиц,
образованных
нейтрофилами
и
моноцитами.
Преэклампсия
сопровождается сниженным количеством микрочастиц, образованных NK-клетками, что может
быть связано с нарушением механизмов развития иммунологической толерантности, а именно
дефектом в индукции гибели активированных NK-клеток, что определяет цитотоксические
эффекты в зоне маточно-плацентарного контакта.
4.
Микрочастицы
плазмы
периферической
крови
женщин
с
физиологической
беременностью и с преэклампсией в условиях in vitro по-разному изменяют активность
моноцитоподобных клеток линии THP-1, проявляя регуляторные свойства. Микрочастицы
женщин с физиологической беременностью снижают экспрессию рецептора для IL-8 и
повышают экспрессию адгезионных молекул CD18 и CD54 клетками линии THP-1.
Микрочастицы женщин с преэклампсией по сравнению с микрочастицами женщин с
физиологической беременностью повышают экспрессию CD181 клетками линии THP-1.
Реализация работы. По материалам диссертации опубликовано 29 научных работ, в том
числе 9 статей в журналах, включенных в Перечень ВАК Минобрнауки РФ для публикации
материалов диссертационных исследований.
Личное участие автора заключалось в проведении экспериментальных исследований,
статистической обработке, обобщении и анализе полученных результатов, и подготовке статей.
Методическая помощь была оказана с.н.с. отдела иммунологии ФГБНУ «ИЭМ» Стариковой Э.А.
при освоении метода трансэндотелиальной миграции. Атомно-силовая микроскопия препаратов
микрочастиц, выделенных из плазмы периферической крови, была выполнена совместно с
сотрудниками
биологического
факультета
Санкт-Петербургского
Государственного
Университета Бенкеным К.А. и Онохиным К.В., за что автор выражает им благодарность.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены на X юбилейном
9
Всероссийском научном форуме «Мать и дитя» (Москва, 2009), XIII Всероссийском форуме с
международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2009), II
Европейском Конгрессе по иммунологии (Берлин, Германия, 2009), на 14-ом Международном
конгрессе по Иммунологии (Кобе, Япония, 2010), I Ежегодной научной конференции молодых
ученых и специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых 2010» (Санкт-Петербург,
2010),
XVI
Межгородской
конференции
молодых
ученых
«Актуальный
проблемы
патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2010), на XI Всероссийском научном форуме «Мать и
дитя» (Москва, 2010), 4-ой Всероссийской конференции «Иммунология репродукции» (Пермь,
2010), Всероссийской конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки
третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2010), на XVII Межвузовской конференции молодых
ученых
«Актуальный
проблемы
патофизиологии»
(Санкт-Петербург,
2011),
XIV
Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И.Иоффе
«Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2011), 17-ом Международном
студенческом медицинском конгрессе (ISCOM 2011) (Гронинген, Голландия, 2011), на XII
Всероссийском научном форуме «Мать и дитя» (Москва, 2011), II Ежегодной научной
конференции молодых ученых и специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых
2011» (Санкт-Петербург, 2011), Международной конференции «Programmed Cell Death in
Biology and Medicine» (Москва, 2012), XIII Всероссийском научном форуме «Мать и дитя»
(Москва,
2012),
XVIII
Международной
медико-биологической
конференции
молодых
исследователей, посвященной двадцатилетию факультета СПбГУ «Фундаментальная наука и
клиническая медицина – человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2015).
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации включают введение, обзор
литературы, описание материалов и методов, полученные результаты, обсуждение, общее
заключение, выводы, список сокращений и список литературы. Текст диссертации изложен на
190 страницах, содержит 10 таблиц, 46 рисунков и 11 приложений. Список литературы состоит
из 367 работ.
10
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Иммунологические механизмы контроля физиологического течения беременности
1.1.1 Лейкоциты периферической крови и основные пути их миграции
Основными популяциями лейкоцитов периферической крови являются моноциты,
гранулоциты, Т-лимфоциты, В-лимфоциты, NK-клетки [36]. После выхода из костного мозга в
кровь моноциты и гранулоциты мигрируют в периферические ткани, где при встрече с
патогеном реализуют свои эффекторные функции [126]. Мобилизация нейтрофилов из костного
мозга происходит с высокой скоростью, при развитии воспаления скорость выхода
нейтрофилов из костного мозга увеличивается в течение нескольких часов после инициации
воспалительной реакции [285]. Около 30% нейтрофилов, выходящих из кровотока, мигрируют в
печень и костный мозг, около 20% мигрируют в микроциркуляторное русло легких, около 15%
нейтрофилов – в селезенку [36]. В случае, если нейтрофил не был мобилизован из крови для
участия в воспалительной реакции, он подвергается деградации в костном мозге, печени или
селезенке [285]. Основным резервуаром моноцитов является костный мозг, в то же время
селезенка также содержит большое количество моноцитов в субкапсулярной красной пульпе, и
при развитии воспаления может обеспечивать выход моноцитов в кровь [285]. В то же время
даже в отсутствие воспаления часть моноцитов мигрирует в ткани, где образует популяцию
резидентных макрофагов [285]. В зависимости от тканевого микроокружения моноциты после
миграции дифференцируются в тканеспецифичные макрофаги: клетки Купфера в печени,
клетки Лангерганса в коже, макрофаги красной и белой пульпы, альвеолярные макрофаги,
микроглию [36]. Помимо нейтрофилов и моноцитов в крови присутствуют лимфоциты: одной
из популяций лимфоцитов являются Т-лимфоциты, основные этапы развития которых проходят
в тимусе. Среди Т-лимфоцитов выделяют CD4+ Т-лимфоциты и CD8+ Т-лимфоциты [36]. До
встречи
с
антигеном
рециркулирующими
Т-лимфоциты
между
крови
вторичными
являются
лимфоидными
наивными
органами
Т-лимфоцитами,
[215].
Приобретая
активированное состояние в результате межклеточных взаимодействий во вторичных
лимфоидных
органах,
Т-лимфоциты
выходят
в
циркуляцию
и
после
миграции
в
периферические ткани могут реализовывать свои эффекторные функции [126]. В модели in vivo
с использованием мышей показано, что миграция эффекторных CD8+ Т-лимфоцитов идет во
все нелимфоидные органы независимо от места первичного введения антигена, что определяет
максимальную элиминацию патогена из организма [213]. После дифференцировки наивных
CD4+Т-лимфоцитов в специфические Т-хелперные лимфоциты эти клетки поступают в
рециркуляцию и мигрируют в очаг воспаления. Необходимо отметить, что в очаг воспаления
преимущественно мигрируют Т-хелперы I типа, в то время как Т-хелперы II типа мигрируют в
11
лимфатическом узле из места своей дифференцировки в сторону фолликулов, где находятся Влимфоциты [36]. Для В-лимфоцитов характерна миграция во вторичные лимфоидные органы,
после встречи с антигеном и получения дополнительного сигнала от CD4+Т-лимфоцитов
происходит дифференцировка В-лимфоцитов в антитело-образующие плазматические клетки,
которые затем мигрируют в маргинальную зону селезенки, мозговые шнуры лимфатических
узлов, костный мозг [36]. В популяцию лимфоцитов также входят NK-клетки, образующиеся в
костном мозге. NK-клетки подразделяют на CD56highCD16low и CD56lowCD16high популяции. NKклетки с фенотипом CD56lowCD16high преобладают в кровотоке, в то время как CD56highCD16low
NK-клетки преобладают в печени, эндометрии матки, децидуальной оболочке и лимфатических
узлах [36]. Также NK-клетки присутствуют в красной пульпе селезенки [36]. Специфичная
миграция лейкоцитов в ткани осуществляется за счет межклеточных взаимодействий
лейкоцитов и эндотелиальных клеток, выстилающих сосуды [215, 285].
1.1.2 Механизмы взаимодействия эндотелиальных клеток и лейкоцитов
Миграция клеток крови из сосудов в ткани находится под контролем определенных
цитокинов и хемокинов, секретируемых эндотелиальными клетками, и адгезионных молекул,
экспрессируемых на эндотелиальных клетках и на лейкоцитах. Процесс миграции лейкоцитов
включает в себя несколько этапов, а именно прилипание, качение, плотную адгезию и
трансэндотелиальную миграцию клеток через стенку сосуда. Каждый из этих этапов
опосредован разными молекулярными взаимодействиями [31, 36, 261].
Первым этапом адгезии лейкоцитов к эндотелию является первоначальное прилипание и
качение, происходящее за счет взаимодействия E- и Р-селектинов (CD62E и CD62P,
соответственно), экспрессируемых эндотелиальными клетками, с лигандом SialylLewisx и
гликопротеиновым лигандом P-селектина (PSGL-1) соответственно на лейкоцитах. Также на
первом
этапе
играет
роль
взаимодействие
L-селектина
(CD62L),
экспрессируемого
лейкоцитами, с E-селектином, экспрессируемым клетками эндотелия [31, 261]. Для L-селектина
также характерно взаимодействие с молекулами CD34, адгезионной молекулой 1, зависимой от
гликозилирования, (GLYCAM-1) [78] и адгезионной молекулой 1 к адрессинам слизистых
оболочек (MadCAM-1) [58] эндотелиальных клеток. Структурно L-, E- и P-селектины сходны,
они содержат NH-терминальный Ca2+-зависимый лектиноподобный связывающий домен, EGFподобный домен, трансмембранный домен и короткий цитоплазматический домен [78, 261].
На этапе плотной адгезии со стороны эндотелия участвуют молекулы межклеточной
адгезии (ICAM): ICAM-1 (CD54), ICAM-2 (CD102), ICAM-3 (CD50); сосудистая молекула
клеточной
адгезии
1 (VCAM-1
(CD106)),
тромбоцитарно-эндотелиальная адгезионная
12
молекула-1 (PECAM-l (CD31)), MAdCAM-1, GLYCAM-1 [31, 78, 261]. Адгезионные молекулы
ICAM-1 и VCAM-1 в основном опосредуют адгезию лейкоцитов при воспалении. Экспрессия
молекулы ICAM-3 характерна для растущих сосудов (как например, при гемангиоме),
экспрессия ICAM-3 зрелыми эндотелиальными клетками незначительна [333]. Экспрессия
эндотелиальными клетками ICAM-2 носит конститутивный характер, что указывает на участие
этого маркера эндотелия в конститутивной миграции лейкоцитов [325]. Помимо связывания β2
интегринов молекула ICAM-2 в условиях in vitro взаимодействует с лигандом CD209
(специфически связывающая ICAM-3 неинтегриновая молекула дендритных клеток (DC-SIGN))
на дендритных клетках и таким образом участвует в трансмиграции дендритных клеток через
эндотелий [325]. Эндотелиальные клетки конститутивно экспрессируют адгезионную молекулу
PECAM-1. Под воздействием фактора некроза опухоли α (TNFα) и интерферона γ (IFNγ)
экспрессия PECAM-1 в области клеточных контактов снижается [351]. Молекула MAdCAM-1
конститутивно экспрессируется на эндотелиальных клетках собственной пластинки слизистой
[67].
Описаны
следующие
взаимодействия
между
адгезионными
молекулами,
экспрессируемыми эндотелиальными клетками, и интегринами на лейкоцитах: лимфоцитарный
функционально-ассоциированый
антиген
1
(LFA-1
(интегрин
αLβ2,CD11a/CD18)),
экспрессируемая лейкоцитами, связывается с концевым доменом ICAM-1 или с концевым
доменом ICAM-2 [78, 261]. Причем LFA-1 может связываться только с димером ICAM-1, и не
взаимодействует с мономером ICAM-1 [279]. Молекула макрофагального антигена 1 (Mac-1
(интегрин αMβ2, CD11b/CD18)), экспрессируемая лейкоцитами, взаимодействует с третьим
иммуноглобулиновым доменом ICAM-1 [78]. Также Mac-1 может связываться с ICAM-2 [93] и
ICAM-3 [253]. Молекула позднего антигена активации 4 (VLA-4 (α4β1 интегрин, CD49d/CD29)),
экспрессируемая лейкоцитами, связывается с концевым и четвертым иммуноглобулиновыми
доменами VCAM-1 [78]. Лейкоциты экспрессируют различные адгезионные молекулы в разных
комбинациях.
Лимфоциты
периферической
крови
несут
на
своей
поверхности
преимущественно LFA-1, в то время как для нейтрофилов, моноцитов и NK-клеток характерна
экспрессия LFA-1, Mac-1. Адгезия нейтрофилов и моноцитов к эндотелию в основном
опосредована LFA-1 и Mac-1 [78]. Адгезия лимфоцитов также опосредована взаимодействием
LFA-1 с ICAM-1 и ICAM-2 на эндотелиальных клетках [78]. Блокада экспрессии LFA-1
приводит к нарушению адгезии лимфоцитов к эндотелию [105]. Адгезионная молекула VLA-4
экспрессирована на всех гемопоэтических клетках за исключением нейтрофилов, этот интегрин
принимает участие в адгезии лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов, базофилов, NK-клеток к
активированному эндотелию. Молекула VLA-4 также способна взаимодействовать с CS-1
доменом фибронектина, экспрессированного на поверхности эндотелия in vivo [78]. С
13
адгезионной молекулой эндотелиальных клеток MadCAM-1 связывается интегрин α4β7
лейкоцитов [118]. Адгезионные молекулы PECAM-1 и CD99 присутствуют на поверхности как
эндотелиальных клеток, так и лейкоцитов. Гомофильные взаимодействия этих молекул
усиливают адгезию лейкоцитов к эндотелиальным клеткам и в дальнейшем способствуют
трансэндотелиальной миграции в условиях in vitro и in vivo [78, 261, 351]. После связывания
PECAM-1 происходит фосфорилирование тирозиновых остатков PECAM-1, что опосредует
взаимодействие этой адгезионной молекулы с цитоскелетом клетки и, в частности, с α- и βкатенинами. В условиях in vitro показано, что взаимодействие PECAM-1 эндотелия и
лейкоцитов важно для успешной адгезии моноцитов, нейтрофилов, Т-лимфоцитов и NK-клеток
к монослою эндотелия [351]. Данные литературы о взаимодействии основных адгезионных
молекул эндотелия и лейкоцитов, контролирующих адгезию и трансмиграцию, упомянутые в
этой главе, приведены в таблице 1.
Таблица 1. Пары адгезионных молекул, контролирующих адгезию лейкоцитов к
эндотелиальным клеткам.
Эндотелиальные клетки
Молекула
E-селектин
Лейкоциты
Молекула
CD
CD62E
CD
L-селектин,
CD62L [261],
sialyl-LewisX
CD15s [261]
P-селектин
CD62P
PSGL-1
-
ICAM-1, ICAM-2,
CD54, CD102
LFA-1
CD11a\CD18 [78, 261]
Mac-1
CD11b\CD18 [78, 93,
ICAM-1,
ICAM-2, CD54,
CD102,
[261]
ICAM-3
CD50
253]
VCAM-1
CD106
VLA-4
CD49d\CD29 [78]
-
CD34
L-селектин
CD62L [78]
GLYCAM-1
-
L-селектин
CD62L [78]
MAdCAM-1
-
Интегрин α4β7,
- [118],
L-селектин
CD62L [58]
PECAM-1
CD31
PECAM-1
CD31 [78, 196, 261, 351]
-
CD99
-
CD99 [78, 196, 261, 351]
После взаимодействия ICAM-1, ICAM-2 и VCAM-1 c соответствующими интегринами
лейкоцитов в эндотелиальных клетках активируются ГТФазы семейства Rho, в частности RhoA
и Rac1, опосредующие дальнейшие кластеризацию ICAM-1 и перестройку цитоскелета,
необходимые при адгезии и трансэндотелиальной миграции [325]. Установлено, что ГТФазы
14
семейства Rho принимают активное участие в процессе адгезии лейкоцитов к эндотелию. Так,
установлено, что они участвуют в TNFα-индуцибельном синтезе E-селектина, экспрессии
ICAM-1, синтезе PECAM-1, а также влияют на расположение E-селектина на мембране клеток
[84].
После этапа плотной адгезии лейкоцит смещается к месту межклеточных контактов, где
происходит процесс трансэндотелиальной миграции лейкоцита в ткань. Миграция лейкоцитов
проходит в основном между клетками в области клеточных контактов, также возможна
миграция непосредственно через клетку (трансклеточная миграция) [80]. При взаимодействии
лейкоцита и эндотелия на эндотелиальных клетках формируются вертикальные выступы
мембраны с концентрированными на них молекулами ICAM-1. Данные выступы на эндотелии
начинают формироваться на начальных этапах адгезии независимо от взаимодействия ICAM-1
и LFA-1, и не играют существенной роли на этапе плотной адгезии [79]. Эти выступы
окружают адгезировавшие лейкоциты, в то же время LFA-1 лейкоцитов кластеризуются,
формируя своеобразные линии. Этим выступам, формирующимся как на эндотелии, так и на
лейкоцитах, дали название «трансмиграционных бокалов» на основе определенного сходства
формы [80]. В этих бокалах в основном локализуются ICAM-1 и VCAM-1, в то время как
ICAM-2 и PECAM-1 представлены на формирующихся при адгезии лейкоцитов выступах
эндотелия в малых количествах [80].
Процесс трансэндотелиальной миграции лейкоцитов через эндотелий определяют также
белки соединительных адгезионных молекул (JAM) [65]. Семейство иммуноглобулиноподобных адгезионных молекул JAM включает в себя молекулы JAM-A, JAM-B и JAM-C [112].
Эти белки состоят из двух внеклеточных иммуноглобулиновых доменов и обладают
несколькими сайтами фосфорилирования [65]. Показано, что в области трансмиграционных
бокалов на эндотелиальных клетках концентрируются адгезионные молекулы JAM-A,
взаимодействующие с LFA лейкоцитов. JAM-B связывается с интегрином VLA-4, в то время
как JAM-C взаимодействует с интегрином Mac-1. Также JAM-C способен взаимодействовать с
JAM-B, экспрессированным на поверхности эндотелиальных клеток, тромбоцитов, NK-клеток,
дендритных клеток, Т- и В-лимфоцитов [65, 112].
Миграция
лейкоцитов
находится
под
контролем
хемокинов,
синтезируемых
и
секретируемых различными тканями [36]. Хемокины могут синтезироваться конститутивно, как
например, стромальный клеточный фактор (SDF-1 (CXCL12)), хемокин, привлекающий Вклетки (BCA-1 (CXCL13)), хемокин вторичной лимфоидной ткани (SLC (CCL21)), хемокин
EBI-1 лиганда (ELC (CCL19)), и определять гомеостатическую миграцию различных популяций
лейкоцитов в ткани [244]. Так, SDF-1 экспрессируется в костном мозге, тимусе [244], при
беременности SDF-1 выявлен в децидуальной оболочке и экстравиллезном трофобласте [142,
15
354]. Хемокины ELC и SLC продуцируют эндотелиальные клетки венул с высоким эндотелием
[247, 360]. При беременности отмечается увеличение экспрессии мРНК CCL19 и CCL21 в
области хориона и децидуальной оболочки в третьем триместре физиологической беременности
[135]. В условиях воспалительной реакции индуцируется синтез дендритными клетками и
макрофагами таких хемокинов, как интерлейкин (IL)-8 (CXCL8), интерферон-индуцибельный
протеин 10 (IP-10 (CXCL10)), моноцитарный хемоаттрактантный протеин 1 (MCP-1 (CCL2)),
воспалительный протеин макрофагов 1α (MIP-1α (CCL3)), воспалительный протеин макрофагов
1β (MIP-1β (CCL4), фактор, секретирующийся Т-лимфоцитами после активации (RANTES
(CCL5)) [244].
Миграция лейкоцитов в ткань определяется экспрессией лейкоцитами хемокиновых
рецепторов, а также градиентом концентрации хемокинов [235]. Создание высоких
концентраций хемокинов, стимулирующих миграцию лейкоцитов в ткань, осуществляется за
счет того, что хемокины могут находиться в связанном с эндотелием состоянии и
экспонироваться на поверхности клетки в составе глюкозамингликанов и синдеканов-1 и -2
[223]. Хемокины специфически воздействуют на разные популяции лейкоцитов, связываясь с
рецепторами на поверхности клеток. Так, хемокины IL-8 и MCP-1 преимущественно
индуцируют запуск плотной адгезии моноцитов с участием молекул адгезии Mac-1, LFA-1 и
ICAM-1 эндотелиальных клеток. Хемокины SDF-1, RANTES, MIP-1α стимулируют плотную
адгезию лимфоцитов к эндотелию [244]. Хемокиновые рецепторы к конститутивно
экспрессируемым хемокинам являются узко специфичными в то время, как хемокинам,
которые синтезируются в условиях воспалительной реакции, соответствует несколько
рецепторов [244].
Помимо хемокинов в условиях воспалительной реакции на процессы адгезии и
трансэндотелиальной миграции оказывают влияние провоспалительные цитокины [9, 234]. Так,
при активации эндотелия IFNγ усиливается адгезия и последующая трансмиграция Тлимфоцитов через эндотелий [105], вероятно, за счет пролонгирования экспрессии CD62E
эндотелиальными клетками [187]. Также под влиянием IFNγ повышается экспрессия
эндотелиальными клетками ICAM-1, VCAM-1 [23]. Под влиянием провоспалительного
цитокина IL-1β в эндотелиальных клетках отмечается повышение экспрессии генов цитокинов
IL-6, IL-8 и гена адгезионной молекулы ICAM-1 [18, 178]. При стимуляции эндотелия TNFα или
IL-6 на эндотелиальных клетках усиливается экспрессия ICAM-1, VCAM-1 и CD62E [22, 23,
105, 342]. В экспериментах in vitro под воздействием TNFα возрастает секреция
эндотелиальными клетками IL-8 [23], что в свою очередь усиливает привлечение и адгезию
лейкоцитов к эндотелию. Стимуляция клеток TNFα и хемокинами RANTES или MIP1α
16
приводит к еще большей экспрессии адгезионных молекул и последующей трансмиграции
лимфоцитов, частично опосредованной VLA-4 [105].
В целом, процесс миграции лейкоцитов в ткань находится под влиянием определенных
хемокинов
и
опосредован
специфическими
взаимодействиями
адгезионных
молекул
лейкоцитов и эндотелиальных клеток. При физиологической беременности формирующаяся
плацента и децидуальная оболочка секретируют различные цитокины и хемокины, которые
влияют на функциональное состояние эндотелия сосудов маточно-плацентарного комплекса и
изменяют экспрессию эндотелиальными клетками адгезионных молекул [134]. Также хемокины
плаценты и децидуальной оболочки стимулируют адгезию и трансэндотелиальную миграцию
различных популяций лейкоцитов в децидуальную оболочку, где клетки иммунной системы
матери участвуют в контроле развития плаценты и физиологического течения беременности
[142, 151, 153]. Физиологическое развитие плаценты сопровождается экспрессией и секрецией
различных факторов (молекул лейкоцитарного антигена человека (HLA) С и G) [156, 252],
индоламин-2,3-диоксигеназы [345], модулирующих активность мигрировавших клеток и, в
частности, индуцирующих состояние толерантности клеток иммунной системы матери в
отношении
полу-аллогенного
плода.
При
таком
патофизиологическом
процессе
как
преэклампсия разные этапы взаимодействия лейкоцитов с эндотелием могут нарушаться,
вследствие чего происходят нарушения миграции клеток иммунной системы в плаценту и
децидуальную оболочку. Далее рассмотрим подробнее роль различных популяций лейкоцитов
в физиологическом развитии плаценты и их вклад в патогенез преэклампсии.
1.1.3 Роль различных популяций лейкоцитов децидуальной оболочки в
иммунологическом контроле физиологического развития плаценты
Плацента представляет собой уникальный орган, перестройка структуры которого
наблюдается практически на протяжении всей беременности. В плаценте различают
зародышевую, или плодную, часть (pars fetalis) и материнскую, или маточную (pars materna)
[15]. Плодная часть представлена ветвистым (ворсинчатым) хорионом, гладким хорионом с
хориальной пластинкой и приросшей к нему амниотической оболочкой (Рисунок 1).
Материнская часть плаценты представлена видоизмененной базальной частью эндометрия
(decidua basalis) и соединительнотканными септами, отделяющими котиледоны (дольки) друг
от друга, а также лакунами [355].
17
Рисунок 1. Строение маточно-плацентарного комплекса (Модифицировано из Wulff C. et
al., 2003 [355]).
Р – периметрий; М – миометрий; CL – гладкий хорион; А – амниотическая оболочка; MZ
– маргинальная зона; СР – хориальная пластинка; IVS - межворсинчатое (интервиллёзное)
пространство; S – соединительнотканные септы; ВР – базальная пластинка; J - зона контакта;
UC – пупочный канатик.
Формирование
и
развитие
плаценты,
стабилизация
ее
структуры,
а
также
физиологическое развитие беременности и формирование здорового плода находятся под
контролем клеток иммунной системы матери [2]. Если у небеременных женщин количество
лейкоцитов в эндометрии обычно не превышает 10%, то при беременности количество их
может быть более 40% всех клеток децидуальной оболочки [106, 332]. Увеличение количества
лейкоцитов в децидуальной оболочке происходит в основном в первом триместре беременности
за счет децидуальных NK-клеток, составляющих до 70% всех лейкоцитов, присутствующих в
децидуальной
оболочке
[134,
332].
Количество
Т-лимфоцитов,
присутствующих
в
децидуальной оболочке незначительно в первом триместре беременности и составляет около 510% всех лейкоцитов. К третьему триместру количество NK-клеток значительно снижается и
составляет около 5% всех лейкоцитов, в то время как количество Т-лимфоцитов возрастает до
50% всех лейкоцитов [134]. На протяжении всей беременности в среднем около 20%
лейкоцитов децидуальной оболочки составляют макрофаги и около 10% лейкоцитов
представлено гранулоцитами [134, 332]. Физиологическая беременность сопровождается
контролируемой миграцией различных популяций лейкоцитов в децидуальную оболочку, где
эти клетки участвуют в регуляции ремоделирования структуры плаценты и децидуальной
оболочки [134].
18
1.1.3.1 Т-лимфоциты децидуальной оболочки
Т-лимфоциты присутствуют в эндометрии до наступления беременности, и их количество
изменяется в зависимости от стадии менструального цикла [134, 142]. В раннюю
пролиферативную стадию менструального цикла Т-лимфоциты составляют до 50% от
количества всех децидуальных лейкоцитов. В секреторную фазу менструального цикла
количество Т-лимфоцитов децидуальной оболочки снижено [134]. После наступления
беременности количество Т-лимфоцитов в децидуальной оболочке снижается [331] и
составляет около 10% всех лейкоцитов. По некоторым данным Т-лимфоциты в децидуальной
оболочке представлены CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитами [32, 347]. По другим данным на ранних
сроках
физиологической
беременности
в
эндометрии
присутствуют
CD45+
клетки,
располагающиеся дискретно или образующие лимфоидные кластеры рядом с железами
эндометрия. В состав этих кластеров входят также NK-клетки, γδ Т-лимфоциты, CD4+ Тлимфоциты и CD8+ Т-лимфоциты [226, 331].
Лимфоциты мигрируют из периферической крови в лимфатические узлы за счет
взаимодействия рецепторов лимфоцитов с адгезионными молекулами GlyCAM-1 [78], ICAM-1,
VCAM-1 [123] высокого эндотелия венул лимфатических узлов. При физиологической
беременности эндотелиальные клетки децидуальной оболочки и плаценты среди прочих
адгезионных молекул экспрессируют VCAM-1, ICAM-1 [111, 207, 323], что делает эти клетки
сходными по фенотипу с эндотелиальными клетками венул с высоким эндотелием. Проходя
зону маточно-плацентарного кровообращения, лимфоциты контактируют с эндотелиальными
клетками и могут мигрировать в децидуальную оболочку [134].
В децидуальной оболочке при физиологической беременности присутствуют CD8+ Тлимфоциты, причем их относительное количество in situ превышает относительное количество
в периферической крови [200]. В экспериментах in vitro показано, что хемокин CXCL16,
секретируемый клетками трофобласта, вызывает направленную миграцию CD8+ Т-лимфоцитов
[153]. В децидуальной оболочке на ранних этапах беременности также выявлены CD8+ Тлимфоциты, несущие на своей поверхности гомологичную рецептору хемоаттрактанта
молекулу, экспрессированную Т-хелперами 2 (CRTH2) [321]. Установлено, что привлечение
CRTH2+ CD8+ Т-лимфоцитов в децидуальную оболочку происходит под действием
простагландина D2, секретируемого клетками трофобласта и эпителием матки на ранних сроках
физиологической беременности [222]. Клетки трофобласта, эпителиальные клетки матки и
клетки желез эндометрия на ранних сроках беременности экспрессируют хемокин,
регулируемый тимусом и активацией (TARC) [320]. У женщин с физиологической
19
беременностью по сравнению с небеременными женщинами в периферической крови
повышено количество CD8+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих рецептор к этому хемокину CCR4. При этом у женщин с физиологической беременностью количество CCR4+ CD8+ Тлимфоцитов в децидуальной оболочке было выше по сравнению с количеством этих
лимфоцитов в периферической крови [320]. Вероятно, хемокин TARC, наряду с CRTH2, также
участвует в привлечении CD8+ Т-лимфоцитов в первом триместре беременности в
децидуальную оболочку.
Установлено, что Т-лимфоциты децидуальной оболочки, экспрессирующие CD3 и CD8,
обладают цитотоксической активностью в условиях in vitro [282]. Клетки плода экспрессируют
как антигены матери, так и отца, которые могут индуцировать образование цитотоксических Тлимфоцитов. Однако при физиологической беременности индуцируется толерантность клеток
иммунной системы, в том числе CD8+ Т-лимфоцитов, к антигенам плода. Одним из
механизмов, вызывающих толерантность клеток иммунной системы, является связывание HLAС и неклассических молекул главного комплекса гистосовместимости - HLA-E, HLA-F и HLAG [25, 156, 206], с иммуноглобулино-подобными рецепторами, экспрессированными на Тлимфоцитах [156]. Необходимо отметить, что в литературе преимущественно уделяется
внимание экспрессии клетками децидуальной оболочки молекул локуса HLA-G, в то время, как
экспрессия других молекул этого локуса описана менее подробно [159]. Помимо Т-лимфоцитов
рецепторы к HLA-G несут на своей мембране и другие клетки (NK-клетки, макрофаги,
дендритные клетки, В-лимфоциты) (Рисунок 2) [37, 156, 185].
Как мембранная, так и растворимая форма HLA-G являются толерогенными и
препятствуют лизису клеток плода цитотоксическими лимфоцитами матери [156, 158]. После
взаимодействия CD8+ клеток с растворимой формой HLA-G цитотоксические Т-лимфоциты
экспрессируют на поверхности Fas (CD95). В то же время клетки трофобласта экспрессируют
на своей поверхности FasL [303]. Таким образом, при взаимодействии Fas и FasL индуцируется
гибель цитотоксических CD8+ лимфоцитов путем апоптоза [156]. При физиологической
беременности
также
подавляется
пролиферативная
активность
CD8+
Т-лимфоцитов
децидуальной оболочки за счет экспрессии дендритными клетками фермента индоламин-2,3диоксигеназы и уменьшения содержания триптофана в среде [32]. Клетки децидуальной
оболочки в первом триместре беременности секретируют гликоделин А, который также
подавляет цитотоксическую функцию CD8+ Т-лимфоцитов, присутствующих в децидуальной
оболочке [298]. По некоторым данным CD8+ Т-лимфоциты децидуальной оболочки по
сравнению с CD8+ Т-лимфоцитами не продуцируют перфорин, что указывает на неспособность
этих клеток осуществлять цитотоксическую активность с участием перфоринов [317].
20
Рисунок 2. Рецепторы клеток иммунной системы, взаимодействующие с молекулами
локуса HLA-G (Модифицировано из Hunt J. S. et al., 2005 [156]). Иммуноглобулиноподобный
транскрипт (ILT) 2 -. ILT-рецептор Т- и В-лимфоцитов, NK-клеток и макрофагов; ILT4 - ILTрецептор макрофагов и дендритных клеток; KIR2DL4 – рецептор NK-клеток; CD8 – маркер
цитотоксических Т-лимфоцитов; CD4 – маркер Т-хелперных лимфоцитов, TcR – Т-клеточный
рецептор.
В экспериментах in vitro Т-лимфоциты с фенотипом CD3+CD8+, выделенные из
децидуальной оболочки в первом триместре беременности, секретируют такие цитокины, как
IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 и TNF [282]. По данным других исследователей
присутствующие в децидуальной оболочке в первом триместре CD8+ Т-лимфоциты
секретируют преимущественно IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 и IL-13 [222]. Установлено, что
кондиционированные среды CD8+ Т-лимфоцитов децидуальной оболочки стимулируют
инвазивную активность клеток трофобласта в модельной системе с использованием
специального субстрата (Матригель) [282]. За счет секретируемых цитокинов CD8+ Тлимфоциты принимают активное участие в формировании плаценты на ранних этапах
физиологической беременности [32]. В третьем триместре децидуальная оболочка секретирует
такие цитокины, как IL-6, IL-10, IFNγ, TGFβ, IL-12 [347]. Вклад в синтез и секрецию этих
цитокинов могут вносить CD8+ Т-лимфоциты.
В децидуальной оболочке при физиологической беременности также выявлены CD4+ Тлимфоциты, популяцию которых разделяют на Т-регуляторные клетки (Тreg), хелперные Тлимфоциты 2 типа и Т-хелперы 17 (Тh17).
21
В первом
триместре
физиологической
беременности
в децидуальной
оболочке
присутствуют CD4+ Т-лимфоциты [47]. По некоторым данным популяция CD4+ Т-лимфоцитов
децидуальной оболочки является Т-хелперами 2 типа, экспрессирующими рецептор CRTH2.
Рецептор CRTH2 появляется на плазматической мембране клеток после их активации. При этом
количество CRTH2+ CD4+ Т-лимфоцитов в децидуальной оболочке значительно превышает их
количество в периферической крови [321]. Таким образом, CRTH2+ CD4+ Т-лимфоциты 2 типа,
выявленные в децидуальной оболочке, находятся в активированном состоянии. Так как CRTH2
является хемокиновым рецептором для простагландина D2, секретируемого клетками
трофобласта, появление CRTH2+ CD4+ Т-лимфоцитов 2 типа в децидуальной оболочке может
быть следствием специфической миграции этих клеток [222]. Также в привлечении CD4+ Тлимфоцитов в децидуальную оболочку участвует хемокин TARC, который, как упоминалось
выше, секретируется клетками трофобласта, эпителиальными клетками матки и клетками желез
эндометрия на ранних сроках беременности [320]. Выявлено, что у здоровых беременных
женщин количество CD4+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих рецептор к TARC – CCR4, в
децидуальной оболочке повышено по сравнению с количеством этих лимфоцитов в
периферической крови [320].
Как упоминалось ранее, для децидуальной оболочки в первом триместре беременности
характерна продукция фермента индоламин-2,3-диоксигеназы, расщепляющего триптофан
[337]. В экспериментах in vitro установлено, что метаболиты триптофана индуцируют апоптоз
Т-хелперных лимфоцитов 1 типа за счет активации каспазы 8 и выхода цитохрома из
митохондрий [122]. Вероятно, в ситуации in vivo индоламин-2,3-диоксигеназа способствует
преобладанию в децидуальной оболочке Т-хелперов 2 типа. В свою очередь CD4+ Тлимфоциты в децидуальной оболочке при физиологической беременности выполняют функцию
поддержания иммунологической толерантности за счет секреции таких цитокинов, как IL-4,
LIF, макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF), необходимых как на этапе
имплантации зародыша, так и для дальнейшего развития плода и плаценты [251].
Одной из популяций CD4+ Т-лимфоцитов являются Т-регуляторные клетки, обладающие
фенотипом CD4+CD25+, а также синтезирующие внутриклеточный белок FoxP3 [35]. Трегуляторные лимфоциты децидуальной оболочки, продуцирующие IL-10 и TGFβ, при
беременности участвуют в установлении толерантности иммунной системы матери по
отношению к тканям плода [138, 156]. Т-регуляторные клетки дифференцируются в тимусе из
наивных Т-лимфоцитов под действием TGF-β [138]. Также возможна дифференцировка Трегуляторных клеток из наивных предшественников Т-лимфоцитов в периферических тканях
[138].
22
Отметим, что у беременных женщин количество Т-регуляторных лимфоцитов в
периферической крови выше, нежели чем у небеременных женщин [232, 280]. Установлено, что
Т-регуляторные клетки экспрессируют HLA-G, причем в децидуальной оболочке этих
CD4+CD25+HLA-G+ клеток больше, чем в периферической крови [47]. Уже через 2 дня после
оплодотворения яйцеклетки в регионарных лимфатических узлах матки увеличивается пул Трегуляторных клеток, в то время как в крови количество этих клеток повышается уже после
имплантации [46]. В децидуальной оболочке количество Т-регуляторных клеток в первом
триместре
беременности
повышено
по
сравнению
с
содержанием
этих
клеток
в
периферической крови [280]. В экспериментах с модельными животными установлено, что
количество Т-регуляторных клеток в середине беременности возрастает в селезенке,
периферических лимфатических узлах и периферической крови [212]. Пик количества Трегуляторных клеток в периферической крови приходится на второй триместр, далее
происходит постепенное снижение количества этих клеток до уровня, который наблюдался до
беременности [297]. В децидуальной оболочке в третьем триместре беременности Трегуляторные клетки составляют около 15% от популяции CD4+ Т-лимфоцитов [145].
Клетки трофобласта продуцируют хорионический гонадотропин, градиент концентрации
которого определяет
миграцию
Т-регуляторных
клеток на ранних
сроках
развития
беременности в децидуальную оболочку [287]. Привлечение Т-регуляторных клеток в
децидуальную оболочку также может происходить под воздействием хемокинов. Так, на
ранних сроках беременности в матке увеличивается количество T-клеток, экспрессирующих
рецептор CCR4 к хемокину TARC, присутствующему в децидуальной оболочке [320].
Вероятно, что этот хемокин отчасти участвует в привлечении и Т-регуляторных клеток в
децидуальную оболочку.
В экспериментах in vitro установлено, что связывание CD47, экспрессируемого наивными
CD4+ Т-лимфоцитами и CD4+ Т-клетками памяти, полученными из периферической крови
матери, и наивными CD4+ Т-лимфоцитами пуповинной крови, с тромбоспондином 1 (TSP-1),
приводит к экстратимической дифференцировке этих клеток в регуляторные Т-клетки [137].
Гликопротеин TSP-1 присутствует в плаценте при физиологической беременности [12].
Вероятно, взаимодействие TSP-1 и CD47 может приводить к дифференцировке CD4+ Тлимфоцитов в Т-регуляторные клетки in situ в области маточно-плацентарного контакта. Также
дифференцировка Т-регуляторных клеток может происходить в результате воздействия других
клеток
микроокружения.
Так,
под
влиянием
цитокина
тимического
стромального
лимфопоэтина, полученного из трофобласта, (TSLP) дендритные клетки децидуальной
оболочки секретируют TGF-β, который в свою очередь стимулирует дифференцировку
CD4+CD25+FOXP3+ Т-регуляторных клеток из CD4+ Т-лимфоцитов [107].
23
Регуляторные Т-лимфоциты способны подавлять пролиферативную активность и
активацию CD4+ Т-лимфоцитов и CD8+ Т-лимфоцитов, также способны подавлять
цитотоксическую функцию NK-клеток и ингибировать созревание и антиген-презентацию
дендритных клеток и макрофагов [138]. Механизмы воздействия Т-регуляторных клеток на
другие клетки различны и включают как прямое контактное взаимодействие, так и воздействие
через секретируемые цитокины IL-10 и TGF-β [138]. Установлено, что Т-регуляторные клетки
могут подавлять активность экспрессии костимулирующих сигналов дендритными клетками,
связываясь с молекулами B-7 через антиген, ассоциированный с цитотоксическими Тлимфоцитами (CTLA-4). Кроме того, через связывание В-7 CTLA-4+CD4+CD25+ Т-лимфоциты
запускают синтез индоламин-2,3-диоксигеназы дендритными клетками децидуальной оболочки
[162]. За счет секреции цитокинов TGF-β и IL-10 Т-регуляторные клетки могут аутокринно
подавлять эффекторную активность Т-лимфоцитов [359].
Установлено, что при физиологической беременности Т-лимфоциты матери могут
проникать через плаценту в лимфатические узлы развивающегося плода. Это явление носит
название микрохимеризма [231]. Ряд материнских антигенов не наследуются плодом, на эти
аллоантигены развивается иммунный ответ. В условиях in vitro лимфоциты плода реагируют на
неродственные антигены, следовательно, эти лимфоциты способны к реализации иммунного
ответа. Однако иммунный ответ на аллоантигены матери в тканях плода не развивается, что
обусловлено наличием в тканях плода большого количества T-регуляторных клеток матери,
подавляющих активацию Т-лимфоцитов плода на материнские антигены [231, 309].
При физиологической беременности в децидуальной оболочке также присутствуют Тхелперные лимфоциты 17 (Th17) [353]. Несмотря на то, что популяция клеток Th17 принимает
участие в развитии хронического воспаления и патогенезе аутоиммунных заболеваний, при
беременности под влиянием мезенхимных стволовых клеток эндометрия Th17 приобретают
регуляторные свойства [250]. В первом триместре беременности в периферической крови
выявлено повышенное количество Th17 [194]. В течение беременности ко второму триместру
происходит снижение количества Th17 в периферической крови [194]. У небеременных
женщин с диагностированным привычным невынашиванием беременности наблюдается
повышенное количество Th17 в периферической крови и повышение значений индекса
Тh17/Тreg по сравнению со здоровыми небеременными женщинами [290]. При преэклампсии
наблюдается повышенное количество Th17 в периферической крови в третьем триместре
беременности [250].
Привлечение Th17 из периферической крови осуществляют клетки стромы децидуальной
оболочки за счет секреции хемокина CCL2 [353]. Также Th17 периферической крови
экспрессируют рецептор CCR6 [94], при этом показано присутствие в децидуальной оболочке
24
на этапе имплантации бластоцисты лиганда этого рецептора - CCL20 в модели с
использованием мышей [85]. В ситуации in vivo, с использованием мышей в качестве
модельных животных, установлена способность Th17 мигрировать из периферической крови в
область маточно-плацентарного контакта. Кроме того, материнские Th17 также были выявлены
в тканях плода [344], что сходно с явлением микрохимеризма, описанного для Т-регуляторных
клеток.
Основным цитокином, секретируемым Th17, является IL-17, обладающий плейотропными
эффектами и, в частности, способный индуцировать экспрессию провоспалительных цитокинов
и хемокинов, стимулирующих инфильтрацию ткани лейкоцитами [94]. По некоторым данным
за счет секреции IL-17 клетки Th17 способствуют пролиферации клеток трофобласта, их
инвазии в децидуальную оболочку, а также обладают антиапоптотической активностью,
необходимыми в начале беременности [353]. Установлено, что NK-клетки, присутствующие в
децидуальной оболочке при беременности, контролируют провоспалительную активность Th17
[127].
В целом популяция Т-лимфоцитов, представленная в децидуальной оболочке, весьма
гетерогенна, и непосредственное взаимодействие клеток децидуальной оболочки и Тлимфоцитов матери, наряду с описанными ранее механизмами индукции толерантности в
отношении антигенов плода, определяет формирование плаценты и физиологическое течение
беременности. Помимо Т-лимфоцитов пул лейкоцитов децидуальной оболочки составляют NKклетки, которым приписывают множество эффекторных воздействий, важных как на ранних
этапах развития плаценты, так и на поздних стадиях развития беременности.
1.1.3.2 NK-клетки децидуальной оболочки
В течение пролиферативной фазы менструального цикла NK–клетки матки представляют
собой небольшую популяцию клеток. Однако их количество в эндометрии значительно
возрастает в секреторную фазу цикла [307]. После имплантации зародыша в ходе
децидуализации в эндометрии матки появляется большое количество децидуальных NK–клеток
с фенотипом CD3– CD56bright, составляющих до 70% всех лейкоцитов, присутствующих в
децидуальной оболочке и примерно 30% всех клеток децидуальной оболочки [8, 171]. Для NK–
клеток матки характерна высокая экспрессия CD56 и низкая экспрессия CD16. Лишь небольшое
количество NK–клеток являются CD56dim [307]. По некоторым данным CD3– CD56bright NKклетки присутствуют в большом количестве в слизистой оболочке матки еще до имплантации.
В случае наступления беременности NK-клетки матки аккумулируются вокруг клеток
трофобласта, а максимальное их содержание совпадает с периодом инвазии трофобласта [21].
25
В настоящее время дискуссионным остается вопрос о процессе образования и пополнения
пула NK-клеток матки при беременности. NK-клетки с фенотипом CD16dimCD56bright в
периферической крови и децидуальной оболочке экспрессируют хемокиновый рецептор
CXCR3 (рецептор к IP-10) и CXCR4, лигандом которого является SDF–1 [142, 354]. Для
CD16dimCD56brightNK–клеток при беременности характерно увеличение как количества клеток,
экпрессирующих CXCR4, так и увеличение интенсивности его экспрессии на этих клетках. Для
децидуальной оболочки в отличие от стромы ворсин хориона характерна экспрессия хемокинов
SDF-1 (лиганд CXCR4) и IP-10 (лиганд CXCR3). Кроме того, клетки экстравиллезного
трофобласта также экспрессируют хемокины CXCL12 и химерин [77, 142, 354]. В условиях in
vitro клетки стромы матки и децидуальные эндотелиальные клетки в первом триместре
беременности экспрессируют мРНК IP–10. В экспериментах in vitro показано, что
CD16dimCD56bright NK–клетки периферической крови при стимуляции IP-10, интерферониндуцибульным хемоаттрактантом Т-лимфоцитов (I-TAC) или химерином мигрируют через
монослой децидуальных эндотелиальных клеток и клетки стромы матки [76, 77, 197]. При
культивировании CD16brightCD56dimNK–клеток в присутствии супернатантов, полученных после
культивирования стромальных клеток матки, наблюдается снижение экспрессии NK-клетками
CD16 и изменение их фенотипа с CD16bright на CD16dim. Смену фенотипа NK-клеток вызывает
цитокин
TGF-β,
децидуальной
продуцируемый
оболочке
[171,
Т-регуляторными
297].
Также
в
клетками,
децидуальной
присутствующими
оболочке
в
обнаружены
гемопоэтические стволовые клетки, которые при культивировании в присутствии IL-15 и
фактора стволовых клеток (SCF) приобретают фенотип CD16- CD56bright децидуальных NKклеток [171].
Ранее установлено, что NK–клетки экспрессируют такие адгезионные молекулы, как LFA1 [54], Mac-1 [177], PECAM–1 [351]. Лиганды к адгезионным молекулам NK–клеток выявлены
на эндотелиальных клетках и клетках трофобласта (таблица 2), что может опосредовать
взаимодействие NK-клеток как с эндотелиальными клетками в ходе миграции, так и с клетками
трофобласта.
Клетки стромы матки, эндотелиальные клетки децидуальной оболочки и клетки
трофобласта за счет секреции хемокинов контролируют хемотаксис NK–клеток с фенотипом
CD16dimCD56bright из периферической крови. Пополнение пула NK-клеток матки может также
происходить за счет CD16brightCD56dim NK–клеток периферической крови. Под воздействием
цитокинов CD16brightCD56dim NK–клетки изменяют свой фенотип на CD16dimCD56bright и
приобретают характерные для этих клеток регуляторные свойства. Затем увеличение
количества CD16dimCD56bright NK-клеток в децидуальной оболочке может происходить за счет
пролиферации in situ.
26
Таблица 2. Экспрессия адгезионных молекул NK–клетками и их лигандов на клетках
эндотелия и трофобласта
Адгезионные
молекулы Лиганды на эндотелиальных Лиганды
на
NK–клеток
клетках
трофобласта
LFA–1 [43]
ICAM–1 [76]
ICAM–1 [80]
Mac–1 [142]
клетках
ICAM–1 [93], ICAM–2 [93], ICAM–1 [80]
ICAM–3 [253]
VLA–4 [259]
VCAM–1 [76]
VCAM–1 [80, 189]
PECAM–1 [273]
PECAM–1 [273], CD99 [54]
PECAM–1 [61]
Как уже упоминалось, возникновение толерантности иммунной системы матери к
антигенам плода объясняют взаимодействием рецепторов децидуальных лимфоцитов с
молекулами локуса HLA-G, экспрессированных на клетках трофобласта [33]. Рецепторами
молекул локуса HLA-G на NK-клетках являются ILT и KIR2DL4 (Рисунок 2). Взаимодействие
этих рецепторов с молекулами локуса HLA-G препятствует активации цитотоксической
функции NK-клеток [156]. Однако блокирование рецептора KIR2DL4 NK-клеток с помощью
специфичных антител не приводит к проявлению цитотоксических свойств децидуальных NKклеток по отношению к клеткам трофобласта [21, 245]. Следовательно, лиганд-рецепторные
взаимодействия клеток трофобласта и NK-клеток не сводятся исключительно к ингибированию
цитотоксичности последних.
Имплантация и физиологическое развитие плаценты зависит во многом и от
продуцируемых децидуальными NK-клетками цитокинов [2]. Беременность сопровождается
повышенной секрецией IFNγ NK-клетками в зоне маточно-плацентарного контакта. Связывание
молекулы локуса HLA-G, экспрессированной на клетках трофобласта, и рецептора KIR2DL4
NK-клеток стимулирует секрецию IFNγ NK-клетками при одновременном ингибировании их
цитотоксической активности в отношении клеток трофобласта [327]. При взаимодействии
рецептора NKG2D NK-клеток с лигандом ранний транскрипт ретиноевой кислоты (RAET1)
клеток трофобласта также индуцируется секреция IFNγ NK-клетками [75]. Цитокин IFNγ
способствует формированию плаценты, снижая миграцию клеток трофобласта и обеспечивая их
скопление вблизи спиральных артерий [151]. При воздействии на эндотелиальные клетки IFNγ
индуцирует экспрессию и секрецию молекул локуса HLA-E эндотелиальными клетками, что
препятствует их лизису NK-клетками [96].
Неотъемлемой частью физиологического развития беременности является апоптоз клеток
трофобласта при формировании и перестройках структуры плаценты [34]. Запуск процесса
апоптоза индуцируется лиганд-рецепторными взаимодействиями TNF-подобного лиганда,
27
инициирующего апоптоз (TRAIL) и рецептора TRAIL (TRAIL-R) и Fas/FasL. Для клеток
трофобласта характерна экспрессия Fas, FasL и рецепторов TRAIL – TRAIL-R1 и TRAIL-R2
[303]. NK-клетки матки экспрессируют FasL, при связывании которого с Fas происходит
индукция апоптоза. Также для NK-клеток характерна экспрессия TRAIL, который при
связывании с его рецептором может индуцировать гибель клеток трофобласта. В целом апоптоз
клеток децидуальной оболочки и плаценты в норме при беременности носит ограниченный
характер: большинство клеток трофобласта не подвергается апоптозу за счет ингибиторов
апоптоза – FLICE-подобного ингибирующего протеина (FLIP) и Х-связанного ингибитора
апоптоза (XIAP), препятствующих проведению внутриклеточного сигнала от Fas [302, 303].
Кроме того, под воздействием IL-15, цитокина, присутствующего в плаценте при
физиологической беременности [43], NK-клетки экспрессируют рецепторы TRAIL-R2 и TRAILR3 [228] и таким образом могут сами подвергаться апоптозу в случае активации и угрозы
физиологическому развитию плаценты.
NK-клетки матки оказывают иммуномодулирующий эффект на клетки плаценты за счет
продукции гликоделина и галектина-1. Гликоделин и галектин-1 обладают подавляющими
иммунный ответ свойствами и влияют на цитокиновую сеть плаценты. Они уменьшают
продукцию TNFα, IL-2 и IFNγ Т–лимфоцитами, локализованными в эндометрии, а также
снижают продукцию IL–12 активированными макрофагами [255], что способствует индукции
иммунологической толерантности в отношении клеток плода.
Для децидуальных NK-клеток показана высокая экспрессия MIP-1α, гранулоцитарномакрофагального колониестимулирующего фактора (GM–CSF), колониестимулирующего
фактора-1 по сравнению с CD16dimCD56bright NK-клетками периферической крови. Также NKклетки матки продуцируют ангиопоэтин-2 и плацентарный ростовой фактор (PlGF) [307]. В
экспериментах in vitro при стимуляции NK-клеток антителами к рецепторам KIR2DL4 в
течение 2 часов после стимуляции возрастает транскрипция генов IL-1β, IL-8, MIP-3α, а затем
генов IL-6, IL-12β и IL-23α [258]. При физиологической беременности в децидуальной оболочке
присутствуют растворимые молекулы HLA-G, секретируемые трофобластом. При связывании с
ними рецепторов KIR2DL4 NK-клетки экспрессируют IL-1β и IFNγ, стимулируют продукцию
фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) клетками трофобласта и таким образом способствуют
ангиогенезу и повышают жизнеспособность клеток плаценты [258]. Кроме того, NK-клетки
продуцируют IL-8 и IP-10, цитокины, способствующие инвазии трофобласта [175].
Таким образом, NK-клетки матки оказывают значительное влияние на процессы
формирования плаценты и физиологическое развитие беременности. Помимо Т-лимфоцитов и
NK-клеток в децидуальной оболочке присутствуют макрофаги.
28
1.1.3.3 Макрофаги децидуальной оболочки
На разных сроках развития беременности децидуальные макрофаги составляют от 15 до
30% лейкоцитов децидуальной оболочки [134, 238]. Пополнение пула децидуальных
макрофагов происходит за счет миграции моноцитов периферической крови матери под
влиянием хемокинов CXCL16, M-CSF, MCP-1, продуцируемых клетками децидуальной
оболочки [51, 117, 153]. Адгезия моноцитов к неактивированным эндотелиальным клеткам
линии
HUVEC
определяется
экспрессией
адгезионных
молекул
CD18.
Адгезия
к
активированным эндотелиальным клеткам осуществляется за счет экспрессии моноцитами
CD29 и CD49d [89]. На модели in vivo с использованием мышей показано, что миграция
моноцитов определяется экспрессией ими интегрина α4β7, связывающего MadCAM-1
эндотелиальных клеток [125].
Под влиянием клеток микроокружения макрофаги могут изменять свои функциональные
характеристики. В настоящее время в литературе описаны два основных варианта активации
макрофагов: классический путь активации – М1 (под влиянием лигандов Toll-подобных
рецепторов (TLR) и IFNγ) и альтернативный – М2 (под влиянием IL-4 или IL-13) [295]. Путь
активации макрофагов М1 также может быть индуцирован присутствием GM-CSF [211].
Макрофаги могут приобретать фенотип М2 под влиянием противовоспалительного цитокина
IL-10, глюкокортикоидов, M-CSF [211], а также наличия в микроокружении апоптотических
клеток [335]. В ходе иммунного ответа возможно переключение пути активации макрофагов,
опосредованное активностью внутриклеточных белков, передающих сигнал и активирующих
транскрипцию (STAT) [295]. Макрофаги M1 обеспечивают защиту от внутриклеточных
патогенов (например, Mycobacterium tuberculosis) продуцируют провоспалительные цитокины
IL-1β, IL-6, TNFα, для них характерна продукция активных радикалов кислорода, эти клетки
стимулируют иммунный ответ по типу Th1 [211, 295]. Макрофаги М1 обладают фенотипом IL12high IL-10low [211]. Макрофагам М2 приписывают иммунорегуляторные функции, эти клетки
участвуют в ремоделировании тканей, патогенезе опухолевого роста и защите от гельминтов.
Они характеризуются повышенной способностью к фагоцитозу, высокой экспрессией
scavenger-рецепторов, обладают фенотипом IL-12low IL-10high [295]. Под влиянием IL-10
макрофаги М2 осуществляют контроль воспалительной реакции, снижая продукцию
провоспалительных цитокинов, изменяют внеклеточный матрикс, секретируют IL-10 и TGFβ
[211].
Макрофаги,
присутствующие
CD14+CD163+CD206+CD209+,
в
децидуальной
характерным для
пути
оболочке,
активации
обладают
М2,
фенотипом
что позволяет
рассматривать их как популяцию М2 [62, 305]. Под влиянием M-CSF и IL-10, присутствующих
29
в зоне маточно-плацентарного контакта, моноциты периферической крови приобретают
фенотип М2 [305]. По другим данным децидуальные макрофаги не относят строго к
макрофагам М2, а выделяют в отдельную популяцию макрофагов, сходную с М2 [149].
На основе экспрессии ими адгезионной молекулы ICAM-3 макрофаги децидуальной
оболочки разделяют на 2 отдельные популяции: экспрессирующие и не экспрессирующие
ICAM-3. Причем ICAM-3+ макрофаги демонстрируют более высокую экспрессию CD163,
CD206 и CD209 [305]. Через рецепторы CD163 (scavenger-рецептор), CD206 (маннозный
рецептор) макрофаги осуществляют распознавание и уничтожение бактериальных патогенов
[50, 119]. Экспрессия рецептора CD209 (DC-SIGN) характерна для незрелых дендритных
клеток, в то же время децидуальные макрофаги CD209+ не экспрессируют HLA-DR, HLA-DP,
HLA-DQ [62].
Децидуальные макрофаги, присутствующие в течение первого триместра беременности в
области маточно-плацентарного контакта, подразделяют на две популяции также на основе
экспрессии ими CD11c – CD11chigh и CD11clow. Анализ экспрессируемых генов этими группами
макрофагов показал, что CD11chigh макрофаги отвечают за метаболизм липидов, а CD11clow
определяют перестройку внеклеточного матрикса и контролируют пролиферацию клеток в
децидуальной оболочке [149].
Как моноциты, так и макрофаги экспрессируют на своей поверхности рецепторы к
молекулам локуса HLA-G [156]. В условиях in vitro растворимая форма молекулы HLA-G
индуцирует продукцию IL-10, TNFα и IFNγ моноцитами периферической крови [165].
Физиологическое развитие плаценты сопровождается повышением синтеза и секреции NKклетками матки IFNγ [327], который вызывает активацию макрофагов М1 [334]. По некоторым
данным, при взаимодействии молекул локуса HLA-G и рецепторов ILT2 и ILT4 макрофагов
(Рисунок 2), происходит ингибирование синтеза TNFα и индуцируется синтез IL-10
макрофагами децидуальной оболочки [292]. Мембранные формы молекулы локуса HLA-G
ингибируют продукцию TNFα и IFNγ макрофагами децидуальной оболочки [166]. Помимо
индукции толерантности самих макрофагов в отношении полу-аллогенных тканей плода,
макрофаги
с
фенотипом
М2
секретируют
индоламин-2,3-диоксигеназу
-
фермент,
определяющий индукцию иммунологической толерантности за счет ингибирования активности
Т-лимфоцитов, макрофагов и NK-клеток [238].
Децидуальные и плацентарные макрофаги способны экспрессировать FasL и таким
образом принимать участие в перестройке спиральных артерий матки [17, 303]. Клетки,
подвергшиеся апоптозу, поглощаются макрофагами, при этом задействуются такие молекулы,
как интегрины αvβ3 (CD51/CD61), CD14, ICAM-3, рецептор фосфатидилсерина [120]. Полагают,
что
взаимодействие
рецептора
фосфатидилсерина
на
поверхности
макрофага
и
30
фосфатидилсерина на апоптотической клетке является важным не только для запуска процесса
поглощения макрофагом погибшей клетки, но также и играет существенную роль в индукции
продукции
TGFβ
макрофагами
[120].
Поглощение
клеток,
подвергшихся
апоптозу,
макрофагами в плаценте обеспечивает не только удаление нежелательного антигенного
материала, но и дополнительную секрецию противовоспалительных цитокинов, которые
ингибируют воспалительные процессы в плаценте в течение всей беременности. В макрофагах
при поглощении клеток плаценты или клеток эндометрия, вошедших в апоптоз, снижается
синтез и секреция провоспалительных цитокинов IL-1β, IL-8, GM-CSF, TNFα, и увеличивается
синтез и секреция противовоспалительных цитокинов TGFβ1, IL-10, IL-4. Выделяемые
макрофагами противовоспалительные цитокины повышают устойчивость клеток трофобласта к
Fas-опосредованному апоптозу [13]. Также, секретируемые макрофагами IL-10 и TGFβ
инициируют секрецию трофобластом секреторного варианта поверхностной молекулы FasL sFasL, который, связываясь с Fas на поверхности активированных цитотоксических
лимфоцитов, запускает их апоптоз [40, 52, 303] (Рисунок 3). Однако, поглощение клеток,
подвергшихся апоптозу, макрофагами активированными IFNγ или TNFα, приводит к
подавлению их способности индуцировать апоптоз [108].
Рисунок
3.
Влияние
апоптотических
клеток
трофобласта
и
макрофагов
на
жизнеспособность трофобласта (Модифицировано из Straszewski-Chavez S.L. et al., 2005 [303]).
Макрофаги секретируют VEGF и секреторный вариант рецептора VEGF – sVEGF-R1, тем
самым оказывая влияние на процессы ангиогенеза в децидуальной оболочке и плаценте [238].
Показано, что макрофаги матки экспрессируют белок Spry, за счет которого паракринно
модулируют ветвление ворсин [48]. Поэтому, макрофаги матки являются одними из главных
клеток, ответственных за развитие ворсин хориона [13].
31
Таким
образом,
макрофаги
децидуальной
оболочки
способствуют
повышению
жизнеспособности клеток трофобласта и участвуют в формировании иммунологической
толерантности в отношении антигенов плода. Секретируя про- и противовоспалительные
цитокины, макрофаги модулируют собственную активность, стимулируют ремоделирование
структуры децидуальной оболочки, а также влияют на функции клеток, присутствующих в
децидуальной оболочке.
Суммируя полученные данные необходимо отметить, что формирование децидуальной
оболочки и плаценты находится под непосредственным контролем клеток иммунной системы
матери и плода. Миграция популяций лейкоцитов из периферической крови в децидуальную
оболочку на разных сроках беременности изменяется в зависимости от присутствующих в зоне
маточно-плацентарного контакта хемокинов. Такие механизмы, как экспрессия молекул локуса
HLA-G, секреция индоламин-2,3-диоксигеназы, активность Т-регуляторных лимфоцитов
обуславливают
формирование
толерантности
клеток
иммунной
системы
матери,
присутствующих в децидуальной оболочке, по отношению к антигенам плода. Широкий спектр
секретируемых клетками иммунной системы цитокинов способствуют ремоделированию
спиральных артерий и развитию сосудистой сети плаценты. Нарушение иммунологического
контроля может приводить к развитию такой патологии беременности, как преэклампсия.
1.2
Патогенетические механизмы развития преэклампсии
Преэклампсия является одним из распространенных осложнений беременности. Эта
патология развивается после 20 недели беременности и для неё характерно развитие
полиорганной недостаточности. Частота встречаемости этого заболевания составляет 6-8% в
развитых странах и превышает 20% в развивающихся [1]. Преэклампсия в настоящее время
остается одним из основных заболеваний, являющихся причиной смертности беременных
женщин. При преэклампсии у женщины развивается гипертония и протеинурия, нарушения
свертываемости крови, нарушения функции почек и печени, ишемия головного мозга [1, 109].
Из-за недостаточного понимания механизмов возникновения преэклампсии долгое время не
существовало единой классификации различных форм этого заболевания. В настоящее время
преэклампсию рассматривают как полиэтиологичное заболевание [1], в основе которого лежат
нарушения сложного взаимодействия разных клеточных популяций матери и плода.
В основе развития преэклампсии лежит патогенетический механизм воспаления
неинфекционного генеза, что подтверждается наличием таких изменений, как активация
эндотелия, активация лейкоцитов, повышение тромбогенности эндотелия, повышенная
активность каскада комплемента [63, 260]. В определенной степени маркеры воспалительной
32
реакции присутствуют и при физиологическом течении беременности (лейкоцитоз в первом
триместре беременности, повышенная фагоцитарная активность нейтрофилов и моноцитов,
присутствие IL-6 и TNFα в сыворотке крови) [63]. При преэклампсии воспалительная реакция
приобретает системный характер [63]. В частности проявлением воспалительного процесса при
преэклампсии является повышение концентрации IL-1β, IL-6, лактоферрина по сравнению с
уровнем, наблюдающимся при физиологической беременности [28]. Определенный вклад в
запуск и развитие воспаления при преэклампсии вносит плацента, которая является источником
анти-ангиогенных
факторов
(например,
sVEGFR),
микрочастиц
аллогенного
синцитиотрофобласта и провоспалительных цитокинов [63, 248]. Возможным механизмом
развития воспалительной реакции является первоначальная активация эндотелия при
взаимодействии с активированными лейкоцитами (моноцитами и нейтрофилами) [110]. В
результате воздействия на эндотелиальные клетки провоспалительных цитокинов лейкоцитов
происходит локальное повреждение эндотелия. Дополнительный вклад в повреждение
эндотелия вносит взаимодействие рецепторов, активируемых протеазами (PAR) с протеазами
системы свертывания крови, что приводит к вазоконстрикции, продукции активных форм
кислорода и усилению воспаления [110]. Однако существует предположение, что воспаление,
наблюдающееся при преэклампсии, является следствием развития данной патологии, но не ее
причиной [260]. Вместе с тем, обсуждается диагностическое значение определения
интенсивности воспалительной реакции, протекающей у женщины с преэклампсией, по уровню
содержания в сыворотке крови TNFα, IL-6 и C-реактивного белка [224].
Среди теорий, рассматривающих причины развития преэклампсии выделяют несколько
основных, в основе которых лежат генетические факторы, иммунологические факторы,
состояние сосудистого русла, ишемия плаценты, нарушения липидного обмена [1, 3]. В
генетической теории основным фактором, способствующим развитию преэклампсии, считают
дефекты некоторых генов матери (ген ангиотензина, ген эндотелиальной NO-синтазы на 7
хромосоме, гены TNFα) [30, 329], также рассматривают совместный вклад генотипа матери и
генотипа плода в развитие преэклампсии [329]. Так, частота развития преэклампсии повышена
в случае, если плод является гомозиготой по аллели гена HLA-C2, а мать – гомозигота по гену
KIR (гаплотип А) [348]. Установлено также, что риск развития у беременной женщины
преэклампсии повышен в случае, если ее партнер родился от женщины, у которой была
диагностирована преэклампсия [348], что подтверждает важную роль генетических факторов в
определении групп риска по развитию данной патологии. В настоящее время все шире
применяются методы комплексной оценки экспрессии генов при преэклампсии и изменения их
экспрессии в сравнении с физиологической беременностью, включающие анализ библиотек
генов и применение микрочипов для верификации полученных in silico данных [170]. С
33
помощью подобного анализа выявлено, что развитие преэклампсии сопровождается дефектом
пептида глутатиона и генов цитокина IL-2, GABA рецептора и пути проведения
внутриклеточного сигнала Sonic hedgehog [170], а также генов белков, участвующих в
метаболизме аргинина и пролина [144]. При преэклампсии установлено наличие повышенной
экспрессии мРНК VEGFR-1, эндоглина, P-селектина и сниженная экспрессия мРНК PlGF в
периферической крови, с ростом тяжести заболевания экспрессия мРНК VEGFR1 и эндоглина
повышается [289]. Однако, вследствие отсутствия полного описания генетических детерминант,
повышающих риск развития преэклампсии и манифестацию ее клинических симптомов, в
настоящее время в рамках генетической теории можно с определенной долей вероятности
говорить о влиянии экспрессии определенных генов на патогенез данного заболевания [299].
Основу сосудистой теории развития преэклампсии составляет изменение состояния
сосудистого русла при беременности. Наличие в анамнезе беременных с преэклампсией
заболеваний сердечно-сосудистой системы (например, хронической гипертонии), а также
наличие
аутоиммунных
заболеваний
(например,
системной
красной
волчанки,
антифосфолипидного синдрома) являются факторами, усугубляющими состояние сосудистого
русла и способствующими развитию преэклампсии [329]. В рамках данной теории внимание
уделяется развивающейся при преэклампсии эндотелиальной дисфункции, под которой
понимают нарушение таких функций эндотелия, как регуляция адгезии лейкоцитов к
сосудистой
стенке,
физиологической
регуляция
беременности
тонуса
сосудов,
антикоагулянтная
атромбогенность
и
эндотелия.
антитромботическая
При
способность
эндотелия преобладает над его прокоагулянтными свойствами. При преэклампсии же
увеличивается проницаемость сосудов и их чувствительность к вазоактивным веществам,
наблюдается
повышенная
прокоагулянтная
активность
эндотелия,
происходит
потеря
тромборезистентных свойств эндотелия [11]. В качестве причин, приводящих к развитию
эндотелиальной дисфункции, основной является нарушение инвазии цитотрофобласта в стенку
спиральных артерий, однако также рассматривают вклад в повреждение эндотелия
окислительного
стресса,
развития
воспаления
и
образования
микрочастиц
синцитиотрофобласта [14]. В циркуляторном русле матери при преэклампсии возрастает
концентрация тромбина, который влияет на плотные контакты между клетками и in vitro
увеличивает проницаемость эндотелиального монослоя. При преэклампсии возрастает
количество рецепторов к тромбину на эндотелиальных клетках и на нейтрофилах, что
свидетельствует о влиянии тромбина на про- и анти-агрегационные процессы между
эндотелиальными клетками, тромбоцитами и нейтрофилами [101, 181, 340]. Создаются условия
для генерализованного вазоспазма, который приводит к ишемическим и гипоксическим
изменениям в организме и нарушениям функции жизненно важных органов [1]. Такие
34
клинические проявления преэклампсии, как протеинурия и возникновение отеков, являются
следствием патологического увеличения проницаемости сосудов вследствие эндотелиальной
дисфункции [341]. Потеря эндотелием эластичности приводит к гипертонии, повышенная
проницаемость сосудов влечет за собой нарушение фильтрации в почках и протеинурию.
Нарушение экспрессии эндотелием факторов свертывания приводит к коагулопатии. Кроме
того, эндотелиальная дисфункция, вазоконстрикция и ишемия ткани может привести к
нарушению работы печени [147, 181]. Развивающаяся при преэклампсии эндотелиальная
дисфункция отражается в увеличении количества фибронектина и тромбомодулина, профактора
Виллебранта
(активатора
адгезии
тромбоцитов),
тканевого
активатора
плазминогена,
ингибитора активатора плазминогена 1 в сыворотке крови беременных [7, 41, 136, 269].
Принимая во внимание то, что общим патогенетическим механизмом, наблюдающимся при
преэклампсии, является воспаление, эндотелиальную дисфункцию часто относят в одному из
аспектов генерализованной воспалительной реакции [248].
Близкой к сосудистой теории развития преэклампсии является ишемическая теория,
которая в качестве причины развития заболевания выделяет нарушение инвазии трофобласта,
нарушение перестройки сосудов матки и формирование недостаточного кровоснабжения
плаценты [1, 10], которое в свою очередь приводит к продукции активных форм кислорода
[155]. Активные формы кислорода способны окислять липиды мембран клеток, повреждать
внутриклеточные органеллы, способствуя продукции клетками TNFα и запуску апоптоза клеток
[155]. В эксплантах плацент, полученных от женщин с преэклампсией, выявлено повышенное
содержание метаболитов перекисного окисления липидов [216], апоптотических телец
синцитиотрофобласта, мРНК TNFα [155], поэтому возможным пусковым механизмом
преэклампсии
является
нарушение
баланса
между
гипоксическим
воздействием
и
реоксигенацией фето-плацентарного комплекса в ходе становления сосудистой сети плаценты
[155].
С позиций теории нарушения липидного обмена развитию преэклампсии способствует
модификация липопротеинов низкой плотности и липопротеинов очень низкой плотности,
вызывающая их токсическое действие на клетки [1, 3, 248]. При преэклампсии наблюдается
повышение содержания триглицеридов, жирных кистот и холестерола, ассоциированного с
липопротеинами низкой плотности, в то время как содержание липопротеинов высокой
плотности
снижено
[56,
248].
В
плаценте
при
преэклампсии
наблюдаются
такие
воспалительные изменения, как отложения фибрина, тромбоз сосудов, что сближает процессы,
происходящие при данной патологии с патогенетическими процессами, наблюдающимися при
атеросклерозе [210]. Повышенный уровень липопротеина А является фактором риска развития
атеросклероза, при преэклампсии наблюдается тенденция к увеличению концентрации
35
липопротеина А. Однако при тяжелой преэклампсии установлено снижение содержания
липопротеина А, что может быть связано с его аккумулированием в стенках сосудов [210].
Также установлено, что при преэклампсии повышено содержание пероксидов липидов, которые
могут образовываться в результате воздействия на клетки свободных радикалов [56, 179], а
также снижена концентрация таких белков, как каталаза, пероксидаза глутатиона, супероксид
дисмутаза, обладающих протективным действием. В свою очередь пероксиды липидов могут
повреждать эндотелиальные клетки, способствовать развитию эндотелиальной дисфункции и
клинических проявлений преэклампсии [179].
Иммунологическая теория развития преэклампсии делает акцент на чужеродность (полуаллогенность) плода и
нарушении
адаптации
материнского организма к факторам,
продуцируемым плацентой при беременности [262]. В литературе присутствуют косвенные
свидетельства участия реакций адаптивного иммунного ответа на ранних стадиях имплантации
бластоцисты и плацентации и их роли в последующем развитии преэклампсии. Так, короткий
интервал между первым совокуплением и наступлением беременности от одного партнера
является фактором риска развития преэклампсии при данной беременности, что указывает на
развитие толерантности иммунной системы матери в отношении отцовских антигенов,
присутствующих в сперме и семенной жидкости, еще до наступления беременности [172]. В
экспериментах с использованием мышей в качестве модельных животных установлено, что в
семенной жидкости присутствуют молекулы MHC-I, MHC-II и TGFβ, способствующие
образованию Т-регуляторных клеток в регионарных лимфатических узлах матки [272]. После
наступления беременности важна роль механизмов индукции толерантности клеток иммунной
системы (экспрессии молекул локуса HLA-G [186], фермента индоламин-2,3-диоксигеназы
[195]), присутствующих в области маточно-плацентарного контакта, в отношении тканей плода.
Развитие
преэклампсии
возможно
в
результате
нарушения
указанных
механизмов:
недостаточная инвазия трофобласта в стенки спиральных артерий матки происходит вследствие
недостаточной экспрессии молекул локуса HLA-G и недостаточной стимуляции секреции
лейкоцитами иммунорегуляторных цитокинов и ангиогенных факторов, что приводит к
развитию системной воспалительной реакции, вовлекающей взаимодействия лейкоцитов и
эндотелия [184]. В рамках иммунологической теории важным признается вклад врожденного
паттерн-спеццифического звена иммунитета в развитие воспалительного процесса при
преэклампсии [262]. Так, в результате оксидативного стресса из клеток могут выходить
молекулы, получившие название молекулярные паттерны, ассоциированные с повреждением
(DAMPs), которые связываясь с рецепторами TLR на иммунных клетках, могут провоцировать
развитие воспаления [183]. Также вклад в развитие иммунного ответа в маточно-плацентарном
36
комплексе вносят продукция провоспалительных цитокинов активированными моноцитами и
нейтрофилами, и измененная секреция NK-клетками IFNγ [183].
В целом каждая из теорий развития преэклампсии рассматривает отдельные факторы
патогенеза данной патологии беременности. При рассмотрении развития преэклампсии как
воспалительного процесса предприняты попытки объединения всех имеющих место
патологических явлений, что отражено на рисунке 4. Далее рассмотрим подробнее механизмы
патогенеза преэклампсии.
Рисунок 4. Вклад различных систем организма в развитие воспалительного процесса при
преэклампсии (Модифицировано из Redman C. et al., 2010 [262]).
1.3
Молекулярные и клеточные механизмы патогенеза преэклампсии
Одной из важных составляющих патогенеза преэклампсии является нарушение инвазии
трофобласта [167]. При физиологической беременности на 10-12 неделе наблюдается резкое
возрастание концентрации кислорода в результате активной перфузии в интервиллезном
пространстве и повышения интенсивности работы анти-оксидантных энзимов [256]. Высокая
концентрация кислорода индуцирует изменение фенотипа трофобласта с пролиферативного на
инвазивный, также клетки трофобласта начинают экспрессировать молекулы, характерные для
эндотелиальных клеток [167]. Так, при физиологической беременности на трофобласте
снижается экспрессия E-кадгерина, интегринов α6β4 и αvβ5, в то время как возрастает экспрессия
кадгерина эндотелия сосудов (VE-кадгерина), PECAM-1, α4 интегрина, интегринов α1β1 и αvβ3
[167, 181, 366]. Также клетки трофобласта экспрессируют на своей поверхности молекулы
sialyl-Lewisx [167]. Происходящие при преэклампсии нарушения работы анти-оксидантной
37
системы в организме матери, приводят к окислительному стрессу клеток трофобласта [256], что
отражается в нарушении экспрессии адгезионных молекул трофобластом, в снижении
инвазивных свойств клеток трофобласта и неадекватной перестройке спиральных артерий [167,
366]. В экспериментах in vivo с использованием мышей в качестве модельных животных
установлено, что клетки трофобласта под воздействием IFNγ экспрессируют адгезионные
молекулы ICAM-1, а также повышают экспрессию MHC-1 [316]. Иммуногистохимические
исследования показали, что у беременных женщин при преэклампсии синцитиотрофобласт и
клетки децидуальной оболочки экспрессируют ICAM-1 [246], что способствует лизису клеток
трофобласта цитотоксическими Т-лимфоцитами. В результате перестройка спиральных артерий
проходит
в
недостаточной
степени,
примерно
2/3
артерий
претерпевают
замену
гладкомышечных клеток стенки сосудов на клетки трофобласта лишь в области миометрия и
части децидуальной оболочки. Одна треть спиральных артерий вообще не подвергается
перестройке, что влечет за собой гипоперфузию и гипоксию плаценты [329] (Рисунок 5).
Рисунок 5. Инвазия трофобласта в спиральные артерии при физиологической
беременности и при преэклампсии (Модифицировано из VanWijk M.J. et al., 2000 [329]).
Гипоксия ткани, наступающая вследствие нарушения перестройки спиральных артерий и
недостаточного кровоснабжения плаценты, индуцирует образование провоспалительных
цитокинов лейкоцитами, присутствующими в децидуальной оболочке, что отрицательно
сказывается на состоянии эндотелия сосудов матери [41, 329]. В экспериментах in vitro
установлено, что TNFα нарушает работу электрон-транспортной цепи митохондрий, в
результате чего в кровеносное русло попадают кислородные радикалы и формируются
пероксиды липидов. В свою очередь кислородные радикалы и пероксиды липидов повреждают
эндотелиальные клетки, способствуя образованию пенистых клеток и развитию эндотелиальной
38
дисфункции [136, 256, 257]. При преэклампсии вокруг спиральных артерий скапливается
фибрин, что повышает вероятность образования тромбов в плацентарных сосудах [41, 329].
Эндотелиальные клетки, а также макрофаги и клетки трофобласта при преэклампсии
секретируют в большом количестве секреторную форму рецептора VEGF – sVEGF-R1 [294],
который конкурентно связывается с VEGF и PlGF и не приводит к передаче сигнала в клетку
[181]. Дефицит ангиогенных факторов VEGF и PlGF в области маточно-плацентарного контакта
также вносит вклад в развитие эндотелиальной дисфункции при преэклампсии [16, 181].
Развитие преэклампсии сопровождается изменением представительства лейкоцитов как в
периферической крови, так и в децидуальной оболочке. В периферической крови при
преэклампсии снижено количество CD4+CD45RA+ Т-лимфоцитов и повышено количество
CD4+CD45RO+ Т-лимфоцитов, что связывают с происходящей дифференцировкой CD4+ Тлимфоцитов из наивных (CD45RA+) в клетки памяти (CD45RO+), продуцирующие IL-4 и IFNγ
[99]. Интенсивность экспрессии CD28 CD8+ Т-лимфоцитами периферической крови при
преэклампсии повышена по сравнению с физиологической беременностью [100]. Маркер CD28
является маркером активации CD8+ Т-лимфоцитов [274], что указывает на активированное
состояние CD8+ Т-лимфоцитов при преэклампсии.
При
преэклампсии
по
внутриклеточное
содержание
периферической
крови,
что
сравнению
VEGF
может
с
CD4+
быть
физиологической
Т-лимфоцитами
следствием
беременностью
и
CD8+
активации
снижено
Т-лимфоцитами
этих
клеток
и
преимущественного синтеза ими провоспалительных цитокинов [233].
В периферической крови женщин с преэклампсией количество CD4+CD25+/bright
Т-
регуляторных клеток [99, 319] и интенсивность экспрессии ими CD25 были снижены по
сравнению с количеством этих клеток в циркуляторном русле женщин с физиологической
беременностью [99]. Количество лимфоцитов Th17, присутствующих в периферической крови,
повышено при преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью [319].
Разнонаправленные изменения содержания этих двух популяций Т-лимфоцитов подтверждают
гипотезу о реализующемся при преэклампсии сдвиге баланса Treg/Th17 в сторону Th17,
синтезирующих IL-17 и поддерживающих процесс воспаления [150, 319].
При исследовании фенотипа NK-клеток матки у беременных с преэклампсией
установлено, что количество CD3–CD16+ NK-клеток возрастает в периферической крови при
преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью [20, 21]. В периферической
крови при преэклампсии присутствует большое количество моноцитов, экспрессирующих
CD11b/CD18, которые опосредуют их адгезию к эндотелию [1].
В децидуальной оболочке при преэклампсии по данным одних исследователей снижено
количество CD16+CD56+ NK-клеток, CD3+ Т-лимфоцитов, CD8+ Т-лимфоцитов, FoxP3+ Т-
39
регуляторных клеток и CD14+ макрофагов, что может сказываться на поддержании особого
клеточного
и
цитокинового
микроокружения,
обеспечивающего
характер
течения
беременности [254, 267, 349]. По данным других исследователей в децидуальной оболочке
происходит снижение количества Т-лимфоцитов CD4+CD45RA+, увеличение количества CD8+
Т-лимфоцитов, активированных CD8+CD28+ Т-лимфоцитов и NK-клеток [300, 347].
Недостаток экспрессии молекул локуса HLA-G клетками трофобласта в плаценте снижает
физиологическую индукцию апоптоза фето-токсических CD8+ Т-лимфоцитов [132]. Антигены
плода активируют цитотоксические Т-лимфоциты, что приводит к развитию воспалительной
реакции в плаценте [39]. По некоторым данным Т-регуляторные клетки децидуальной оболочки
при преэклампсии демонстрируют сниженную регуляторную активность, причиной чего может
быть повышенное количество белка эндоглина, препятствующего связыванию TGFβ с его
рецепторами на клетках [183].
Из-за сниженной продукции молекул локуса HLA-G в децидуальной оболочке при
преэклампсии [186] децидуальные NK-клетки могут активироваться и реализовывать
цитотоксическую активность в отношении чужеродного трофобласта [133]. При преэклампсии
наблюдается сниженная экспрессия Fas децидуальными NK-клетками [98], что указывает на
сниженную способность NK-клеток к апоптозу. Связывание рецепторов Fas клеток трофобласта
и FasL NK-клеток приводит к усиленной гибели клеток трофобласта, что в конечном итоге
приводит к нарушению структуры плаценты. Беременность, осложненная преэклампсией, также
сопровождается снижением концентрации IL-15 в плаценте, что способствует снижению
экспрессии NK-клетками рецепторов TRAIL-R2 и TRAIL-R3 и также приводит к нарушению
механизма защиты клеток трофобласта от цитотоксических эффектов NK-клеток при
преэклампсии [303].
При преэклампсии в периферической крови женщин выявляется большее количество
нейтрофилов и моноцитов, экспрессирующих адгезионные молекулы CD11b/CD18, которые
опосредуют их адгезию к эндотелию [1]. Нейтрофилы периферической крови и нейтрофилы,
присутствующие в децидуальной оболочке при преэклампсии, находятся в активированном
состоянии [183]. Нейтрофилы при преэклампсии продуцируют активные формы кислорода
(супероксид-анион, пероксид водорода) [322]. В экспериментах с культурой клеток пупочного
канатика сыворотка пациенток с преэклампсией оказывала цитотоксический эффект на
эндотелиальные
клетки
по
сравнению
с
сыворотками
женщин
с
физиологической
беременностью [41]. Вероятно, этот эффект обусловлен большим количеством активных форм
кислорода, присутствующих в сыворотке беременных с преэклампсией. Активация работы
внутриклеточного энзима нейтрофилов и моноцитов/макрофагов НАДФН - оксидазы
способствует окислению липидов с формированием их токсичных метаболитов [183]. Таким
40
образом, нейтрофилы вносят вклад в патогенез преэклампсии за счет продукции активных форм
кислорода и образования токсичных метаболитов липидов.
Вблизи
спиральных
артерий
при
преэклампсии
выявлено
большое
количество
макрофагов, находящихся в активированном состоянии и секретирующих TNFα, который
способствует нарушению инвазии трофобласта и индуцирует апоптоз клеток трофобласта [167,
263-266]. Установлено, что макрофаги, полученные в условиях in vitro из моноцитов
периферической крови беременных женщин с преэклампсией, секретируют IL-1β [339]. В
экспериментах in vitro показано, что при стимуляции IL-1β или TNFα децидуальные клетки
продуцируют хемоаттрактант макрофагов MCP-1 [198]. Это приводит к поддержанию
повышенного количества макрофагов в плаценте. Активированные макрофаги M1 фенотипа за
счет секреции IL-12 и IL-15 индуцируют цитотоксическую активность NK-клеток [13, 276]. При
преэклампсии наблюдается снижение продукции индоламин-2,3-диоксигеназы макрофагами, а
также дендритными клетками [225], что способствует активации NK-клеток матери и
проявлению цитотоксической активности.
Повышение продукции MCP-1, TNFα, IL-1β, IL-12 и экспрессии адгезионных молекул
лейкоцитами определяет образование мононуклеарных инфильтратов в плаценте при
преэклампсии [19], что является отражением воспалительного процесса в области маточноплаценарного контакта при преэклампсии.
Провоспалительные цитокины приводят к активации нейтрофилов и моноцитов плода,
которые в свою очередь могут продуцировать дополнительные провоспалительные медиаторы.
В разных исследованиях при преэклампсии выявляли повышение концентрации IL-6, TNFα, IL1α, IL-1β, IL-8, Fas-лиганда в сыворотке крови, однако прямой взаимосвязи между повышением
того или иного фактора и развитием симптомов преэклампсии не обнаружено [29, 38, 132, 136,
181]. Отметим, что провоспалительные цитокины индуцируют увеличение экспрессии
адгезионных
молекул
sialyl-Lewisx,
CD49d/CD29, CD31 на нейтрофилах плода при
преэклампсии по сравнению с нейтрофилами плода от пациенток с физиологической
беременностью. Моноциты плода при преэклампсии продуцируют в большем количестве sialylLewisx, CD11c, CD54 по сравнению с моноцитами плода при беременности без патологии. В
результате увеличения экспрессии адгезионных молекул на нейтрофилах и моноцитах плода
эти клетки могут как адгезировать к эндотелию сосудов, так и слипаться друг с другом (CD11c
– CD54), закупоривая сосуды и поддерживая гипоксическое состояние в плаценте [218].
Нарушение экспрессии трофобластом молекул локуса HLA-G и провоспалительные
цитокины, присутствующие в децидуальной оболочке и в плаценте при преэклампсии,
активируют
лейкоциты
матери,
проходящие
через
зону
маточно-плацентарного
кровообращения [256, 270]. Лейкоциты при прохождении маточной вены, изменяют
41
экспрессию адгезионных молекул, при этом преэклампсия сопровождается повышением по
сравнению с физиологической беременностью экспрессии ряда адгезионных молекул
нейтрофилами и моноцитами, полученными из маточной вены [219]. Изменение экспрессии
адгезионных молекул лейкоцитами при преэклампсии может влиять на миграцию клеток в
ткани и в том числе децидуальную оболочку, что может вносить вклад в прогрессирование
преэклампсии.
Таким образом, происходящие в ходе течения беременности нарушения межклеточных
взаимодействий,
определяемых
экспрессируемыми
клетками
рецепторами,
могут
способствовать формированию условий для развития преэклампсии. В настоящее время в
литературе присутствуют данные, свидетельствующие о том, что при различных межклеточных
взаимодействиях клетки могут образовывать особые микровезикулы (микрочастицы). Активно
изучается влияние микрочастиц клеток на состояние сосудистого русла и их вклад в патогенез
сердечно-сосудистых заболеваний [141, 311, 338]. Так как развитие беременности сопряжено с
активными перестройками сосудистого русла [168], а манифестация преэклампсии связана с
развитием эндотелиальной дисфункции [11] и нарушением межклеточных взаимодействий
клеток трофобласта и лейкоцитов децидуальной оболочки, можно предполагать, что указанные
изменения могут инициировать образование микрочастиц клеток, что в свою очередь делает
актуальным исследование данного аспекта патологии беременности.
1.4 Микрочастицы клеточного происхождения при физиологической беременности и
при преэклампсии
В результате различных межклеточных взаимодействий все эукариотические клетки
образуют небольшие везикулы размером 100 – 1000 нм, которые называют мембранными
микровезикулами или микрочастицами. Микрочастицы имеют разнообразное клеточное
происхождение, лишены ядра и способности к синтезу, но могут содержать мембранный скелет
и различное количество фосфатидилсерина на своей поверхности. [69, 214]. Следует отличать
микрочастицы клеток от экзосом и апоптотических телец. Экзосомы представляют собой
везикулы
размером
50-100
нм,
источником
которых
являются
внутриклеточные
мультивезикулярные компоненты клеток (например, эндоплазматический ретикулюм) [69, 214].
В состав их мембраны входит фосфатидилсерин, а на поверхности экзосом экспрессированы
такие маркеры лизосомальных мембран, как CD107a и CD63 [104]. Седиментация экзосом
происходит при 100000g [214]. Апоптотические тельца являются фрагментами клеток,
погибших путем апоптоза, размер этих телец достигает 5000 нм. Для них характерен высокий
42
аффинитет к аннексину V, связывающемуся с фосфатидилсерином мембран. Константа
седиментации апоптотических телец составляет 16000g [69, 214]. Кроме того, апоптотические
тельца обладают пермеабилизованной мембраной, что позволяет окрашивать их раствором
пропидия йодида [104]. Микрочастицы в отличие от экзосом и апоптотических телец, обладают
размером от 100 до 1000 нм. В состав мембран микрочастиц входит фосфатидилсерин, а также
молекулы адгезии, различные поверхностные маркеры «родительских» клеток, молекулы РНК
и микро-РНК [69, 104, 214, 313]. Микрочастицы могут связывать растворимые молекулы,
присутствующие в межклеточном пространстве (например, компоненты комплемента и
иммунные комплексы), за счет представленных на их мембране соответствующих рецепторов
[92, 358]. Микрочастицы образуются как при апоптозе клеток, так и при их активации, а также
при таких межклеточных взаимодействиях, как деление, адгезия [104, 214, 284]. Механизм
образования микрочастиц до конца не установлен, вероятно, в результате активации или
апоптоза индуцируется активность ферментов скрамблазы, флиппазы, транслоказы/флиппазы,
что приводит к появлению фосфатидилсерина в составе внешнего липидного слоя
плазматической мембраны и потере мембраной асимметрии состава ее белков. В результате
повышения внутриклеточной концентрации Ca2+ происходит реорганизация цитоскелета и
отщепление микрочастиц [104]. Так как микрочастицы могут образовываться в норме в
отсутствие каких-либо патологий [57, 60], в настоящее время активно обсуждается участие
микрочастиц клеток в переносе и презентации антигенных детерминант и расширяется спектр
их возможных влияний [154].
В периферической крови у здоровых людей установлено наличие микрочастиц
(фрагментов клеток размером 0,05-1,0 мкм) эндотелиального происхождения, концентрация
которых в кровотоке составляет в среднем 65000 частиц в 1 мл плазмы [57]. При этом
количество микрочастиц эндотелиальных клеток составляет около 10-15% от всего количества
микрочастиц, находящихся в циркуляции [68]. В литературе представлены противоречивые
сведения о влиянии микрочастиц эндотелиального происхождения на эндотелиальные клетки.
Установлено, что инкубация эндотелиальных клеток в присутствии микрочастиц
эндотелиального происхождения приводила к нарушению вазорелаксации, уменьшению
продукции ими NO, а также повышению продукции эндотелиальными клетками супероксид аниона [68]. Инкубация в присутствии эндотелиальных микрочастиц способствовала
увеличению количества эндотелиальных клеток, погибших путем апоптоза, уменьшению
пролиферации эндотелиальных клеток пупочного канатика HUVEC и снижению способности
образовывать сосудо-подобные структуры in vitro [221]. В то же время микрочастицы,
полученные от эндотелиальных клеток HUVEC и содержащие матриксные металлопротеиназы
(MMP), в низких концентрациях способствовали образованию эндотелиальными клетками
43
капилляро-подобных структур. В высоких концентрациях микрочастицы HUVEC ингибировали
ангиогенез
[312].
По
некоторым
данным,
содержащиеся
в
составе
микрочастиц
эндотелиального происхождения металлопротеиназы способны ремоделировать внеклеточный
матрикс [202].
При физиологической беременности плацента образует микрочастицы синцитиального
происхождения [139]. По мере развития беременности в периферической крови количество
микрочастиц синцитиотрофобласта увеличивается [130]. В экспериментах in vitro установлено,
что
микрочастицы
синцитиотрофобласта
не
индуцируют
активацию
Т-лимфоцитов
периферической крови. В то же время микрочастицы, полученные из плаценты разными
методами оказывают различное влияние на синтез Т-лимфоцитами цитокинов. Так,
микрочастицы, полученные после предварительного иссечения ворсинчатого трофобласта, а
также микрочастицы, полученные после культивирования эксплантов плаценты, ингибировали
синтез и секрецию активированными Т-лимфоцитами IL-2 и IFNγ и ингибировали
пролиферацию активированных Т-лимфоцитов. В то же время микрочастицы, полученные
путем предварительного промывания межворсинчатого пространства плаценты, не влияли на
продукцию
IL-2
и
индуцировали
синтез
IFNγ
активированными
Т-лимфоцитами
периферической крови и увеличивали их пролиферацию [139].
Физиологическая беременность сопровождается индукцией апоптоза активированных Тлимфоцитов и цитотоксических NK-клеток в децидуальной оболочке. Происходящая при
преэклампсии активация лейкоцитов периферической крови [219], активация плацентарных и
децидуальных макрофагов и секреция ими провоспалительных цитокинов [303], может
способствовать образованию микрочастиц в зоне маточно-плацентарного контакта.
Микрочастицы присутствуют в периферической крови как при физиологической
беременности, так и при преэклампсии. Общее количество циркулирующих микрочастиц при
преэклампсии остается таким же, как и при физиологической беременности [57, 330]. Вероятно,
функциональные характеристики микрочастиц при преэклампсии, отличаются от характеристик
микрочастиц, присутствующих в периферической крови при физиологической беременности.
Например, при физиологической беременности микрочастицы обладают потенциалом к
индукции
активации
каскада
комплемента.
Установлено,
что
при
преэклампсии
в
периферической крови повышено количество микрочастиц, образующих комплексы с Среактивным белком [60].
Развитие преэклампсии сопровождается появлением в плазме крови повышенного (по
сравнению
с
состоянием
физиологической
беременности)
содержания
микрочастиц
синцитиального происхождения. Инкубация клеток линии HUVEC в присутствии этих
микрочастиц приводила к подавлению пролиферации эндотелиальных клеток и повышению
44
уровня их апоптоза [87]. Однако, количество микрочастиц эндотелиального происхождения не
различается у женщин с физиологической беременностью и женщин с преэклампсией [201].
Связываясь с рецепторами на моноцитах, микрочастицы синцитиального происхождения
способны индуцировать
фагоцитарную
активность этих клеток
[130]. Преэклампсия
сопровождается повышенным по сравнению с физиологической беременностью содержанием
микрочастиц Т-лимфоцитов, гранулоцитов [330] и моноцитов [201], что связывают с
реализующейся активацией клеток иммунной системы при этой патологии.
В целом в литературе представлены разрозненные данные о присутствии микрочастиц
различного клеточного происхождения в периферической крови беременных женщин,
отсутствует целостное описание их фенотипических и функциональных характеристик как при
физиологической беременности, так и при преэклампсии.
Суммируя описанные в литературе данные необходимо отметить, что клетки иммунной
системы, мигрирующие в децидуальную оболочку и плаценту на всем протяжении
беременности, участвуют в процессе формирования структуры плаценты и ее поддержании за
счет секреции хемокинов, цитокинов, ростовых факторов. Процесс миграции лейкоцитов из
периферической крови в децидуальную оболочку определяется спектром хемокинов и
цитокинов, секретируемых в зоне маточно-плацентарного контакта. Активность лейкоцитов,
мигрировавших в децидуальную оболочку, модулируется секретируемыми децидуальной
оболочкой и плацентой факторами. Результатом взаимодействия клеток иммунной системы,
клеток
децидуальной
оболочки
и
клеток
трофобласта
является
формирование
иммунологической толерантности в отношении тканей полу-аллогенного плода. Нарушения
механизмов индукции иммунологической толерантности при беременности способствуют
активации лейкоцитов матери и развитию такой акушерской патологии, как преэклампсия.
Секреция провоспалительных цитокинов и активных радикалов кислорода клетками иммунной
системы, присутствующими в децидуальной оболочке, а также образование клетками
иммунной системы микрочастиц способствуют развитию эндотелиальной дисфункции,
определяющей основные клинические проявления преэклампсии и являющейся неотъемлемой
составляющей патологического процесса. Дисфункция эндотелия сопровождается изменением
фенотипических и функциональных характеристик эндотелиальных клеток, что отражается в
изменении их адгезивных свойств и может определять изменения миграции клеток иммунной
системы из периферической крови в децидуальную оболочку. Следует отметить, что при
изучении участия различных клеток иммунной системы в патогенезе преэклампсии
недостаточно внимания уделяется сопоставлению данных о фенотипических характеристиках
мононуклеаров периферической крови беременных женщин. Изменение фенотипических
45
характеристик мононуклеаров может сказываться на функциональных характеристиках клеток,
что определяет необходимость общего совокупного анализа функциональных характеристик
мононуклеаров периферической крови. Модуляция функций клеток иммунной системы,
присутствующих в зоне маточно-плацентарного контакта, при физиологической беременности
и их нарушение при преэклампсии может определяться изменением состава микрочастиц
различного происхождения. Однако вклад микрочастиц плазмы крови в регуляцию функций
клеток иммунной системы и патогенез преэклампсии в настоящее время недостаточно изучен,
что определяет необходимость оценки эффектов, оказываемых микрочастицами на лейкоциты.
46
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.
Общая характеристика обследованных женщин
Для решения поставленных задач проведено обследование 422 женщин репродуктивного
возраста во время и вне беременности на базе ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта». План
научно-диссертационного исследования был одобрен Этическим Комитетом ФГБУ «НИИ АГ
им.Д.О.Отта» СЗО РАМН. Получено информированное согласие пациенток на обследование.
Прошедших обследование женщин разделили на следующие группы: здоровые
небеременные женщины, в анамнезе у которых были одни и более родов (I группа),
соматически здоровые женщины с физиологически протекающей беременностью (II группа) и
беременные женщины с преэклампсией (III группа) (таблица 4). I группу составили здоровые
небеременные женщины, являвшиеся донорами в отделении переливания крови ФГБНУ «НИИ
АГиР им. Д.О. Отта». Критериями включения для I группы являлись репродуктивный возраст,
отсутствие беременности на момент исследования, согласие на проведение исследования.
Критериями исключения для I группы являлись острая или обострение хронической
инфекционной патологии, сахарный диабет I и II типов, аллергические реакции, аутоиммунные
заболевания, заболевания сердечно-сосудистой системы, отказ от проведения обследования.
Возраст женщин II и III групп находился в интервале от 17 до 48 лет и в среднем составил
30,8±5,9 лет. Критериями включения для II группы являлись срок беременности 38-39 недель,
одноплодная беременность, отсутствие осложнений беременности, согласие на участие в
исследовании. Критериями включения для III группы являлись срок беременности 38-39
недель, наличие клинических проявлений преэклампсии, одноплодная беременность, согласие
на участие в исследовании. Критериями исключения для II и III групп являлись сахарный
диабет I и II типов, сахарный диабет беременных на инсулинотерапии, многоводие, маловодие,
урогенитальная инфекция, острая или обострение хронической инфекционной патологии,
аутоиммунные заболевания, аллергические реакции, гипертоническая болезнь и другие
заболевания системы кровообращения, отказ от проведения исследования. Женщины II и III
групп наблюдались врачами в акушерских отделениях ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта».
Диагноз преэклампсии у женщин третьей группы установлен в отделении физиологии и
патологии беременности ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта» в соответствии с Международной
классификацией болезней X пересмотра на основании клинических симптомов различной
степени выраженности (таблица 3).
Объектом исследования явилась периферическая кровь, полученная венопункцией
локтевой вены иглой 16G и собранная в вакуумную пробирку с антикоагулянтом (Greiner BioOne (Австрия)). В исследовании фенотипических характеристик мононуклеаров, активности
47
NK-клеток,
адгезии
и
трансэндотелиальной
миграции
мононуклеаров
в
качестве
антикоагулянта использовался Na2ЭДТА. В исследовании содержания микрочастиц в
периферической крови и их влияния на клетки линии THP-1 в качестве антикоагулянта
использовался гепарин. Количество обследованных женщин, вошедших в исследование на
разных его этапах, отражено в таблице 4.
Таблица 3. Диагностические критерии преэклампсии средней тяжести и тяжелой
преэклампсии [26].
Диагноз
Преэклампсия
средней тяжести
Преэклампсия
тяжелая
Клинические проявления

Артериальная гипертензия: САД ≥ 140 мм рт. ст. или ДАД ≥ 90 мм
рт.ст., возникшие при сроке беременности более 20 недель у женщины с
нормальным артериальным давлением;

Протеинурия ≥ 0,3 г/л белка в суточной пробе мочи
Наличие симптомов умеренной преэклампсии и более одного из
следующих критериев:

Артериальная гипертензия: САД ≥160 мм рт.ст. или ДАД ≥ 110 мм
рт.ст. при двухкратном измерении с интервалом в 6 часов в состоянии
покоя;

Протеинурия ≥ 5,0 г/л в суточной пробе мочи или > 3 г/л в двух
порциях мочи, взятой с интервалом в 6 часов

Олигурия < 500 мл за 24 часа

Церебральные или зрительные симптомы

Отек легких

Цианоз

Боли в эпигастрии или правом верхнем квадранте

Нарушение функции печени

Тромбоцитопения (< 100* 109 /л)

Задержка внутриутробного роста плода (на 4 неделе и более)
Таблица 4. Количество обследованных женщин
Метод исследования
Оценка адгезии мононуклеаров периферической крови к
эндотелию
Оценка трансэндотелиальной миграции мононуклеаров
периферической крови
Оценка фенотипических характеристик мононуклеаров
периферической крови
Анализ активности NK-клеток периферической крови
Оценка содержания микрочастиц в периферической крови
Анализ влияния микрочастиц на клетки линии THP-1
Количество
женщин
(n),
включенных в группу
I группа
II группа III группа
n=14
n=22
n=39
n=27
n=27
n=31
n=27
n=22
n=24
n=20
n=21
n=20
n=20
n=20
n=20
n=24
n=24
n=20
48
2.2.
Культуры клеток
Эндотелиальные клетки линии Ea.Hy926 были любезно предоставлены Dr. C.-J. Edgell
(Университет Северной Калифорнии, США). Культура получена путем гибридизации
эндотелиальных клеток вены пупочного канатика человека HUVEC с клетками карциномы
легкого A-549 в 1983 году. Клетки линии Ea.Hy926 воспроизводят основные морфологические,
фенотипические и функциональные характеристики, присущие эндотелию [113, 268, 314].
Для культивирования клеток линии Ea.Hy926 использовали среду DMEM/F12 с
добавлением 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) («ICN», США),
50 мкг/мл сульфата гентамицина, 2 мМ L-глютамина, HAT («ICN», США). Клетки линии
Ea.Hy926 являются монослойной культурой, требующей пересева 1 раз в 3-4 дня.
Дезинтеграцию монослоя для пересева вызывали 5-минутной экспозицией в растворе Версена
(«Биолот», Россия). Для оценки жизнеспособности клеток использовали раствор трипанового
синего и она составляла 96%.
Клетки линии ТНР-1 получены из Американской коллекции типовых культур (ATСC,
США). Культура клеток линии THP-1 представляет собой промоноцитарные клетки,
полученные от человека с острой моноцитарной лейкемией. Клетки линии THP-1
воспроизводят основные фенотипические и функциональные характеристики моноцитов [53].
Культура клеток линии THP-1 является суспензионной культурой и поддерживается в
суспензионной форме в диапазоне концентраций 0,7-1х106 кл/мл в полной среде RPMI-1640 c
10% ЭТС, содержащей 2 мМ L-глютамин, 100 ЕД/мл пенициллин, 100 мкг/мл стрептомицин
(Sigma, США). Клетки линии THP-1 требуют пересев 1 раз в 2-3 дня. Оценку жизнеспособности
клеток проводили с помощью раствора трипанового синего и они составляла 96%.
2.3
2.3.1
Методы исследования
Исследование адгезии к эндотелиальным клеткам и трансэндотелиальной
миграции мононуклеаров периферической крови
Накануне опыта по оценке адгезии производили пересев клеток линии Ea.Hy926, часть
полученной клеточной суспензии ресуспендировали в культуральной среде DMEM/F12 с
добавлением 10% ЭТС и помещали в лунки плоскодонного 24-луночного планшета («Sarstedt»,
Австрия). Концентрация клеток на лунку составляла 1,5105 клеток, объем культуральной
среды в лунке составлял 500 мкл. Затем культивировали клетки во влажной атмосфере с 5%
СО2 при 37С для получения однородного монослоя в течение 22 часов. На следующий день в
49
часть лунок с эндотелиальными клетками вносили рекомбинантный препарат TNFα (препарат
«Рефнолин», Латвия, специфическая активность препарата 1 Ед=0,06 нг) в концентрации 100
ЕД/мл. Затем продолжали инкубацию в течение 22 часов, после инкубации все лунки отмывали
трижды теплым раствором Хенкса.
Для изучения адгезии к эндотелию мононуклеары периферической крови женщин
исследуемых
групп
выделяли
при
помощи
стандартного
метода
с
использованием
центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографин (Sigma, США) [64]. В лунки,
содержащие однородный монослой интактных или активированных TNFα эндотелиальных
клеток линии Ea.Hy926, вносили мононуклеары периферической крови в концентрации 1×106
клеток на лунку в 500 мкл теплой культуральной среды. Затем культивировали клетки во
влажной атмосфере с 5% СО2 при 37ºС в течение 30 минут. После инкубации трижды отмывали
монослой
эндотелиальных
клеток
от
неадгезировавших
клеток
нагретым
до
37ºС
физиологическим раствором. Адгезировавшие клетки вместе с эндотелиальными клетками
переводили в суспензию с помощью 5-минутной экспозиции в растворе Версена («Биолот»,
Россия). Количественную и качественную оценку адгезировавших к эндотелию популяций
мононуклеаров периферической крови проводили методом проточной цитофлюорометрии.
Суспензию клеток, полученную после совместного культивирования эндотелиальных
клеток и мононуклеаров периферической крови, обрабатывали моноклональными антителами к
CD3, CD16, CD56, CD4, CD8, CD14 (BD, США), и проводили анализ при помощи проточного
цитофлюориметра FACScan (BD, США). В качестве контроля неспецифического связывания
антител использовали окрашивание клеток неспецифическими изотипическим антителами.
Настройку проточного цитофлюориметра проводили таким образом, чтобы выделить области,
занимаемые лимфоцитами (CD3+) и моноцитами (CD14+) в зависимости от показателей
прямого и бокового светорассеяния. Проводили гейтирование исследуемых клеток в
координатах прямого и бокового светорассеяния FSC и SSC. При этом эндотелиальные клетки
находились вне пределов выделенных областей. Затем анализировали пробы на наличие
флюоресценции клеток, попавших в регионы лимфоцитов и моноцитов (Рисунок 6).
50
Рисунок 6. а) Двумерная гистограмма в координатах по оси абсцисс FSC по оси ординат
SSC мононуклеаров периферической крови. Регион R1 содержит лимфоциты. Регион R2
содержит моноциты; б) Двумерная гистограмма лимфоцитов в координатах по оси абсцисс CD3
по оси ординат CD16 и CD56; в) Двумерная гистограмма лимфоцитов в координатах по оси
абсцисс CD3 по оси ординат CD4; г) Двумерная гистограмма лимфоцитов в координатах по оси
абсцисс CD3 по оси ординат CD8; д) Двумерная гистограмма моноцитов в координатах по оси
абсцисс CD14 по оси ординат CD16.
При постановке экспериментов по изучению трансэндотелиальной миграции накануне
опыта производили пересев линии клеток Ea.Hy926. Часть полученной клеточной суспензии
тщательно ресуспендировали в культуральной среде и вносили во вставки для 24-луночных
планшетов с поликарбонатным фильтром (размер пор 8 мкм, BD Falkon, США) в количестве
45000 клеток на вставку в среде DMEM/F12 с добавлением 10% ЭТС. Клетки линии Ea.Hy926,
помещенные во вставки, установленные в 24 луночный планшет, инкубировали до образования
конфлюэнтного монослоя при 37˚С во влажной атмосфере с 5% содержанием СО2.
Однородность
монослоя
эндотелиальных
клеток
контролировали
при
помощи
инвертированного микроскопа Axio Observer Z-1 (Zeiss, Германия).
Мононуклеары периферической крови выделяли стерильно при помощи стандартного
метода с использованием центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографин
(Sigma, США) [64].
В верхнюю камеру (вставка с эндотелиальными клетками на фильтре, Рисунок 7) вносили
мононуклеары в количестве 1·106 клеток в 200 мкл среды DMEM/F12 с добавлением 10% ЭТС.
51
Рисунок
7.
Модель,
используемая
для
оценки
трансэндотелиальной
миграции
мононуклеаров периферической крови.
В работе оценивали как спонтанную трансэндотелиальную миграцию мононуклеаров
периферической крови, так и в присутствии TNFα. Для этого в нижнюю камеру (лунка 24луночного планшета) вносили 700 мкл среды DMEM/F12 с добавлением 10% ЭТС (Рисунок 7).
В часть нижних камер также вносили TNF в концентрации 50 Ед/мл. Затем клетки
инкубировали в течение 24 часов при 37˚С во влажной атмосфере с 5% содержанием СО 2.
После инкубации все содержимое нижней камеры собирали в пробирки, клетки осаждали путем
центрифугирования (200g) и окрашивали антителами к рецепторам CD45, CD3, CD4, CD8,
CD16, CD56, CD14 (BD, США) в соответствии с указаниями производителя. Оценивали как
относительное, так и абсолютное количество лимфоцитов и моноцитов периферической крови.
Содержание лимфоцитов и моноцитов оценивали по характеру экспрессии рецепторов CD45,
CD3, CD4, CD8, CD16, CD56, CD14. Абсолютное количество мигрировавших клеток оценивали
в пробирках для подсчета абсолютного количества клеток Trucount («BD», США), содержащих
известное количество стандартных частиц. В качестве контроля неспецифического связывания
антител использовали окрашивание клеток неспецифическими изотипическим антителами.
2.3.2
Оценка экспрессии лейкоцитами периферической крови адгезионных
молекул, хемокиновых рецепторов и рецепторов к ростовым факторам
Обработку клеток
цельной
периферической
крови
антителами
осуществляли
в
соответствии с указаниями производителя (BD, США). Использовали антитела к CD3, CD4,
CD8, CD14, CD16, CD56, антитела к адгезионным молекулам - CD11a, CD11b, CD11c, СD18,
CD29, CD49d, CD31, CD44, CD47, CD51/CD61, CD36, CD54, CD58, CD62L, CD62E, CD62P,
CD138, CD106, интегрину β7; к хемокиновым рецепторам - CD192 (CCR2), CD134 (OX 40), CD
196 (CCR6), CXCR5, CD197(CCR7), CD119 (рецептор к IFNγ), CD184 (CXCR4); к ростовым
факторам - CD114 (G-CSFR), CD116 (GM-CSFRα), CD140b (рецептор PDGFβ), CD140a
52
(рецептор PDGFα) (BD, США). В качестве контроля неспецифического связывания
использовали изотипические антитела в соответствии с указаниями производителя. Анализ
флуоресценции проводили при помощи проточного цитофлюориметра FACS Canto II (BD,
США). На графиках с координатами по оси абсцисс FSC по оси ординат SSC проводили
гейтирование лимфоцитов и моноцитов. Попавшие в область гейтирования моноциты
анализировали на предмет экспрессии CD14 и дифференцировали по фенотипу CD14+.
События, попавшие в регион R1 (Рисунок 8), анализировали на экспрессию CD3, CD4, CD8,
CD16, CD56.
Рисунок 8. А) Двумерная гистограмма периферической крови с координатами по оси
абсцисс FSC по оси ординат SSC. Регион R1 содержит лимфоциты и моноциты, регион R2 –
моноциты, регион R3 - нейтрофилы; Б) Двумерная гистограмма периферической крови с
координатами по оси абсцисс CD3 по оси ординат CD16 и CD56, на которую спроецированы
события из региона R1. Квадрант Q1 содержит NK-клетки; В) Двумерная гистограмма
периферической крови с координатами по оси абсцисс CD3 по оси ординат CD4, на которую
спроецированы события из региона R1. Квадрант Q3 содержит CD4+Т-лимфоциты; Г)
Двумерная гистограмма периферической крови с координатами по оси абсцисс CD3 по оси
ординат CD8, на которую спроецированы события из региона R1. Квадрант Q4 содержит
CD8+Т-лимфоциты; Д) Двумерная гистограмма периферической крови с координатами по оси
абсцисс FSC по оси ординат CD14, на которую спроецированы события из региона R2.
Квадрант Q5 содержит моноциты.
53
Лимфоциты, одновременно экспрессирующие CD3 и CD4 рассматривали как Т-хелперные
лимфоциты, а одновременно экспрессирующие CD3 и CD8 - как цитотоксические Тлимфоциты.
NK-клетки
определяли
по
фенотипу
CD3–CD16+CD56+
(Рисунок
8).
Анализировали как относительное содержание лимфоцитов и моноцитов, экспрессирующих
исследуемые поверхностные молекулы, так и интенсивность их флюоресценции.
2.3.3
Оценка функциональной активности NK-клеток периферической крови
2.3.3.1 Оценка содержания NK-клеток в периферической крови
Для оценки содержания NK-клеток в периферической крови женщин обследованных
групп использовали стандартный набор для определения относительного и абсолютного
состава лимфоцитов периферической крови (BD Multitest with Trucount tubes, США). Набор
содержит антитела к основным популяциям лимфоцитов (CD45, CD3, CD16, CD56, CD4, CD8,
CD19) и пробирки с известным количеством частиц, используемых для автоматического
пересчета абсолютного содержания популяций лимфоцитов в пробе. Анализ проводили на
проточном цитофлюориметре FACS Canto II (BD, США).
2.3.3.2 Оценка активности NK-клеток
Для анализа активности NK-клеток мононуклеары периферической крови выделяли на
градиенте плотности фиколл-верографин (Sigma, США) стандартным методом [64]. Затем
мононуклеары инкубировали в пробирках 4 часа в культуральной среде RPMI-1640 (Sigma,
США), 10% ЭТС (Sigma, США), 1% стрептомицина и пенициллина (Sigma, США), 1% Lглютамина (Sigma, США) во влажной атмосфере при 37°С и 5 % CO2 в концентрации 1 млн
клеток/мл. Для оценки дегрануляции клеток использовали метод, предложенный Alter G. и
соавторами [45]. Часть клеток от каждой пациентки инкубировали в присутствии антител к
CD107a (в соответствии с указанием производителя BD, США) и 8 мкг\мл монензина (BD,
США). Вторую часть клеток от тех же пациенток инкубировали в присутствии антител к
CD107a, 8 мкг\мл монензина, и стандартного реагента для активации лейкоцитов (далее активатора), содержащего 2,5 мкг\мл РМА и 0,5 мкг\мл иономицина (BD, США). После
инкубации мононуклеары центрифугировали при 200g в течение 10 мин и ресуспендировали в
растворе Хенкса. Затем клетки обрабатывали специфическими антителами к CD3, CD16, CD56,
CD54 в соответствии с указаниями производителя (BD, США), а также часть клеток
обрабатывали изотипическими антителами в соответствии с указаниями производителя (BD,
США). Анализ флуоресценции проводили при помощи проточного цитофлюориметра FACS
54
Canto II (BD, США). Для этого проводили гейтирование лимфоцитов в координатах FSC и SSC.
События, попавшие в регион лимфоцитов, анализировали, выделяя NK-клетки по фенотипу
CD3−CD16+CD56+.
Затем
оценивали
количество
NK-клеток
периферической
крови,
экспрессирующих CD107a и CD54, среди всех NK-клеток (Рисунок 9).
Рисунок 9. Экспрессия NK-клетками CD107a
а) Распределение мононуклеаров в координатах по оси абсцисс FSC по оси ординат SSC.
Гейт P1 содержит лимфоциты и моноциты; б) Распределение событий из гейта P1 в
координатах по оси абсцисс CD3 по оси ординат CD56. Гейт P2 содержит клетки с фенотипом
CD3– CD56+; в) Распределение событий из гейта Р2 в координатах по оси абсцисс CD3 по оси
ординат CD16. Гейт P3 содержит клетки с фенотипом CD3– CD56+ CD16+; г) Изотипический
контроль; д) Распределение клеток с фенотипом CD3– CD56+ CD16+ из гейта P3 после
инкубации без активатора в координатах по оси абсцисс CD107a по оси ординат CD54; е)
Распределение клеток с фенотипом CD3– CD56+ CD16+ после инкубации в присутствии
активатора в координатах по оси абсцисс CD107a по оси ординат CD54.
2.3.3.3 Оценка экспрессии TRAIL NK-клетками периферической крови
При анализе экспрессии TRAIL NK-клетками периферической крови применяли антитела
к CD3, CD16, CD56 (BD, США) и антитела к TRAIL (BD, США). Обработку клеток цельной
периферической крови антителами осуществляли в соответствии с указаниями производителя.
Анализ флуоресценции проводили при помощи проточного цитофлюориметра FACS Canto II
(BD, США). Проводя гейтирование на графиках с координатами по оси абсцисс FSC по оси
55
ординат SSC, выделяли регион Р1, содержащий лимфоциты. Последовательно проецировали
события из региона Р1 на график с координатами по оси абсциcс CD3 по оси ординат CD16 и в
координатах по оси абсции CD3 по оси ординат CD56, дифференцировали NK-клетки по
фенотипу CD3−CD16+CD56+. Границы устанавливали на основании предшествующего
измерения флюоресценции клеток, обработанных изотипическими антителами. Анализировали
как относительное содержание TRAIL+ NK-клеток, так и интенсивность их флюоресценции
(Рисунок 10).
Рисунок 10. Экспрессия NK-клетками TRAIL
а) Распределение лейкоцитов в координатах по оси абсцисс CD45 по оси ординат SSC.
Гейт Р1 содержит лимфоциты и моноциты; б) Распределение событий из гейта Р1 в
координатах по оси абсцисс CD3 по оси ординат CD56. Гейт Р2 содержит клетки с фенотипом
CD3– CD56+; в) Распределение событий из гейта P2 в координатах по оси абсцисс CD3 по оси
ординат CD16. Гейт Р3 содержит клетки с фенотипом CD3– CD56+CD16+; г) Изотипический
контроль; д) Распределение клеток с фенотипом CD3– CD56+CD16+ из гейта P3 в координатах
по оси абсцисс TRAIL по оси ординат CD16; е) Интенсивность экспрессии TRAIL клетками с
фенотипом CD3– CD56+CD16+ TRAIL+.
56
2.3.4
Оценка количества, морфометрических и фенотипических характеристик
микрочастиц в периферической крови
2.3.4.1. Атомно-силовая микроскопия микрочастиц периферической крови
Морфометрический анализ препаратов микрочастиц плазмы крови проводили при
помощи атомной-силовой микроскопии. Для выделения микрочастиц использовали метод,
описанный авторами Gelderman M.P. и Simak J. [129]. Все растворы и среды для выделения
микрочастиц были предварительно профильтрованы через ультрафильтр с диаметром пор 0,1
мкм (Sigma, США). Периферическую кровь центрифугировали 15 минут (2600g, +10ºС) для
осаждения
тромбоцитов.
Затем
полученную
плазму,
обедненную
тромбоцитами,
центрифугировали 10 минут при 9900g, +10ºС для удаления остаточных тромбоцитов. Затем
проводили центрифугирование надосадка в течение 20 минут при 19800g, +10ºС с целью
осаждения микрочастиц. Затем микрочастицы отмывали холодным раствором Хенкса без CaCl2
(Sigma, США) центрифугированием в течение 20 минут при 19800g, +10ºС. Полученные
микрочастицы повторно ресуспендировали в растворе Хенкса без CaCl2 (Sigma, США).
Суспензию выделенных микрочастиц в растворе Хенкса без СаCl2 наносили на обезжиренные
покровные стекла, покрытые полилизином (Sigma, США) с добавлением равного объема 10%
формалина (pH=7,1) и высушивали при 37оС. Контрольным препаратом служил препарат
раствора Хенкса без CaCl2. После фиксации препараты промывали в дистиллированной воде и
высушивали
при
комнатной
температуре.
Атомно-силовая
микроскопия
препаратов
микрочастиц, выделенных из плазмы периферической крови, была выполнена сотрудниками
биологического факультета Санкт-Петербургского Государственного Университета Бенкеным
К.А. и Онохиным К.В., за что автор выражает им благодарность. Сканирование поверхности
препаратов проводили с помощью сканирующего зондового микроскопа Интегра Аура (NTMDT, Россия) в полуконтактном режиме на воздухе с использованием неконтактных
кремниевых зондов высокого разрешения NSG01-А (NT-MDT, Россия) с жесткостью 5.1 Н/м,
средней резонансной частотой 150 кГц. Обработку полученных изображений производили при
помощи программного обеспечения Nova (NT-MDT, Россия). В контрольном препарате
раствора Хенкса без СаCl2 распределение высот находилось в пределах от 15 до 50 нм (Рисунок
11).
57
б
a
Рисунок 11. Атомно-силовая микроскопия контрольного препарата без микрочастиц
выделенных из плазмы крови. Рельеф поверхности (а) и гистограмма распределения высот (б)
обзорного поля зрения 60х60 мкм контрольного препарата – раствора Хенкса без СаCl2.
2.3.4.2 Анализ количества и фенотипических характеристик микрочастиц в
периферической крови
Для выделения микрочастиц использовали метод, описанный авторами Gelderman M.P. и
Simak J. [129]. Все растворы и среды для выделения микрочастиц были предварительно
профильтрованы через ультрафильтр с диаметром пор 0,1 мкм (Sigma, США). Периферическую
кровь центрифугировали 15 минут (2600g, +10ºС) для осаждения тромбоцитов. Затем
полученную плазму, обедненную тромбоцитами, центрифугировали 10 минут при 9900g, +10ºС
для удаления остаточных тромбоцитов. Затем проводили центрифугирование надосадка в
течение 20 минут при 19800g, +10ºС с целью осаждения микрочастиц. Затем микрочастицы
отмывали холодным раствором Хенкса без CaCl2 (Sigma, США) центрифугированием в течение
20 минут при 19800g, +10ºС. Полученные микрочастицы ресуспендировали в растворе Хенкса
(«Биолот», Россия), содержащего 0,35% бычьего сывороточного альбумина (BSA, Sigma,
США), и обрабатывали антителами к CD45, CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD56, CD62L,
CD62P, CD54, CD41a (BD, США) в соответствии с указаниями производителя. В работе была
проанализирована экспрессия указанных маркеров как по отдельности, так и в различных
комбинациях. Оценку экспрессии указанных рецепторов проводили при помощи проточного
цитофлюориметра BD FACS Canto II (BD, США). Для максимальной стабилизации потока все
измерения проводили на низкой скорости подачи образца (Low). Гейт микрочастиц по
показателям светорассеяния выделяли с помощью полистироловых бус калиброванных по
размерам: 1,0 мкм, 0,5 мкм, 0,2 мкм (Sigma, США) (Рисунок 12 а,б,в). Для анализа собирали не
менее 10000 событий из FSC-A×SSC-A гейта микрочастиц (Рисунок 12 г). Для гейтирования
58
микрочастиц по показателям флюоресценции использовали изотипические контроли (BD и
R&D, США). При анализе образцов микрочастиц периферической крови события из FSCA×SSC-A гейта микрочастиц проецировали на график FSC-A×CD41a, где выделяли
микрочастицы с фенотипом CD41a-. Окрашивание антителами к CD41a применяли для
отделения тромбоцитов и микрочастиц, образованных тромбоцитами, оценка которых не
входила в задачи данного исследования. Затем оценивали экспрессию на микрочастицах
рецепторов CD45, CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD56, CD62L, CD62P, CD54 по отдельности и
совместно. Анализировали относительное содержание микрочастиц и интенсивность их
флюоресценции. Определение абсолютного количества микрочастиц клеток в периферической
крови проводили в пробирках TruCount tubes (BD, США).
59
a
в
б
59
г
Рисунок 12. Стратегия гейтирования микрочастиц. График распределения калибровочных частиц размером 0,2 мкм (а), 0,5 мкм (б),
1мкм (в) в координатах FSC×SSC. График распределения микрочастиц в координатах FSC×SSC (г).
60
2.3.5
Оценка влияния микрочастиц плазмы крови на функциональные свойства
клеток линии THP-1
Для получения микрочастиц из периферической крови использовали метод, описанный
авторами Gelderman M.P. и Simak J. [129]. Все растворы и среды для выделения микрочастиц
были предварительно профильтрованы через ультрафильтр с диаметром пор 0,1 мкм (Sigma,
США). Периферическую кровь центрифугировали 15 минут (2600g, +10ºС) для осаждения
тромбоцитов. Затем полученную плазму, обедненную тромбоцитами, центрифугировали 10
минут при 9900g, +10ºС для удаления остаточных тромбоцитов. Затем проводили
центрифугирование надосадка в течение 20 минут при 19800g, +10ºС с целью осаждения
микрочастиц. Затем микрочастицы отмывали холодным растворов Хенкса без CaCl2 (Sigma,
США) центрифугированием в течение 20 минут при 19800g, +10ºС.
Предварительно (за 22 часа до стимуляции микрочастицами) клетки линии ТНР-1
рассевали в 24-луночный планшет для суспензионных культур в концентрации 1х106 клеток/мл
и инкубировали при 37°С, 5% СО2 и 95% влажности. В часть лунок также вносили 50 ЕД/мл
TNFα («Рефнолин», Латвия, активность препарата: 1ЕД=0,06нг) для проведения экспериментов
с предварительно активированными клетками. На следующий день клетки отмывали теплым
раствором Хенкса. Выделенные из периферической крови женщин исследуемых групп
микрочастицы разводили полной средой для клеток линии THP-1 пропорционально исходному
объему образца плазмы крови и вносили в лунки с клетками линии THP-1. Затем
культивировали в течение 24 часов, после чего клетки линии THP-1 отмывали теплым
раствором Хенкса и обрабатывали реагентом FcBlock (BD, США). Затем клетки линии THP-1
обрабатывали моноклональными антителами к CD11a, CD11b, CD11c, СD18, CD29, CD49d,
CD31, CD47, CD54, интегрину β7, HLA-DR, CD119, CD181, CD182, CD120a (BD, США),
VEGFR1, VEGFR2 (RD, США) в соответствии с указаниями производителя. Характер
флуоресценции клеток линии THP-1 оценивали при помощи проточного цитофлюориметра
FACS Canto II (BD, США). Для гейтирования клеток по показателям флюоресценции
использовали изотипические контроли (BD и R&D, США) (Рисунок 13).
61
a
б
в
г
Рисунок 13. а) Распределение клеток линии ТНР-1 в координатах FSC×SSC; б)
Распределение интактных клеток линии ТНР-1, обработанных изотипическими антителами,
меченными APС, в координатах FSC×APC; в) Распределение интактных клеток линии ТНР-1,
обработанных анти-CD54 APC антителами, в координатах FSC×APC; г) Распределение TNFαактивированных клеток линии ТНР-1, обработанных анти-CD54 APC антителами, в
координатах FSC×APC.
2.4.
Статистический анализ
Данные, полученные в исследовании, представлены в виде медианы {верхний квартиль;
нижний квартиль}. Для сравнения полученных данных использовался U-критерий МаннаУитни, являющийся непараметрическим аналогом t-критерия Стьюдента [4, 5]. Для
автоматического вычисления значений U-критерия в работе пользовались компьютерной
программой STATISTICA 7.0. Статистически значимыми признавались различия при p<0,05;
p<0,01 и p<0,001.
62
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1
Исследование адгезии к эндотелиальным клеткам и трансэндотелиальной
миграции мононуклеаров периферической крови
3.1.1
Адгезия мононуклеаров периферической крови к эндотелию
В работе использовалось две модели: адгезия и трансмиграция через интактный эндотелий
и адгезия и трансмиграция через активированный TNFα эндотелий. Количество лимфоцитов,
адгезировавших к интактному эндотелию, у женщин с физиологической беременностью было
меньше, чем у здоровых небеременных женщин (Рисунок 14, приложение А). Количество
лимфоцитов, адгезировавших к активированному TNFα эндотелию, у беременных женщин с
преэклампсией было больше, чем у женщин с физиологической беременностью (Рисунок 14,
приложение А). Количество лимфоцитов, адгезировавших к активированному TNFα, эндотелию
было выше, чем адгезировавших к интактному у женщин с физиологической беременностью, а
также у женщин с преэклампсией (Рисунок 14, приложение А).
%
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
◙◙ #
◙
*
◙◙
**
#
◙
*
лимфоциты (адгезия к лимфоциты (адгезия к моноциты (адгезия к
моноциты (адгезия к
интактному эндотелию) активированному TNFα интактному эндотелию) активированному TNFα
эндотелию)
эндотелию)
Рисунок 14. Адгезия мононуклеаров к эндотелию. Достоверность различий: ◙ - p<0,05; ◙◙ p<0,01 (различия внутри каждой группы пациентов при разных условиях инкубации); *- p<0,05,
** - p<0,01 (группа женщин с физиологической беременностью отличается от группы здоровых
небеременных женщин); # - p<0,05 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы
женщин с физиологической беременностью).
Количество адгезировавших к интактному эндотелию моноцитов у женщин с
физиологической беременностью было больше, чем у здоровых небеременных женщин
(Рисунок 14, приложение А). Количество моноцитов адгезировавших к активированному TNFα
63
эндотелию у женщин с физиологической беременностью было больше, чем у здоровых
небеременных женщин. Количество моноцитов, адгезировавших к активированному TNFα
эндотелию, у беременных женщин с преэклампсией было больше, чем у женщин
с
физиологической беременностью (Рисунок 14, приложение А) Количество моноцитов,
адгезировавших к активированному TNFα эндотелию, по сравнению с количеством моноцитов,
адгезировавших с интактному эндотелию, было повышено в группе женщин с физиологической
беременностью и в группе беременных женщин с преэклампсией (Рисунок 14, приложение А).
В опыте с интактным эндотелием отношение общего количества лимфоцитов к общему
количеству моноцитов среди адгезировавших клеток у женщин с физиологической
беременностью было ниже, чем у небеременных женщин (Рисунок 14, приложение А). У
женщин с преэклампсией отношение общего количества лимфоцитов к общему количеству
моноцитов было почти в два раза ниже, чем у женщин с физиологической беременностью
(Рисунок 14, приложение А), что свидетельствует о большем адгезионном потенциале
моноцитов
беременных
с
преэклампсией
по
сравнению
с
моноцитами
женщин
с
физиологической беременностью.
В эксперименте с активированным TNFα эндотелием отношение общего количества
лимфоцитов к общему количеству моноцитов среди адгезировавших клеток у женщин с
физиологической беременностью было ниже, чем у небеременных женщин и женщин с
преэклампсией. В целом изменение этого показателя внутри каждой группы свидетельствует о
снижении способности к адгезии лимфоцитов к активированному эндотелию у женщин с
физиологической беременностью и небеременных женщин, но повышению способности к
адгезии лимфоцитов у беременных с преэклампсией.
Установлено, что количество лимфоцитов с фенотипом CD3+, адгезировавших к
интактному эндотелию, снижено у женщин с физиологической беременностью по сравнению с
количеством CD3+ лимфоцитов, адгезировавших к интактному эндотелию, у здоровых
небеременных женщин (Рисунок 14, приложение А). Количество CD3+ лимфоцитов,
адгезировавших к активированному эндотелию, по сравнению с количеством CD3+
лимфоцитов, адгезировавших к интактному эндотелию, было снижено в группе здоровых
небеременных женщин и было повышено в группе женщин с физиологической беременностью
и группе женщин с преэклампсией (Рисунок 14, приложение А). В группе женщин с
преэклампсией
количество
лимфоцитов
с фенотипом
CD3+CD4+, адгезировавших
к
активированному эндотелию, было повышено по сравнению с количеством CD3+CD4+
лимфоцитов, адгезировавших к интакному эндотелию (Рисунок 14, приложение А).
Количество CD14+ моноцитов и CD14+CD16- моноцитов, адгезировавших к интактному
эндотелию, было больше в группе женщин с физиологической беременностью по сравнению с
64
количеством CD14+ моноцитов небеременных женщин (Рисунок 14, приложение А).
Количество CD14+ моноцитов и CD14+CD16- моноцитов, адгезировавших к активированному
эндотелию, также было больше у женщин с физиологической беременностью по сравнению с
моноцитами небеременныхи женщин (Рисунок 14, приложение А).
Адгезия клеток с фенотипом CD16+CD56+ к интактному и активированному эндотелию
внутри групп и между группами не отличалась.
Таким образом, адгезия лимфоцитов к интактному эндотелию у женщин при
физиологической беременности по сравнению с небеременными женщинами снижена, а
моноцитов – повышена. Адгезия лимфоцитов и моноцитов к активированному эндотелию
повышена по сравнению с адгезией к интактному эндотелию внутри групп обследованных
беременных женщин. Преэклампсия характеризуется интенсификацией функции адгезии
лимфоцитов и моноцитов к активированному эндотелию по сравнению с физиологической
беременностью.
3.1.2
Трансэндотелиальная миграция мононуклеаров периферической крови
При оценке относительного количества клеток как спонтанная, так и индуцированная
TNFα, трансэндотелиальная миграция моноцитов у женщин с физиологической беременностью
была выше, чем у небеременных женщин, в то время как миграция лимфоцитов была снижена
(рисунок 15, приложение Б). Установлено, что у здоровых небеременных женщин
относительное количество лимфоцитов, мигрировавших через монослой эндотелиальных
клеток в нижнюю камеру в присутствии TNFα, было выше, чем количество спонтанно
мигрировавших лимфоцитов (рисунок 15, приложение Б).
Установлено, что у здоровых небеременных женщин относительное количество
моноцитов, спонтанно мигрировавших в нижнюю камеру, выше по сравнению с их
количеством, мигрировавшим в ответ на TNFα (рисунок 15, приложение Б). Выявлено, что у
женщин с беременностью, осложненной преэклампсией, по сравнению с женщинами с
физиологической беременностью снижено относительное количество лимфоцитов, спонтанно
мигрировавших в нижнюю камеру (рисунок 15, приложение Б).
У женщин с преэклампсией по сравнению с женщинами с физиологической
беременностью также снижено абсолютное количество лимфоцитов, спонтанно мигрировавших
в нижнюю камеру (рисунок 16, приложение В). При преэклампсии по сравнению с
физиологической беременностью в нижней камере после трансэндотелиальной миграции
65
снижено абсолютное количество таких популяций лимфоцитов, как CD3+ Т-лимфоциты,
CD3+CD4+Т-лимфоциты, CD3+CD8+Т-лимфоциты, NK-клетки (рисунок 16, приложение В).
При добавлении TNFα в нижнюю камеру трансэндотелиальная миграция лимфоцитов в
целом, а также миграция отдельных популяций лимфоцитов у пациенток с преэклампсией по
сравнению с женщинами с физиологической беременностью также были снижены (рисунок 17,
приложение В).
66
Рисунок 15. Относительное количество клеток, мигрировавших в нижнюю камеру. Группа
I – здоровые небеременные женщины, группа II – женщины с физиологической беременностью,
группа III – женщины с преэклампсией. Достоверность различий: ◙ - p<0,05 (количество
спонтанно мигрировавших клеток отличается от количества клеток, мигрировавших в
присутствии TNFα, внутри группы); * - p<0,05 (группа женщин с физиологической
беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #- p<0,05 (группа
женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической беременностью).
67
Рисунок 16. Абсолютное количество клеток, спонтанно мигрировавших в нижнюю
камеру. Группа I – здоровые небеременные женщины, группа II – женщины с физиологической
беременностью, группа III – женщины с преэклампсией. Достоверность различий: * - p<0,05
(группа женщин с физиологической беременностью отличается от группы здоровых
небеременных женщин); #- p<0,05; ##- p<0,01; ###- p<0,001 (группа женщин с преэклампсией
отличается от группы женщин с физиологической беременностью).
68
Рисунок 17. Абсолютное количество клеток, мигрировавших в нижнюю камеру в
присутствии TNFα. Группа I – здоровые небеременные женщины, группа II – женщины с
физиологической беременностью, группа III – женщины с преэклампсией. Достоверность
различий: #- p<0,05; ##- p<0,01 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин
с физиологической беременностью).
Таким образом, в случае активации эндотелия TNFα происходит интенсификация
функции трансэндотелиальной миграции лимфоцитов в группе здоровых небеременных
69
женщин. Сравнение способности к трансмиграции мононуклеаров группы женщин с
физиологической беременностью и группы небеременных женщин позволило установить, что
миграция лимфоцитов снижена, а миграция моноцитов повышена и не изменяется в
зависимости от наличия в модельной системе TNFα. Преэклампсия характеризуется сниженной
функцией трансмиграции in vitro через эндотелий основных популяций лейкоцитов.
3.2 Экспрессия адгезионных молекул, хемокиновых рецепторов и рецепторов к
ростовым факторам лейкоцитами периферической крови
3.2.1 Экспрессия поверхностных молекул Т-лимфоцитами периферической крови
Установлено, что в периферической крови женщин с физиологической беременностью по
сравнению с небеременными женщинами увеличено количество CD3+CD8+ цитотоксических
Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD184, CD192, CD197 (рисунок 18, приложение Г).
CD184
20
%
***
15
10
5
0
##
*
CD197
##
*
CD192
Здоровые небеременные женщины
Женщины с физиологической беременностью
Женщины с преэклампсией
Рисунок 18. Относительное количество CD3+CD8+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих
хемокиновые рецепторы. Достоверность различий: *- p<0,05, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); ## p<0,01 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической
беременностью).
70
Интенсивность экспрессии цитотоксическими Т-лимфоцитами CD184, CD119, CD197
также была повышена у женщин с физиологической беременностью по сравнению с
небеременными женщинами (рисунок 19, приложение Г).
CD197
*
CD184
MFI 700
600
***
500
400
300
200
100
0
###
#
**
CD119
###
Здоровые небеременные
женщины
Женщины с физиологической
беременностью
Женщины с преэклампсией
CD192
Рисунок 19. Интенсивность экспрессии CD3+CD8+ Т-лимфоцитами хемокиновых
рецепторов. Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); # p<0,05, ###- p<0,001 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с
физиологической беременностью). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
Количество цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD192 и CD197 при
преэклампсии, было ниже по сравнению с физиологической беременностью (рисунок 18,
приложение Г). Интенсивность экспрессии CD8+ Т-лимфоцитами CD119, CD192, CD197 при
преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью также была снижена (рисунок
19, приложение Г).
Количество CD8+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD54, интегрин β7, CD29, CD49d
(рисунок 20, приложение Г) и CD11b (приложение Г), было выше у женщин с физиологической
беременностью по сравнению с небеременными женщинами.
71
CD54
%
А)
90
75
CD49d
*
60
CD18
*
45
###
30 ###
15
#
0
*
#
CD29
###
## **
CD58
CD44
Интегрин
β7
Здоровые
небеременные
женщины
Женщины с
физиологической
беременностью
Женщины с
преэклампсией
Рисунок 20. Относительное количество CD3+CD8+Т-лимфоцитов, экспрессирующих
адгезионные молекулы. Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа
женщин с физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных
женщин); #- p<0,05, ## - p<0,01, ###- p<0,001 (группа женщин с преэклампсией отличается от
группы женщин с физиологической беременностью).
У женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными
женщинами наблюдали повышенную интенсивность экспрессии молекул интегрина β7, CD29
72
(рисунок 21, приложение Г) и CD11c (приложение Г) цитотоксическими CD3+CD8+ Тлимфоцитами.
А)
MFI 2500
2000
1500
1000
###
500
###
###
## ###
**
0
*
Здоровые небеременные женщины
Женщины с физиологической беременностью
Женщины с преэклампсией
Рисунок 21. Интенсивность экспрессии CD3+CD8+Т-лимфоцитами адгезионных молекул.
Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01 (группа женщин с физиологической
беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); # - p<0,05, ## - p<0,01,
###- p<0,001 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с
физиологической беременностью). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
73
У женщин с преэклампсией по сравнению с женщинами с физиологической
беременностью количество цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD54, CD18,
CD47, интегрин β7, CD44, CD58, CD49d (рисунок 20, приложение Г), было снижено.
Интенсивность экспрессии цитотоксическими Т-лимфоцитами CD54, CD47, интегрина β7,
CD44, CD29, CD49d снижена при преэклампсии по сравнению с физиологической
беременностью. Интенсивность экспрессии CD18 CD8+ Т-лимфоцитами была в 6,5 раз выше у
женщин с преэклампсией по сравнению с женщинами физиологической беременностью
(рисунок 21, приложение Г).
Таким образом, физиологическая беременность характеризуется повышенной экспрессией
рецепторов к хемокинам SDF-1 (CD184), MIP-3β и SLC (CD197), MCP-1 (CD192) и IFNγ
(CD119) и ряда молекул межклеточной адгезии (CD29, CD49d, интегрин β7, CD11b, CD11c,
CD54)
CD8+
Т-лимфоцитов
периферической
крови.
Преэклампсия
сопровождается
значительным повышением экспрессии CD18 на CD8+ Т-лимфоцитах периферической крови.
При сравнении экспрессии хемокиновых рецепторов CD3+CD4+ Т-лимфоцитами
выявлено, что у женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными
женщинами увеличено количество CD3+CD4+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD184,
CD119, CD192, CD197 (рисунок 22, приложение Д).
Интенсивность экспрессии CD184, CD192, CD197 Т-хелперами также была повышена у
женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными женщинами
(рисунок 23, приложение Д).
Беременность,
осложненная
преэклампсией
по
сравнению
с
физиологической
беременностью характеризовалась сниженным количеством CD3+CD4+ Т-лимфоцитов,
экспрессирующих CD196, в периферической крови (рисунок 22, приложение Д). Также при
преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью была снижена интенсивность
экспрессии CD184, CD196, CD197 и CXCR5 CD4+Т-лимфоцитами (рисунок 23, приложение Д).
При анализе экспрессии адгезионных молекул установлено, что у женщин с
физиологической беременностью по сравнению с небеременными женщинами повышено
количество CD3+CD4+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих интегрин β7, CD29, CD49d (рисунок
24, приложение Д).
74
CD184
18
%
16
14
***
12
10
8
6
4
** 2
0
CD197
CD119
*
Здоровые
небеременные
женщины
*
#
Женщины с
физиологической
беременностью
CD196
CD192
Женщины с
преэклампсией
Рисунок 22. Относительное количество CD3+CD4+Т-лимфоцитов, экспрессирующих
хемокиновые рецепторы. Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа
женщин с физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных
женщин); #- p<0,05 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с
физиологической беременностью).
Интенсивность экспрессии CD47, интегрина β7, CD29 и CD49d Т-лимфоцитами с
фенотипом CD3+CD4+ также была повышена у женщин с физиологической беременностью по
сравнению с небеременными женщинами (рисунок 25, приложение Д). Количество CD4+ Тлимфоцитов, экспрессирующих CD47, CD44 и CD49d, было снижено при преэклампсии по
сравнению с физиологической беременностью (рисунок 24, приложение Д). Интенсивность
экспрессии CD4+ Т-лимфоцитами CD54, CD47, интегрина β7, CD44, CD29 и CD49d также была
снижена при преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью (рисунок 25,
приложение Д).
75
А)
CD192
MFI 250
200
150
100
50
**
0
##
##
*
CXCR5
CD197
Здоровые небеременные женщины
Женщины с физиологической беременностью
Женщины с преэклампсией
Рисунок
23.
Интенсивность
экспрессии
CD3+CD4+Т-лимфоцитами
хемокиновых
рецепторов. Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #p<0,05, ## - p<0,01 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с
физиологической беременностью). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
Таким образом, для физиологической беременности характерна повышенная экспрессия
рецепторов к хемокинам SDF-1, MCP-1, MIP-3β, SLC, CXCL13 и IFNγ и адгезионных молекул
интеринового типа CD29, CD49d, Интегрин β7 и адгезионной молекулы к компонентам
внеклеточного матрикса CD47 CD4+ Т-лимфоцитами. Преэклампсия по сравнению с
физиологической беременностью сопровождается снижением экспрессии интегринов и CD47
CD4+ Т-лимфоцитами.
76
CD47
100
###
%
80
60
40
CD49d
Интегрин
β7
***
20
***
#
0
Здоровые
небеременные
женщины
##
*
Женщины с
физиологической
беременностью
CD29
CD44
Женщины с
преэклампсией
Рисунок 24. Относительное количество CD3+CD4+Т-лимфоцитов, экспрессирующих
адгезионные молекулы. Достоверность различий: *- p<0,05, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #p<0,05, ## - p<0,01, ### - p<0,001 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы
женщин с физиологической беременностью).
77
А)
MFI
CD54
2500
2000
1500
CD49d
1000
*
Интегрин β7
500
###
0
#
#
**
###
###
Здоровые
небеременные
женщины
*
CD29
CD44
Женщины с
физиологической
беременностью
Женщины с
преэклампсией
Рисунок 25. Интенсивность экспрессии CD3+CD4+Т-лимфоцитами адгезионных молекул.
Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01 (группа женщин с физиологической
беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #- p<0,05, ### p<0,001 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической
беременностью). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
78
3.2.2 Экспрессия поверхностных молекул NK-клетками периферической крови
У женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными
женщинами повышено количество CD3–CD16+CD56+ NK-клеток, экспрессирующих CD54,
интегрин β7, CD29, CD49d (рисунок 26, приложение Е). Также у женщин с физиологической
беременностью по сравнению с небеременными женщинами повышена интенсивность
экспрессии CD49d CD3–CD16+CD56+ NK-клетками (рисунок 27, приложение Е).
Здоровые небеременные
женщины
Женщины с физиологической
беременностью
Женщины с преэклампсией
% 100
80
60
**
#
**
40
20
0
**
*
#
Рисунок 26. Относительное количество CD3–CD16+CD56+ NK-клеток периферической
крови, экспрессирующих адгезионные молекулы. Достоверность различий: *- p<0,05, ** p<0,01 (группа женщин с физиологической беременностью отличается от группы здоровых
небеременных женщин); #- p<0,05 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы
женщин с физиологической беременностью).
79
CD47
MFI 4000
3000
##
2000
1000
CD49d
***
##
0
#
CD11b
##
CD29
Здоровые небеременные женщины
Женщины с физиологической беременностью
Женщины с преэклампсией
Рисунок 27. Интенсивность экспрессии адгезионных молекул CD3–CD16+CD56+ NKклетками периферической крови. Достоверность различий: *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #p<0,05, ##- p<0,01 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с
физиологической беременностью). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
У беременных женщин с преэклампсией по сравнению с женщинами с физиологической
беременностью повышено количество CD3–CD16+CD56+ NK-клеток, экспрессирующих CD11c
(рисунок 26, приложение Е). В то же время количество CD3–CD16+CD56+ NK-клеток,
экспрессирующих CD58, и интенсивность экспрессии CD3–CD16+CD56+ NK-клетками CD47,
CD11b, CD29 и CD49d была снижена (рисунок 26, рисунок 27, приложение Е).
Таким образом, физиологическая беременность сопровождается повышением экспрессии
адгезионных молекул интегринового типа (интегрин β7, CD29, CD49d) NK-клетками, в то
время как преэклампсия характеризуется повышением количества CD11с NK-клеток.
80
3.2.3 Экспрессия поверхностных молекул моноцитами периферической крови
Интенсивность
экспрессии
хемокиновых
рецепторов
CD119,
и
CD196
CXCR5
моноцитами у женщин с физиологической беременностью была выше, чем у небеременных
женщин. Интенсивность экспрессии CD192 моноцитами женщин с физиологической
беременностью по сравнению с небеременными женщинами была снижена (рисунок 28,
приложение Ж).
MFI
CD119
2500
2000
#
***
1500
1000
***
500
CXCR5
*
CD192
0
***
Здоровые небеременные женщины
Женщины с физиологической
беременностью
CD196
Рисунок
28.
Интенсивность
экспрессии
Женщины с преэклампсией
хемокиновых
рецепторов
моноцитами
периферической крови. Достоверность различий: * - p<0,05, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #p<0,05 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической
беременностью). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
При преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью увеличено
количество моноцитов, экспрессирующих рецептор CD119 (рисунок 29, приложение Ж).
Интенсивность флуоресценции CD119 моноцитами была выше при преэклампсии, чем при
физиологической беременности (приложение Ж).
81
Рисунок
Относительное
29.
количество
моноцитов,
экспрессирующих
CD119.
Достоверность различия: #- p<0,05 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы
женщин с физиологической беременностью).
У
женщин
с
физиологической
беременностью
по
сравнению
со
здоровыми
небеременными женщинами повышено количество моноцитов, экспрессирующих CD11b, CD47
(рисунок 30, приложение Ж) и интегрин β7 (приложение Ж). При этом количество моноцитов,
экспрессирующих CD11a, CD62L, CD44, CD58, снижено у женщин с физиологической
беременностью по сравнению с небеременными женщинами (рисунок 30, приложение Ж).
Интенсивность экспрессии моноцитами адгезионных молекул CD11c, CD11b, CD54,
CD62P, CD47, CD29, CD31 повышена у женщин с физиологической беременностью по
сравнению со здоровыми небеременными женщинами (рисунок 31, приложение Ж).
Интенсивность экспрессии адгезионных молекул CD11a, CD18, CD62L, CD49d (рисунок
31, приложение Ж), CD44 и интегрина β7 (приложение Ж) моноцитами женщин с
физиологической беременностью снижена по сравнению с интенсивностью экспрессии этих
адгезионных молекул моноцитами здоровых небеременных женщин.
82
%
CD11a
100
Здоровые
небеременные
женщины
80
60
CD58
CD62L
40
*
20
0
Женщины с
физиологической
беременностью
**
***
*
Женщины с
преэклампсией
*
CD44
CD47
**
CD11b
Рисунок 30. Относительное количество моноцитов, экспрессирующих адгезионные
молекулы. Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин).
Количество CD36+ моноцитов у женщин при преэклампсии было снижено по сравнению
количеством этих клеток у женщин с физиологической беременностью (приложение Ж). Для
моноцитов беременных женщин при преэклампсии по сравнению с моноцитами женщин с
физиологической беременностью была характерна сниженная интенсивность экспрессии
адгезионных молекул CD11c, CD54, CD47, CD49d (рисунок 31, приложение Ж) и CD36
(приложение Ж).
Таким образом, физиологическая беременность сопровождается повышенной экспрессией
адгезионных молекул интегринового и иммуноглобулиноподобного типа (CD11c, CD11b,
CD54, CD62P, CD47, CD29, CD31). При преэклампсии наблюдается повышение экспрессии
моноцитами рецептора к IFNγ.
83
CD11
a
MFI
5000
А)
Здоровые
небеременные
женщины
4000
CD29
CD18
3000
**
***
1000
0
Женщины с
преэклампсией
***
2000
***
***
CD11
b
Женщины с
физиологической
беременностью
CD62
L
#
***
***
CD62
P
CD47
Б)
MFI
CD11c
20000
16000
12000
8000
***
#
4000
CD31***
0
##
***
##
CD54
Здоровые
небеременные
женщины
Женщины с
физиологической
беременностью
Женщины с
преэклампсией
***
CD49d
Рисунок
31.
Интенсивность
экспрессии
адгезионных
молекул
моноцитами
периферической крови. Достоверность различий: ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #p<0,05, ##- p<0,01 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с
физиологической беременностью). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
84
3.2.4 Экспрессия поверхностных молекул нейтрофилами периферической крови
У женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными
женщинами повышено количество нейтрофилов, экспрессирующих CD119 (рисунок 32,
приложение З) и интенсивность экспрессии CD119 на нейтрофилах (приложение З).
Рисунок 32. Относительное количество нейтрофилов, экспрессирующих поверхностные
молекулы. Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01 (группа женщин с физиологической
беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #- p<0,05, ##- p<0,01
(группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической беременностью).
При анализе экспрессии нейтрофилами адгезионных молекул установлено, что у женщин
с
физиологической
беременностью
по
сравнению
с
небеременными
женщинами
в
85
периферической крови присутствует большее количество нейтрофилов, экспрессирующих
CD54 (рисунок 32, приложение З). Количество нейтрофилов, экспрессирующих адгезионные
молекулы CD58 и CD31 снижено у женщин при преэклампсии по сравнению с женщинами с
физиологической беременностью (рисунок 32, приложение З).
Таким образом, физиологическая беременность и преэклампсия не различаются по
характеру экспрессии нейтрофилами рецепторов к IFNγ, а экспрессия адгезионных молекул
нейтрофилами при преэклампсии снижена.
3.3 Содержание и функциональная активность NK-клеток периферической крови
Установлено, что преэклампсия по сравнению с физиологической беременностью
характеризуется повышенным относительным количеством и абсолютным количеством NKклеток в периферической крови (таблица 5).
Таблица 5. Содержание NK-клеток в периферической крови
Содержание NKЗдоровые
Женщины с
Женщины с
клеток в
небеременные
физиологической
преэклампсией (n=24)
периферической крови женщины (n=20)
беременностью (n=20)
относительное, %
11,7 {7,9; 15,9}
9,3 {7,2; 10,3}
12,25 {10,2; 14,2}##
абсолютное, тыс./мкл 0,180 {0,149; 0,215}
0,141 {0,100; 0,179}
0,215 {0,183; 0,250}##
Группа беременных с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической
беременностью: ## - p<0,01. Данные представлены в виде: медиана {верхний квартиль; нижний
квартиль}.
При инкубации мононуклеаров периферической крови без активатора количество
активированных NK-клеток с фенотипом CD3−CD56+CD107a+ и интенсивность экспрессии
ими CD107a не различались между группами обследованных женщин (таблица 6).
После инкубации мононуклеаров периферической крови в присутствии активатора,
содержащего 2,5 мкг\мл РМА и 0,5 мкг\мл иономицина, увеличивалось количество
CD3−CD56+CD107a+ NK-клеток и интенсивность экспрессии ими CD107a по сравнению с их
начальным количеством и интенсивностью экспрессии во всех группах обследованных женщин
(таблица 6). При сравнении данных по экспрессии CD107a NK-клетками после инкубации в
присутствии активатора, содержащего 2,5 мкг\мл РМА и 0,5 мкг\мл иономицина, не выявлено
различий в количестве CD107a+ NK-клеток и интенсивности экспрессии ими CD107a между
86
группами здоровых небеременных женщин и женщин с физиологической беременностью
(таблица 6).
После инкубации в присутствии активатора, содержащего 2,5 мкг\мл РМА и 0,5 мкг\мл
иономицина, мононуклеаров периферической крови женщин с беременностью, осложненной
преэклампсией, по сравнению с мононуклеарами женщин с физиологической беременностью
количество активированных CD107a+ NK-клеток было ниже (таблица 6). Различий между
группами пациенток по интенсивности экспрессии CD107a активированными NK-клетками
выявлено не было (таблица 6).
Таблица 6. Экспрессия CD107a NK-клетками периферической крови
Условия
инкубации
Экспрессия CD107a NK-клетками периферической крови в группах:
Женщины с
Здоровые небеременные
Женщины с
физиологической
женщины (n=20)
преэклампсией (n=24)
беременностью (n=20)
Относитель Интенсивность Относитель Интенсивность Относите Интенсивность
флюоресценции ное
флюоресценции льное
флюоресценции
ное
количество, , относительные количество, , относительныеколичест , относительные
%
единицы
%
флюоресценции
единицы
во, %
флюоресценции
единицы
флюоресценции
Инкубация
0,5
1754
1,1
1744
1,1
1170
без
{0,2; 2,4} {1240; 2172} {0,4; 2,7}
{649; 1873} {0,6; 1,7} {824; 1604}
активатора
Инкубация в
10,8
2957
7,4
3447
4,5
3292
присутствии {5,6; 18,2} {2282; 3417} {4,0; 11,0} {2550; 4621} {2,6; 6,0} {2056; 3618}
активатора
◙◙◙
◙◙
◙◙◙
◙◙◙
◙◙◙ #
◙◙◙
Достоверность различий: ◙◙ - p<0,01, ◙◙◙ - p<0,001 (различия внутри каждой группы
пациентов при разных условиях инкубации); # - p<0,05 (группа беременных с преэклампсией
отличается от группы женщин с физиологической беременностью). Данные представлены в
виде: медиана {верхний квартиль; нижний квартиль}.
Установлено, что инкубация мононуклеаров в присутствии активатора, содержащего 2,5
мкг\мл РМА и 0,5 мкг\мл иономицина, приводила к снижению интенсивности экспрессии CD54
активированными NK-клетками у здоровых небеременных женщин (таблица 7), а у женщин с
физиологической беременностью – к уменьшению количества активированных CD54+ NKклеток по сравнению с неактивированными NK-клетками (таблица 7).
При сопоставлении характера экспрессии молекулы CD54 NK-клетками в разных группах
установлено, что количество CD107a+CD54+ NK-клеток и интенсивность экспрессии ими CD54
не различались между группами здоровых небеременных женщин и женщин с физиологической
беременностью независимо от условий инкубации (таблица 7).
87
При преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью в случае инкубации
мононуклеаров без активатора выявлено сниженное количество CD54+CD107a+ NK-клеток и
сниженная интенсивность экспрессии CD54 CD107a+NK-клетками (таблица 7). После
активации NK-клеток беременных с преэклампсией интенсивность экспрессии ими молекулы
CD54 усиливалась и достигала уровня интенсивности экспрессии этой молекулы NK-клетками
женщин с физиологической беременностью (таблица 7).
У женщин с преэклампсией по сравнению с
женщинами с физиологической
беременностью количество TRAIL+ NK-клеток было повышено (таблица 8).
Таблица 7. Экспрессия CD54 активированными CD107a+ NK-клетками периферической крови
Экспрессия CD54 активированными CD107a+ NK-клетками периферической крови
в группах:
Женщины с
Здоровые небеременные
Женщины с преэклампсией
физиологической
женщины (n=20)
(n=24)
Условия
беременностью (n=20)
инкубации
Интенсивность
Интенсивность
Интенсивность
Относител
Относител
Относитель
флюоресценции,
флюоресценции,
флюоресценции,
ьное
ьное
ное
относительные
относительные
относительные
количество
количество
количество,
единицы
единицы
единицы
,%
,%
%
флюоресценции
флюоресценции
флюоресценции
Инкубация
89,4
93,5
5811
86,4
7166
4207
без
{83,3;
{91,0;
{4381; {80,5; 92,5}
{4775; 8717}
{3196; 4862} ##
активатора
93,9}
95,6}
10112}
#
Инкубация в
89,8
87,5
4957
5033
88,8
4676
присутствии {78,6;
{74,1;
{3753;
{4084; 5892} ◙◙
{84,8; 91,4} {3810; 5617} ◙
активатора
92,0}
92,8} ◙
5642}
Достоверность различий: ◙- p<0,05; ◙◙ - p<0,01 (различия внутри каждой группы
пациентов при разных условиях инкубации); # - p<0,05; ## - p<0,01 (группа беременных с
преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической беременностью). Данные
представлены в виде: медиана {верхний квартиль; нижний квартиль}.
88
Таблица 8. Экспрессия TRAIL NK-клетками периферической крови
Экспрессия TRAIL NK-клетками периферической крови в группах:
здоровые
женщины с
женщины с
Параметры экспрессии
небеременные
физиологической
преэклампсией
женщины (n=22)
беременностью (n=18)
(n=22)
Относительное количество
25,9 {11,9;
19,8 {8,7; 29,7}
12,8 {5,3; 20,4}
TRAIL+ NK-клеток, %
43,9}#
Интенсивность
флюоресценции TRAIL+
1122 {774; 1243}
876 {760; 1091}
810 {741; 892}
NK-клеток, относительные
единицы флюоресценции
Достоверность различий: # - p<0,05 (группа беременных с преэклампсией отличается от
группы женщин с физиологической беременностью). Данные представлены в виде: медиана
{верхний квартиль; нижний квартиль}.
Таким образом, присутствие активатора увеличивало интенсивность дегрануляции NKклеток и выхода на поверхностную мембрану гликопротеина лизосомальных мембран CD107a
во всех обследованных группах женщин. Преэклампсия характеризуется сниженной
экспрессией CD107a и адгезионной молекулы CD54 и повышенной экспрессией TRAIL NKклетками.
3.4
Содержание микрочастиц в периферической крови и их морфометрические и
фенотипические характеристики
3.4.1 Атомно-силовая микроскопия препаратов микрочастиц, выделенных из
плазмы крови
На рельефе поверхности и его гистограмме высот обзорного поля зрения 20х20 мкм
определяли популяцию сферических объектов в диапазоне высот 50-900 нм, с максимумом
распределения в области 230 нм (рисунок 33 (А и Б)). Мажорная популяция микрочастиц
находилась в диапазоне высот 100-300 нм. При прохождении зонда по крупным частицам,
создавались шумы. При гранулометрическом анализе рельефа поверхности поля зрения 5х5
мкм средний диаметр микрочастиц плазмы крови составил 330 нм (рисунок 33 (В)). На рисунке
33 (Г) представлена 3D-реконструкция препарата микрочастиц в поле зрения 5х5 мкм.
89
А
Б
В
Г
Рисунок 33. Атомно-силовая микроскопия препаратов микрочастиц выделенных из
плазмы крови. Рельеф поверхности (А) и гистограмма распределения высот (Б) обзорного поля
зрения 20х20 мкм образца микрочастиц плазмы периферической крови. Рельеф поверхности (В)
и 3D-реконструкция (Г) того же образца в поле зрения 5х5мкм.
3.4.2 Содержание микрочастиц в периферической крови и их фенотипические
характеристики
Установлено, что в периферической крови у женщин с физиологической беременностью
общее содержание микрочастиц превышает их количество у здоровых небеременных женщин.
Различий между группами беременных женщин с преэклампсией и без этой патологии не
выявлено (таблица 9).
Таблица 9. Количество микрочастиц в 1 мл плазмы периферической крови
Количество микрочастиц в 1 мл плазмы периферической крови в группах:
Здоровые небеременные
Женщины с физиологической
Женщины с преэклампсией
женщины (n=21)
беременностью (n=20)
(n=24)
1 347 089 {566383, 3527021}
8 151 216 {3116096, 12075456}* 4 529 263 {830520, 8302298}
Достоверность различия: * - p<0,001 (группа женщин с физиологической беременностью
отличается от группы здоровых небеременных женщин). Данные представлены в виде: медиана
{верхний квартиль; нижний квартиль}.
90
У
женщин
при
физиологической
беременности
по
сравнению
со
здоровыми
небеременными женщинами повышено абсолютное количество микрочастиц, отдельно
экспрессирующих CD45, CD3, CD4, CD8, CD16, CD56, CD14, CD62L, CD62P либо CD54
(рисунок 34, приложение И).
А)
Абсолютное
количество
микрочастиц
CD45
20000
15000
*
10000
5000
CD8
**
*
0
*
Б)
CD4
CD16
Абсолютное 300000
количество
микрочастиц 250000
200000
**
CD54*
150000
CD3
Здоровые небеременные
женщины
Женщины с физиологической
беременностью
Женщины с преэклампсией
CD56
100000
50000
0
*
*
*
*
CD62P
Здоровые
небеременные
женщины
CD14
Женщины с
физиологической
беременностью
Женщины с
преэклампсией
CD62L
Рисунок 34. Абсолютное количество микрочастиц, экспрессирующих поверхностные
маркеры лейкоцитов. Достоверность различий: * - p<0,05, ** - p<0,01
(группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин).
91
Интенсивность
экспрессии
CD62L
и
CD54
на
микрочастицах
у
женщин
с
физиологической беременностью по сравнению с небеременными была снижена (приложение И).
Анализ совместной экспрессии лейкоцитарных маркеров на микрочастицах клеток
периферической крови выявил, что у женщин с физиологической беременностью по сравнению
со
здоровыми
небеременными
повышено
количество
микрочастиц
с
фенотипом
CD45+CD16+CD56+, CD45–CD16+CD56+ и CD3+CD4+, но понижено количество микрочастиц
с фенотипом CD45+CD16+CD56– и CD45+CD16–CD56+ (рисунок 35 приложение К).
CD45+
CD16+
CD56+
Абсолютное
количество 10000
микрочастиц
**
8000
6000
4000
CD3+
CD4+
2000
*
##
##
0
*
CD45+
CD16+
CD56–
*
#
*
CD45–
CD16+
CD56+
CD45+
CD16–
CD56+
Здоровые небеременные женщины
Женщины с физиологической беременностью
Женщины с преэклампсией
Рисунок
35.
Абсолютное
количество
микрочастиц
в
периферической
крови,
экспрессирующих различные комбинации лейкоцитарных маркеров. Достоверность различий:
*- p<0,05, ** - p<0,001 (группа женщин с физиологической беременностью отличается от
группы здоровых небеременных женщин); # - p<0,05, ##
- p<0,001 (группа женщин с
преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической беременностью).
При сравнении группы женщин с физиологической беременностью и женщин с
преэклампсией установлено, что при преэклампсии в 11 раз снижено количество микрочастиц,
92
несущих одновременно CD45, CD16 и CD56, но в 16 раз повышено количество микрочастиц с
фенотипом CD45+CD16+ CD56–. Также при преэклампсии по сравнению с физиологической
беременностью повышено количество микрочастиц с фенотипом CD45+CD16–CD56+ (рисунок
35, приложение К).
Таким образом, физиологическая беременность сопровождается повышением содержания
микрочастиц NK-клеток (CD45+CD16+CD56+ и CD45–CD16+CD56+) и активированных Т-хелперных
лимфоцитов (СD3+CD4+ и CD54+). Преэкламспия характеризуется повышением содержания
микрочастиц регуляторных NK-клеток с фенотипом CD16dim CD56
bright
(CD45+CD16-CD56+) и
микрочастиц моноцитов и нейтрофилов (CD45+СD16+CD56-).
3.5 Оценка влияния микрочастиц плазмы крови на функциональные свойства клеток
линии THP-1
3.5.1 Оценка спонтанной и предварительно индуцированной TNFα экспрессии
поверхностных рецепторов клетками линии ТНР-1
При оценке экспрессии поверхностных рецепторов клетками линии ТНР-1 установлено,
что активация клеток TNFα приводила к повышению интенсивности экспрессии CD11c, CD29,
CD54, HLA-DR и CD181 по сравнению со спонтанным уровнем (рисунок 36, приложение Л).
Рисунок 36. Экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1. Без TNFα –
спонтанный уровень экспрессии поверхностного маркера клетками линии THP-1. С TNFα –
интенсивность экспрессии после активации клеток линии THP-1 TNFα. Достоверность
различий: * - p<0,05 (уровень спонтанной экспрессии поверхностных маркеров отличается от
экспрессии, индуцированной TNFα). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
93
3.5.2 Влияние микрочастиц плазмы крови здоровых небеременных женщин на
экспрессию поверхностных рецепторов клетками линии ТНР-1
Введение в интактную культуру клеток линии ТНР-1 микрочастиц, выделенных из плазмы
крови здоровых небеременных женщин, приводило к снижению уровня экспрессии
адгезионных молекул CD18 и CD49d по сравнению со спонтанным уровнем экспрессии этих
молекул (рисунок 37, приложение Л).
Рисунок 37. Экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1. А – спонтанный
уровень экспрессии клетками линии THP-1 поверхностных маркеров. Б – экспрессия
поверхностных маркеров клетками линии THP-1 после инкубации с микрочастицами плазмы
крови здоровых небеременных женщин. В – экспрессия клетками линии THP-1 поверхностных
маркеров после активации TNFα. Г – экспрессия поверхностных маркеров клетками линии
THP-1 после предварительной активации TNFα и последующей инкубации с микрочастицами
плазмы крови небеременных женщин. Достоверность различий: ● -
p<0,05 (группа Б
отличается от группы А); ◊ - p<0,05 (группа Г отличается от группы В). MFI – средняя
интенсивность флуоресценции; ◙ - p<0,05 (группа Г отличается от группы Б).
94
Введение в предварительно активированную TNFα культуру клеток линии ТНР-1
микрочастиц, выделенных из плазмы крови здоровых небеременных женщин, также приводило
к снижению уровня экспрессии адгезионных молекул CD18 и CD49d по сравнению с уровнем
экспрессии указанных молекул этими клетками (рисунок 37, приложение Л).
Присутствие микрочастиц здоровых небеременных женщин приводило к снижению
экспрессии CD54 и CD11b предварительно активированными TNFα клетками линии THP-1
(рисунок 38, приложение Л).
Рисунок 38. Экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1. А – спонтанный
уровень экспрессии клетками линии THP-1 поверхностных маркеров. Б – экспрессия
поверхностных маркеров клетками линии THP-1 после инкубации с микрочастицами плазмы
крови здоровых небеременных женщин. В – экспрессия клетками линии THP-1 поверхностных
маркеров после активации TNFα. Г – экспрессия поверхностных маркеров клетками линии
THP-1 после предварительной активации TNFα и инкубации с микрочастицами плазмы крови
небеременных женщин. Достоверность различий: ◊ - p<0,05 (группа Г отличается от группы В);
◙ - p<0,05 (группа Г отличается от группы Б). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
95
Отмеченное снижение экспрессии CD18 и CD54 клетками линии THP-1, предварительно
активированными TNFα, не достигало значений экспрессии этих молекул клетками линии THP1, обработанными только микрочастицами плазмы крови здоровых небеременных женщин
(рисунок 37, рисунок 38, приложение Л). Уровень экспрессии CD49d и CD11b в этом случае
снижался до показателей экспрессии этой молекулы клетками линии THP-1, обработанными
только микрочастицами плазмы крови здоровых небеременных женщин (приложение Л).
Микрочастицы небеременных женщин также снижали экспрессию CD181 как интактными
клетками (рисунок 39, приложение Л), так и предварительно активированными TNFα клетками
линии ТНР-1 (рисунок 39, приложение Л).
Рисунок 39. Экспрессия CD181 клетками линии THP-1. А – спонтанный уровень
экспрессии CD181 клетками линии THP-1. Б – экспрессия CD181 клетками линии THP-1 после
инкубации с микрочастицами плазмы крови здоровых небеременных женщин. В – экспрессия
клетками линии THP-1 CD181 после активации TNFα. Г – экспрессия CD181 клетками линии
THP-1 после предварительной активации TNFα и последующей инкубации с микрочастицами
плазмы крови небеременных женщин. Достоверность различий: ● - p<0,05 (группа Б отличается
от группы А); ◊ - p<0,05 (группа Г отличается от группы В); ◙ - p<0,05 (группа Г отличается от
группы Б). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
Снижение экспрессии CD181 предварительно активированными TNFα клетками линии
ТНР-1 не достигало
значения экспрессии
этой
молекулы клетками
линии
THP-1,
обработанными только микрочастицами плазмы крови здоровых небеременных женщин
(приложение Л).
В присутствии микрочастиц плазмы крови здоровых небеременных женщин повышался
уровень экспрессии CD11c и CD31 интактными клетками линии ТНР-1 (рисунок 40,
96
приложение Л) и уровень экспрессии CD11c, CD31 и CD47 предварительно активированными
TNFα клетками линии THP-1 (рисунок 40, приложение Л).
Рисунок 40. Экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1. А – спонтанный
уровень экспрессии поверхностных маркеров клетками линии THP-1. Б – экспрессия
поверхностных маркеров клетками линии THP-1 после инкубации с микрочастицами плазмы
крови здоровых небеременных женщин. В – экспрессия клетками линии THP-1 поверхностных
маркеров после активации TNFα. Г – экспрессия поверхностных маркеров клетками линии
THP-1 после предварительной активации TNFα и последующей инкубации с микрочастицами
плазмы крови небеременных женщин. Достоверность различий: ● -
p<0,05 (группа Б
отличается от группы А); ◊ - p<0,05 (группа Г отличается от группы В); ◙ - p<0,05 (группа Г
отличается от группы Б). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
97
Отмеченное повышение экспрессии CD31 и CD11с предварительно активированными
TNFα клетками превышало значения экспрессии этих молекул интактными клетками линии
THP-1, обработанными только микрочастицами плазмы крови здоровых небеременных женщин
(рисунок 40, приложение Л). Микрочастицы плазмы крови небеременных женщин также
повышали экспрессию VEGFR2 предварительно активированными TNFα клетками линии ТНР1 (приложение Л).
3.5.3 Влияние микрочастиц плазмы крови женщин с физиологической
беременностью на экспрессию поверхностных рецепторов клетками линии ТНР-1
Введение как в интактную культуру, так и в культуру клеток линии THP-1,
предварительно активированных TNFα, микрочастиц плазмы крови женщин с физиологической
беременностью приводило к снижению уровня экспрессии CD11a и CD29 клетками линии ТНР1 по сравнению со спонтанным уровнем (для интактной культуры) и по сравнению с уровнем
экспрессии после активации (для предварительно активированной TNFα культуры) (рисунок 41,
приложение Л).
Микрочастицы плазмы крови женщин с физиологической беременностью повышали
уровень экспрессии CD54 как интактными (рисунок 42, приложение Л), так и предварительно
активированными TNFα клетками линии THP-1.
Уровень экспрессии CD54 предварительно активированными TNFα клетками линии THP1, обработанными микрочастицами плазмы крови женщин с физиологической беременностью,
превышал уровень экспрессии этой молекулы интактными клетками, обработанными только
микрочастицами плазмы крови женщин той же группы (рисунок 42, приложение Л).
Обработка интактных клеток линии THP-1 микрочастицами плазмы крови женщин с
физиологической беременностью приводило к снижению уровня экспрессии CD181 (рисунок
42, приложение Л). В случае предварительно активированных TNFα клеток линии THP-1,
уровень экспрессии CD181 также снижался (рисунок 42, приложение Л), но превышал значение
экспрессии этих молекул интактными клетками линии THP-1, обработанных только
микрочастицами плазмы крови женщин с физиологической беременностью (рисунок 42,
приложение Л).
Микрочастицы плазмы крови женщин с физиологической беременностью повышали
экспрессию интегрина β7 предварительно активированными TNFα клетками линии ТНР-1
(приложение Л).
98
Рисунок 41. Экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1. А – спонтанный
уровень экспрессии поверхностных маркеров клетками линии THP-1. Б – экспрессия
поверхностных маркеров клетками линии THP-1 после инкубации с микрочастицами плазмы
крови женщин с физиологической беременностью. В – экспрессия клетками линии THP-1
поверхностных маркеров после активации TNFα. Г – экспрессия поверхностных маркеров
клетками линии THP-1 после предварительной активации TNFα и последующей инкубации с
микрочастицами плазмы крови женщин с физиологической беременностью. Достоверность
различий: ● - p<0,05 (группа Б отличается от группы А); ◊ - p<0,05 (группа Г отличается от
группы В). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
99
Рисунок 42. Экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1. А – спонтанный
уровень экспрессии поверхностных маркеров клетками линии THP-1. Б – экспрессия
поверхностных маркеров клетками линии THP-1 после инкубации с микрочастицами плазмы
крови женщин с физиологической беременностью. В – экспрессия клетками линии THP-1
поверхностных маркеров после активации TNFα. Г – экспрессия поверхностных маркеров
клетками линии THP-1 после предварительной активации TNFα и последующей инкубации с
микрочастицами плазмы крови женщин с физиологической беременностью. Достоверность
различий: ● - p<0,05 (группа Б отличается от группы А); ◊ - p<0,05 (группа Г отличается от
группы В); ◙ - p<0,05 (группа Г отличается от группы Б). MFI – средняя интенсивность
флуоресценции.
3.5.4 Влияние микрочастиц плазмы крови беременных женщин с преэклампсией на
экспрессию поверхностных рецепторов клетками линии ТНР-1
Микрочастицы, выделенные из плазмы крови беременных женщин с преэклампсией, не
изменяли профиль экспрессии адгезионных молекул интактными клетками (приложение Л). В
случае предварительно активированных TNFα клеток линии THP-1 микрочастицы плазмы
100
крови женщин с преэклампсией снижали экспрессию CD18 (рисунок 43, приложение Л). При
этом экспрессия CD18 оставалась выше, чем экспрессия этой молекулы интактными клетками
линии THP-1, обработанных только микрочастицами плазмы крови женщин той же группы
(рисунок 43, приложение Л).
Рисунок 43. Экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1. А – спонтанный
уровень экспрессии поверхностных маркеров клетками линии THP-1. Б – экспрессия
поверхностных маркеров клетками линии THP-1 после инкубации с микрочастицами плазмы
крови женщин с преэклампсией. В – экспрессия клетками линии THP-1 поверхностных
маркеров после активации TNFα. Г – экспрессия поверхностных маркеров клетками линии
THP-1 после предварительной активации TNFα и последующей инкубации с микрочастицами
плазмы крови женщин с преэклампсией. Достоверность различий: ● -
p<0,05 (группа Б
отличается от группы А); ◊ - p<0,05 (группа Г отличается от группы В); ◙ - p<0,05 (группа Г
отличается от группы Б). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
Введение как в интактную культуру, так и в культуру клеток линии THP-1,
предварительно активированных TNFα, микрочастиц плазмы крови женщин с преэклампсией
101
приводило к снижению уровня экспрессии CD181 клетками линии THP-1 по сравнению со
спонтанным уровнем (для интактной культуры) и по сравнению с уровнем экспрессии после
активации (для предварительно активированной TNFα культуры) (рисунок 43, приложение Л).
В случае предварительно активированных TNFα клеток линии THP-1, уровень экспрессии
CD181 превышал значение экспрессии этих молекул интактными клетками линии THP-1,
обработанных только микрочастицами плазмы крови женщин с преэклампсией (рисунок 43,
приложение Л).
Инкубация активированных TNFα клеток линии THP-1 в присутствии микрочастиц
плазмы крови женщин с преэклампсией приводила к повышению экспрессии CD182 (рисунок
44, приложение Л).
Рисунок 44. Экспрессия CD182 клетками линии THP-1. А – спонтанный уровень
экспрессии поверхностных маркеров клетками линии THP-1. Б – экспрессия поверхностных
маркеров клетками линии THP-1 после инкубации с микрочастицами плазмы крови женщин с
преэклампсией. В – экспрессия клетками линии THP-1 поверхностных маркеров после
активации TNFα. Г – экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1 после
предварительной активации TNFα и инкубации с микрочастицами плазмы крови женщин с
преэклампсией. Достоверность различий: ◊ - p<0,05 (группа Г отличается от группы В). MFI –
средняя интенсивность флуоресценции.
102
3.5.5 Сравнение влияния микрочастиц плазмы крови женщин разных групп на
экспрессию поверхностных рецепторов клетками линии ТНР-1
Уровень экспрессии CD181 интактными клетками линии THP-1 был ниже при инкубации
клеток в присутствии микрочастиц плазмы крови женщин с физиологической беременностью,
чем при инкубации в присутствии микрочастиц, плазмы крови здоровых небеременных женщин
(рисунок 45, приложение Л).
Рисунок 45. Экспрессия CD181 клетками линии THP-1. А – экспрессия CD181 клетками
линии THP-1 без предварительной активации TNFα после инкубации с микрочастицами плазмы
крови женщин I, II и III групп. Б – экспрессия CD181 клетками линии THP-1 после
предварительной активации TNFα и последующей инкубации с микрочастицами плазмы крови
женщин I, II и III групп. I группа – здоровые небеременные женщины, II группа – женщины с
физиологической беременностью, III группа – беременные женщины с преэклампсией.
Достоверность различий: * - p<0,05 (группа I отличается от группы II), # - p<0,05 (группа II
отличается от группы III). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
Экспрессия CD18 и CD54 предварительно активированными TNFα клетками линии THP-1
после инкубации с микрочастицами плазмы крови женщин с физиологической беременностью,
была выше по сравнению с экспрессией после инкубации с микрочастицами плазмы крови
здоровых небеременных женщин (рисунок 46, приложение Л).
Экспрессия CD181 предварительно активированными клетками линии THP-1 была ниже
при инкубации с микрочастицами плазмы крови женщин с физиологической беременностью по
103
сравнению с инкубацией с микрочастицами плазмы крови здоровых небеременных женщин
(рисунок 45, приложение Л).
Рисунок 46. Экспрессия поверхностных маркеров клетками линии THP-1 после
предварительной активации TNFα и инкубации с микрочастицами плазмы крови женщин I, II и
III групп. I группа – здоровые небеременные женщины, II группа – женщины с
физиологической беременностью, III группа – беременные женщины с преэклампсией.
Достоверность различий: * - p<0,05 (группа I отличается от группы II), # - p<0,05 (группа II
отличается от группы III). MFI – средняя интенсивность флуоресценции.
Уровень экспрессии CD181 интактными клетками линии THP-1 и предварительно
активированными TNFα клетками линии THP-1 после их обработки микрочастицами плазмы
крови женщин с преэклампсией был выше, чем в случае действия на них микрочастиц плазмы
крови женщин с физиологической беременностью (рисунок 45, приложение Л).
Экспрессия CD18 и CD54 предварительно активированными TNFα клетками линии THP-1
была снижена после инкубации в присутствии микрочастиц плазмы крови женщин с
преэклампсией по сравнению с экспрессией после инкубации с микрочастицами плазмы крови
женщин с физиологической беременностью (рисунок 46, приложение Л).
Таким образом, микрочастицы небеременных и беременных женщин при наличии и
отсутствии преэклампсии обладают разнонаправленными эффектами на экспрессию клеткамимишенями адгезионных молекул и хемокиновх рецептров. Микрочастицы плазмы женщин с
преэклампсией при воздействии на клетки приближают фенотипические характеристики
клеток-мишеней к таковым у небеременных женщин.
104
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
Беременность сопряжена с формированием плаценты и децидуальной оболочки, от
развития структуры которых зависит характер течения беременности и её исход [6]. В процессе
развития беременности в децидуальной оболочке и плаценте появляются различные популяции
лейкоцитов. В децидуальной оболочке присутствуют Т-лимфоциты, составляющие около 10%
всех лейкоцитов децидуальной оболочки [347]. К концу беременности и в процессе родовой
деятельности количество Т-лимфоцитов в децидуальной оболочке возрастает до 50% от всех
лейкоцитов [134]. Популяция Т-лимфоцитов децидуальной оболочки преимущественно
представлена CD8+ Т-лимфоцитами и CD4+ Т-лимфоцитами [32, 347]. Количество CD3+CD4+
Т-лимфоцитов увеличивается во втором триместре беременности [180], к третьем триместру
беременности в децидуальной оболочке сохраняется популяция CD3+CD4+ Т-лимфоцитов
[347]. Среди лейкоцитов децидуальной оболочки также выявлены NK-клетки и макрофаги.
Количество макрофагов в децидуальной оболочке составляет от 15% до 30% всех лейкоцитов,
увеличиваясь к концу беременности [134, 238]. Количество NK-клеток в первом триместре
беременности в децидуальной оболочке составляет около 70% всех лейкоцитов, к концу
беременности уменьшаясь до 3% [134]. В конце беременности в зоне маточно-плацентарного
контакта появляются нейтрофилы, принимающие участие в запуске родовой деятельности
[134].
Формирование
и
пополнение
пула
децидуальных
лейкоцитов
происходит,
предположительно, за счет миграции этих клеток из периферической крови [134].
Эндотелиальные клетки децидуальной оболочки экспрессируют адгезионные молекулы ICAM1, ICAM-2, VCAM-1, PECAM-1 [111, 161, 323]. Такое состояние эндотелиальных клеток
способствует адгезии лейкоцитов периферической крови и создает условия для дальнейшей
миграции в зону маточно-плацентарного контакта. В литературе представлены разрозненные
данные о миграции отдельных популяций лейкоцитов по градиенту концентрации хемокинов,
секретируемых в зоне маточно-плацентарного контакта. Так, показана специфическая миграция
NK-клеток в ответ на хемокин CXCL12, секретируемый клетками децидуальной оболочкой
[142]. Также установлено, что хемокин CXCL16, секретируемый клетками трофобласта,
вызывает хемотаксис Т-лимфоцитов, NK-клеток и моноцитов [153]. Однако в литературе
присутствует недостаточно данных об особенностях миграционной активности лейкоцитов
периферической крови при беременности, осложненной преэклампсией.
Нами был проведен анализ функций адгезии и миграции лейкоцитов женщин с
физиологической беременностью и с беременностью, осложненной преэклампсией, к
эндотелиальным клеткам. Сниженная интенсивность адгезии к интактному эндотелию
лимфоцитов женщин при физиологической беременности по сравнению с небеременными
105
женщинами свидетельствует о низком уровне взаимодействия лимфоцитов беременных
женщин с нестимулированными эндотелиальными клетками. Эндотелиальные клетки в
присутствии таких провоспалительных цитокинов, как TNFα, экспрессируют ICAM-1 (CD54) и
VCAM-1 (CD106) [23]. Так как эндотелий децидуальной оболочки находится в активированном
состоянии и для него характерна экспрессия адгезионных молекул ICAM-1, ICAM-2, VCAM-1,
PECAM-1
[111,
161,
323],
характер
адгезии
лейкоцитов
периферической
крови
к
активированному эндотелию в системе in vitro с определенной долей вероятности
характеризует взаимодействие лейкоцитов с эндотелием сосудов децидуальной оболочки. По
нашим данным лимфоциты женщин с физиологической беременностью обладают повышенным
уровнем адгезии к активированному эндотелию in vitro, данная особенность функционального
состояния лимфоцитов может лежать в основе механизма регуляции миграции лимфоцитов
беременных женщин в децидуальную оболочку in vivo.
Повышенное при преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью
количество лимфоцитов, адгезировавших к активированному эндотелию, указывает на
активированное состояние лимфоцитов периферической крови при данной патологии
беременности и согласуется с данными, описанными в литературе. Так, например, при
преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью повышена экспрессия
адгезионных молекул ICAM-1 на лимфоцитах периферической крови [346].
Выявленная нами повышенная адгезия моноцитов к активированному эндотелию in vitro
при преэклампсии по сравнению с физиологической беременностьюо может являться
следствием усиления экспрессии адгезионных молекул эндотелиальными клетками в
используемой нами модели в присутствии TNFα и изменения экспрессии адгезионных молекуллигандов на моноцитах.
В
случае
физиологической
беременности
преобладает
адгезия
моноцитов
к
неактивированному эндотелию, так как отношение общего количества лимфоцитов к общему
количеству моноцитов среди адгезировавших клеток было ниже, чем у небеременных женщин.
В случае адгезии к активированному эндотелию подобная тенденция сохранялась. При
преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью большим адгезионным
потенциалом к неактивированному эндотелию обладают моноциты, так как отношение общего
количества лимфоцитов к общему количеству моноцитов, адгезировавших к интактному
эндотелию также было снижено. В эксперименте с активированным эндотелием отношение
общего количества адгезировавших лимфоцитов к общему количеству адгезировавших
моноцитов было повышено у женщин с преэклампсией по сравнению с женщинами с
физиологической беременностью, что указывает на большую способность к адгезии
лимфоцитов при преэклампсии.
106
Адгезия к активированному эндотелию CD3+ лимфоцитов небеременных женщин была
снижена по сравнению с соответствующим уровнем адгезии к интактному эндотелию, что
может быть обусловлено отсутствием в используемой модели необходимых хемокинов,
секретируемых в ситуации in vivo в зоне воспаления [36]. В группах беременных женщин (с
наличием
или
отсутствием
преэклампсии)
уровень
адгезии
CD3+
лимфоцитов
к
активированному эндотелию был выше, чем уровень адгезии к интактному эндотелию, что
свидетельствует о предактивированном состоянии CD3+ лимфоцитов при беременности. В
присутствии цитокинов, секретируемых активированным эндотелием (например, IL-8),
лимфоциты способны к повышению экспрессии адгезионных молекул [49], что может
объяснять выявленные особенности адгезии. Установленная интенсификация адгезии CD3+
лимфоцитов и CD3+CD4+ лимфоцитов к активированному эндотелию может определяться не
только усилением экспрессии адгезионных молекул на эндотелиальных клетках в присутствии
TNFα [176], но и возможным повышением уровня экспрессии адгезионных молекул-лигандов
Т-лимфоцитами.
По данным литературы в периферической крови у женщин с физиологической
беременностью по сравнению с небеременными женщинами снижено количество классических
моноцитов с фенотипом CD14+CD16- [217], представляющих основной пул моноцитов
периферической крови [308]. В настоящей работе установлена повышенная адгезионная
способность CD14+ моноцитов и CD14+CD16- моноцитов при физиологической беременности
как к интактному, так и к активированному эндотелию. Возможно, снижение количества
моноцитов CD14+CD16- происходит в следствие повышения адгезионной способности этих
клеток к эндотелию, что отражалось наших в результатах в модели адгезии in vitro.
Таким образом, сниженная функция адгезии лимфоцитов при физиологической
беременности в модели интактного эндотелия отражает измененное состояние лимфоцитов при
физиологической беременности по сравнению с лимфоцитами небеременных женщин.
Повышенная адгезионная способность моноцитов при физиологической беременности в модели
неактивированного эндотелия может определяться изменением экспрессии моноцитами
адгезионных молекул. Усиленная функция адгезии лимфоцитов и моноцитов при преэклампсии
по сравнению с физиологической беременностью указывает на активированное состояние этих
клеток и возможность их миграции в ткани, в том числе и в децидуальную оболочку,
эндотелиальные клетки которой находятся в активированном состоянии [111, 161, 323]. С
целью оценки дальнейшего поведения мононуклеаров периферической крови беременных
женщин, адгезировавших к эндотелию, изучали их трансмиграцию через монослой
эндотелиальных клеток.
107
В
настоящей
работе
оценивали
как
спонтанную
миграцию
мононуклеаров
периферической крови через эндотелий, так и индуцированную (в присутствии TNFα). TNFα
является хемоаттрактантом для лимфоцитов [102] и моноцитов [160], а также активирует
эндотелиальные клетки, индуцируя продукцию ими IL-1, IL-6, IL-8 [176, 362] и экспрессию
адгезионных молекул ICAM-1 [31, 304], и таким образом стимулирует миграцию лимфоцитов и
моноцитов через эндотелий. По нашим данным у здоровых небеременных женщин
относительное количество лимфоцитов, мигрировавших в нижнюю камеру в присутствии
TNFα, было выше, чем количество спонтанно мигрировавших лимфоцитов, что согласуется с
данными о влиянии TNFα на миграцию лимфоцитов [102]. У здоровых небеременных женщин
количество моноцитов, спонтанно мигрировавших в нижнюю камеру, было снижено по
сравнению с их количеством, мигрировавшим в присутствии TNFα. По нашим данным функция
адгезии
моноцитов
небеременных
женщин
не
различалась
в
зависимости
от
предшествовавшего воздействия TNFα на эндотелиальный монослой, что, вероятно, вносит
вклад в снижение интенсивности трансмиграции.
Клетки
иммунной
кровообращения
децидуальной
подвергаются
оболочкой
функциональных
системы
прохождении
воздействию
[103],
характеристик
при
что
[278]
цитокинов
определяет
и
зоны
и
хемокинов,
изменение
обуславливает
маточно-плацентарного
их
секретируемых
фенотипических
привлечение
лейкоцитов
и
в
децидуальную оболочку. Полагают, что формирование и пополнение пула децидуальных
лейкоцитов происходит за счет миграции клеток из периферической крови [134], что
подтверждается полученными нами данными о высоком уровне трансэндотелиальной миграции
in vitro лимфоцитов и моноцитов через эндотелий при физиологической беременности. В то же
время выявленная сниженная у здоровых беременных женщин по сравнению с небеременными
женщинами функция трансмиграции лимфоцитов in vitro объясняется сниженной функцией
адгезии лимфоцитов к интактному эндотелию и связана со снижением при беременности
способности лимфоцитов мигрировать через эндотелий в ткани в отсутствие активационных
сигналов. Сходный характер трансэндотелиальной миграции in vitro наблюдается также в
присутствии TNFα. Изменение трансэндотелиальной миграции лимфоцитов и моноцитов
женщин с физиологической беременностью по сравнению со здоровыми небеременными
женщинами частично согласуется с данными по адгезии мононуклеаров к эндотелию при
физиологической беременности. Присутствие TNFα в нижней камере трансвела не изменяет
тенденции миграции мононуклеаров периферической крови женщин с физиологической
беременностью: лимфоциты мигрируют в меньшем, а моноциты в большем количестве, чем у
небеременных женщин. Эта тенденция может быть связана с характером экспрессии
адгезионных
молекул
лимфоцитами
и
моноцитами
периферической
крови
при
108
физиологической беременности. Наличие цитокина TNFα в модельной системе, по-видимому,
является недостаточным условием воспроизведения индуцированной миграции мононуклеаров
при физиологической беременности.
Нами установлено, что у женщин с беременностью, осложненной преэклампсией, по
сравнению с женщинами с физиологической беременностью снижена функция транмиграции
Т-лимфоцитов, CD4+ Т-лимфоцитов, CD8+ Т-лимфоцитов, NK-клеток. В присутствии TNFα
характер трансэндотелиальной миграции in vitro популяций лимфоцитов пациенток с
преэклампсией сохранялся. Таким образом, присутствие TNFα не влияло на характер
трансэндотелиальной миграции лимфоцитов периферической крови женщин с преэклампсией.
Ранее в модельной системе in vitro показано, что в присутствии кондиционированных сред
плацент, полученных от женщин с преэклампсией, усиливалась трансэндотелиальная миграция
моноцитоподобных клеток линии THP-1 [24]. При преэклампсии в плаценте и ворсинах
хориона выявлены мононуклеарные инфильтраты [19], а в децидуальной оболочке наблюдается
увеличение количества цитотоксических CD8+Т-лимфоцитов [347]. Данные факты в
совокупности указывают на вероятную миграцию лейкоцитов в зону маточно-плацентарного
контакта и частично подтверждается полученными нами in vitro данными об адгезии к
активированному эндотелию и трасэндотелиальной миграции лимфоцитов и моноцитов.
Установленная нами повышенная функция адгезии к активированному эндотелию лимфоцитов
женщин с преэклампсией, по-видимому, является недостаточным
условием для их
трансмиграции в отсутствии дополнительных хемокинов и цитокинов, секретируемых в
условиях воспаления в зоне маточно-плацентарного контакта при преэклампсии. Так как
уровень трансэндотелиальной миграции лимфоцитов был ниже у женщин с преэклампсией, чем
у женщин с физиологической беременностью, для определения возможных причин
наблюдаемого феномена необходим анализ экспрессии лейкоцитами периферической крови
адгезионных молекул и рецепторов к хемокинам, секретируемым в зоне маточноплацентарного контакта.
В
зоне
маточно-плацентарного
контакта
присутствуют
различные
хемокины,
секретируемые клетками плаценты и децидуальной оболочки. Клетки трофобласта секретируют
хемокины SDF-1 (CXCL12) [142]. Для клеток плаценты характерна секреция хемокина MCP-1,
в особенности при стимуляции клеток IL-1β и TNFα [198]. Хемокин MCP-1 также
секретируется клетками эндометрия и эндотелия сосудов матки при формировании окна
имплантации, а также после имплантации [71, 121]. Установленная нами повышенная
экспрессия
CD8+
Т-лимфоцитами
периферической
крови
рецепторов
к
хемокинам,
присутствующим в зоне маточно-плацентарного кровотока, вероятно, определяет привлечение
этих клеток в децидуальную оболочку и поддержание пула децидуальных Т-лимфоцитов,
109
количество которых возрастает к третьему триместру беременности [134]. В то же время Тлимфоциты могут мигрировать в лимфатические узлы, при этом их миграция в лимфатический
узел определяется взаимодействием с высоким эндотелием венул, который продуцирует
хемокины CCL19 (MIP-3β) и CCL21 (SLC) [247, 360]. В области хориона и децидуальной
оболочки в третьем триместре физиологической беременности наблюдается увеличение
экспрессии мРНК CCL19 и CCL21 [135]. Выявленная нами повышенная при физиологической
беременности экспрессия CD8+ Т-лимфоцитами CD197, связывающего хемокины CCL19 и
CCL21
[74],
может
способствовать
привлечению
цитотоксических
Т-лимфоцитов
в
децидуальную оболочку и регионарные лимфатические узлы матки.
Для эндотелиальных клеток венул с высоким эндотелием характерна экспрессия ICAM-1,
VCAM-1, MAdCAM-1 [36], которые являются лигандами адгезионных молекул Mac-1, VLA-4 и
α4β7 интегрина. Повышенная экспрессия субъединиц указанных адгезионных молекул,
установленная нами при физиологической беременности на CD8+ Т-лимфоцитах, может
способствовать адгезии этой популяции лимфоцитов к эндотелию лимфатических узлов матки.
Для эндотелиальных клеток спиральных артерий и клеток трофобласта установлена экспрессия
ICAM-1, VCAM-1, PECAM-1 [323]. В системе с использованием модельных животных также
выявлена экспрессия MAdCAM-1 эндотелиальными клетками сосудов матки [125]. В
экспериментах in vitro отмечено, что хемокин CCL21 стимулирует взаимодействие α4β7
интегринов Т-лимфоцитов с MAdCAM [247], экспрессия которого эндотелиальными клетками
сосудов матки установлена у мышей [125]. Поэтому отмеченная нами повышенная экспрессия
CD8+ Т-лимфоцитами периферической крови при физиологической беременности интегринов
α4 (CD49d) и β7 при одновременном повышении экспрессии CD197, рецептора для хемокинов
CCL19 и CCL21, также может способствовать адгезии этих лимфоцитов к эндотелию сосудов
децидуальной оболочки.
Формирующийся при беременности фето-плацентарный комплекс представляет собой
потенциальное место развития иммунного ответа при попадании в децидуальную оболочку
CD3+CD8+
Т-лимфоцитов,
так
как
содержит
полу-аллогенные
ткани
плода.
При
физиологической беременности NK-клетки децидуальной оболочки продуцируют IFNγ,
необходимый для физиологического формирования плаценты [327]. Установленная нами
повышенная интенсивность экспрессии рецептора к IFNγ (CD119) CD8+ Т-лимфоцитами у
женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными женщинами
указывает на повышение способности Т-лимфоцитов связывать IFNγ в случае миграции в
децидуальную оболочку при беременности. По данным литературы CD8+Т-лимфоциты
экспрессируют рецепторы ILT2, связывающие молекулы локуса HLA-G [156]. При связвании
молекул локуса HLA-G, экспрессированных на клетках трофобласта [206], индуцируется
110
толерантность CD8+ Т-лимфоцитов в отношении полу-аллогенного плода [206] при сохранении
способности CD8+ Т-лимфоцитов секретировать цитокины [282]. После взаимодействия CD8+
Т-лимфоцитов с растворимой формой HLA-G, секретируемой клетками трофобласта,
цитотоксические Т-лимфоциты экспрессируют на поверхности Fas (CD95). В то же время
клетки трофобласта экспрессируют на своей поверхности FasL [303]. Таким образом, при
взаимодействии Fas и FasL индуцируется гибель цитотоксических CD8+ лимфоцитов путем
апоптоза [156] и таким образом предотвращается развитие воспаления в случае миграции CD8+
Т-лимфоцитов в маточно-плацентарный комплекс при физиологической беременности.
При физиологической беременности клетки плаценты секретируют IL-15 [43]. При
стимуляции IL-15 Т-лимфоцитов периферической крови in vitro экспрессия этими клетками
адгезионной молекулы ICAM-1 (CD54) увеличивается [192], что косвенно подтверждается
нашими
данными
о
присутствии
повышенного
количества
CD8+
Т-лимфоцитов,
экспрессирующих CD54, в периферической крови женщин с физиологической беременностью.
Вероятно, при физиологической беременности в зоне маточно-плацентарного контакта
цитотоксические Т-лимфоциты подвергаются воздействию IL-15, что способствует повышению
экспрессии этими клетками адгезионных молекул ICAM-1 (CD54). Связывание ICAM-1 CD8+
Т-лимфоцитов приводит к их активации и секреции ими IFNγ [301]. Наряду с NK-клетками
CD8+ Т-лимфоциты децидуальной оболочки являются источником IFNγ [182, 240], на ранних
стадиях беременности определяющего миграцию клеток эктравиллезного трофобласта и
связанную с этим перестройку спиральных артерий [152]. В то же время молекулы локуса HLAG,
экспрессируемые
и
секретируемые
клетками
трофобласта
при
физиологической
беременности, препятствуют проявлению цитотоксической активности CD8+ Т-лимфоцитов
при одновременном повышении продукции ими IFNγ [156]. В третьем триместре беременности
выявлена секреция IFNγ децидуальными мононуклеарами [140]. В экспериментах in vitro
показана
способность
IFNγ
стимулировать
экспрессию
и
секрецию
индоламин-2,3-
диоксигеназы дендритными клетками и макрофагами [230]. Таким образом, IL-15 индуцирует
экспрессию CD54 на Т-лимфоцитах, вследствие связывания CD54 CD8+Т-лимфоцитов
происходит активация секреции ими IFNγ, который в свою очередь стимулирует экспрессию
индоламин-2,3-диоксигеназы дендритными клетками и макрофагами децидуальной оболочки.
Фермент индоламин-2,3-диоксигеназа приводит к уменьшению содержания триптофана в среде
и в следствие этого – к ограничению пролиферации Т-лимфоцитов и апоптозу активированных
Т-лимфоцитов
[249],
что
способствует
поддержанию
состояния
иммунологической
толерантности в отношении плода. Повышенную экспрессию CD54 CD8+ Т-лимфоцитами при
физиологической беременноси в этом случае можно рассматривать как компонент системы,
реализующей
состояние
толерантности
в
отношении
трофобласта.
Сниженная
при
111
преэклампсии секреция плацентой IL-15 [43] может являться причиной установленного в
настоящем исследовании сниженного количества CD54+CD8+ Т-лимфоцитов и пониженной
интенсивности экспрессии этими клетками CD54 при преэклампсии.
Выявленное
при
физиологической
беременности
увеличенное
количество
и
интенсивность экспрессии CD4+ Т-лимфоцитами хемокиновых рецепторов CD184 и CD192
определяет возможный механизм привлечения CD3+CD4+ Т-лимфоцитов в децидуальную
оболочку при физиологической беременности, так как продукция хемокинов SDF-1 и MCP-1
характерна для клеток децидуальной оболочки [135]. Так как хемокины CCL19 (MIP-3β) и
CCL21 (SLC) присутствуют в децидуальной оболочке [135] и секретируются эндотелиальными
клетками венул лимфатических узлов [247, 360], установленное нами увеличенное количество
CD4+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих рецептор к данным хемокинам (CD197), в
периферической крови отражает способность CD4+ Т-лимфоцитов к миграции, как в
регионарные лимфатические узлы матки, так и в децидуальную оболочку в третьем триместре
беременности. Установленное повышенное содержание в периферической крови CD4+ Тлимфоцитов, экспрессирующих рецептор к IFNγ – CD119, указывает на повышенную
восприимчивость CD4+ Т-лимфоцитов к воздействию IFNγ, присутствующего в зоне маточноплацентарного контакта.
При физиологической беременности в сыворотке крови и амниотической жидкости
беременных женщин обнаружено повышенное содержание хемокина CXCL13 (BCA-1) [241].
Этот хемокин секретируется моноцитами, лимфоцитами и дендритными клетками, участвует в
привлечении Т-лимфоцитов в очаг воспаления [241] и способствует формированию
герминативных центров лимфоидной ткани при инфекции и в очаге воспаления [350]. У
женщин с физиологической беременностью характер экспрессии рецептора к хемокину
CXCL13 – CXCR5 CD4+ Т-лимфоцитами не отличался от характера экспрессии этого хемокина
у здоровых небеременных женщин. Соответственно, миграция CD4+ Т-лимфоцитов в
децидуальную
оболочку
и
маточные
лимфатические
узлы,
возможно,
определяется
непосредственно повышением продукции хемокина CXCL13, которое было отмечено по
данным литературы, но не изменением характера экспрессии рецепторов к нему.
Обнаруженное у женщин с физиологической беременностью по сравнению с
небеременными женщинами повышенное количество CD4+ Т-лимфоцитов периферической
крови, экспрессирующих субъединицы адгезионной молекулы VLA-4 (CD29, CD49d) и α4β7
интегрина (CD49d, интегрин β7), и повышенная интенсивность экспрессии этими клетками
CD29, CD49d, интегрина β7 могут определять адгезию и миграцию лимфоцитов через
эндотелий при физиологической беременности. Дальнейшая миграция лимфоцитов в
децидуальную оболочку может способствовать формированию описанных ранее временных
112
лимфоидных образований в децидуальной оболочке - кластеров лимфоидных клеток [227, 331],
определяющих материнско-фетальные иммунологические взаимодействия.
Необходимо отметить, что установленная нами in vitro повышенная адгезия CD3+
лимфоцитов женщин с физиологической беременностью к активированному эндотелию по
сравнению с адгезией к интактному эндотелию может быть обусловлена не только повышением
экспрессии адгезионных молекул на эндотелиальных клетках, но и установленной повышенной
экспрессией CD3+CD4+ Т-лимфоцитами и CD3+CD8+ Т-лимфоцитами адгезионных молекул
CD29, CD49d, интегрина β7. Однако, нами не было выявлено различий между группами
небеременных женщин и женщин с физиологическим течением беременности в трансмиграции
лимфоцитов, что, вероятно, может объясняться недостатком осуществляющих привлечение
лимфоцитов хемокинов в использованной нами модельной системе in vitro.
Помимо функции адгезии поверхностные адгезионные молекулы могут являться
инициаторами запуска дифференцировки клеток. Так, связывание CD47, экспрессируемого
наивными CD4+Т-лимфоцитами и CD4+ Т-клетками памяти, полученными из периферической
крови матери, а также наивными CD4+Т-лимфоцитами пуповинной крови с TSP-1 приводит к
экстратимической дифференцировке этих клеток в регуляторные Т-клетки [137]. В плаценте
при физиологической беременности выявлены положительно-окрашенные на внеклеточный
гликопротеин TSP-1 области стромы ворсин [12]. Установленная нами увеличенная
интенсивность
экспрессии
физиологической
CD4+Т-лимфоцитами
беременности,
вероятно,
периферической
может
крови
способствовать
CD47
при
дифференцировке
регуляторных Т-лимфоцитов в случае миграции в децидуальную оболочку, где эти клетки
обеспечивают состояние иммунологической толерантности в системе «мать-плод».
Преэклампсия
сопровождается
повышенной
продукцией
децидуальными
и
плацентарными макрофагами TSP-1 [12]. Однако, при преэклампсии снижена экспрессия CD4+
Т-лимфоцитами CD47, что, вероятно, не позволяет в необходимом объеме обеспечивать
дифференцировку CD4+ T-лимфоцитов в Т-регуляторные лимфоциты и поддерживать
состояние толерантности иммунной системы матери в отношении плода. При преэклампсии в
плаценте и ворсинах хориона выявлены мононуклеарные инфильтраты [19], а в децидуальной
оболочке наблюдается увеличение количества цитотоксических CD8+Т-лимфоцитов [347]. При
преэклампсии
клетки
трофобласта
и
эндотелиальные
клетки
спиральных
артерий
экспрессируют адгезионные молекулы VCAM-1 [323]. Интегрин β7, наряду с VLA-4, является
лигандом для VCAM-1 [97]. Нами установлена сниженная экспрессия лигандов VCAM-1 CD29, CD49d и интегрин β7 CD3+CD4+Т-лимфоцитами при преэклампсии. Выявленное нами
снижение экспрессии адгезионных молекул CD3+CD8+ Т-лимфоцитами и CD3+CD4+Тлимфоцитами согласуется с нашими данными о сниженной при преэклампсии трансмиграции
113
этих популяций лимфоцитов через интактный и активированный эндотелий in vitro. Однако
установленная нами in vitro повышенная при преэклампсии адгезия лимфоцитов к
активированному эндотелию, а также повышенная более, чем в 6,5 раз интенсивность
экспрессии CD3+CD8+ Т-лимфоцитами CD18 могут определять повышенный адгезионный
потенциал CD8+Т-лимфоцитов в условиях in vivo. Для образования функционально активных
адгезионных молекул CD18 может вступать в комплекс с субъединицами CD11a, CD11b, CD11c
[78]. Поскольку при преэклампсии для СD8+ Т-лимфоцитов периферической крови женщин
характерна высокая интенсивность экспрессии CD11a на этих клетках образуется большое
количество адгезионных молекул LFA-1 (CD11a/CD18), которые участвуют в процессе адгезии
Т-лимфоцитов к эндотелиальным клеткам венул с высоким эндотелием [123].
Сниженное
при
преэклампсии
количество
цитотоксических
Т-лимфоцитов,
экспрессирующих изученные хемокиновые рецепторы, вероятно, связано со сложностью
организации механизма привлечения лейкоцитов в ткани и вероятным участием широкого
спектра хемокиновых рецепторов, участвующих в привлечении CD8+ Т-лимфоцитов в
децидуальную оболочку при преэклампсии. Так, в периферической крови небеременных
женщин присутствуют CD8+ Т-лимфоциты, экспрессирующие рецептор к этому хемокину –
CXCR6 [153], при развитии воспалительной реакции в очаге воспаления наблюдается
увеличение количества CXCR6+ CD8+ Т-лимфоцитов [244]. В экспериментах in vitro показано,
что хемокин CXCL16, секретируемый клетками трофобласта, вызывает направленную
миграцию CD8+ Т-лимфоцитов [153]. Экспрессия CXCL16 характерна для трофобласта как в
норме, так и при преэклампсии [283]. В совокупности с выше упомянутыми фактами и
принимая во внимание, что при преэклампсии нарушается индукция иммунологической
толерантности клеток иммунной системы в отношении клеток трофобласта, вероятно участие
CXCR6 в привлечении CD8+ Т-лимфоцитов в децидуальную оболочку, где развивается
воспалительная реакция, являющаяся важной составляющей патогенеза преэклампсии.
По данным литературы содержание CD4+Т-лимфоцитов в децидуальной оболочке не
различается при физиологической беременности и преэклампсии [267]. Так как при
преэклампсии экспрессия хемокиновых рецепторов CXCR5, CD196, CD197 и CD184 CD4+Тлимфоцитами периферической крови преимущественно была снижена, вероятно, эти рецепторы
не являются определяющими привлечение CD4+ Т-лимфоцитов в зону маточно-плацентарного
контакта. Например, при ювенильном ревматоидном артрите, патогенетическим механизмом
которого является миграция CD4+ Т-лимфоцитов в синовиальную жидкость суставной сумки,
установлено повышенное содержание хемокинов RANTES, IP-10 и TARC и CD4+ Тлимфоцитов, экспрессирующих рецепторы к этим хемокинам (CCR5, CXCR3 и CCR4), в
синовиальной жидкости [128]. В то же время в периферической крови при ювенильном
114
ревматоидном артрите содержание CD4+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих CCR5, CXCR3 и
CCR4, не отличалось от нормы [128]. Так как в зоне маточно-плацентарного контакта
экспрессируются хемокины TARC [320], RANTES и IP-10 [19], миграцию CD4+ Т-лимфоцитов
в децидуальную оболочку может определять экспрессия этими клетками рецепторов CCR5,
CXCR3 и CCR4. Возможно, также, что при преэклампсии популяция CD4+ Т-лимфоцитов
обладает сниженной экспрессией хемокиновых рецепторов, так как по нашим данным миграция
этих клеток через эндотелий снижена. По данным литературы CD4+ Т-лимфоциты могут
являться источником для экстратимической дифференцировки регуляторных Т-лимфоцитов
[137], играющих важную роль в поддержании толерантности иммунной системы матери в
отношении тканей плода [138, 156]. При преэклампсии количество Т-регуляторных
лимфоцитов в децидуальной оболочке снижено [254]. Приведенные факты подтверждают
предположение о сниженном мирационном потенциале CD4+Т-лимфоцитов при преэклампсии.
В децидуальной оболочке присутствуют NK-клетки, их содержание изменяется в течение
беременности. Как уже отмечено выше в первом триместре беременности NK-клетки
составляют до 70 % всех лейкоцитов децидуальной оболочки, а в третьем триметре их
содержание составляет около 3% от всех лейкоцитов [134]. По данным литературы пополнение
пула NK-клеток децидуальной оболочки происходит за счет миграции NK-клеток из
периферической крови [76]. Также в децидуальной оболочке обнаружены гемопоэтические
стволовые клетки, которые при культивировании в присутствии IL-15 и фактора стволовых
клеток SCF (stem cell factor) приобретают фенотип CD16– CD56bright децидуальных NK-клеток
[171]. По разным данным, для NK-клеток периферической крови характерна экспрессия
адгезионных молекул: LFA-1 (CD11a/CD18) [54], Mac-1 (CD11b/CD18) [177], PECAM-1 (CD31)
[351]. Нами установленная повышенная экспрессия NK-клетками адгезионных молекул CD29,
CD49d, интегрин β7 у женщин с физиологической беременностью обеспечивает формирование
функционально активных адгезионных молекул VLA-4 (CD29/CD49d) и CD49d/интегрин β7
[78]. Выявленные изменения экспрессии адгезионных молекул могут определять миграцию NKклеток
из
периферической
крови
в
децидуальную
оболочку
в
третьем
триместре
физиологической беременности [134]. Однако нами не было выявлено различий в адгезии и
трансмиграции in vitro популяции NK-клеток у женщин с физиологической беременностью и у
небеременных женщин, что, вероятно, связано с недостатком хемокинов в используемой нами
модели адгезии и трасмиграции in vitro по сравнению с ситуацией in vivo, в которой
функциональные изменения NK-клеток происходят под влиянием спектра хемокинов,
секретируемых плацентой (например, IP-10, CXCL12, SDF-1 [77, 142, 354]).
Для NK-клеток характерна экспрессия адгезионных молекул CD54 [364]. При добавлении
термически обработанного антигена Mycobacterium tuberculosis, экспрессия CD54 NK-клетками
115
возрастает [364]. С помощью конфокальной микроскопии установлено, что NK-клетки и γδТлимфоциты образуют синапсы с участием молекул CD54 и количество таких контактов
возрастает по мере продолжения времени их совместного культивирования [364]. В свою
очередь γδТ-лимфоциты наряду с NK-клетками присутствуют в децидуальной оболочке на
протяжении всей беременности [227], где за счет секреции IL-10 и TGFβ γδТ-лимфоциты
оказывают иммуносупрессорное действие [227]. Нами было выявлено повышенное количество
CD54+ NK-клеток в периферической крови при физиологической беременности. Возможно,
межклеточное взаимодействие с участием CD54 между γδТ-лимфоцитами и NK-клетками
обеспечивает
подавление
цитотоксической
активности
NK-клеток
и
способствует
приобретению NK-клетками периферической крови фенотипа децидуальных NK-клеток после
их привлечения в децидуальную оболочку.
У беременных с преэклампсией по сравнению с женщинами с физиологической
беременностью повышено количество NK-клеток, экспрессирующих CD11c, в периферической
крови. По-видимому, увеличенное количество NK-клеток, экспрессирующих CD11c, при
преэклампсии может частично обуславливать поддержание пула NK-клеток в децидуальной
оболочке при преэклампсии и пролонгировать воспалительную реакцию в зоне маточноплацентарного контакта [183].
Выявленное нами сниженное количество CD58+ NK-клеток в периферической крови у
женщин с преэклампсией по сравнению с женщинами с физиологической беременностью
может способствовать снижению количества активированных Т-лимфоцитов, так как через
адгезионную молекулу CD58 NK-клетки могут взаимодействовать с Т-лимфоцитами,
экспрессирующими ее лиганд CD2. В свою очередь взаимодействие CD2 – LFA-3 способствует
активации Т-лимфоцитов и их пролиферации [188]. Отметим, что связывание CD2 Тлимфоцитов приводит к активации внутриклеточного сигнального пути с участием белков
STAT, и в отличие от активации цитокинами носит более длительный характер [188]. Таким
образом, сниженное количество CD58+ NK-клеток в периферической крови при преэклампсии
можно рассматривать как компенсаторную реакцию организма, направленную на снижение
интенсивности воспаления в зоне маточно-плацентарного контакта.
Экспрессия других адгезионных молекул интегринового типа на NK-клетках определяет
возможность этих клеток мигрировать в ткани и в том числе в децидуальную оболочку и
поддерживать пул NK-клеток децидуальной оболочки, так лиганды этих рецепторов
экспрессированы на эндотелиальных клетках в зоне маточно-плацентарного контакта. Вместе с
тем, сниженная интенсивность экспрессии данных адгезионных молекул на NK-клетках при
преэклампсии согласуется с нашими данными о сниженной трансмиграции NK-клеток при
преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью. Необходимо отметить, что
116
NK-клетки женщин с преэклампсией в определенной, хоть и сниженной по сравнению с
физиологической беременностью, степени мигрировали в нижнюю камеру трансвела, что
отражает их потенциальную возможность реализации подобной функции in vivo. По данным
литературы, NK-клетки децидуальной оболочки из-за сниженной продукции молекул локуса
HLA-G в децидуальной оболочке при преэклампсии [186] могут активироваться и
реализовывать цитотоксическую активность в отношении клеток трофобласта [133] и, таким
образом, участвовать в развитии воспаления в зоне маточно-плацентарного контакта. Таким
образом, в случае реализации потенциальной возможности к миграции зону маточноплацентарного контакта NK-клетки могут способствовать гибели клеток трофобласта и
децидуальной оболочки. Образующиеся при этом в большом количестве в результате апоптоза
клеток апоптотические тельца способствуют активации макрофагов децидуальной оболочки,
что показано в модели in vitro [42].
В норме макрофаги децидуальной оболочки контролируют инвазию трофобласта и
ремоделирование
децидуальную
спиральных
оболочку
и
артерий
матки
дальнейшее
[40],
поэтому
пополнение
миграция
пула
моноцитов
макрофагов
в
определяет
физиологическое развитие плаценты. При беременности хемокин CXCL13 присутствует в
сыворотке периферической крови, пуповинной крови и амниотической жидкости [241].
Установленная нами повышенная экспрессия рецептора к CXCL13 (CXCR5) моноцитами
указывает на участие этого хемокина в привлечении моноцитов в децидуальную оболочку.
Учитывая выявленный низкий уровень экспрессии хемокиновых рецепторов к MCP-1 (CD192)
и к ELC и SLC (CD196) моноцитами можно предположить, что миграцию моноцитов при
беременности
определяют
другие
хемокиновые
рецепторы.
Так,
например,
клетки
децидуальной оболочки секретируют хемокины MCP-2, GM-CSF [288], IL-8 [19, 288], IP-10,
RANTES [19], которые индуцируют миграцию моноцитов [126] и могут опосредовать
пополнение пула макрофагов децидуальной оболочки.
Как уже отмечено выше при физиологической беременности для NK-клеток децидуальной
оболочки характерна высокая продукция IFNγ [327], способствующего активации макрофагов.
Установленная нами
повышенная интенсивность
экспрессии
CD54 моноцитами при
физиологической беременности также указывает на активированное состояние моноцитов и
согласуется с данными других исследователей [203]. Взаимодействие молекул локуса HLA-G,
экспрессированных клетками трофобласта, и рецепторов ILT2 и ILT4 на макрофагах изменяет
активность
макрофагов
децидуальной
оболочки
[292].
Также
при
физиологической
беременности IFNγ снижает миграционную активность моноцитов, что способствует
увеличению пула моноцитов в матке. Под влиянием IFNγ моноциты при физиологической
беременности
продуцируют
индоламин-2,3-диоксигеназу,
способствующую
индукции
117
толерантности иммунной системы матери [230]. Выявленная нами повышенная интенсивность
экспрессии CD119 моноцитами при физиологической беременности может способствовать
модулированию активности этих клеток.
У женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными, при
одинаковом количестве CD11c+ моноцитов, увеличена интенсивность экспрессии CD11c,
являющегося субъединицей интегрина αXβ2 (CD11c/CD18). Этот интегрин способен
связываться с лигандами на эндотелиальных клетках ICAM-1, VCAM-1 и ICAM-2. Так как для
эндотелия сосудов матки при физиологической беременности характерна экспрессия ICAM-1
[199, 323], VCAM-1 [323], повышенная экспрессия CD11c моноцитами при физиологической
беременности
определяет
возможность
моноцитов
адгезировать
к
эндотелию
при
физиологической беременности.
Среди макрофагов децидуальной оболочки выделяют макрофаги CD11chigh и CD11clow
[149]. Для децидуальных макрофагов с низкой экспрессией CD11c характерна экспрессия генов,
связанных с формированием компонентов внеклеточного матрикса, ростом ткани, и
межклеточной коммуникацией, в то время как децидуальным макрофагам с высокой
экспрессией CD11c в большей степени свойственна способность процессировать антигены и
выступать в роли антиген-презентирующих клеток [149]. Макрофагам CD11chigh децидуальной
оболочки свойственна экспрессия молекул CD1, вовлекаемых в презентацию липидных
антигенов Т-лимфоцитам [148]. Выявленная нами популяция моноцитов, обладающая
повышенной экспрессией CD11с, присутствующая в периферической крови женщин с
физиологической беременностью, может представлять собой предшественники популяции
макрофагов CD11сhigh децидуальной оболочки.
Кроме CD11c лигандом ICAM-1 эндотелиальных клеток является адгезионная молекула
Mac-1, экспрессируемая моноцитами. Субъединицей адгезионной молекулы Mac-1 является
CD11b. Установленное нами повышение количества CD11b+ моноцитов при физиологической
беременности согласуется с данными других исследователей [204]. Эндотелиальные клетки
сосудов матки также экспрессируют адгезионные молекулы MadCAM-1, взаимодействующие с
интегрином
α4β7
[125],
а
также
PECAM-1
(CD31),
опосредующие
взаимодействие
эндотелиальных клеток и моноцитов за счет образования гомофильных связей [261].
Выявленное нами при физиологической беременности увеличенное количество интегрин β7 +
моноцитов и CD11b+ моноцитов в периферической крови и повышенная интенсивность
экспрессии CD11b и CD31 этими клетками может способствовать миграции моноцитов в ткани,
и в том числе в децидуальную оболочку при физиологической беременности. Данное
предположение подтверждается нашими данными о повышенной in vitro адгезии и
трансмиграции моноцитов женщин с физиологической беременностью по сравнению с
118
моноцитами
небеременных
женщин
через
интактный
и
активированный
эндотелий.
Установленное нами увеличенное количество одной из субъединиц адгезионной молекулы
VLA-4 - CD29 на поверхности моноцитов при физиологической беременности может также
способствовать адгезии моноцитов к эндотелиальным клеткам.
Трансмиграция моноцитов через эндотелий обеспечивается взаимодействием CD47,
экспрессируемым моноцитами, и SIRPα, экспрессируемым эндотелиальными клетками [261].
Установленная нами повышенная экспрессия моноцитами адгезионной молекулы CD47 при
физиологической беременности может способствовать миграции моноцитов в децидуальную
оболочку. Кроме того, связывание CD47 моноцитов и интегрина αvβ3 может индуцировать
продукцию моноцитами TGFβ и блокировать синтез провоспалительных цитокинов [169], что
способствует физиологическому развитию плаценты.
Для активированных эндотелиальных клеток характерна экспрессия как P-селектина, так и
его лиганда PSGL-1, в то время как для моноцитов характерна экспрессия PSGL-1 [328]. Нами
установлено, что интенсивность экспрессии моноцитами другого лиганда PSGL-1 - CD62L
снижена у женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременным
женщинами. Вероятно, сниженное количество адгезионных молекул CD62L на моноцитах при
физиологической беременности компенсирует установленная нами увеличенная интенсивность
экспрессии P-селектина на моноцитах. Связывание P-селектина моноцитов с PSGL-1
эндотелиальных клеток может оказывать влияние на адгезию и миграцию моноцитов в
децидуальную оболочку при физиологической беременности.
Преэклампсия сопровождается значительным увеличением количества макрофагов в
децидуальной оболочке, а также повышением продукции MCP-1 клетками плаценты [198].
Хемокин MCP-1 индуцирует миграцию моноцитов в матку. Однако, в настоящем исследовании
не выявлено изменений в количестве моноцитов, экспрессирующих рецепторы к MCP-1
(CD192) у беременных с преэклампсией по сравнению с женщинами с физиологической
беременностью. Таким образом, увеличение количества моноцитов децидуальной оболочки
обусловлено увеличением продукции MCP-1 клетками плаценты при преэклампсии [198], но не
повышением количества рецепторов к этому хемокину на моноцитах. При преэклампсии кроме
повышенной экспрессии MCP-1 также повышена продукция IP-10 и IL-8 клетками
децидуальной оболочки и плаценты [306]. Поэтому наряду с MCP-1 миграция моноцитов в
децидуальную оболочку при преэклампсии может определяться хемокинами IP-10 и IL-8.
При преэклампсии в децидуальной оболочке повышено содержание IFNγ [237]. Цитокин
IFNγ индуцирует увеличение экспрессии костимулирующих молекул, секрецию хемокинов и
цитокинов макрофагами [286]. Увеличенное количество CD119+ моноцитов и усиленная
экспрессия моноцитами CD119 при преэклампсии по сравнению с физиологической
119
беременностью может способствовать модулированию функций моноцитов при преэклампсии.
Кроме того, IFNγ оказывает влияние на экспрессию моноцитами поверхностных молекул,
например, на экспрессию гликопротеина CD36, связывающего TSP-1 [357], секретируемого
плацентой при преэклампсии [12]. Полученные нами данные о сниженной экспрессии CD36
моноцитами
периферической
крови
при
преэклампсии
согласуются
с
данными,
представленными в литературе [357].
При преэклампсии выявлено сниженное количество молекул CD47 на моноцитах. Однако,
процесс трансмиграции моноцитов через эндотелий опосредован, наряду с CD47, адгезионными
молекулами CD31 [261]. Таким образом, выявленная в настоящем исследовании сниженная
интенсивность экспрессии CD47 моноцитами при преэклампсии указывает на участие других
адгезионных молекул в процессе трансмиграции. Под влиянием провоспалительных цитокинов
(IL-1β и TNFα) при преэклампсии клетки трофобласта экспрессируют ICAM-1, LFA-1 и VCAM1 [81]. При этом характер экспрессии моноцитами лигандов указанных адгезионных молекул
эндотелиальных клеток не различался между группами беременных женщин. Так как данные
адгезионные молекулы-лиганды (CD11a, CD11b, CD18, CD29) присутствуют на моноцитах при
преэклампсии, появление адгезионных молекул ICAM-1 и VCAM-1 на клетках трофобласта в
условиях
воспалительной
реакции
при
преэклампсии
[81]
может
стимулировать
взаимодействие моноцитов с клетками трофобласта. Сниженная интенсивность экспрессии
моноцитами периферической крови CD54 у женщин с преэклампсией по сравнению с
женщинами с физиологической беременностью указывает на понижение количества этих
адгезионных молекул на моноцитах. Вероятно, моноциты с высоким уровнем экспрессии CD54,
присутствующие в периферической крови при физиологической беременности и пополняющие
пул децидуальных макрофагов, в случае преэклампсии мигрировали в децидуальную оболочку
в ответ на развивающуюся там воспалительную реакцию. Данное предположение в
определенно мере подтверждается полученными нами данными о повышенной адгезии и
трансмиграции моноцитов при преэклампсии.
При развитии воспалительной реакции в очаг воспаления активно мигрируют
нейтрофилы, поэтому нами также проведен анализ экспрессии хемокиновых рецепторов и
адгезионных молекул нейтрофилами у женщин с физиологической беременносью и у женщин с
преэклампсией. Установленое нами увеличенное количество нейтрофилов периферической
крови, экспрессирующих рецептор IFNγ (CD119) и повышенная интенсивность экспрессии
этими клетками CD119 при физиологической беременности по сравнению с небеременными
женщинами указывает на повышенную способность нейтрофилов отвечать на стимуляцию IFNγ
и готовность этих клеток к реализации защитной реакции. Несмотря на одинаковый уровень
экспрессии CD119 нейтрофилами периферической крови при неосложненной и осложненной
120
преэклампсией беременности, в случае преэклампсии CD119+ нейтрофилы потенциально могут
связывать IFNγ, присутствующий в большом количестве в децидуальной оболочке при этой
патологии [347].
Активированные NK-клетки способствуют поддержанию жизнеспособности нейтрофилов
и влияют на функциональное состояние нейтрофилов как с помощью цитокинов (IFNγ), так и
непосредственно, образуя прямой контакт [95]. В результате совместного культивирования
нейтрофилов и активированных NK-клеток происходит снижение количества нейтрофилов,
подвергшихся апоптозу, повышение экспрессии нейтрофилами CD64 и СD11b [95]. Также
предшествовавший
контакт
с
активированными
NK-клетками
вызывает
повышенную
продукцию нейтрофилами супероксид-анионов в ответ на белковые антигены бактерий [95]. В
модельной системе установлено, что NK-клетки образуют контакт с клетками-мишенями,
экспрессирующими CD58 (LFA-3), и в особенности совместно экспрессирующими CD58 и
CD54 (ICAM-1) [55]. Таким образом, обнаруженное нами высокое содержание нейтрофилов,
экспрессирующих
CD54
при
физиологической
беременности
определяет
готовность
нейтрофилов к взаимодействию с NK-клетками. Однако, при физиологической беременности
инфильтрация нейтрофилами децидуальной оболочки и плаценты отсутствует [70]. При
преэклампсии нейтрофилы присутствуют в децидуальной оболочке и плаценте [70], что
определяет возможность их контакта с другими клетками децидуальной оболочки. Поскольку
активация нейтрофилов происходит с участием адгезионных молекул CD54 [310], за счет
высокой экспрессии CD58 и CD54 нейтрофилы при преэклампсии могут активироваться in situ
NK-клетками и способствовать развитию воспалительной реакции после миграции в
децидуальную
оболочку.
Отмеченное
нами
сниженное
количество
нейтрофилов,
экспрессирующих CD58, в периферической крови беременных с преэклампсией по сравнению с
женщинами с физиологической беременностью может являться следствием компенсаторного
снижения экпрессии этой молекулы на нейтрофилах. С другой стороны, количество CD58+
нейтрофилов в периферической крови может быть снижено в связи с участием активированных
нейтрофилов в воспалительной реакции в зоне маточно-плацентарного контакта и,
соответственно, миграцией нейтрофилов в очаг воспаления.
При преэклампсии повышена продукция провоспалительных цитокинов [19, 27, 324, 347].
Попадая в зону маточно-плацентарного контакта предактивированные CD119+ нейтрофилы
подвергаются влиянию провоспалительных цитокинов, что может способствовать повышению
экспрессии адгезионных молекул на этих клетках и способствовать их адгезии к эндотелию
капилляров при преэклампсии [72]. В свою очередь взаимодействие эндотелиальных клеток и
нейтрофилов при преэклампсии способствует нарушению микроциркуляции, продукции
нейтрофилами активных форм кислорода и развитию эндотелиальной дисфункции [72].
121
По данным, описанным в литературе, адгезионная молекула PECAM-1 (CD31) определяет
активацию [115] и трансэндотелиальную миграцию нейтрофилов [205]. Однако в настоящем
исследовании нами отмечено снижение количества CD31+ нейтрофилов периферической крови
при преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью. Принципиальных
различий экспрессии других адгезионных молекул и рецепторов к хемокинам между
обследованными группами женщин выявлено не было.
Таким образом, физиологическая беременность сопровождается секрецией клетками
децидуальной оболочки и плаценты IFNγ [327], SDF-1 [142], CXCL16 [153], MCP-1 [19, 71,
121], CCL19 и CCL21 [74], CXCL13 [241], TARC [320], RANTES, IL-8, IP-10 [19], влияющих на
характер экспрессии лейкоцитами поверхностных молекул и определяющих привлечение
разных популяций лейкоцитов в децидуальную оболочку и регионарные лимфатические узлы.
Повышенная функция адгезии лимфоцитов периферической крови к активированному
эндотелию при физиологической беременности и повышенная экспрессия CD8+ Тлимфоцитами и CD4+ Т-лимфоцитами хемокиновых рецепторов CD184, CD192, CD197, CD119
может являться предрасполагающим фактором для привлечения этих популяций Т-лимфоцитов
в децидуальную оболочку и регионарные лимфатические узлы. Повышенная экспрессия
адгезионных молекул CD29, CD49, CD11b, CD11c, интегрин β7 может опосредовать миграцию
CD8+ Т-лимфоцитов в децидуальную оболочку, где они участвуют в секреции цитокинов IL-6,
IL-10, IFNγ, TGFβ, IL-12 [347]. При связывании молекулы CD54, экспрессируемой при
физиологической беременности CD8+ Т-лимфоцитами, происходит индукция синтеза IFNγ ими
[301], который повышает экспрессию фермента индоламин-2,3-диоксигеназы макрофагами
децидуальной оболочки и поддерживает состояние иммунологической толерантности в зоне
маточно-плацентарного контакта [230]. Миграция CD4+ Т-лимфоцитов может определяться
повышенной экспрессией адгезионных молекул CD29, CD49d, интегрин β7. В случае миграции
в децидуальную оболочку при участии рецептора CD47 CD4+ Т-лимфоциты могут
дифференцироваться в Т-регуляторные клетки in situ [137] и поддерживать толерантность
лейкоцитов
в
отношении
полу-аллогенных
клеток
трофобласта.
Для
NK-клеток
периферической крови при физиологической беременности характерна повышенная экспрессия
адгезионных молекул CD29, CD49d и интегрина β7, которые могут определять миграцию этих
клеток в децидуальную оболочку. За счет повышенной экспрессии CD54 при физиологической
беременности NK-клетки могут образовывать контакты с γδТ-лимфоцитами децидуальной
оболочки [364] и подвергаться иммуносупрессорному воздействию γδТ-лимфоцитов [190], в
результате чего могут приобретать регуляторные свойства, характерные для CD56bright NKклеток. Физиологическая беременность сопровождается присутствием в периферической крови
повышенного количества CXCR5+ моноцитов, что свидетельствует об участии хемокина
122
CXCL13 в привлечении моноцитов в децидуальную оболочку. Отсутствие значимых различий в
экспрессии других хемокиновых рецепторов и повышенная in vitro адгезия и трансмиграция
моноцитов при физиологической беременности указывает на определяющую роль уровня
экспрессии других хемокинов (MCP-2 [288], IL-8 [19, 288], IP-10, RANTES [19]) клетками
децидуальной оболочки при физиологической беременности в контроле привлечения
моноцитов в зону маточно-плацентарного контакта. Повышенная экспрессия
CD11с
моноцитами периферической крови при физиологической беременности, наряду с повышенной
экспрессией CD11b, CD29, интегрина β7, CD47, CD31, может определять миграцию моноцитов
в децидуальную оболочку и пополнение популяции CD11сhigh макрофагов, которые
секретируют MIP-1β, IL-10, IL-6, TNF-α, TGF-β [149]. Выявленное нами повышение экспрессии
нейтрофилами рецептора к IFNγ, секретируемому NK-клетками при физиологической
беременности [327], может быть связано с готовностью нейтрофилов к реализации защитной
реакции.
Для
патогенетического
процесса
преэклампсии
характерно
развитие
местной
воспалительной реакции в маточно-плацентарном комплексе [183], что может провоцировать
установленные
нами
изменения
фенотипа
Т-лимфоцитов,
NK-клеток,
моноцитов
и
нейтрофилов периферической крови. На фоне общей сниженной экспрессии адгезионных
молекул CD8+ Т-лимфоцитами более, чем в 6,5 раз была повышена экспрессия CD18. В
совокупности с высоким уровнем экспрессии CD11a повышенная экспрессия CD18 может в
определенной мере регулировать миграцию CD8+ Т-лимфоцитов в регионарные лимфатические
узлы и развитие цитотоксического иммунного ответа в отношении клеток трофобласта.
Сниженная экспрессия хемокиновых рецепторов CD4+ Т-лимфоцитами, отсутствие различий в
экспрессии адгезионных молекул при физиологической беременности и при преэклампсии и
сниженная функция трансмиграции CD4+ Т-лимфоцитов свидетельствуют о сниженном
миграционном потенциале этих клеток при осложненной преэклампсией беременности. В то же
время сниженная экспрессия CD47 CD4+ Т-лимфоцитами при преэклампсии может лежать в
основе сниженной дифференцировки Т-регуляторных клеток из CD4+Т-лимфоцитов [137], что
может усугублять дисбаланс толерогенных и противотолерогенных факторов в зоне маточноплацентарного контакта. Для NK-клеток периферической крови при преэклампсии характерна
повышенная экспрессия CD11c, что определяет миграцию NK-клеток в децидуальную оболочку
и способствует развитию цитотоксических реакций в отношении клеток трофобласта.
Проведенные функциональные тесты показали, что в целом адгезия лимфоцитов к
активированному эндотелию повышена, однако процесс трансмиграции лимфоцитов остается
незавершенным, так как количество лимфоцитов, мигрировавших через эндотелий in vitro,
остается сниженным при преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью.
123
Однако, нарушение механизмов индукции толерантности лейкоцитов при преэклампсии может
приводить к развитию воспаления в децидуальной оболочке даже на фоне сниженной миграции
лимфоцитов в зону маточно-плацентарного контакта. Выявленное нами сниженное количество
CD58+ NK-клеток в периферической крови при преэклампсии может
снижать их
взаимодействия с Т-лимфоцитами через CD2 и таким образом снижать количество
активированных Т-лимфоцитов. Сниженное количество CD58+ NK-клеток отражает наличие
компенсаторной реакции, направленной на снижение интенсивности воспаления в зоне
маточно-плацентарного контакта. Характер экспрессии моноцитами адгезионных молекул в
целом не различается при физиологической беременности и при преэклампсии, однако
появление адгезионных молекул ICAM-1 и VCAM-1 на клетках трофобласта в условиях
воспалительной реакции при преэклампсии [81] определяет взаимодействие моноцитов с
клетками трофобласта. Кроме того, установленная нами in vitro повышенная адгезия моноцитов
при преэклампсии свидетельствует о возможности моноцитов мигрировать в ткани, эндотелий
которых находится в активированном состоянии, и в том числе в децидуальную оболочку при
преэклампсии. Учитывая то, что при преэклампсии повышена экспрессия IFNγ в децидуальной
оболочке [237], повышенная экспрессия моноцитами рецептора к IFNγ способствует их
активации. Высокая экспрессия CD119 нейтрофилами периферической крови может
способствовать активации нейтрофилов при попадании их в зону маточно-плацентарного
контакта, отсутствие различий между физиологической беременностью и преэклампсией
указывает на ведущую роль изменения содержания факторов, секретируемых децидуальной
оболочкой и плацентой, в инициации воспалительной реакции. Выявленные изменения
фенотипа лейкоцитов и их функциональных характеристик наряду с данными литературы
отражают активированное состояние клеток периферической крови при преэклампсии. Так как
одной из популяций лейкоцитов, играющих важную роль в регуляции развития беременности
являются
NK-клетки
[76],
на
следующем
этапе
работы
была
проведена
оценка
функционального состояния NK-клеток периферической крови при беременности.
Одними из клеток, мигрирующих в децидуальной оболочку и присутствующих в зоне
маточно-плацентарного контакта в течение всего срока физиологической беременности,
являются NK-клетки [134]. При физиологической беременности NK-клетки являются основным
источником IFNγ [327], модулирующего активность клеток, присутствующих в децидуальной
оболочке, и необходимого для нормального формирования плаценты [316, 327]. При
преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью количество NK-клеток
повышено в децидуальной оболочке [347], а также в периферической крови [20]. Полученные
результаты дополняют описанные ранее данные и указывают на то, что преэклампсия по
сравнению
с
физиологической
беременностью
характеризуется
как
повышенным
124
относительным количеством, так и абсолютным количеством NK-клеток в периферической
крови.
Функциональная активность NK-клеток в настоящей работе оценивалась по экспрессии
клетками CD107a - гликопротеина, ассоциированного с лизосомальными мембранами клеток.
Подобный метод измерения активности NK-клеток дает возможность непосредственно
оценивать количество дегранулировавших NK-клеток [45]. Данный метод сопоставим с
классическим методом оценки цитотоксической активности NK-клеток в отношении клеток
линии K562. Кроме того, результаты, полученные методом оценки экспрессии CD107a,
коррелируют с активностью продукции NK-клетками IFNγ и TNFα, что позволяет считать
экспрессию CD107a полноценно отражающей степень функциональной активности NK-клеток
[45].
Установленное нами повышение количества активированных NK-клеток и экспрессии
ими молекулы CD107a при инкубации в присутствии активатора во всех группах указывает на
способность
NK-клеток
отвечать
на
стимуляцию.
При
сравнении
групп
здоровых
небеременных женщин и женщин с физиологической беременностью не выявлено различий в
количестве CD107a+ NK-клеток и интенсивности экспрессии ими CD107a, что указывает на
сходный уровень функциональной активности NK-клеток этих групп женщин. При
преэклампсии количество активированных CD107a+ NK-клеток было снижено после инкубации
в присутствии активатора, что согласуется с данными о сниженной активности NK-клеток в
отношении клеток линии К562 при преэклампсии [44], а также свидетельствуют о сниженной
гранзим-опосредованной цитотоксической активности NK-клеток при преэклампсии.
Среди прочих адгезионных молекул NK-клетки экспрессируют молекулы CD54,
блокирование которых антителами приводит к снижению цитотоксической активности NKклеток в отношении клеток линии К562, а также к снижению цитотоксической активности NKклеток, вызванной PMA и иономицином [88]. В наших экспериментах инкубация
мононуклеаров в присутствии активатора приводила к снижению интенсивности экспрессии
CD54 активированными NK-клетками у здоровых небеременных женщин, а у женщин с
физиологической беременностью – к уменьшению количества активированных CD54+ NKклеток. Перечисленные факты указывают на то, что у небеременных женщин инкубация
лимфоцитов в присутствии активатора приводит к снижению роли молекулы CD54 в регуляции
цитотоксической активности NK-клеток. При физиологической беременности эта тенденция
сохраняется. Кроме того CD107a+ NK-клетки не изменяют характер экспрессии молекулы
CD54 в группах здоровых небеременных женщин и женщин с физиологической беременностью
независимо от условий инкубации, что свидетельствует о сходном уровне функциональной
активности NK-клеток этих групп женщин.
125
При преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью в случае инкубации
мононуклеаров без активатора снижена экспрессия молекулы CD54 NK-клетками, что
свидетельствует о снижении способности интактных NK-клеток при преэклампсии отвечать на
ингибирующие цитотоксичность сигналы, опосредованные молекулой CD54. Вместе с тем
после активации NK-клеток беременных с преэклампсией интенсивность экспрессии ими
молекулы CD54 усиливается и достигает уровня интенсивности экспрессии этой молекулы NKклетками женщин с физиологической беременностью. Таким образом, активация NK-клеток
может приводить к восстановлению роли молекулы CD54 в регуляции цитотоксических
эффектов NK-клеток при данной патологии. Однако сниженная экспрессия CD107a
активированными NK-клетками и изменение регуляции экспрессии молекулы CD54 указывают
на
нарушение
механизма
гранзим-опосредованной
цитотоксичности
NK-клеток
при
преэклампсии.
Помимо механизма высвобождения гранзимов и перфорина NK-клетки также могут
индуцировать гибель клеток-мишеней за счет экспрессии TRAIL [228]. Рецепторы для TRAIL
присутствуют на клетках ворсинчатого трофобласта в течение всего срока беременности [86].
Установленное нами повышенное количество TRAIL+ NK-клеток при преэклампсии
свидетельствует
об
интенсификации
именно
этого
механизма
индукции
апоптоза.
Ингибирование гранзим-опосредованной цитотоксичности NK-клеток может сопровождаться
активацией альтернативных механизмов реализации цитотоксичности, например за счет
повышенной экспрессии CD95L и TRAIL, благодаря которой NK-клетки активно уничтожают
опухолевые
клетки
[173].
Вероятно,
нарушение
механизма
гранзим-опосредованной
цитотоксичности NK-клеток при преэклампсии может быть результатом продукции цитокинов
клетками плаценты и децидуальной оболочки в условиях воспаления. Так, TGFβ в присутствии
простагландина E2 подавляет гранзим-опосредованную цитотоксичность NK-клеток [209].
Несмотря на это NK-клетки в условиях патологического процесса сохраняют цитотоксическую
активность за счет повышенной экспрессии TRAIL.
Таким образом, при физиологической беременности функциональная активность NKклеток, связанная с высвобождением перфорина и гранзимов, и с экспрессией TRAIL, не
отличается от таковой у небеременных женщин. При стимуляции активность NK-клеток при
физиологической беременности повышается также, как и у небеременных женщин, что
указывает
на
отсутствие
изменений
в
функциональном
состоянии
этих
клеток
в
периферической крови. При преэклампсии изменяется функциональная активность NK-клеток,
что проявляется в изменении стратегии индукции гибели клеток-мишеней. В этом случае на
первый план выходит TRAIL-опосредованная индукция апоптоза, а механизм индукции гибели
клеток, основанный на высвобождении гранзимов и перфорина, отступает на второй план.
126
В результате апоптоза клеток, а также в результате их активации клетки могут
образовывать микрочастицы [154]. Секретируемые в зоне маточно-плацентарного комплекса
цитокины также могут способствовать формированию микрочастиц различными клетками,
присутствующими в децидуальной оболочке. Наличие микрочастиц различных клеток в
периферической крови и их соотношение является одним из показателей состояния фетоплацентарного комплекса, поэтому следующим этапом работы стала оценка содержания
микрочастиц клеточного происхождения в периферической крови.
Исследование микрочастиц сопряжено с трудностями их визуализации. Одним из
общепринятых методов морфометрического анализа микровезикул является атомно-силовая
микроскопия. С помощью данного метода установлено, что используемый нами протокол
фракционирования микрочастиц плазмы крови, позволил получить фракцию со средним
размером микрочастиц 330 нм. Эти данные хорошо согласуются с результатами атомносиловой микроскопии микрочастиц плазмы крови, описанными в литературе, и подтверждают,
что исследуемые препараты плазмы крови в большом количестве содержат микрочастицы
[361].
Установленное повышенное общее количество микрочастиц в плазме периферической
крови у женщин при физиологической беременности по сравнению с небеременными
женщинами отражает активно протекающие процессы межклеточных взаимодействий в
области фето-плацентарного комплекса. Группа женщин с физиологической беременностью и
группа женщин с преэклампсией не различались по общему количеству микрочастиц в плазме
периферической крови, что согласуется с данными других исследователей [330]. Во время
беременности общее количество микрочастиц преимущественно представлено фракцией
тромбоцитарного происхождения (97–99%). Особое значение во время беременности имеют
плацентарные микрочастицы, число которых прогрессивно возрастает на протяжении всей
беременности. В периферической крови также присутствуют микрочастицы эндотелиального
происхождения [66]. Взаимодействие эндотелиальных клеток с лейкоцитами крови в сосудах
децидуальной оболочки и в плаценте может способствовать образованию микрочастиц
лейкоцитами, поэтому следующим этапом работы была оценка содержания микрочастиц,
несущих на своей поверхности лейкоцитарные маркеры.
Определяемые в настоящей работе поверхностные маркеры лейкоцитов не являются узко
специфичными, и их экспрессия характерна для нескольких типов клеток, присутствующих в
периферической крови (таблица 10).
127
Таблица 10. Экспрессия поверхностных маркеров основными популяциями лейкоцитов
периферической крови
Поверхностные
маркеры
Основные популяции лейкоцитов периферической крови,
экспрессирующие указанные поверхностные маркеры
CD45
Все лейкоциты [291]
CD3
Т-лимфоциты [291], NKT-клетки [59]
CD4
Хелперные Т-лимфоциты [164, 208], регуляторные Tлимфоциты [164]
CD8
Цитотоксические Т-лимфоциты [208]
CD16
NK-клетки [291], нейтрофилы [352], моноциты [367]
CD56
NK-клетки [124], NKT-клетки [326]
CD14
Нейтрофилы [143], моноциты [367]
CD62L
Т-лимфоциты [191], NK-клетки [191], нейтрофилы [343],
моноциты [203]
CD62P
Моноциты [163]
CD54
Т-лимфоциты [191, 318], моноциты [203], NK-клетки [191]
CD3+ CD45+
Т-лимфоциты [229], NKT-клетки [229]
CD45+ CD16+ CD56+
NK-клетки [356]
CD45+ CD16+
Нейтрофилы [114], моноциты [146], NK-клетки [356]
CD45+ CD56+
NK-клетки [356]
CD56+ CD16+
NK-клетки [73]
CD45+ CD14+
Нейтрофилы [275], моноциты [146, 365]
CD3+ CD4+
Хелперные Т-лимфоциты [229]
CD3+ CD8+
Цитотоксические Т-лимфоциты [229]
CD14+ CD54+
Моноциты [296]
CD3+ CD54+
Активированные хелперные Т-лимфоциты [318],
активированные цитотоксические Т-лимфоциты [301]
CD45+ CD14+ CD54+
Моноциты [203]
CD45+ CD3+ CD54+
CD45+ CD62L+
Активированные хелперные Т-лимфоциты [318],
активированные цитотоксические Т-лимфоциты [301]
Нейтрофилы [82], моноциты [203], Т-лимфоциты [191],
NK-клетки [191]
CD45+ CD62P+
Моноциты [163, 281]
CD45+ CD62L+
CD62P+
Моноциты [163, 281]
128
Так, экспрессия CD62P и CD54 помимо лейкоцитов характерна также для эндотелиальных
клеток. В связи с этим говорить об изменениях содержания микрочастиц различного
происхождения можно только при сравнительном анализе всей группы определенных
микрочастиц. В настоящее время обсуждается сигнальная функция микрочастиц клеток. С этой
точки зрения микрочастицы являются своего рода мембранными контейнерами, содержащими в
составе своей мембраны и внутри себя различные сигнальные молекулы [214]. Несмотря на
низкое относительное количество микрочастиц, несущих пан-лейкоцитарный маркер CD45
(0,7%) их роль в межклеточной коммуникации при беременности может быть значительной
благодаря экспрессии рецепторов и содержанию внутри микрочастиц цитокинов и других
регуляторных молекул. Изменение содержания лейкоцитарных микрочастиц может отражать
процессы, проходящие в зоне маточно-плацентарного контакта.
По нашим данным физиологическая беременность сопровождается появлением в
периферической крови повышенного количества микрочастиц экспрессирующих CD16 и CD54,
образованных основными популяциями лейкоцитов периферической крови (лимфоцитами,
моноцитами, NK-клетками, нейтрофилами). Источником CD16+ микрочастиц могут являться
как NK-клетки, так и нейтрофилы и моноциты. Адгезионная молекула CD54 экспрессирована
на разных популяциях лейкоцитов [192, 203, 271], а также на эндотелиальных клетках
преимущественно после активации [239].
При физиологической беременности клетки плаценты продуцируют растворимую форму
молекул локуса HLA-G – sHLA-G [156]. Установлено, что связывание NK-клеток и
активированных Т-лимфоцитов с sHLA-G может индуцировать их апоптоз [193, 363].
Учитывая, что у женщин при физиологической беременности по сравнению с небеременными
женщинами повышено количество микрочастиц с фенотипом CD45+CD16+CD56+ и CD45–
CD16+CD56+, можно предположить, что наличие повышенного количества микрочастиц с
фенотипом CD16+ и CD54+ является преимущественно следствием гибели цитотоксических
NK-клеток, а также активированных Т-лимфоцитов. Индукция гибели этих популяций клеток
может способствовать поддержанию иммунологической толерантности иммунной системы
матери в отношении полу-аллогенного плода.
Преэклампсия сопровождается нарушением механизмов поддержания иммунологической
толерантности, что выражается в снижении экспрессии клетками трофобласта молекул локуса
HLA-G [242] и секреции sHLA-G [83]. В этом случае не происходит гибель цитотоксических
NK-клеток, что отражается в полученных нами результатах – сниженном почти в 12 раз
количестве микрочастиц с фенотипом CD45+CD16+CD56+ при преэклампсии по сравнению с
физиологической беременностью. При этом количество микрочастиц CD45–CD16+CD56+ у
женщин с преэклампсией такое же, как у женщин с физиологической беременностью, а
129
количество CD45+CD16–CD56+ микрочастиц вдвое выше. При физиологической беременности
в
децидуальной
оболочке
присутствует
большое
количество
NK-клеток
матки
(CD16dimCD56bright). При преэклампсии количество клеток этой популяции NK-клеток в матке
снижено [349]. Вероятно, выявленное нами повышенное количество микрочастиц фенотипом
CD45+CD16–CD56+ отражает снижение количества клеток именно этой популяции в
децидуальной оболочке и является следствием гибели NK-клеток матки. Учитывая, что
лимфоциты с фенотипом CD16dimCD56bright обладают преимущественно регуляторными
функциями в отличие от CD16brightCD56dim, определяющих цитотоксические эффекты, можно
предполагать, что при преэклампсии преобладающей в маточно-плацентарной зоне становится
популяция NK-клеток с преимущественно цитотоксическим потенциалом.
Источником микрочастиц с фенотипом CD45+CD16+CD56– могут быть NK-клетки,
моноциты и нейтрофилы. Выявленное нами повышенное количество этих микрочастиц в
плазме крови у женщин с преэклампсией согласуется с данными других исследователей,
которые установили, что при этой патологии в периферической крови наблюдается
повышенное количество микрочастиц моноцитарного происхождения [201]. При преэклампсии
повышенное количество микрочастиц с фенотипом CD45+CD16+CD56– наряду с данными о
сниженном
количестве
микрочастиц,
образуемых
NK-клетками
(CD45+CD16+CD56+),
позволяет предположить преимущественное происхождение микрочастиц с фенотипом
CD45+CD16+CD56– в первую очередь из моноцитов и нейтрофилов. Вероятно, эти
микрочастицы могут образовываться в результате активации моноцитов в зоне маточноплацентарного контакта при преэклампсии [219]. Нейтрофилы при преэклампсии также
находятся в активированном состоянии, о чем свидетельствует повышение экспрессии ими
адгезионных молекул и повышенная продукция активных радикалов кислорода [90]. Гибель
нейтрофилов путем апоптоза при преэклампсии снижена по сравнению с физиологической
беременностью [336]. Учитывая эти данные, а также то, что в плаценте при преэклампсии
развивается
воспалительный
процесс,
нельзя
отрицать
возможности
образования
CD45+CD16+CD56– микрочастиц нейтрофилами при их активации. Так как микрочастицы
могут содержать провоспалительные цитокины, микрочастицы нейтрофильного происхождения
также могут способствовать развитию воспалительной реакции при преэклампсии.
Таким образом, при физиологической беременности повышено содержание микрочастиц,
образованных
основными
популяциями
лейкоцитов,
что
позволяет
расценивать
иммунологическую толерантность не просто как иммунорегуляцию, а как отражение активных
иммунных взаимодействий организмов матери и плода. При преэклампсии снижено количество
микрочастиц, образованных NK-клетками, что может быть связано с нарушением механизмов
развития иммунологической толерантности при беременности, а именно дефектом в индукции
130
гибели активированных NK-клеток. Преэклампсия сопровождается присутствием в циркуляции
повышенного количества микрочастиц, образованных нейтрофилами и моноцитами, что,
вероятно, связанного с развитием ключевого патогенетического процесса преэклампсии воспалительной реакции. Микрочастицы, присутствующие в плазме крови, могут связываться с
клетками через рецепторы на их поверхности, а также по средством прямого слияния мембран
[214] и таким образом оказывать влияние на функциональные характеристики клеток.
Следующим этапом работы была оценка влияния микрочастиц плазмы крови беременных
женщин с физиологической беременностью и с преэклампсией на фенотипические
характеристики моноцитоподобных клеток линии THP-1.
Для оценки влияния микрочастиц плазмы крови беременных женщин на фенотипические
свойства
клеток
использовали
интактные
и
предварительно
активированные
TNFα
моноцитоподобные клетки линии THP-1. Добавление TNFα приводило к изменению некоторых
фенотипических признаков моноцитоподобных клеток линии THP-1. Так, инкубация клеток
линии THP-1 в присутствии TNFα стимулировала экспрессию клетками CD54, подобный
эффект наблюдается при активации клеток линии THP-1 [315].
Микрочастицы сравниваемых групп женщин обладали различным модулирующим
действием на экспрессию адгезионных молекул и рецепторов для цитокинов клетками линии
ТНР-1. Также различалось их влияние как на интактные, так и на активированные TNFα клетки
линии
ТНР-1.
Микрочастицы
плазмы
крови
небеременных
женщин
обладали
разнонаправленными эффектами на экспрессию молекул, отвечающих за адгезию к
активированному эндотелию и трансэндотелиальную миграцию клеток. Выявленное снижение
экспрессии субъединиц CD18 и CD49d адгезионных молекул LFA-1, Mac-1, CD11c/CD18 и
VLA-4, α4β7 интегрина, лигандами которых являются ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3 и VCAM-1,
может влиять на способность клеток к миграции через активированный эндотелий, за счет
снижения адгезии клеток [157, 293].
В ситуации in vivo в периферической крови присутствуют микрочастицы, поэтому
сравнение с начальным уровнем экспрессии адгезионных молекул клетками линии THP-1 в
отсутствии влияния микрочастиц является преимущественно проверкой функциональности
настоящей модели. При активации клеток TNFα повышался уровень экспрессии CD11c
клетками линии THP-1, при этом микрочастицы усиливали эффект TNFα в отношении
экспрессии этой молекулы. По данным литературы повышение экспрессии CD11c в свою
очередь способствует миграции моноцитов через активированный эндотелий [236]. С другой
стороны уровень экспрессии CD11b предварительно активированными клетками снижался при
действии микрочастиц плазмы крови небеременных женщин. Таким образом, микрочастицы
плазмы крови небеременных женщин модулируют экспрессию моноцитоподобными клетками
131
молекул, ответственных за трансэндотелиальную миграцию, способствуя повышению
экспрессии одних субъединиц адгезионных молекул и снижению экспрессии других.
Действие микрочастиц плазмы крови небеременных женщин на предварительно
активированные клетки линии ТНР-1 вызывало повышение экспрессии рецептора CD47,
являющегося регулятором адгезии, взаимодействия с внеклеточным матриксом, а также
фагоцитарной активности и апоптоза [243], что в условиях in vivo может модулировать адгезию
и повышать чувствительность клеток к апоптозу. Микрочастицы небеременных женщин
оказывали модулирующее действие, снижая экспрессию адгезионной молекулы CD54
активированными TNFα клетками. Вероятно, выявленная нами при анализе поверхностных
рецепторов лейкоцитами периферической крови низкая экспрессия моноцитами небеременных
женщин CD54 может являться следствием присутствия в плазме крови микрочастиц и их
взаимодействия с моноцитами.
Микрочастицы небеременных женщин также снижали экспрессию рецептора для IL-8
(CD181) как интактными клетками, так и предварительно активированными TNFα клетками
линии ТНР-1, что в условиях in vivo может снижать хемотаксис клеток в очаг воспаления.
Следует отметить, что микрочастицы небеременных женщин повышали экспрессию VEGFR2
предварительно активированными TNFα клетками линии ТНР-1, что может отражать
существующую in vivo регуляцию миграции моноцитов в зоны реваскуляризации и
обеспечение репарации тканей [116], повреждение которых способствовало появлению в
циркуляции микрочастиц. Таким образом, микрочастицы небеременных женщин могут влиять
на миграционную активность клеток за счет модулирования экспрессии адгезионных молекул и
угнетения хемотаксической активности этих клеток.
Субъединицы CD11a и CD29 адгезионных молекул LFA-1 и VLA-4 обеспечивают
активацию моноцитов и их адгезию к эндотелию, связываясь с ICAM-1 и компонентами
матрикса [174, 236]. Снижение экспрессии этих молекул, наблюдавшееся при воздействии
микрочастиц плазмы женщин с физиологической беременностью, может ограничивать
миграцию моноцитов в зону воспаления. При этом микрочастицы плазмы крови женщин с
физиологической беременностью вызывали повышение экспрессии CD54 клетками линии ТНР1. Экспрессия CD54 моноцитами повышается во время беременности [91]. По нашим данным
экспрессия CD54 моноцитами при физиологической беременности также была повышена по
сравнению с экспрессией CD54 моноцитами небеременных женщин, а микрочастицы клеток
трофобласта повышают уровень экспрессии CD54 моноцитами крови [220], что также
согласуется с полученными нами данными.
Микрочастицы женщин с физиологической беременностью повышали экспрессию
молекулы интегрина β7 клетками линии ТНР-1. Данная субъединица в комплексе с CD49d
132
формирует α4/β7 интегрин, обеспечивающий взаимодействие с MAdCAM-1 [118], определяя
адгезию к эндотелиальным клеткам.
В целом введение микрочастиц плазмы крови от женщин с физиологической
беременностью приводило к снижению уровня экспрессии адгезионных молекул как
интактными, так и предварительно активированными TNFα клетками линии THP-1, но
выраженному повышению экспрессии адгезионной молекулы и маркера активации CD54.
Таким образом, при физиологической беременности микрочастицы плазмы крови способны
поддерживать активационный фенотип клеток, что согласуется с нашими данными о
повышенной экспрессии адгезионных молекул отдельными популяциями лейкоцитов женщин с
физиологической беременностью и повышенной способности моноцитов к адгезии. Можно
предположить,
что
воздействие
микрочастиц
плазмы
женщин
с
физиологической
беременностью в условиях in vivo также может модулировать миграцию моноцитов в
децидуальную оболочку. Так как в условиях in vitro установлена сниженная экспрессия CD181
клетками линии ТНР-1 под воздействием микрочастиц плазмы женщин с физиологической
беременностью, можно предположить, что в условиях in vivo микрочастицы женщин с
физиологической беременностью могут ограничивать хемотаксическую активность клеток в
очаг воспаления.
Микрочастицы, выделенные из плазмы крови беременных женщин с преэклампсией, не
изменяли профиль экспрессии адгезионных молекул интактными клетками, что в целом
согласуется с нашими данными о характере экспрессии моноцитами периферической крови
адгезионных молекул при преэклампсии. По-видимому, микрочастицы плазмы крови в
условиях преэклампсии не обеспечивают регуляции миграции моноцитов, как это происходит
при физиологической беременности. Кроме того, в ситуации in vivo преэклампсия
сопровождается активацией моноцитов при прохождении маточно-плацентарного кровотока
[219], поэтому более близкой к условиям in vivo является инкубация микрочастиц от женщин с
преэклампсией с предварительно активированными клетками линии THP-1. Микрочастицы
женщин с преэклампсией снижали экспрессию CD18 предварительно активированными TNFα
клетками линии ТНР-1. Ингибирующее действие на экспрессию CD18 микрочастиц плазмы
крови женщин этой группы было более выраженным, чем от микрочастиц, выделенных из
плазмы крови женщин с физиологической беременностью. Данная молекула является
субъединицей адгезионных молекул LFA-1, Mac-1, CD11c/CD18, обеспечивающих активацию и
трансэндотелиальную миграцию моноцитов в зону воспаления. Аналогичное снижение
экспрессии CD18 на моноцитах в результате возможного влияния микрочастиц in vivo может
компенсировать повышенную активность моноцитов в условиях преэклампсии [131, 277].
Экспрессия CD181 клетками линии ТНР-1 подавлялась после введения микрочастиц плазмы
133
крови женщин с преэклампсией, но в меньшей степени, чем при действии микрочастиц плазмы
крови женщин с физиологической беременностью. При этом микрочастицы женщин с
преэклампсией повышали экспрессию CD182 предварительно активированными TNFα
клетками линии ТНР-1. Аналогичное увеличение экспрессии данного рецептора в результате
воздейстивя на клетки микрочастиц in vivo, наоборот, может способствовать миграции
моноцитов в зону воспаления.
Таким образом, функциональная активность микрочастиц плазмы крови женщин с
преэклампсией значительно отличается от активности микрочастиц женщин с физиологической
беременностью в отношении экспрессии ряда молекул обеспечивающих хемотаксис и
трансэндотелиальную миграцию моноцитоподобных клеток линии ТНР-1. Микрочастицы
плазмы периферической крови небеременных женщин, женщин с физиологической и
осложненной преэклампсией беременностью обладают различным действием на адгезионные
молекулы моноцитоподобных клеток THP-1. Микрочастицы плазмы крови небеременных
женщин способны модулировать адгезионную активность клеток, снижая экспрессию CD18,
CD49d и повышая экспрессию CD11c, CD31 и CD47. Помимо этого, микрочастицы
небеременных женщин повышают чувствительность клеток к VEGF. Микрочастицы плазмы
крови женщин с физиологической беременностью модулируют адгезионную активность клеток,
снижая экспрессию CD11a и CD29 и повышая экспрессию интегрина β7. Микрочастицы плазмы
крови женщин с преэклампсией оказывают эффект, отличающийся от эффекта микрочастиц
женщин
с
физиологической
беременностью
на
экспрессию
адгезионных
молекул
исследуемыми клетками, снижая экспрессию CD18 в условиях активации TNFα. По-видимому,
измененный состав микрочастиц плазмы крови в условиях преэклампсии не обеспечивает
регуляции
адгезионных
свойств
клеток,
как
это
происходит
при
физиологической
беременности. При этом микрочастицы сравниваемых групп женщин могут обладать
различным действием на костимулирующую активность моноцитоподобных клеток через
модуляцию экспрессии CD54. Микрочастицы небеременных женщин подавляют экспрессию
CD54.
Напротив,
при
физиологической
беременности
микрочастицы
плазмы
крови
увеличивают костимулирующую активность моноцитоподобных клеток, повышая экспрессию
CD54 предварительно активированными TNFα клетками, что в ситуации in vivo может
отражаться в увеличении интенсивности экспрессии CD54 моноцитами периферической крови
женщин с физиологической беременностью. Микрочастицы плазмы крови женщин с
преэклампсией подавляют экспрессию этой молекулы на клетках линии THP-1. Подобное
влияние микрочастиц плазмы крови женщин с преэклампсией согласуется с нашими данными,
полученными при оценке экспрессии адгезионных молекул моноцитами периферической крови.
Соответственно, микрочастицы плазмы крови женщин с преэклампсией приближают
134
функциональную активность клеток к уровню, который наблюдается у небеременных женщин.
Кроме того, микрочастицы женщин с физиологической беременностью, вероятно, могут
угнетать хемотаксис моноцитов, аналагочным образом, как и при воздействии на клетки линии
THP-1, снижая экспрессию рецептора для IL-8 вне зависимости от активации. При этом у
женщин с преэклампсией наблюдается менее выраженная способность микрочастиц плазмы
угнетать экспрессию CD181, что может способствовать привлечению моноцитов в очаг
воспаления.
Таким образом, микрочастицы плазмы крови могут регулировать хемотаксическую и
адгезионную активность клеток. При этом их влияние на эти процессы изменяется при
физиологической беременности и при преэклампсии.
135
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В заключение следует отметить, что физиологическая беременность сопряжена с
активными межклеточными взаимодействиями в зоне маточно-плацентарного контакта и
присутствием в децидуальной оболочке при физиологической беременности различных
популяции лейкоцитов [134]. Клетки децидуальной оболочки и клетки плаценты секретируют
различные хемокины (MCP-1, SDF-1, IFNγ, MIP-3β, SLC), а эндотелиальные клетки в области
маточно-плацентарного кровотока экспрессируют такие адгезионные молекулы, как молекулы
ICAM-1, ICAM-2, VCAM-1, PECAM-1 [111, 161, 323], что в целом определяет взаимодействие
лейкоцитов периферической крови с эндотелиальными клетками сосудов децидуальной
оболочки. По нашим данным у женщин при физиологической беременности по cравнению с
небеременными
адгезионных
женщинами
молекул
на
повышена
CD8+
экспрессия
Т-лимфоцитах,
ряда
CD4+
хемокиновых
рецепторов
Т-лимфоцитах
и
и
моноцитах
периферической крови при физиологической беременности. Выявленное нами изменение
экспрессии адгезионных молекул лейкоцитами периферической крови, вероятно, является
результатом воздействия на лейкоциты хемокинов и цитокинов при прохождении ими маточноплацентарного кровотока. Повышение количества и экспрессии ряда адгезионных молекул при
физиологической беременности CD8+ Т-лимфоцитами, СD4+ Т-лимфоцитами, NK-клетками и
моноцитами, по всей видимости, предрасполагает эти популяции лейкоцитов к адгезии к
эндотелию в зоне маточно-плацентарного контакта при физиологической беременности.
Однако, выявленные нами противоречивые результаты об интенсификации функции адгезии
лимфоцитов и моноцитов и снижении функции транэндотелиальнйо миграции лимфоцитов при
преэклампсии указывают на то, что привлечение различных популяций лимфоцитов и
моноцитов в децидуальную оболочку и регионарные лимфатические узлы определяется в
большей степени уровнем секреции хемокинов в зоне маточно-плацентарного контакта, нежели
чем уровнем экспрессии хемокиновых рецепторов на лимфоцитах и моноцитах. Макрофаги
децидуальной оболочки являются одними из основных клеток, определяющих поддержание
иммунологической толерантности, их повышенная адгезия и миграция из периферической
крови является неотъемлемым процессом, способствующим развитию физиологической
беременности. Экспрессия некоторых адгезионных молекул также может способствовать
поддержанию
состояния
иммунологической
толерантности
при
физиологической
беременности. Так, CD47 на CD4+ Т-лимфоцитах способствует приобретению клетками
фенотипа Т-регуляторных лимфоцитов [137], а экспрессия этой адгезионной молекулы на
моноцитах
способствует
блокированию
синтеза
провоспалительных
цитокинов
[169].
Установленная нами повышенная экспрессия NK-клетками адгезионной молекулы CD54 при
136
физиологической беременности может определять формирование регуляторного фенотипа NKклеток, характерного для NK-клеток децидуальной оболочки, за счет формирования синапсов с
γδТ-лимфоцитами [364]. Однако приобретение NK-клетками регуляторного фенотипа,
вероятно, окончательно происходит уже непосредственно в децидуальной оболочке, так как,
например, функциональная активность NK-клеток, связанная с высвобождением перфорина и
гранзимов, и с экспрессией TRAIL, не отличается у небеременных женщин и женщин с
физиологической беременностью. Активно-протекающие межклеточные взаимодействия в зоне
маточно-плацентарного контакта отражает появление в периферической крови микрочастиц
лейкоцитарного
происхождения,
которые
также
могут
опосредовать
взаимодействие
организмов матери и плода. Так, например, in vitro происходит изменение экспрессии
адгезионных молекул и рецептора к цитокину IL-8 моноцитоподобными клетками THP-1 под
влиянием микрочастиц плазмы крови женщин с физиологической беременностью, что
позволяет предполагать наличие влияния микрочастиц плазмы крови на фенотипические
свойства клеток и возможного влияния на адгезию и миграцию лейкоцитов в децидуальную
оболочку.
Преэклампсия сопровождается развитием воспалительной реакции в децидуальной
оболочке и в плаценте, являющейся одним из факторов патогенеза данной патологии.
Воспаление в зоне маточно-плацентарного контакта приводит к секреции провоспалительных
цитокинов и повышению интенсивности экспрессии адгезионных молекул эндотелиальными
клетками в зоне маточно-плацентарного контакта. При преэклампсии лейкоциты в
периферической крови находятся в активированном состоянии, что подтверждается нашими
данными о повышенной экспрессии рецепторов к IFNγ моноцитами периферической крови.
Активированное состояние этих клеток определяет их готовность к адгезии к активированному
эндотелию при наличии хемоаттрактанта, что было продемонстрировано в эксперименте in vitro
с активированным эндотелием. Вероятно, подобное взаимодействие клеток возможно в зоне
маточно-плацентарного контакта, где эндотелиальные клетки находятся в активированном
состоянии [111]. По нашим данным, при преэклампсии повышается экспрессия отдельных
адгезионных молекул CD8+ Т-лимфоцитами, моноцитами, NK-клетками, однако не было
выявлено значительного повышения трансэндотелиальной миграции лимфоцитов и моноцитов,
что свидетельствует в пользу описанного ранее нарушения микроциркуляции на системном
уровне в результате процесса адгезии, не завершающегося трансмиграцией [72]. Развивающаяся
при
преэклампсии
воспалительная
реакция
в
зоне
маточно-плацентарного
контакта
сопровождается нарушением механизмов индукции иммунологической толерантности, что
является следствием недостаточной экспрессии клетками трофобласта молекул локуса HLA-G.
Обнаруженная нами сниженная экспрессия CD4+ Т-лимфоцитами адгезионных молекул CD29
137
и CD49d может определять снижение миграции этих клеток в децидуальную оболочку при
преэклампсии и, соответственно, снижение их регуляторного эффекта in situ и нарушение
реализации механизмов иммунологической толерантности. Выявленные нами изменения
функционального состояния NK-клеток периферической крови вносят вклад в понимание
механизмов реализации воспаления при преэклампсии, так основным механизмом индукции
апоптоза клеток-мишеней NK-клетками становится TRAIL-зависимый путь. Установленное
нами появление в периферической крови микрочастиц, образованных нейтрофилами и
моноцитами, при преэклампсии, вероятно, происходит как в результате межклеточных
взаимодействий, так и в результате апоптоза, индуцированного NK-клетками. Выявленное
присутствие сниженного количества микрочастиц NK-клеток в периферической крови при
преэклампсии может отражать нарушение механизмов формирования иммунологической
толерантности при беременности, а именно, дефект в индукции гибели активированных NKклеток. В эксперименте с линией клеток THP-1 установлено, что микрочастицы плазмы
периферической крови при преэклампсии изменяют характер экспрессии отдельных
адгезионных молекул клетками, однако однонаправленного системного эффекта на характер
экспрессии адгезионных молекул не наблюдается. При этом микрочастицы плазмы крови
женщин с преэклампсией подавляют экспрессию молекулы CD54 моноцитоподобными
клетками линии THP-1, что приближает функциональную активность клеток к активности
клеток, подвергшихся воздействию микрочастиц плазмы небеременных женщин, и отражает
нарушение системы контроля межклеточных взаимодействий при преэклампсии на системном
уровне.
138
ВЫВОДЫ
1.
Физиологическая
беременность
сопровождается
сниженной
трансэндотелиальной
миграцией лимфоцитов и повышенной трансэндотелиальной миграцией моноцитов in vitro.
Преэклампсия по сравнению с физиологической беременностью характеризуется повышенной
адгезионной способностью лимфоцитов и моноцитов периферической крови к активированным
эндотелиальным клеткам линии Ea.Hy926. Функция трансэндотелиальной миграции лимфоцитов
периферической крови in vitro снижена при преэклампсии по сравнению с физиологической
беременностью.
2.
У женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными женщинами
повышена экспрессия CD8+ Т-лимфоцитами, CD4+ Т-лимфоцитами, NK-клетками адгезионных
молекул CD29, CD49d, интегрин β7, а также CD62P, CD11b, CD11c, CD29, CD31, CD47, CD54
моноцитами периферической крови. При преэклампсии по сравнению с физиологической
беременностью повышена экспрессия CD18 CD8+ Т-лимфоцитами, CD11с NK-клетками, а
экспрессия адгезионных молекул CD4+ Т-лимфоцитами снижена.
3.
У женщин при физиологической беременности по сравнению с небеременными женщинами
для нейтрофилов и моноцитов периферической крови характерна повышенная экспрессия
рецептора к IFNγ (CD119). При развитии преэклампсии экспрессия рецептора к IFNγ на моноцитах
периферической крови возрастает.
4.
Преэклампсия сопровождается повышением количества NK-клеток периферической крови,
экспрессирующих TRAIL, при отсутствии изменений количества CD107a+ NK-клеток. При
стимуляции NK-клеток in vitro количество активированных CD107a+ NK-клеток снижено при
преэклампсии по сравнению с физиологической беременностью.
5.
Физиологическая беременность сопровождается присутствием в плазме периферической
крови повышенного количества микрочастиц преимущественно образованных NK-клетками
(CD45+ CD16+ CD56+ и CD45- CD16+ CD56+). При преэклампсии по сравнению с
физиологической беременностью в периферической крови повышено содержание микрочастиц
преимущественно нейтрофильного и моноцитарного происхождения (CD45+CD16+CD56-).
6.
Микрочастицы
плазмы
крови
женщин
с
физиологической
беременностью
и
с
преэклампсией in vitro обладают разнонаправленными эффектами на экспрессию активированными
моноцитоподобными клетками линии THP-1 адгезионных молекул CD18 и CD54 и на экспрессию
рецептора к IL-8 (CD181) клетками линии THP-1 независимо от наличия предшествовавшей
активации.
139
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
САД – систолическое артериальное давление
ДАД – диастолическое артериальное давление
BCA-1 – хемокин, привлекающий В-клетки (B-cell attracting chemokine 1)
CRTH2 - гомологичная рецептору хемоаттрактанта молекула, экспрессированная Т-хелперами 2
(Chemoattractant receptor-homologous molecule expressed on Th2)
CTLA-4 - антиген, ассоциированный с цитотоксическими Т-лимфоцитами (Cytotoxic Tlymphocyte associated antigen 4)
DAMP – молекулярный паттерн, ассоциированные с повреждением (Damage-associated
molecular pattern)
DC-SIGN – специфически связывающая ICAM-3 неинтегриновая молекула дендритных клеток
(Dendric cell-specific ICAM-3-grabbing nonintegrin)
EGF –эпидермальный ростовой фактор (Epidermal growth factor)
ELC – хемокин EBI-1 лиганда (EBI-1 ligand chemokine)
Fas – рецептор суперсемейства TNFα
FasL – лиганд для рецептора Fas, экспрессируемый на поверхности клетки
FLIP – FLICE-подобный ингибирующий протеин (FLICE-like inhibitory protein)
GLYCAM-1 –адгезионная молекула, зависимая от гликозилирования – 1 (Glycosylationdependent cell adhesion molecule 1)
GM–CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (Granulocytemacrophage colony-stimulating factor)
HLA –человеческий лейкоцитарный антиген (Human leukocyte antigen)
ICAM – молекула межклеточной адгезии (Intercellular cell adhesion molecule)
IFNγ - интерферон γ (Inteferon γ)
IL - интерлейкин (Interleukin)
ILT – иммуноглобулиноподобный транскрипт (Immunoglobulin like transcript)
IP-10 -интерферон-индуцибельный протеин 10 (interferon inducible protein 10)
I-TAC – интерферон-индуцибельный хемоаттрактант Т-лимфоцитов (Interferon inducible T-cell
alpha chemoattractant)
JAM - соединительная адгезионная молекула (Junctional adhesion molecule)
LARC – хемокин, регулируемый печенью и активацией (Liver and activation regulated
chemokine)
LIF –фактор, ингибирующий лейкемию (Leukemia inhibitory factor)
140
LFA - лимфоцитарный функционально-ассоциированный антиген (lymphocyte function
associated antigen)
MAdCAM-1 - адгезионная молекула к адрессинам слизистых оболочек – (Mucosal addressin cell
adhesion molecule)-1
Mac-1 – макрофагальный антиген 1 (macrophage antigen 1)
MCP - моноцитарный хемотактический протеин (monocyte chemotactic protein)
M-CSF – макрофагальный колониестимулирующий фактор (macrophage colony stimulating
factor)
MFI – средняя интенсивность флуоресценции (medium fluorescence intensity)
MHC-1 – главный комплекс гистосовместимости (major histocompatibility complex)
MIP - воспалительный протеин макрофагов (macrophage inflammatory protein)
MMP - матриксная металлопротеиназа (matrix metalloproteinase)
NADFH
PAR - рецепторы, активируемые протеазами (protease activated receptors)
PECAM-1 - тромбоцитарно-эндотелиальная адгезионная молекула-1 (platelet endothelial cell
adhesion molecule 1)
PlGF – плацентарный ростовой фактор (placental growth factor)
PSGL-1 –гликопротеиновый лиганд P-селектина (P-selectin glycoprotein ligand-1)
RAET1 - ранний транскрипт ретиноевой кислоты (retinoic acid early transcript 1)
RANTES - фактор, секретирующийся Т-лимфоцитами после активации (regulated upon activation
normal T-cell expressed and presumably secreted)
SCF – фактор стволовых клеток (stem cell factor)
SDF-1 – стромальный клеточный фактор (stromal cell-derived factor-1)
SLC – хемокин вторичной лимфоидной ткани (secondary lymphoid tissue chemokine)
STAT – белок, передающий сигнал и активирующий транскрипцию (signal transducer and
activator of transcription)
sVEGF-R - секреторный вариант рецептора VEGF
TARC - хемокин, регулируемый тимусом и активацией (Thymus and Activation Regulated
Chemokine)
TGFβ –трансформирующий ростовой фактор β (Transforming growth factor β)
Th– Т-хелперный лимфоцит (T-helper)
TLR – Toll-подобный рецептор (Toll-like receptors)
TNFα - фактор некроза опухоли α (tumor necrosis factor α)
TRAIL - TNF-подобный лиганд, инициирующий апоптоз (TNF-related apoptosis inducing ligand)
TRAIL-R – рецептор TRAIL
141
Treg – регуляторный Т-лимфоцит (regulatory T-cells)
TSLP - цитокин тимического стромального лимфопоэтина, полученный из трофобласта
(trophoblast-derived thymic stromal lymphopoietin)
TSP-1 – тромбоспондин 1 (trombospondin 1)
VCAM-1 - сосудистая молекула клеточной адгезии 1 (vascular cell adhesion molecule 1)
VE-cadherin – кадгерин эндотелия сосудов (vascular endothelial cadherin)
VEGF –фактор роста эндотелия сосудов (vascular endothelial growth factor)
VLA- поздний антиген активации (very late activation antigen)
XIAP - Х-связанный ингибитор апоптоза (X-linked inhibitor of apoptosis)
142
Приложение А
Относительное количество популяций мононуклеаров, адгезировавших к эндотелию
Количественные
показатели
измерения
мононуклеаров
периферической
крови
1
Относительное
содержание
лимфоцитов от
общего
количества
событий
Относительное
содержание
моноцитов
от
общего
количества
событий
Отношение
общего
количества
лимфоцитов
к
общему
количеству
моноцитов
Доля
лимфоцитов
с
фенотипом CD3+
от
общего
количества
лимфоцитов
Доля
CD3+\CD4+
клеток от общего
количества
лимфоцитов
Доля
CD3+\CD8+
клеток от общего
количества
лимфоцитов
Отношение
количества CD4+
лимфоцитов
к
общему
количеству CD3+
лимфоцитов
Количество клеток с указанным фенотипом в пересчете на 100
эндотелиальных клеток (М±m)
среди клеток, адгезировавших к среди клеток, адгезировавших к
интактному эндотелию
активированному TNFα эндотелию
Здоровые Женщины с Женщины Здоровые Женщины с Женщины
неберемен физиологич
с
неберемен физиологич
с
ные
еской
преэкламп
ные
еской
преэкламп
женщины беременнос
сией
женщины беременнос
сией
(n=14)
тью (n=22)
(n=39)
(n=14)
тью (n=22)
(n=39)
2
3
4
5
6
7
34,7±2,6
21,3±2,7
**
19,3±1,7
38,2±3,7
42,5±3,7
◙◙
74,1±5,3
◙◙#
15,6±2,9
26,4±3,7*
33,1±2,1
23,8±6,9
51,6±5,2◙*
67,3±6,0◙
#
3,1
1,27
0,73
2,4
0,95
1,45
69,8±1,5
56,4±2,3
**
55,6±1,8
58,6±5,7◙
64,4±1,9◙
62,9±2,5
◙◙
38,7±2,2
34,4±2,3
33,2±1,8
37,0±3,5
36,4±2,6
37,8±1,6◙
26,2±2,6
22,7±2,0
22,6±1,2
18,0±2,8
23,4±2,1
22,7±1,6
0,56
0,62
0,6
0,56
0,57
0,61
143
1
2
3
4
5
6
7
Отношение
количества CD8+
лимфоцитов
к
0,37
0,4
0,41
0,26
0,36
0,35
общему
количеству CD3+
лимфоцитов
Доля
CD14+
клеток от общего
66,2±3,8
85,0±3,0**
88,9±1,4
75,4±5,8
89,7±1,4**
86,6±1,6
количества
моноцитов
Доля
CD14+\CD16–
80,6±3,2**
74,1±5,6
клеток от общего 63,0±3,7
84,3±1,5
86,1±1,5**
83,2±1,7
количества
моноцитов
Доля
CD14+\CD16+
клеток от общего 3,2±0,3
4,5±0,8
4,7±0,7
2,3±0,8
3,6±0,6
3,3±0,9
количества
моноцитов
Отношение
количества
CD14+\CD16+
моноцитов
к
0,05
0,05
0,05
0,03
0,04
0,037
общему
количеству
CD14+
моноцитов
Отношение
количества
CD14+\CD16–
моноцитов
к
0,95
0,95
0,94
0,98
0,96
0,96
общему
количеству
CD14+
моноцитов
Достоверность различий: ◙ - p<0,05; ◙◙ - p<0,01 (различия внутри группы между количеством
клеток, адгезировавших к интактному эндотелию, и количеством клеток, адгезировавших с
активированному эндотелию); * - p<0,05; ** - p<0,01 (группа женщин с физиологической
беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); # - p<0,05 (группа
беременных
с
беременностью).
преэклампсией
отличается
от
группы
женщин
с
физиологической
144
Приложение Б
CD45+CD3-CD16+CD56+
6,7 {5,8; 8,6}
6,5 {4,6; 8,6}
6,5 {5,0; 9,0}
6,4 {5,6; 8,9}
6,8 {4,9; 8,8}
7,1 {5,2; 8,8}
Достоверность различий: ◙ - p<0,05 (количество спонтанно мигрировавших клеток отличается от количества клеток, мигрировавших в
присутствии TNFα, внутри группы); * - p<0,05 (группа женщин с физиологической беременностью отличается от группы здоровых
небеременных женщин); # - p<0,05 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической беременностью).
Данные представлены в виде: медиана {верхний квартиль; нижний квартиль}.
144
Относительное количество клеток периферической крови, мигрировавших через монослой эндотелиальных клеток линии Ea.Hy926, в
нижнюю камеру
Относительное количество клеток, %
спонтанная миграция
миграция в присутствии TNFα
Мононуклеары
Здоровые
Женщины с
Женщины с
Женщины с
Здоровые
Женщины с
периферической крови
небеременные физиологической
физиологической
преэклампсией
небеременные
преэклампсией
женщины
беременностью
беременностью
(n=31)
женщины (n=27)
(n=31)
(n=27)
(n=27)
(n=27)
90,4
{83,3;
72,3
92,6
{90,1;
82,2
{56,0;
лимфоциты
84,0 {66,0; 92,4}*
88,4 {70,1; 93,1}*
93,5}
{57,1;84,9}#
94,9}◙
88,4}
16,6
{12,4;
моноциты
8,3 {5,3; 15,5}
14,3 {6,1; 32,9}*
5,9 {3,0; 8,3}◙
9,8 {4,2; 26,1}*
12,4 {7,7; 38,5}
37,2}
80,5
{78,3;
82,4
{75,1;
80,7
{74,0;
CD45+CD3+
82,3 {79,1; 86,8}
81,9 {78,7; 84,0} 81,6 {76,0; 86,2}
84,1}
85,5}
85,1}
53,6
{51,2;
50,9
{45,6;
51,1
{47,7;
CD45+CD3+CD4+
51,9 {48,7; 54,7}
53,6 {50,0; 57,2} 50,0 {45,0; 57,5}
56,8}
58,3}
56,0}
23,3
{20,1;
23,7
{20,7;
24,1
{21,2;
CD45+CD3+CD8+
23,7 {21,0; 30,9}
22,9 {19,8; 27,9} 24,0 {20,6; 30,3}
27,3}
28,8}
29,6}
145
Приложение В
Абсолютное количество клеток периферической крови, мигрировавших через монослой эндотелиальных клеток линии Ea.Hy926, в нижнюю
камеру
Абсолютное количество клеток, на 1000 стандартных частиц TruCount
спонтанная миграция
миграция в присутствии TNFα
Мононуклеары
Женщины
с
Здоровые
Женщины
с
Здоровые
Женщины
с
Женщины
с
периферической крови
физиологической
небеременные физиологической
небеременные
преэклампсией
преэклампсией
беременностью
женщины
беременностью
женщины (n=27)
(n=31)
(n=31)
(n=27)
(n=27)
(n=27)
1270
{404; 1949
{1014;
1059
{620;
лимфоциты
1927 {982; 2552} 2187 {1557; 2853}
1992 {1432; 2950}
1789}##
2491}
1779}##
168 {83; 316}
297 {129; 551}
CD45+CD3+
1563 {787; 2106}
1739 {1249; 2296}
CD45+CD3+CD4+
1017 {538; 1436}
1178 {735; 1339}
CD45+CD3+CD8+
449 {219; 644}
507 {327; 699}
CD45+CD3-CD16+CD56+
148 {75; 242}
128 {89; 201}
283 {145; 717}
126 {74; 185}
197 {79; 411}
236 {64; 1019}
968
{299; 1639
{764;
1584 {1079; 2317}
1448}##
2076}
685
{179; 1089
{546;
978 {644; 1339}
953}###
1457}
273
{105;
435 {260; 642} 434 {312; 618}
478}##
837
{486;
1503}##
525
{324;
957}##
262
{141;
487}#
78 {36; 120}#
95 {47; 130}#
136 {95; 223}
144 {93; 179}
Достоверность различий: * - p<0,05 (группа женщин с физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных
женщин); # - p<0,05; ## - p<0,01; ### - p<0,001 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической
беременностью). Данные представлены в виде: медиана {верхний квартиль; нижний квартиль}.
145
моноциты
146
Приложение Г
Экспрессия хемокиновых рецепторов CD3+CD8+ Т-лимфоцитами следующих групп женщин
Количественные характеристики экспрессии поверхностных
CD3+CD8+ Т-лимфоцитами следующих групп женщин
Здоровые
небеременные
женщины (n=27)
Интенсив
Поверхно
ность
стные
маркеры Относител флюоресц
енции,
ьное
относител
количество
ьные
,%
единицы
флюоресц
енции
1
2
3
4,3 {1,8;
219 {100;
CD184
8,8}
379}
1,9 {0,8;
194 {37;
CD119
3,3}
392}
3,1 {1,4;
228 {131;
CD192
6,9}
331}
3,9 {1,2;
242 {80;
CD196
6,8}
400}
6,1 {2,3;
316 {146;
CD197
16,6}
386}
0,3 {0,2;
67 {0;
CD114
1,0}
138}
1,7 {0,3;
CD11c
0 {0; 48}
3,3}
44 {35,6;
914 {774;
CD54
54,7}
1173}
1849
66,3 {54,3;
CD11a
{1380;
80,6}
2211}
19,4 {6,6;
486{379;
CD18
32,8}
681}
3318
44,0 {33,4;
CD62L
{2525;
53,5}
5016}
3141
90,4 {78,3;
CD47
{2547;
97,4}
4802}
Интегрин 36,2 {26,5; 817 {693;
β7
46,1}
971}
0,4 {0,2;
CD11b
4 {0; 130}
1,0}
35,4 {21,9; 726 {553;
CD44
51,1}
1055}
Женщины
с
физиологической
беременностью (n=22)
Интенсивн
ость
флюоресце
Относител
нции,
ьное
относитель
количество
ные
,%
единицы
флюоресце
нции
4
5
17,6 {13,7;
625 {406;
27,5}***
776}***
4,1 {1,4;
435 {278;
9,0}
518}**
10,5 {2,2;
371 {186;
17,3}*
547}
4,6 {1,9;
295 {70;
10,1}
490}
13,5 {7,8;
383 {241;
35,4}*
644}*
0,8 {0,3;
84 {0; 225}
1,5}
2,7 {1,3;
53 {0;
7,7}
238}*
55,6{45,5;
1041{846;
76,1}*
1332}
маркеров
Женщины
преэклампсией (n=24)
Относител
ьное
количество
,%
6
15,2 {11,2;
25,3}
3,8 {2,4;
10,9}
2,4 {2,0;
4,5}##
3,2 {1,7;
5,2}
6,8 {4,3;
7,6}##
0,4 {0,1;
1,2}
2,2 {1,8;
3,6}
37,2 {27,6;
44,9}###
с
Интенсивно
сть
флюоресце
нции,
относитель
ные
единицы
флюоресце
нции
7
446 {350;
616}
269 {113;
362}#
101 {71;
238}###
116 {20;
328}
201 {120;
287}###
0 {0; 193}
7 {0; 227}
667 {572;
797}###
56,3 {47,3;
67,4}
1598 {1299;
2051}
58,6 {44,5;
80,8}
1735 {1250;
1998}
30,1 {18,1;
56,7}
576 {398;
938}
17,4 {12,1;
25,2}#
3890 {3025;
5065}#
46,9 {36,3;
55,2}
3113 {2351;
4764}
50,6 {36,0;
56,3}
2937 {2440;
4034}
94,3 {91,1;
98,5}
4417 {3466;
5319}
87,6 {74,3
95,0}##
2794 {2452;
3437}###
48,1 {39,3;
63,5}**
1,3 {0,7;
2,1}*
40,0 {24,5;
71,6}
1070 {876;
1284}**
38,8 {29,6;
45,3}##
2,1 {1,2;
3,3}
16,6{9,8;
23,4} ###
764 {641;
845}###
86 {0; 185}
777 {517;
1239}
16 {0; 237}
348 {267;
460} ###
147
1
2
3
4
5
6
7
1141
43,3 {31,1;
46,2 {32,2; 1120 {626;
32,4{26,1;
1111 {960;
CD58
{820;
52,1}
59,0}
1321}
48,2}#
1281}
1288}
18,9 {8,6;
662 {463; 26,6 {17,8;
874 {646;
21,8 {17,4;
584 {444;
CD29
28,2}
880}
40,1}*
1183}*
26,1}
712}##
2056
78,6 {75,8;
91,9 {81,3; 2345 {2126; 78,4 {59,8; 1783{1194;
CD49d
{1630;
90,9}
97,5}*
3640}
85,6}###
1970}###
2566}
2333
64,3 {57,5;
70,4 {61,6; 2481 {2193; 62,8 {52,3; 2509 {2272;
CD31
{2002;
66,5}
75,1}
2742}
73,3}
2928}
2660}
Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); # p<0,05, ## - p<0,01, ### - p<0,001 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы
женщин с физиологической беременностью). Данные представлены в виде: медиана {верхний
квартиль; нижний квартиль}.
148
Приложение Д
Экспрессия поверхностных молекул CD3+CD4+ Т-лимфоцитами периферической крови
Количественные характеристики экспрессии поверхностных маркеров CD3+CD4+
Т-лимфоцитами следующих групп женщин
Поверхно
стные
маркеры
1
Женщины
Здоровые небеременные
физиологической
женщины (n=27)
беременностью (n=22)
Интенсивно
сть
Относител флюоресцен
ьное
ции,
количество относительн
,%
ые единицы
флюоресцен
ции
2
3
с
Интенсивнос
ть
Относитель флюоресцен
ное
ции,
количество, относительн
%
ые единицы
флюоресцен
ции
4
5
Женщины с преэклампсией
(n=24)
Интенсивность
флюоресценци
Относительн
и,
ое
относительные
количество,
единицы
%
флюоресценци
и
6
7
16,6 {10,3;
26,0}
489 {316; 674}#
CD184
4,2 {1,5;
7,1}
306 {166;
551}
12,9 {9,9;
37,5}***
698 {452;
1055}***
CD119
2,0 {0,6;
4,0}
348 {156;
409}
5,4 {1,6;
12,0}*
474 {217;
826}
CD192
0,4 {0,2;
1,5}
30 {2; 45}
2,0 {0,4;
4,0}*
70 {27;
222}**
0,8 {0,2; 1,4}
47 {5; 210}
CD196
6,2 {3,2;
12,9}
520 {301;
727}
10,8 {6,2;
21,0}
476 {249;
1024}
6,2 {3,1;
10,5}#
279 {165;
418}##
CD197
2,0 {0,8;
135 {85; 234}
4,4}
6,2 {1,3;
10,2}**
231 {163;
322}*
CXCR5
3,3 {1,3;
5,6}
CD11c
0 {0; 0,2}
0 {0; 112}
0,2 {0; 0,5}
0 {0; 98}
0,5 {0,1; 0,9}
0 {0; 68}
CD54
15,6 {12,0;
24,9}
390 {370;
536}
22,2 {19,8;
25,8}
510 {312;
608}
19,9 {15,2;
21,9}
376 {260; 505}#
CD11a
41,3 {23,1;
66,1}
1109 {760;
1399}
39,9 {23,3;
54,5}
889 {810;
1106}
44,0 {26,8;
58,5}
1011 {821;
1277}
CD18
3,1 {1,2;
8,7}
269 {160;
387}
6,9 {4,0;
17,9}
291 {199;
392}
3,2 {1,5; 8,4} 308 {185; 494}
3,6 {1,4; 6,0} 99 {78; 207}##
96 {23; 126} 4,7 {2,5; 8,0} 131 {88; 188} 2,6 {0,1; 4,7} 67 {27; 100}##
5,5 {3,9; 7,6} 236 {118; 307}
CD62L
71,1 {60,2; 3997 {3192;
77,5}
5073}
66,0 {61,6;
75,1}
4109 {2768;
4764}
66,6 {54,7;
76,8}
3340 {2350;
4273}
CD47
97,4 {92,2; 5369 {3973;
99,1}
6283}
99,2 {98,8;
99,5}
6034 {5149;
8422}*
95,7 {92,5;
99,0}###
3923 {3274;
5830}###
149
1
2
Интегрин 18,4 {13,4;
β7
22,0}
3
4
5
6
7
486 {388;
647}
28,0 {20,4;
34,8}***
665 {504;
852}**
24,6 {19,6;
32,3}
519 {443; 707}#
CD11b
0,1 {0; 0,3} 58 {0; 213} 1,0 {0,5; 2,0} 135 {0; 179} 1,6 {0,7; 2,1}
35 {0; 189}
CD44
26,8 {14,8;
42,6}
729 {530;
887}
25,8 {16,8;
46,9}
602 {424;
867}
14,7 {7,7;
22,7}##
336 {248;
415}###
CD58
37,3 {33,5;
41,8}
1005 {718;
1395}
36,5 {33,5;
40,5}
1057 {974;
1405}
35,1 {29,8;
46,6}
932 {741; 1269}
CD29
25,0 {18,8;
30,8}
961 {590;
1222}
31,1 {27.4;
41,6}*
1104 {853;
1500}*
30,4 {20,8;
35,8}
779 {620;
903}###
CD49d
53,1 {46,0; 1699 {1118;
61,4}
2013}
71,5 {58,3;
76,6}***
2054 {1479;
2667}*
56,6 {46,8;
65,9}#
1306 {1177;
1543}###
30,9 {20,8; 860 {459;
33,8 {28,1;
827 {754;
31,9 {24,0;
899 {481; 1571}
35,4}
1264}
38,9}
1604}
36,5}
Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа женщин с
CD31
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #p<0,05, ## - p<0,01, ### - p<0,001 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы
женщин с физиологической беременностью). Данные представлены в виде: медиана {верхний
квартиль; нижний квартиль}.
150
Приложение Е
Экспрессия поверхностных молекул NK-клетками периферической крови
Количественные характеристики экспрессии поверхностных маркеров NKклетками следующих групп женщин:
Женщины
с
Здоровые
небеременные
Женщины
с
физиологической
женщины (n=27)
преэклампсией (n=24)
беременностью (n=22)
Поверхност
Интенсивност
ные
Интенсивность
Интенсивность
маркеры
Относитель
Относительн флюоресценци Относител ь
флюоресценции ое
флюоресценци
ное
ьное
и,
,
относительные
количество,
количество, относительные количеств и,
единицы
относительные
единицы
%
%
о, %
флюоресценции
единицы
флюоресценции
флюоресценции
1
CD184
2
3
4
5
1,0 {0; 2,5} 114 {27; 199} 0,9 {0,1; 3,4} 108 {0; 209}
6,1 {2,5;
15,7}
6
7
2,9
{1,2;3,7}
83 {0; 205}
CD119
3,9 {2,5;
9,0}
437 {249; 596}
CD192
0,4 {0,1;
0,9}
36 {13; 110}
CD196
0,8 {0,5;
2,4}
CXCR5
0,3 {0; 1,5}
1 {0; 140}
1,0 {0,5; 3,5}
CD140b
0,1 {0; 0,2}
82 {0; 253}
0,1 {0; 0,6}
CD114
0,4 {0,2;
0,8}
CD11c
42,9 {29,6;
53,8}
1831 {1330;
2248}
51,8 {31,9;
63,9}
2226 {1412; 60,2 {52,7; 2286 {1960;
2831}
68,6}#
2975}
CD54
63,4 {50,7;
72,9}
1377 {1249;
1661}
75,6 {65,5;
79,6}**
1579 {1263; 69,7 {62,0; 1391 {1214;
2007}
77,4}
1598}
CD11a
94,9 {88,8;
97,8}
3022 {2336;
3833}
92,0 {83,3;
96,1}
2772 {1994; 92,5 {79,6; 2833 {2243;
3245}
97,8}
3464}
CD18
31,8 {19,5;
729 {585; 885}
55,8}
40,9 {22,4;
38,3 {22,8;
744 {508; 825}
608 {536; 814}
63,9}
57,5}
CD47
84,6 {70,8;
94,2}
89,6 {79,1;
96,9}
493 {235; 592}
0,9 {0,5; 2,2} 67 {33; 173}
200 {121; 473} 2,2 {0,9; 4,2} 221 {0; 380}
0,5 {0,1;
1,4}
34 {0; 182}
1,3 {0,4;
107 {48; 255}
2,2}
0,7 {0,1;
1,4}
35 {0; 100}
71 {37; 250} 0 {0; 0,4}
35 {0; 154}
57 {0; 128}
195 {33; 271} 0,9 {0,3; 2,1} 217 {0; 361}
3331 {2573;
4766}
8,7 {4,8;
370 {250; 480}
10,4}
0,4 {0;
1,2}
75 {0; 241}
3760 {2922; 85,9 {72,1; 2845 {2145;
4759}
94,3}
3136}##
151
1
2
3
4
5
Интегрин
β7
3,4 {1,4;
6,4}
144 {85; 219}
8,9 {3,3;
11,6}**
233 {133; 286}
CD11b
10,9 {7,7;
25,4}
627 {483; 959}
CD44
2,5 {1,4;
6,0}
168 {101; 260} 3,3 {1,1; 3,9} 174 {53; 220}
CD58
77,5 {55,0;
88,4}
CD29
22,1 {9,6;
32,9 {17,4;
865 {601; 1182}
33,9}
54,5}*
1076 {906;
1264}
CD49d
83,1 {70,1;
90,2}
1572 {1427;
1786}
93,2 {84.8;
96,9}**
2067 {1941; 89,9 {81,1; 1632 {1387;
2321}***
94,0}
1948}##
CD31
34,7 {27,0;
48,1}
1520 {1005;
2651}
38,5 {28,1;
49,0}
1429
34,0 {30,1; 1584 {1213;
{1191;2188}
40,4}
2505}
1593 {1295;
2064}
6
11,6 {6,8;
229 {140; 362}
16,4}
14,1 {11,7;
13,9 {8,0;
652 {531; 791}
26,8}
23,0}
76,8 {54,2;
88,2}
7
3,0 {0,9;
5,4}
476 {348;
607}#
121 {6; 197}
1664 {1539; 60,9 {34,7; 1514 {1248;
1866}
74,7}#
1726}
27,5 {18,7;
40,6}
698 {617;
859}##
Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #p<0,05, ## - p<0,01 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с
физиологической беременностью). Данные представлены в виде: медиана {верхний квартиль;
нижний квартиль}.
152
Приложение Ж
Экспрессия поверхностных молекул моноцитами периферической крови
Количественные характеристики экспрессии поверхностных маркеров моноцитами следующих
групп женщин
Женщины
с
Здоровые небеременные
Женщины
с
физиологической
женщины (n=27)
преэклампсией (n=24)
беременностью (n=22)
Интенсивн
Интенсивн
Интенсивно
Поверхнос
ость
ость
Относитель
Относител
Относител сть
тные
флюоресце ьное
флюоресце ьное
флюоресце
ное
маркеры
нции,
нции,
количество
количество
количество нции,
относительн моноцитов,
ые единицы
%
флюоресцен
ции
относительн моноцитов,
ые единицы
%
флюоресцен
ции
относительн
ые единицы
флюоресцен
ции
2
1,7 {0; 9,1}
3
12 {0; 482}
46,5
{22,2;76,8}
4,3 {0,9;
7,5}
0,7 {0,1;
1,7}
20,6 {3,2;
37,5}
1,2 {0; 5,6}
3 {0; 26}
5
358 {215;
461}
1971 {1758;
2225}***
292 {172;
337}*
198 {124;
310}***
2349 {1737;
3638}***
708 {439;
795}
11047
{9516;
13411}***
6845 {5969;
8645}***
6
7,3 {3,4;
16,0}
80,7 {60,1;
91,7}#
2,8 {1,4;
5,3}
1,2 {0; 2,6}
7
428 {183;
556}
2090 {1637;
2298}#
167 {117;
223}
194 {0; 260}
39,1 {25,0;
58,6}
5,0 {0,5;
14,4}
2287 {1617;
3566}
546 {362;
709}
9071 {7526;
12732} #
99,0 {98,4;
99,4}
5587 {5002;
6169}##
1644 {790;
2539}***
17,4 {6,5;
21,4}
1771 {1078;
2273}
моноцитов,
%
1
CD184
CD119
CD192
CD196
CXCR5
397 {255;
509}
1 {0; 10}
1 {0; 11}
4
3,5 {1,5;
8,0}
65,6 {48,5;
81,1}
4,5 {2,2;
16,5}
1,1 {0,8;
1,4}
36,6 {12,6;
55,5}
4,1 {0,8;
9,7}
98,9 {98,0;
99,3}
CD11c
98,9 {97,9;
99,2}
461 {399;
859}
4351 {3484;
5440}
CD54
98,9 {97,3;
99,2}
35,6 {22,5;
65,7}
3669 {2923;
4870}
3208 {2466;
4531}
99,3 {98,9;
99,6}
13,2 {2,4;
32,7}**
61,4 {48,5;
83,3}
47,6 {20,9;
61,6}
4255 {2693;
4830}
3782 {2299;
4615}
80,1
{42,9;93,0}
9,5 {3,5;
20,8}***
1315 {989;
1810}***
65,4 {55,8;
83,4}
1088 {891;
1337}
42 {0;
920}***
16,9 {5,9;
28,0}
435 {0;
1795}
82,9 {75,4;
91,7}
68,7 {52,9;
87,2}
2,0 {0,8;
3,2}
83,0 {66,8;
88,7}
19,6 {8,7;
32,4}
266 {195;
363}
2856 {1837;
3740}
235 {119;
308}
279 {60;
519}
7361 {5957;
8061}
80,7 {61,9;
90,4}
86,9 {70,3;
92,3}*
4,3 {2,7;
5,9}**
91,2 {86,0;
95,2}**
10,3 {4,1;
15,9}*
3164 {2334;
6530}***
3817 {3113;
4562}***
82 {0;
215}*
4130 {3572;
5279}***
379 {194;
552}***
84,4 {68,1;
88,5}
79,8 {70,5;
88,6}
3,4 {1,9;
6,0}
92,8 {85,4;
95,8}
7,3 {3,0;
23,7}
2726 {2014;
3698}
2985 {2288;
3744}#
71 {1; 154}
CD114
CD11a
CD18
CD62L
CD62P
CD47
Интегрин
β7
CD11b
CD44
98,9 {98,1;
99,2}
4239 {3011;
4767}
406 {147;
584}
153
1
CD58
CD36
CD29
CD49d
CD31
2
97,9 {94,3;
99,2}
2,6 {0,7;
9,7}
72,5 {47,7;
93,4}
91,3 {82,8;
94,7}
99,4 {99,1;
99,5}
3
6810 {5695;
7720}
346 {264;
447}
2210 {1450;
3113}
16313
{14308;
20416}
1170 {898;
1567}
4
91,5 {80,9;
98,1}*
3,4 {1,3;
6,3}
85,3 {72,7;
93,7}
86,8 {76,6;
97,8}
5
6160 {5330;
6537}
311 {174;
465}
3133 {2125;
3768}**
3575 {2505;
4743}***
6
93,2 {88,3;
98,4}
1,0 {0,2;
3,8}#
91,5 {82,1;
95,5}
87,9 {77,9;
97,3}
7
5366 {4743;
6370}
108 {30;
280}##
2639 {2384;
3553}
2226 {1999;
2523}##
99,0 {98,3;
99,3}
16765
99,1 {98,0;
15422
{13358;
99,4}
{12675;
21030}***
19514}
Достоверность различий: * - p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001 (группа женщин с
физиологической беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #p<0,05, ## - p<0,01 (группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с
физиологической беременностью). Данные представлены в виде: медиана {верхний квартиль;
нижний квартиль}.
154
Приложение З
Экспрессия поверхностных молекул нейтрофилами периферической крови
Количественные характеристики экспрессии поверхностных маркеров
нейтрофилами следующих групп женщин
Здоровые
Женщины
с
Женщины
с
небеременные
физиологической
преэклампсией (n=24)
женщины (n=27)
беременностью (n=22)
Интенсив
Интенсив
Интенсивн
Поверхностн
ность
ность
ость
ые маркеры
флюоресц
Относите флюоресце
Относитель флюоресц
Относительно енции,
енции,
льное
ное
нции,
е количество, относитель
количеств относительн
количество, относитель
%
ные
ные
о, %
%
ые единицы
единицы
флюоресце
нции
флюоресцен
ции
1
CD184
CD119
CD192
CD196
CXCR5
CD11c
CD54
CD11a
CD18
CD62L
CD62P
CD47
CD11b
2
0,1 {0;
0,9}
3
4
5
0 {0; 72}
0,4 {0,1; 0,8}
0 {0; 62}
2,3 {0,6;
12,0}
1058 {844;
1292}
21,5 {7,4;
38,7}**
0,2 {0,1;
0,7}
0,8 {0,2;
1,5}
0,4 {0,3;
0,6}
95,7
{82,0;
97,0}
41,5
{26,5;
56,7}
0,7 {0,2;
1,0}
54,2
{19,3;
65,3}
75 {23;
109}
364 {246;
523}
205 {160;
354}
5375
{4417;
6447}
2,1 {1,2;
5,4}
23,1
{12,5;
33,7}
35,1
{16,5;
40,4}
98,2
{96,8;
99,1}
0,8 {0,3; 2,5}
0,8 {0,5; 5,2}
1,3 {0,8; 1,9}
93,5 {79,8;
98,2}
1061 {891;
1255}
54,8 {41,1;
66,8}*
613 {365;
814}
0,2 {0,1; 0,6}
1163 {849;
1475}
46,6 {21,7;
79,5}
484 {323;
640}
0,7 {0,2; 1,8}
1037 {593;
1560}
36,2 {14,6;
49,3}
1953
{1394;
2720}
7622
{6297;
10181}
32,6 {19,0;
40,7}
98,4 {96,5;
98,8}
1394
{1256;
1753}***
106 {68;
135}
431 {302;
538}
496 {312;
699}
5727
{4176;
7042}
1204
{941;
1436}
297 {179;
407}
1057
{813;
1654}
192 {83;
343}
1097
{712;
2150}
1971
{1666;
2588}
7847
{6174;
9378}
единицы
флюоресце
нции
6
1,2 {0,3;
2,3}
20,8 {12,7;
54,9}
0,5 {0,2;
1,0}
1,1 {0,3;
2,0}
0,9 {0,4;
1,3}
96,7 {94,5;
97,8}
51,1 {45,5;
62,0}
0,2 {0; 0,3}
7
18 {0;
87,5}
1262
{1124;
1470}
78 {59;
98}
267 {161;
323}
361 {243;
513}
5731
{4155;
6734}
1137
{971;
1316}
440 {323;
545}
38,0 {17,6;
60,1}
899 {646;
1492}
1,1 {0,2;
3,4}
343 {59;
518}
28,7 {19,5;
52,9}
961 {668;
1874}
36,7 {34,0;
45,3}
98,6 {98,1;
98,8}
1677
{1555;
2158}
6469
{5518;
9708}
155
1
2
3
1,1 {0,6;
156 {80;
CD44
2,3}
240}
99,0
6176
CD58
{98,2;
{5576;
99,5}
6568}
6,6 {1,0;
737 {597;
CD29
17,6}
1047}
1,9 {1,1;
102 {34;
CD49d
2,4}
138}
97,8
6683
CD31
{92,6;
{6072;
99,3}
8143}
Достоверность различий: ** - p<0,01,
4
5
6
7
186 {85;
1,2 {0,3;
128 {90;
1,7 {1,0; 4,0}
231}
2,7}
172}
5976
5383
98,6 {94,8;
93,2 {81,0;
{5482;
{4620;
99,2}
98,2}#
6241}
5829}
891 {709;
11,2 {7,0;
819 {579;
7,7 {3,1; 24,4}
1200}
16,8}
989}
90 {54;
1,4 {1,0;
74 {36;
1,6 {1,2; 2,3}
126}
1,8}
111}
6100
6157
98,2 {91,6;
92,4 {74,5;
{5171;
{4919;
99,2}
96,9}##
7430}
6705}
*** - p<0,001 (группа женщин с физиологической
беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин); #- p<0,05, ## - p<0,01
(группа женщин с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической
беременностью). Данные представлены в виде: медиана {верхний квартиль; нижний квартиль}.
156
Приложение И
Экспрессия отдельных поверхностных маркеров лейкоцитов на микрочастицах клеток в
периферической крови
Показатели экспрессии отдельных поверхностных маркеров на микрочастицах
клеток в плазме периферической крови в группах:
Женщины
с
Здоровые небеременные
Женщины
с
физиологической
женщины (n=21)
преэклампсией (n=24)
беременностью (n=20)
Интенсив
Поверхн
Интенсивн
Интенсивн
ность
остные
ость
Абсолютное ость
Абсолютное флюоресц
маркеры
Абсолютное
флюоресце количество,
количество, флюоресце
енции,
количество, в нции,
нции,
в
1мл
в
1мл относитель
плазмы относительн
относительн 1мл
плазмы
плазмы
ные
ые единицы крови
ые единицы
единицы
крови
крови
флюоресцен
флюоресцен
ции
CD45
5456 {3732;
15046}
5041 {2580;
14803}
14035 {8143;
27779}*
CD3
2940 {1247;
4257}
12828
{7218;
17237}
5217 {2671;
7841}*
CD4
5962 {1885;
9276}
7330 {3412;
14940}
15662 {5586;
84135}*
CD8
5268 {1827;
7400}
5224 {3452;
9813}
16317 {6643;
22819}**
CD16
48515
{10461;
81007}
2028 {1716;
3129}
175613
{56852;
259943}**
3165
{1882;
7835}
13756
{4244;
19632}
4196
{1413;
10227}
6073
{3323;
9060}
2368
{1459;
2828}
CD56
21279 {5075;
37453}
1001 {805;
1326}
48801 {20420;
104159}*
817 {714;
944}
CD14
32719
{11686;
54775}
CD62L
8874 {2478;
39500}
2490 {2204; 49945 {30435;
3177}
139459}*
544 {452;
776}
флюоресце
нции
ции
52829 {2859;
83133}*
13649 {7141;
24222}
4656 {2356;
9300}
7149 {3578;
18586}
6692 {4434;
11570}
7389
{2800;
13124}
13112
{3868;
24065}
5860
{2669;
9648}
6018
{3696;
11617}
2382
{1677;
3479}
1027 {660;
1322}
2316
{2071;
2964}
103642
{44998;
280175}
45284
{14594;
81947}
40780
{20135;
74784}
392 {329;
781}*
16344 {3806;
71925}
499 {416;
665}
2700
{2125;
3696}
10520 {3852; 654 {522;
33562 {1920;
497 {439; 16861 {5457; 549 {465;
25963}
796}
79198}*
644}
48775}
613}
91019
287698
234691
1185 {832;
773 {633;
909 {621;
CD54
{23230;
{87335;
{66570;
1462}
1268}*
1278}
203837}
515868}*
345966}
Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,01 (группа женщин с физиологической
CD62P
беременностью отличается от группы здоровых небеременных женщин). Данные представлены
в виде: медиана {верхний квартиль; нижний квартиль}.
157
Приложение К
Количество микрочастиц в периферической крови, экспрессирующих различные комбинации лейкоцитарных маркеров.
небеременных женщин); # - p<0,05, ## - p<0,001 (группа женщин с преэклампсией от группы женщин с физиологической беременностью).
Данные представлены в виде: медиана {верхний квартиль; нижний квартиль}.
157
Количество микрочастиц в периферической крови, экспрессирующих комбинации поверхностных маркеров в
группах:
Комбинации
Здоровые небеременные женщины Женщины
с
физиологической Женщины с преэклампсией
поверхностных маркеров
(n=21)
беременностью (n=20)
(n=24)
Абсолютное количество, в 1 мл
Абсолютное количество, в 1мл
Абсолютное количество, в 1мл
CD3+CD45+
745 {300; 1073}
1040 {505; 1710}
184 {921; 2150}
CD45+ CD16+ CD56+
298 {188; 600}
9389 {4974; 17894}**
840 {465; 1372} ##
CD45+ CD16+ CD56–
1610 {834; 600}
541 {292; 1225}*
9923 {4032; 17433} ##
CD45+CD16– CD56+
765 {418;, 1234}
520 {161; 888}*
981 {784; 1658} #
CD45–CD16+ CD56+
3832 {1359; 5824}
5989 {2170; 18934}*
8274 {3443; 18439}
CD45+ CD14+
756 {470; 1698}
1707 {692; 3373}
1343 {490; 3979}
CD3+ CD4+
563 {330; 1065}
1707 {686; 3302}*
970 {802; 1639}
CD3+ CD8+
501 {225; 883}
624 {436; 1577}
519 {277; 685}
CD14+ CD54+
6514 {3336; 16819}
9755 {5313; 29386}
11848 {3616; 25767}
CD3+ CD54+
1561 {728; 2456}
2324 {1012; 3887}
2451 {1476; 3486}
CD45+ CD14+ CD54+
399 {339; 726}
229 {95; 974}
411{ 237; 919}
CD45+ CD3+ CD54+
420 {138; 547}
293 {76; 921}
579 {271; 918}
CD45+ CD62L+
1296 {412; 2975}
1105 {401; 3265}
1033 {327; 2017}
CD45+ CD62P+
169 {80; 327}
278 {1; 847}
376 {135; 692}
CD45+ CD62L+ CD62P+
71 {31; 242}
85 {1; 173}
136 {1; 241}
Достоверность различий: *- p<0,05, ** - p<0,001 (группа женщин с физиологической беременностью отличается от группы здоровых
158
Приложение Л
Влияние микрочастиц плазмы периферической крови женщин на экспрессию поверхностных молекул моноцитоподобными клетками линии ТНР-1
Интенсивность экспрессии исследуемых молекул клетками линии ТНР-1 (относительные единицы флюоресценции)
после инкубации с микрочастицами плазмы крови
спонтанная
1
2
3
женщин с
физиологической
беременностью
(n=20)
4
CD11a
13466
{10149;
15339}
13328 {11190;
14538}
CD11b
8540 {5240;
11564}
CD11c
после
активации
TNFα
после предварительной активации TNFα
инкубации с микрочастицами плазмы крови
и
5
6
7
женщин с
физиологической
беременностью
(n=20)
8
9560 {7812;
11849} ●
11149 {9693;
13180}
14037 {9820;
15969}
15073 {12972;
15888}
10781 {8385;
13410} ◊
12182 {10218;
14294}
5769 {4728;
9934}
9138 {6880;
14356}
7291 {5424;
10383}
10075 {8189;
12205}
7873 {5887;
10184} ◊
10816 {8780;
14504}
9809 {8416;
13168}
14836
{13810;
18264}
16371 {15383;
20321} ●
15514 {13838;
18276}
16014 {13978;
17997}
19936
{16432;
21682} ●
20239 {17726;
25977} ◊◙
19288 {15182;
20904}
19202 {17263;
22263}
CD18
6320 {4065;
7855}
4452 {3437;
6369} ●
5603 {4122; 9025}
4655 {3932;
6548}
6791 {5610;
8238}
5257 {4168;
7010} ◊◙
6904 {4989;
10278} *
5543 {4294;
8492} #◊◙
CD31
54964
{25200;
64024}
70016 {58761;
80298} ●
32921 {23385;
61572}
55947 {36796;
62293}
64204
{26916;
82013}
83541 {65231;
95473} ◊◙
30486 {23119;
70032}
69977 {37832;
75877}
CD29
21434
{19221;
30071}
26414 {22313;
32942}
20184 {15739;
24681} ●
23841 {16805;
28190}
26631
{24334;
32134} ●
30327 {23794;
33315}
20665 {17333;
27494} ◊
26533 {15621;
33723}
CD49d
16290
[14365;
18957}
12488 {10522;
19277} ●
16074 {13295;
20487}
14024 {10474;
17995}
16787
{14573;
19544}
13591 {11468;
19198} ◊
17422 {14913;
21420}
15130 {12791;
19160}
небеременных
женщин (n=20)
беременных с
преэклампсией
(n=20)
небеременных
женщин
(n=20)
беременных с
преэклампсией
(n=20)
9
158
Поверхн
остные
маркеры
159
1
Интегрин
β7
CD47
CD54
HLA-DR
VEGFR1
VEGFR2
CD181
4470 {3648;
6522}
13138
{7841;
14737}
29352
{19995;
45180}
7473 {5334;
9789}
18881
{12077;
28322}
35549
{25958;
44312}
3
3045 {2567;
3935}
4
4230 {3382; 5916}
5
3644 {2973;
4396}
19689 {14053;
25122}
15706 {11581;
17524}
16402 {14074;
22543}
3966 {3610;
4893}
5678 {4351;
11438} ●
5263 {3647;
7752}
12133 {11050;
13200}
10945 {9512;
14740}
12735 {10230;
14487}
26192 {15523;
42054}
31599 {16400;
44986}
26308 {16706;
36975}
9576 {7443;
10831}
6280 {5594; 7844}
7474 {6791;
8867}
17330 {12796;
20395}
18251 {10179;
38114}
18229 {10490;
24740}
34840 {27647;
38850} ●
20611 {18129;
26992} ●*
30498 {20800;
37313} ●#
6
3403 {2607;
4317}
17906
{15071;
20029}
38800
{34731;
45102} ●
16822
{11235;
19824} ●
28605
{21490;
41495}
7170 {5586;
9406}
16413
{12673;
19965}
51865
{33822;
69513} ●
7
2925 {2413;
3771}
8
4205 {3326; 5788}
◊
9
3553 {2734;
4365}
21091 {15568;
27469} ◊
15521 {11254;
19662}
16893 {13471;
26859}
34387 {27691;
39304} ◊◙
45163 {40575;
56087} *◊◙
39525 {33640;
49542} #
15815 {14197;
19467}
16044 {12743;
21465}
18396 {12479;
23856}
25596 {15940;
42136}
32300 {19604;
46084}
32990 {18195;
45735}
9862 {7099;
10882} ◊
6019 {5584; 7522}
7748 {6430;
10316}
18322 {13938;
23548}
19261 {12177;
36933}
18537 {12043;
28522}
45192 {38987;
51911} ◊◙
28802 {21335;
37852} *◊◙
39328 {27708;
49347} #◊◙
CD182
7834 {6165;
12340}
7432 {4967;
8376}
9357 {6803;
29072}
8364 {6808;
11585}
6810 {5830;
10039}
7260 {4905;
8487}
8147 {6488;
22547}
8213 {6636;
10294} ◊
CD120a
8176 {6170;
10075}
7483 {6678;
8143}
7832 {6603; 9854}
8254 {7059;
9573}
6994 {6757;
8403}
7216 {5882;
8331}
7863 {6410; 9125}
7639 {6525;
8628}
Достоверность различий: ● - p<0,05 (отличие от спонтанного уровня экспрессии); ◙ - p<0,05 (достоверность различий внутри группы
при наличии/ отсутствии предварительной активации TNFα); * - p< 0,05 (группа женщин с физиологической беременностью отличается от
группы небеременных женщин); # - p<0,05 (группа беременных с преэклампсией отличается от группы женщин с физиологической
беременностью); ◊ - p<0,05 (отличие от уровня экспрессии после активации TNFα). Данные представлены в виде: медиана {верхний
квартиль; нижний квартиль}.
159
CD119
2
3618 {2810;
4424}
16780
{14166;
20835}
160
Список литературы
1.
Айламазян Э.К.,Мозговая Е.В. Гестоз: теория и практика. - Москва: Медпресс-информ,
2008. - 272 с.
2.
Айламазян Э.К., Полякова О.В., Линькова Н.С., Кветной И.М.,Дурнова А.О. Роль
резидентных иммунных клеток в развитии плаценты в норме и при патологии // Журнал
акушерства и женских болезней. - 2010. - Т.LIX, №6. С. 8-14.
3.
Айламазян Э.К., Сельков С.А.,Соколов Д.И. Гестоз и атеросклероз: общность
патогенетических механизмов // Журнал акушерства и женских болезней. - 2009. - №1.
С. 4-15.
4.
Боровиков
В.
STATISTICA.
Исскуство
анализа
данных
на
компьютере:
для
профессионалов. - СПб: Питер, 2003. - 688 с.
5.
Гланц С. Медико-биологическая статистика. - Москва: Практика, 1999. - 459 с.
6.
Должиков А.А.,Заболотная С.В. Прикладная морфология для студентов и врачей:
морфология последа человека. - Белгород, 2005. - 41 с.
7.
Зайнулина
М.С.
Роль
дисфункции
эндотелия
в
патогенезе
плацентарной
недостаточности // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2003. -Vol.2, №2.
P. 36-42.
8.
Калинина Н.М., Кетлинский С.А., Оковитый С.В.,Шуленин С.Н. Заболевания иммунной
системы: Диагностика и фармакотерапия. - Москва: Эксмо, 2008. - 496 с.
9.
Кетлинский С.А.,Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции
реакции воспаления и иммунитета // Иммунология. - 1995. - Т.3. С. 30-44.
10.
Мозговая Е.В.,Зайнулина М.С. Новые решения вопросов гестоза: современная
классификация и комплекс профилактических мер для беременных группы риска //
Журнал акушерства и женских болезней. - 2008. - Т.LVII, №4. С. 3-14.
11.
Мозговая Е.В., Малышева О.В.,Иващенко Т.Э. Эндотелиальная дисфункция при гестозе.
Патогенез,
генетическая
предрасположенность,
диагностика
и
профилактика:
методические рекомендации. - СПб.: Н.-Л., 2003. - 32 с.
12.
Останкова Ю.В., Климовская Я.С., Горская О.А., Колобов А.В., Кветной И.М., Сельков
С.А.,Соколов Д.И. Экспрессия мРНК гена и белка тромбоспондина-1 в плаценте при
гестозе // Бюллетень экспериментальной медицины. - 2011. - Т.151, №2. С. 178-181.
13.
Сельков С.А.,Павлов О.В. Плацентарные макрофаги. - Москва: Товарищество научных
изданий КМК, 2007. - 186 с.
14.
Сидорова И.С., Зарубенко Н.Б.,Гурина О.И. Маркеры дисфункции эндотелия при гестозе
// Российский вестник акушера-гинеколога. - 2010. -Vol.10, №5. P. 24-27.
161
15.
Смирнова Т.Л. Плацента. Этапы развития // Вестник Чувашского университета. - 2009. №2. С. 73-79.
16.
Соколов Д.И. Роль проангиогенных и антиангиогенных факторов в развитии плаценты //
Медицинская иммунология. - 2008. - Т.10, №4-5. С. 347-352.
17.
Соколов Д.И., Колобов А.В., Лесничия М.В., Костючек И.Н., Кветной И.М.,Сельков С.А.
Роль апоптоза в развитии плаценты // Молекулярная медицина. - 2009. - №4. С. 12-18.
18.
Соколов Д.И., Кузнецова С.А., Котов А.Ю., Симбирцев А.С., Барышников А.Ю.,
Полосухина Е.Р., Шейкин Ю.А.,Фрейдлин И.С. Цитокиновая регуляция экспрессии
адгезионных молекул ICAM-1 и продукции IL-8 эндотелиальными клетками //
Медицинская иммунология. - 2000. - Т.2, №1. С. 25-33.
19.
Соколов Д.И.,Сельков С.А. Иммунологический контроль формирования сосудистой сети
плаценты. - Спб: Н.-Л., 2012. - 208 с.
20.
Соколов
Д.И.,
Селютин
А.В.,
Лесничия
М.В.,
Аржанова
О.Н.,Сельков
С.А.
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови беременных женщин с
гестозом // Журнал акушерства и женских болезней. - 2007. - Т.LVI, №4. С. 17-23.
21.
Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Кудряшова А.В., Посисеева Л.В., Панова И.А.,
Малышкина А.И.,Н. Ф.И. Иммунологическая загадка беременности. - Иваново: МИК,
2005. - 276 с.
22.
Старикова Э.А., Амчиславский Е.И., Соколов Д.И., Фрейдлин И.С., Полосухина
Е.Р.,Барышников А.Ю. Изменение поверхностного фенотипа эндотелиальных клеток
под влиянием провоспалительных и противовоспалительных цитокинов // Медицинская
иммунология. - 2003. - Т.5, №1-2. С. 39-48.
23.
Старикова Э.А., Фрейдлин И.С., Соколов Д.И.,Сельков С.А. Изменения свойств
эндотелиальных клеток линии EA.hy 926 под влиянием фактора некроза опухоли α,
интерферона-γ и интерлейкина-4 // Клеточная иммунология. - 2005. - Т.2. С. 83-87.
24.
Степанова О.И., Козонов Г.Р., Цицкарава Д.З., Кузьминых Т.У., Кореньков Д.А.,
Сельков С.А.,Соколов Д.И. Влияние секреторных продуктов ткани плаценты на фенотип
и активность трансэндотелиальной миграции моноцитоподобных клеток линии THP-1 //
Медицинская иммунология. - 2013. -Vol.15, №2. P. 131-140.
25.
Сухих Г.Т.,Ванько В.Л. Иммунология беременности. - Москва: Издательство РАМН,
2003. - 400 с.
26.
Сухих Г.Т., Ходжаева З.С., Филиппов О.С., Адамян Л.В.,Краснопольский В.И.
Гипертензивные расстройства во время беременности, в родах и послеродовом периоде.
Преэклампсия. Эклампсия. -, 2013. - с.
162
27.
Тапильская Н.И. Современные представления о роли иммунной системы в развитии
гестоза // Артериальная гипертензия. - 2006. -Vol.12, №1. P. 32-36.
28.
Трунов А.Н., Обухова О.О., Горбенко О.М., Шваюк А.П., Шубина В.И.,Рябиченко Т.И.
Особенности иммуновоспалительного процесса при позднем гестозе беременных //
Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: биология, клиническая
медицина. - 2010. -Vol.8, №3. P. 47-51.
29.
Трунов А.Н., Пекарев О.Г., Горбенко О.М., Шваюк А.П., Обухова О.О., Шубина
В.И.,Трунова Л.А. Нарушение баланса цитокинов и активность процессов перекисного
окисления липидов при позднем гестозе // Сибирский научный медицинский журнал. 2011. -Vol.31, №1. P. 78-82.
30.
Фетисова И.Н., Панова И.А., Малышкина А.И., Рокотянская Е.А., Ратникова С.Ю.,
Смирнова Е.В., Фетисов Н.С.,Назарова А.О. Генетические аспекты преэклампсии //
Современные проблемы науки и образования. - 2014. -Vol.6. P. 1040.
31.
Фрейдлин И.С.,Шейкин Ю.А. Эндотелиальные клетки в качестве мишеней и
продуцентов цитокинов // Медицинская иммунология. - 2001. -Vol.3, №4. P. 499-514.
32.
Ширшев С.В. Иммунология материнско-фетальных взаимодействий. - Екатеринбург:
УрО РАН, 2009. - 582 с.
33.
Ширшев С.В. Механизмы иммунной толерантности при физиологически протекающей
беременности // Успехи физиологических наук. - 2010. - Т.41, №1. С. 75-93.
34.
Щербаков В.И. Апоптоз в трофобласте и его роль при патологии беременности // Успехи
современной биологии. - 2011. - Т.131, №2. С. 145-158.
35.
Ярилин А.А. Естественные регуляторные Т-клетки // Российский медицинский журнал. 2007. - №1. С. 43-48.
36.
Ярилин А.А. Иммунология : учебник. - Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 752 с.
37.
Apps R., Gardner L.,Moffett A. A critical look at HLA-G // Trends in Immunology. - 2008. Vol.29, №7. P. 313-21.
38.
Cheong Y.C.,Ledger W.L. Cytokines in health and disease // The Obstetrician and
Gynaecologist. - 2003. -Vol.5. P. 155–159.
39.
Hahn S.,Holzgreve W. Fetal cells and cell-free fetal DNA in maternal blood: new insights into
pre-eclampsia // Human reproduction update. - 2002. -Vol.8, №6. P. 501-508.
40.
Mor G.,Abrahams V.M. Potential role of macrophages as immunoregulators of pregnancy //
Reproductive Biology and Endocrinology. - 2003. -Vol.1. P. 119-128.
41.
Smith A.R.,Kenny C.L. Current thoughts on the pathogenesis of pre-eclampsia // The
obstetrician and gynecologist. - 2006. -Vol.8. P. 7-13.
163
42.
Abrahams V.M., Kim Y.M., Straszewski S.L., Romero R.,Mor G. Macrophages and apoptotic
cell clearance during pregnancy // Am J Reprod Immunol. - 2004. -Vol.51, №4. P. 275-82.
43.
Agarwal R., Loganath A., Roy A.C., Wong Y.C.,Ng S.C. Expression profiles of interleukin-15
in early and late gestational human placenta and in pre-eclamptic placenta // Mol Hum Reprod.
- 2001. -Vol.7, №1. P. 97-101.
44.
Alanen A.,Lassila O. Deficient natural killer cell function in preeclampsia // Obstet Gynecol. 1982. -Vol.60, №5. P. 631-4.
45.
Alter G., Malenfant J.M.,Altfeld M. CD107a as a functional marker for the identification of
natural killer cell activity // J Immunol Methods. - 2004. -Vol.294, №1-2. P. 15-22.
46.
Aluvihare V.R., Kallikourdis M.,Betz A.G. Regulatory T cells mediate maternal tolerance to
the fetus // Nat Immunol. - 2004. -Vol.5, №3. P. 266-71.
47.
Amodio G., Mugione A., Sanchez A.M., Vigano P., Candiani M., Somigliana E., Roncarolo
M.G., Panina-Bordignon P.,Gregori S. HLA-G expressing DC-10 and CD4(+) T cells
accumulate in human decidua during pregnancy // Hum Immunol. - 2013. -Vol.74, №4. P. 40611.
48.
Anteby E.Y., Natanson-Yaron S., Greenfield C., Goldman-Wohl D., Haimov-Kochman R.,
Holzer H.,Yagel S. Human placental Hofbauer cells express sprouty proteins: a possible
modulating mechanism of villous branching // Placenta. - 2005. -Vol.26, №6. P. 476-83.
49.
Aplin A.E., Howe A., Alahari S.K.,Juliano R.L. Signal transduction and signal modulation by
cell adhesion receptors: the role of integrins, cadherins, immunoglobulin-cell adhesion
molecules, and selectins // Pharmacol Rev. - 1998. -Vol.50, №2. P. 197-263.
50.
Apostolopoulos V.,McKenzie I.F. Role of the mannose receptor in the immune response // Curr
Mol Med. - 2001. -Vol.1, №4. P. 469-74.
51.
Arcuri F., Buchwalder L., Toti P., Cintorino M., Tosi P., Lockwood C.J., Rybalov B.,Schatz F.
Differential regulation of colony stimulating factor 1 and macrophage migration inhibitory
factor expression by inflammatory cytokines in term human decidua: implications for
macrophage trafficking at the fetal-maternal interface // Biol Reprod. - 2007. -Vol.76, №3. P.
433-9.
52.
Ashton S.V., Whitley G.S., Dash P.R., Wareing M., Crocker I.P., Baker P.N.,Cartwright J.E.
Uterine spiral artery remodeling involves endothelial apoptosis induced by extravillous
trophoblasts through Fas/FasL interactions // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2005. -Vol.25,
№1. P. 102-8.
53.
Auwerx J. The human leukemia cell line, THP-1: a multifacetted model for the study of
monocyte-macrophage differentiation // Experientia. - 1991. -Vol.47, №1. P. 22-31.
164
54.
Barber D.F., Faure M.,Long E.O. LFA-1 contributes an early signal for NK cell cytotoxicity //
J Immunol. - 2004. -Vol.173, №6. P. 3653-9.
55.
Barber D.F.,Long E.O. Coexpression of CD58 or CD48 with intercellular adhesion molecule 1
on target cells enhances adhesion of resting NK cells // J Immunol. - 2003. -Vol.170, №1. P.
294-9.
56.
Barrett H.L., Dekker Nitert M., McIntyre H.D.,Callaway L.K. Maternal lipids in pre-eclampsia:
innocent bystander or culprit? // Hypertens Pregnancy. - 2014. -Vol.33, №4. P. 508-23.
57.
Berckmans R.J., Nieuwland R., Boing A.N., Romijn F.P., Hack C.E.,Sturk A. Cell-derived
microparticles circulate in healthy humans and support low grade thrombin generation //
Thromb Haemost. - 2001. -Vol.85, №4. P. 639-46.
58.
Berg E.L., McEvoy L.M., Berlin C., Bargatze R.F.,Butcher E.C. L-selectin-mediated
lymphocyte rolling on MAdCAM-1 // Nature. - 1993. -Vol.366, №6456. P. 695-8.
59.
Berzofsky J.A.,Terabe M. NKT cells in tumor immunity: opposing subsets define a new
immunoregulatory axis // J Immunol. - 2008. -Vol.180, №6. P. 3627-35.
60.
Biro E., Lok C.A., Hack C.E., van der Post J.A., Schaap M.C., Sturk A.,Nieuwland R. Cellderived microparticles and complement activation in preeclampsia versus normal pregnancy //
Placenta. - 2007. -Vol.28, №8-9. P. 928-35.
61.
Bixel M.G., Petri B., Khandoga A.G., Khandoga A., Wolburg-Buchholz K., Wolburg H., Marz
S., Krombach F.,Vestweber D. A CD99-related antigen on endothelial cells mediates
neutrophil but not lymphocyte extravasation in vivo // Blood. - 2007. -Vol.109, №12. P. 532736.
62.
Bockle B.C., Solder E., Kind S., Romani N.,Sepp N.T. DC-sign+ CD163+ macrophages
expressing hyaluronan receptor LYVE-1 are located within chorion villi of the placenta //
Placenta. - 2008. -Vol.29, №2. P. 187-92.
63.
Borzychowski A.M., Sargent I.L.,Redman C.W. Inflammation and pre-eclampsia // Semin
Fetal Neonatal Med. - 2006. -Vol.11, №5. P. 309-16.
64.
Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow. Introduction // Scand J Clin
Lab Invest Suppl. - 1968. -Vol.97. P. 7.
65.
Bradfield P.F., Nourshargh S., Aurrand-Lions M.,Imhof B.A. JAM family and related proteins
in leukocyte migration (Vestweber series) // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2007. -Vol.27,
№10. P. 2104-12.
66.
Bretelle F., Sabatier F., Desprez D., Camoin L., Grunebaum L., Combes V., D'Ercole
C.,Dignat-George F. Circulating microparticles: a marker of procoagulant state in normal
pregnancy and pregnancy complicated by preeclampsia or intrauterine growth restriction //
Thromb Haemost. - 2003. -Vol.89, №3. P. 486-92.
165
67.
Briskin M., Winsor-Hines D., Shyjan A., Cochran N., Bloom S., Wilson J., McEvoy L.M.,
Butcher E.C., Kassam N., Mackay C.R., Newman W.,Ringler D.J. Human mucosal addressin
cell adhesion molecule-1 is preferentially expressed in intestinal tract and associated lymphoid
tissue // Am J Pathol. - 1997. -Vol.151, №1. P. 97-110.
68.
Brodsky S.V., Zhang F., Nasjletti A.,Goligorsky M.S. Endothelium-derived microparticles
impair endothelial function in vitro // Am J Physiol Heart Circ Physiol. - 2004. -Vol.286, №5.
P. H1910-5.
69.
Burger D., Schock S., Thompson C.S., Montezano A.C., Hakim A.M.,Touyz R.M.
Microparticles: biomarkers and beyond // Clin Sci (Lond). - 2013. -Vol.124, №7. P. 423-41.
70.
Butterworth B.H., Greer I.A., Liston W.A., Haddad N.G.,Johnston T.A. Immunocytochemical
localization of neutrophil elastase in term placenta decidua and myometrium in pregnancyinduced hypertension // Br J Obstet Gynaecol. - 1991. -Vol.98, №9. P. 929-33.
71.
Caballero-Campo P., Dominguez F., Coloma J., Meseguer M., Remohi J., Pellicer A.,Simon C.
Hormonal and embryonic regulation of chemokines IL-8, MCP-1 and RANTES in the human
endometrium during the window of implantation // Mol Hum Reprod. - 2002. -Vol.8, №4. P.
375-84.
72.
Cadden K.A.,Walsh S.W. Neutrophils, but not lymphocytes or monocytes, infiltrate maternal
systemic vasculature in women with preeclampsia // Hypertens Pregnancy. - 2008. -Vol.27,
№4. P. 396-405.
73.
Calvelli T., Denny T.N., Paxton H., Gelman R.,Kagan J. Guideline for flow cytometric
immunophenotyping: a report from the National Institute of Allergy and Infectious Diseases,
Division of AIDS // Cytometry. - 1993. -Vol.14, №7. P. 702-15.
74.
Campbell J.J., Bowman E.P., Murphy K., Youngman K.R., Siani M.A., Thompson D.A., Wu
L., Zlotnik A.,Butcher E.C. 6-C-kine (SLC), a lymphocyte adhesion-triggering chemokine
expressed by high endothelium, is an agonist for the MIP-3beta receptor CCR7 // J Cell Biol. 1998. -Vol.141, №4. P. 1053-9.
75.
Carayannopoulos L.N., Barks J.L., Yokoyama W.M.,Riley J.K. Murine trophoblast cells
induce NK cell interferon-gamma production through KLRK1 // Biol Reprod. - 2010. -Vol.83,
№3. P. 404-14.
76.
Carlino C., Stabile H., Morrone S., Bulla R., Soriani A., Agostinis C., Bossi F., Mocci C.,
Sarazani F., Tedesco F., Santoni A.,Gismondi A. Recruitment of circulating NK cells through
decidual tissues: a possible mechanism controlling NK cell accumulation in the uterus during
early pregnancy // Blood. - 2008. -Vol.111, №6. P. 3108-15.
77.
Carlino C., Trotta E., Stabile H., Morrone S., Bulla R., Soriani A., Iannitto M.L., Agostinis C.,
Mocci C., Minozzi M., Aragona C., Perniola G., Tedesco F., Sozzani S., Santoni A.,Gismondi
166
A. Chemerin regulates NK cell accumulation and endothelial cell morphogenesis in the decidua
during early pregnancy // J Clin Endocrinol Metab. - 2012. -Vol.97, №10. P. 3603-12.
78.
Carlos T.M.,Harlan J.M. Leukocyte-endothelial adhesion molecules // Blood. - 1994. -Vol.84,
№7. P. 2068-101.
79.
Carman C.V., Jun C.D., Salas A.,Springer T.A. Endothelial cells proactively form microvillilike membrane projections upon intercellular adhesion molecule 1 engagement of leukocyte
LFA-1 // J Immunol. - 2003. -Vol.171, №11. P. 6135-44.
80.
Carman C.V.,Springer T.A. A transmigratory cup in leukocyte diapedesis both through
individual vascular endothelial cells and between them // J Cell Biol. - 2004. -Vol.167, №2. P.
377-88.
81.
Cartwright J.E.,Balarajah G. Trophoblast interactions with endothelial cells are increased by
interleukin-1beta and tumour necrosis factor alpha and involve vascular cell adhesion
molecule-1 and alpha4beta1 // Exp Cell Res. - 2005. -Vol.304, №1. P. 328-36.
82.
Carulli G. Effects of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor administration
on neutrophil phenotype and functions // Haematologica. - 1997. -Vol.82, №5. P. 606-16.
83.
Cecati M., Giannubilo S.R., Emanuelli M., Tranquilli A.L.,Saccucci F. HLA-G and pregnancy
adverse outcomes // Med Hypotheses. - 2011. -Vol.76, №6. P. 782-4.
84.
Cernuda-Morollon E.,Ridley A.J. Rho GTPases and leukocyte adhesion receptor expression
and function in endothelial cells // Circ Res. - 2006. -Vol.98, №6. P. 757-67.
85.
Chen L., Belton R.J., Jr.,Nowak R.A. Basigin-mediated gene expression changes in mouse
uterine stromal cells during implantation // Endocrinology. - 2009. -Vol.150, №2. P. 966-76.
86.
Chen L., Liu X., Zhu Y., Cao Y., Sun L.,Jin B. Localization and variation of TRAIL and its
receptors in human placenta during gestation // Life Sci. - 2004. -Vol.74, №12. P. 1479-86.
87.
Chen Y., Huang Y., Jiang R.,Teng Y. Syncytiotrophoblast-derived microparticle shedding in
early-onset and late-onset severe pre-eclampsia // Int J Gynaecol Obstet. - 2012. -Vol.119, №3.
P. 234-8.
88.
Cho D.H., Song H.K., Kang H.S., Yoon S.R., Lee H.G., Pyun K.H., Lee W.J., Kim Y.B.,Choi
I. Ligation of ICAM-1 molecules inhibits target cell-induced granule exocytosis of IL-12activated natural killer cells // Cell Immunol. - 2000. -Vol.199, №1. P. 1-7.
89.
Chuluyan H.E., Schall T.J., Yoshimura T.,Issekutz A.C. IL-1 activation of endothelium
supports VLA-4 (CD49d/CD29)-mediated monocyte transendothelial migration to C5a, MIP-1
alpha, RANTES, and PAF but inhibits migration to MCP-1: a regulatory role for endotheliumderived MCP-1 // J Leukoc Biol. - 1995. -Vol.58, №1. P. 71-9.
90.
Clark P., Boswell F.,Greer I.A. The neutrophil and preeclampsia // Semin Reprod Endocrinol. 1998. -Vol.16, №1. P. 57-64.
167
91.
Clark P., Jordan F., Pearson C., Walker I.D., Sattar N., Ellison J.,Greer I.A. Intercellular
adhesion molecule-1 (ICAM-1) expression is upregulated by thrombin in human monocytes
and THP-1 cells in vitro and in pregnant subjects in vivo // Thromb Haemost. - 2003. -Vol.89,
№6. P. 1043-51.
92.
Cloutier N., Tan S., Boudreau L.H., Cramb C., Subbaiah R., Lahey L., Albert A., Shnayder R.,
Gobezie R., Nigrovic P.A., Farndale R.W., Robinson W.H., Brisson A., Lee D.M.,Boilard E.
The exposure of autoantigens by microparticles underlies the formation of potent inflammatory
components: the microparticle-associated immune complexes // EMBO Mol Med. - 2013. Vol.5, №2. P. 235-49.
93.
Cooper M.A., Fehniger T.A., Turner S.C., Chen K.S., Ghaheri B.A., Ghayur T., Carson
W.E.,Caligiuri M.A. Human natural killer cells: a unique innate immunoregulatory role for the
CD56(bright) subset // Blood. - 2001. -Vol.97, №10. P. 3146-51.
94.
Cosmi L., Maggi L., Santarlasci V., Liotta F.,Annunziato F. T helper cells plasticity in
inflammation // Cytometry A. - 2014. -Vol.85, №1. P. 36-42.
95.
Costantini C., Micheletti A., Calzetti F., Perbellini O., Pizzolo G.,Cassatella M.A. Neutrophil
activation and survival are modulated by interaction with NK cells // Int Immunol. - 2010. Vol.22, №10. P. 827-38.
96.
Coupel S., Moreau A., Hamidou M., Horejsi V., Soulillou J.P.,Charreau B. Expression and
release of soluble HLA-E is an immunoregulatory feature of endothelial cell activation //
Blood. - 2007. -Vol.109, №7. P. 2806-14.
97.
da Costa Martins P.A., van Gils J.M., Mol A., Hordijk P.L.,Zwaginga J.J. Platelet binding to
monocytes increases the adhesive properties of monocytes by up-regulating the expression and
functionality of beta1 and beta2 integrins // J Leukoc Biol. - 2006. -Vol.79, №3. P. 499-507.
98.
Darmochwal-Kolarz D., Rolinski J., Leszczynska-Gorzelak B.,Oleszczuk J. Fas antigen
expression on the decidual lymphocytes of pre-eclamptic patients // Am J Reprod Immunol. 2000. -Vol.43, №4. P. 197-201.
99.
Darmochwal-Kolarz D., Saito S., Rolinski J., Tabarkiewicz J., Kolarz B., LeszczynskaGorzelak B.,Oleszczuk J. Activated T lymphocytes in pre-eclampsia // Am J Reprod Immunol.
- 2007. -Vol.58, №1. P. 39-45.
100.
Darmochwal-Kolarz D., Saito S., Tabarkiewicz J., Kolarz B., Rolinski J., LeszczynskaGorzelak B.,Oleszczuk J. Apoptosis Signaling Is Altered in CD4(+)CD25(+)FoxP3(+) T
Regulatory Lymphocytes in Pre-Eclampsia // Int J Mol Sci. - 2012. -Vol.13, №6. P. 6548-60.
101.
Davison J.M., Homuth V., Jeyabalan A., Conrad K.P., Karumanchi S.A., Quaggin S., Dechend
R.,Luft F.C. New aspects in the pathophysiology of preeclampsia // J Am Soc Nephrol. - 2004.
-Vol.15, №9. P. 2440-8.
168
102.
de Jong A.L., Green D.M., Trial J.A.,Birdsall H.H. Focal effects of mononuclear leukocyte
transendothelial migration: TNF-alpha production by migrating monocytes promotes
subsequent migration of lymphocytes // J Leukoc Biol. - 1996. -Vol.60, №1. P. 129-36.
103.
Denison F.C., Kelly R.W., Calder A.A.,Riley S.C. Cytokine secretion by human fetal
membranes, decidua and placenta at term // Hum Reprod. - 1998. -Vol.13, №12. P. 3560-5.
104.
Dignat-George F.,Boulanger C.M. The many faces of endothelial microparticles // Arterioscler
Thromb Vasc Biol. - 2011. -Vol.31, №1. P. 27-33.
105.
Ding Z., Xiong K.,Issekutz T.B. Chemokines stimulate human T lymphocyte transendothelial
migration to utilize VLA-4 in addition to LFA-1 // J Leukoc Biol. - 2001. -Vol.69, №3. P. 45866.
106.
Dosiou C.,Giudice L.C. Natural killer cells in pregnancy and recurrent pregnancy loss:
endocrine and immunologic perspectives // Endocr Rev. - 2005. -Vol.26, №1. P. 44-62.
107.
Du M.R., Guo P.F., Piao H.L., Wang S.C., Sun C., Jin L.P., Tao Y., Li Y.H., Zhang D., Zhu R.,
Fu Q.,Li D.J. Embryonic trophoblasts induce decidual regulatory T cell differentiation and
maternal-fetal tolerance through thymic stromal lymphopoietin instructing dendritic cells // J
Immunol. - 2014. -Vol.192, №4. P. 1502-11.
108.
Duffield J.S., Ware C.F., Ryffel B.,Savill J. Suppression by apoptotic cells defines tumor
necrosis factor-mediated induction of glomerular mesangial cell apoptosis by activated
macrophages // Am J Pathol. - 2001. -Vol.159, №4. P. 1397-404.
109.
Duley L. Pre-eclampsia and the hypertensive disorders of pregnancy // Br Med Bull. - 2003. Vol.67. P. 161-76.
110.
Dusse L.M., Rios D.R., Pinheiro M.B., Cooper A.J.,Lwaleed B.A. Pre-eclampsia: relationship
between coagulation, fibrinolysis and inflammation // Clin Chim Acta. - 2011. -Vol.412, №1-2.
P. 17-21.
111.
Dye J.F., Jablenska R., Donnelly J.L., Lawrence L., Leach L., Clark P.,Firth J.A. Phenotype of
the endothelium in the human term placenta // Placenta. - 2001. -Vol.22, №1. P. 32-43.
112.
Ebnet K., Suzuki A., Ohno S.,Vestweber D. Junctional adhesion molecules (JAMs): more
molecules with dual functions? // J Cell Sci. - 2004. -Vol.117, №Pt 1. P. 19-29.
113.
Edgell C.J., McDonald C.C.,Graham J.B. Permanent cell line expressing human factor VIIIrelated antigen established by hybridization // Proc Natl Acad Sci U S A. - 1983. -Vol.80, №12.
P. 3734-7.
114.
Eksioglu-Demiralp E., Direskeneli H., Kibaroglu A., Yavuz S., Ergun T.,Akoglu T. Neutrophil
activation in Behcet's disease // Clin Exp Rheumatol. - 2001. -Vol.19, №5 Suppl 24. P. S19-24.
169
115.
Elias C.G., 3rd, Spellberg J.P., Karan-Tamir B., Lin C.H., Wang Y.J., McKenna P.J., Muller
W.A., Zukowski M.M.,Andrew D.P. Ligation of CD31/PECAM-1 modulates the function of
lymphocytes, monocytes and neutrophils // Eur J Immunol. - 1998. -Vol.28, №6. P. 1948-58.
116.
Elsheikh E., Uzunel M., He Z., Holgersson J., Nowak G.,Sumitran-Holgersson S. Only a
specific subset of human peripheral-blood monocytes has endothelial-like functional capacity //
Blood. - 2005. -Vol.106, №7. P. 2347-2355.
117.
Engert S., Rieger L., Kapp M., Becker J.C., Dietl J.,Kammerer U. Profiling chemokines,
cytokines and growth factors in human early pregnancy decidua by protein array // Am J
Reprod Immunol. - 2007. -Vol.58, №2. P. 129-37.
118.
Erle D.J., Briskin M.J., Butcher E.C., Garcia-Pardo A., Lazarovits A.I.,Tidswell M. Expression
and function of the MAdCAM-1 receptor, integrin alpha 4 beta 7, on human leukocytes // J
Immunol. - 1994. -Vol.153, №2. P. 517-28.
119.
Fabriek B.O., van Bruggen R., Deng D.M., Ligtenberg A.J., Nazmi K., Schornagel K., Vloet
R.P., Dijkstra C.D.,van den Berg T.K. The macrophage scavenger receptor CD163 functions as
an innate immune sensor for bacteria // Blood. - 2009. -Vol.113, №4. P. 887-92.
120.
Fadok V.A.,Chimini G. The phagocytosis of apoptotic cells // Semin Immunol. - 2001. -Vol.13,
№6. P. 365-72.
121.
Fahey J.V., Schaefer T.M., Channon J.Y.,Wira C.R. Secretion of cytokines and chemokines by
polarized human epithelial cells from the female reproductive tract // Hum Reprod. - 2005. Vol.20, №6. P. 1439-46.
122.
Fallarino F., Grohmann U., Vacca C., Bianchi R., Orabona C., Spreca A., Fioretti
M.C.,Puccetti P. T cell apoptosis by tryptophan catabolism // Cell Death Differ. - 2002. -Vol.9,
№10. P. 1069-77.
123.
Faveeuw C., Di Mauro M.E., Price A.A.,Ager A. Roles of alpha(4) integrins/VCAM-1 and
LFA-1/ICAM-1 in the binding and transendothelial migration of T lymphocytes and T
lymphoblasts across high endothelial venules // Int Immunol. - 2000. -Vol.12, №3. P. 241-51.
124.
Ferlazzo G.,Munz C. NK cell compartments and their activation by dendritic cells // J
Immunol. - 2004. -Vol.172, №3. P. 1333-9.
125.
Fernekorn U., Butcher E.C., Behrends J., Hartz S.,Kruse A. Functional involvement of Pselectin and MAdCAM-1 in the recruitment of alpha4beta7-integrin-expressing monocyte-like
cells to the pregnant mouse uterus // Eur J Immunol. - 2004. -Vol.34, №12. P. 3423-33.
126.
Friedl P.,Weigelin B. Interstitial leukocyte migration and immune function // Nat Immunol. 2008. -Vol.9, №9. P. 960-9.
170
127.
Fu B., Li X., Sun R., Tong X., Ling B., Tian Z.,Wei H. Natural killer cells promote immune
tolerance by regulating inflammatory TH17 cells at the human maternal-fetal interface // Proc
Natl Acad Sci U S A. - 2013. -Vol.110, №3. P. E231-40.
128.
Gattorno M., Prigione I., Morandi F., Gregorio A., Chiesa S., Ferlito F., Favre A., Uccelli A.,
Gambini C., Martini A.,Pistoia V. Phenotypic and functional characterisation of CCR7+ and
CCR7- CD4+ memory T cells homing to the joints in juvenile idiopathic arthritis // Arthritis
Res Ther. - 2005. -Vol.7, №2. P. R256-67.
129.
Gelderman M.P.,Simak J. Flow cytometric analysis of cell membrane microparticles //
Methods Mol Biol. - 2008. -Vol.484. P. 79-93.
130.
Germain S.J., Sacks G.P., Sooranna S.R., Sargent I.L.,Redman C.W. Systemic inflammatory
priming in normal pregnancy and preeclampsia: the role of circulating syncytiotrophoblast
microparticles // J Immunol. - 2007. -Vol.178, №9. P. 5949-56.
131.
Gervasi M.T., Chaiworapongsa T., Pacora P., Naccasha N., Yoon B.H., Maymon E.,Romero R.
Phenotypic and metabolic characteristics of monocytes and granulocytes in preeclampsia // Am
J Obstet Gynecol. - 2001. -Vol.185, №4. P. 792-7.
132.
Gilbert J.S., Ryan M.J., LaMarca B.B., Sedeek M., Murphy S.R.,Granger J.P. Pathophysiology
of hypertension during preeclampsia: linking placental ischemia with endothelial dysfunction //
Am J Physiol Heart Circ Physiol. - 2008. -Vol.294, №2. P. H541-50.
133.
Goldman-Wohl D.,Yagel S. NK cells and pre-eclampsia // Reprod Biomed Online. - 2008. Vol.16, №2. P. 227-31.
134.
Gomez-Lopez N., Guilbert L.J.,Olson D.M. Invasion of the leukocytes into the fetal-maternal
interface during pregnancy // J Leukoc Biol. - 2010. -Vol.88, №4. P. 625-33.
135.
Gomez-Lopez N., Laresgoiti-Servitje E., Olson D.M., Estrada-Gutierrez G.,Vadillo-Ortega F.
The role of chemokines in term and premature rupture of the fetal membranes: a review // Biol
Reprod. - 2010. -Vol.82, №5. P. 809-14.
136.
Granger J.P., Alexander B.T., Llinas M.T., Bennett W.A.,Khalil R.A. Pathophysiology of
hypertension during preeclampsia linking placental ischemia with endothelial dysfunction //
Hypertension. - 2001. -Vol.38, №3 Pt 2. P. 718-22.
137.
Grimbert P., Bouguermouh S., Baba N., Nakajima T., Allakhverdi Z., Braun D., Saito H.,
Rubio M., Delespesse G.,Sarfati M. Thrombospondin/CD47 interaction: a pathway to generate
regulatory T cells from human CD4+ CD25- T cells in response to inflammation // J Immunol.
- 2006. -Vol.177, №6. P. 3534-41.
138.
Guerin L.R., Prins J.R.,Robertson S.A. Regulatory T-cells and immune tolerance in pregnancy:
a new target for infertility treatment? // Hum Reprod Update. - 2009. -Vol.15, №5. P. 517-35.
171
139.
Gupta A.K., Rusterholz C., Holzgreve W.,Hahn S. Syncytiotrophoblast micro-particles do not
induce apoptosis in peripheral T lymphocytes, but differ in their activity depending on the
mode of preparation // J Reprod Immunol. - 2005. -Vol.68, №1-2. P. 15-26.
140.
Gustafsson C., Hummerdal P., Matthiesen L., Berg G., Ekerfelt C.,Ernerudh J. Cytokine
secretion in decidual mononuclear cells from term human pregnancy with or without labour:
ELISPOT detection of IFN-gamma, IL-4, IL-10, TGF-beta and TNF-alpha // J Reprod
Immunol. - 2006. -Vol.71, №1. P. 41-56.
141.
Habersberger J., Strang F., Scheichl A., Htun N., Bassler N., Merivirta R.M., Diehl P.,
Krippner G., Meikle P., Eisenhardt S.U., Meredith I.,Peter K. Circulating microparticles
generate and transport monomeric C-reactive protein in patients with myocardial infarction //
Cardiovasc Res. - 2012. -Vol.96, №1. P. 64-72.
142.
Hanna J., Wald O., Goldman-Wohl D., Prus D., Markel G., Gazit R., Katz G., HaimovKochman R., Fujii N., Yagel S., Peled A.,Mandelboim O. CXCL12 expression by invasive
trophoblasts induces the specific migration of CD16- human natural killer cells // Blood. 2003. -Vol.102, №5. P. 1569-77.
143.
Haziot A., Tsuberi B.Z.,Goyert S.M. Neutrophil CD14: biochemical properties and role in the
secretion of tumor necrosis factor-alpha in response to lipopolysaccharide // J Immunol. - 1993.
-Vol.150, №12. P. 5556-65.
144.
He P., Shao D., Ye M.,Zhang G. Analysis of gene expression identifies candidate markers and
pathways in pre-eclampsia // J Obstet Gynaecol. - 2014. P. 1-7.
145.
Heikkinen J., Mottonen M., Alanen A.,Lassila O. Phenotypic characterization of regulatory T
cells in the human decidua // Clin Exp Immunol. - 2004. -Vol.136, №2. P. 373-8.
146.
Heimbeck I., Hofer T.P., Eder C., Wright A.K., Frankenberger M., Marei A., Boghdadi G.,
Scherberich J.,Ziegler-Heitbrock L. Standardized single-platform assay for human monocyte
subpopulations: Lower CD14+CD16++ monocytes in females // Cytometry A. - 2010. -Vol.77,
№9. P. 823-30.
147.
Hladunewich M., Karumanchi S.A.,Lafayette R. Pathophysiology of the clinical manifestations
of preeclampsia // Clin J Am Soc Nephrol. - 2007. -Vol.2, №3. P. 543-9.
148.
Houser B.L. Decidual macrophages and their roles at the maternal-fetal interface // Yale J Biol
Med. - 2012. -Vol.85, №1. P. 105-18.
149.
Houser B.L., Tilburgs T., Hill J., Nicotra M.L.,Strominger J.L. Two unique human decidual
macrophage populations // J Immunol. - 2011. -Vol.186, №4. P. 2633-42.
150.
Hsu P.,Nanan R.K. Innate and adaptive immune interactions at the fetal-maternal interface in
healthy human pregnancy and pre-eclampsia // Front Immunol. - 2014. -Vol.5. P. 125.
172
151.
Hu Y., Dutz J.P., MacCalman C.D., Yong P., Tan R.,von Dadelszen P. Decidual NK cells alter
in vitro first trimester extravillous cytotrophoblast migration: a role for IFN-gamma // J
Immunol. - 2006. -Vol.177, №12. P. 8522-30.
152.
Hu Y., Tan R., MacCalman C.D., Eastabrook G., Park S.H., Dutz J.P.,von Dadelszen P. IFNgamma-mediated extravillous trophoblast outgrowth inhibition in first trimester explant
culture: a role for insulin-like growth factors // Mol Hum Reprod. - 2008. -Vol.14, №5. P. 2819.
153.
Huang Y., Zhu X.Y., Du M.R.,Li D.J. Human trophoblasts recruited T lymphocytes and
monocytes into decidua by secretion of chemokine CXCL16 and interaction with CXCR6 in
the first-trimester pregnancy // J Immunol. - 2008. -Vol.180, №4. P. 2367-75.
154.
Hugel B., Martinez M.C., Kunzelmann C.,Freyssinet J.M. Membrane microparticles: two sides
of the coin // Physiology (Bethesda). - 2005. -Vol.20. P. 22-7.
155.
Hung T.H.,Burton G.J. Hypoxia and reoxygenation: a possible mechanism for placental
oxidative stress in preeclampsia // Taiwan J Obstet Gynecol. - 2006. -Vol.45, №3. P. 189-200.
156.
Hunt J.S., Petroff M.G., McIntire R.H.,Ober C. HLA-G and immune tolerance in pregnancy //
FASEB J. - 2005. -Vol.19, №7. P. 681-93.
157.
Huo Y., Hafezi-Moghadam A.,Ley K. Role of Vascular Cell Adhesion Molecule-1 and
Fibronectin Connecting Segment-1 in Monocyte Rolling and Adhesion on Early
Atherosclerotic Lesions // Circulation Research. - 2000. -Vol.87, №2. P. 153-159.
158.
Hviid T.V. HLA-G in human reproduction: aspects of genetics, function and pregnancy
complications // Hum Reprod Update. - 2006. -Vol.12, №3. P. 209-32.
159.
Ishitani A., Sageshima N.,Hatake K. The involvement of HLA-E and -F in pregnancy // J
Reprod Immunol. - 2006. -Vol.69, №2. P. 101-13.
160.
Issekutz A.C.,Issekutz T.B. Quantitation and kinetics of blood monocyte migration to acute
inflammatory reactions, and IL-1 alpha, tumor necrosis factor-alpha, and IFN-gamma // J
Immunol. - 1993. -Vol.151, №4. P. 2105-15.
161.
Jaakkola K., Jokimaa V., Kallajoki M., Jalkanen S.,Ekholm E. Pre-eclampsia does not change
the adhesion molecule status in the placental bed // Placenta. - 2000. -Vol.21, №2-3. P. 133-41.
162.
Jin L.P., Chen Q.Y., Zhang T., Guo P.F.,Li D.J. The CD4+CD25 bright regulatory T cells and
CTLA-4 expression in peripheral and decidual lymphocytes are down-regulated in human
miscarriage // Clin Immunol. - 2009. -Vol.133, №3. P. 402-10.
163.
Jockers J.J.,Novak N. Different expression of adhesion molecules and tetraspanins of
monocytes of patients with atopic eczema // Allergy. - 2006. -Vol.61, №12. P. 1419-22.
173
164.
Jonuleit H., Schmitt E., Kakirman H., Stassen M., Knop J.,Enk A.H. Infectious tolerance:
human CD25(+) regulatory T cells convey suppressor activity to conventional CD4(+) T helper
cells // J Exp Med. - 2002. -Vol.196, №2. P. 255-60.
165.
Kanai T., Fujii T., Kozuma S., Yamashita T., Miki A., Kikuchi A.,Taketani Y. Soluble HLA-G
influences the release of cytokines from allogeneic peripheral blood mononuclear cells in
culture // Mol Hum Reprod. - 2001. -Vol.7, №2. P. 195-200.
166.
Kanai T., Fujii T., Unno N., Yamashita T., Hyodo H., Miki A., Hamai Y., Kozuma S.,Taketani
Y. Human leukocyte antigen-G-expressing cells differently modulate the release of cytokines
from mononuclear cells present in the decidua versus peripheral blood // Am J Reprod
Immunol. - 2001. -Vol.45, №2. P. 94-9.
167.
Kaufmann P., Black S.,Huppertz B. Endovascular trophoblast invasion: implications for the
pathogenesis of intrauterine growth retardation and preeclampsia // Biol Reprod. - 2003. Vol.69, №1. P. 1-7.
168.
Kaufmann P., Mayhew T.M.,Charnock-Jones D.S. Aspects of human fetoplacental
vasculogenesis and angiogenesis. II. Changes during normal pregnancy // Placenta. - 2004. Vol.25, №2-3. P. 114-26.
169.
Kauma S., Takacs P., Scordalakes C., Walsh S., Green K.,Peng T. Increased endothelial
monocyte chemoattractant protein-1 and interleukin-8 in preeclampsia // Obstet Gynecol. 2002. -Vol.100, №4. P. 706-14.
170.
Kawasaki K., Kondoh E., Chigusa Y., Ujita M., Murakami R., Mogami H., Brown J.B., Okuno
Y.,Konishi I. Reliable pre-eclampsia pathways based on multiple independent microarray data
sets // Mol Hum Reprod. - 2015. -Vol.21, №2. P. 217-24.
171.
Keskin D.B., Allan D.S., Rybalov B., Andzelm M.M., Stern J.N., Kopcow H.D., Koopman
L.A.,Strominger J.L. TGFbeta promotes conversion of CD16+ peripheral blood NK cells into
CD16- NK cells with similarities to decidual NK cells // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2007. Vol.104, №9. P. 3378-83.
172.
Kho E.M., McCowan L.M., North R.A., Roberts C.T., Chan E., Black M.A., Taylor R.S.,
Dekker G.A.,Consortium S. Duration of sexual relationship and its effect on preeclampsia and
small for gestational age perinatal outcome // J Reprod Immunol. - 2009. -Vol.82, №1. P. 6673.
173.
Kim H.R., Lee K.H., Park S.J., Kim S.Y., Yang Y.K., Tae J.,Kim J. Anti-cancer activity and
mechanistic features of a NK cell activating molecule // Cancer Immunol Immunother. - 2009.
-Vol.58, №10. P. 1691-700.
174
174.
Kim S.H., Turnbull J.,Guimond S. Extracellular matrix and cell signalling: the dynamic
cooperation of integrin, proteoglycan and growth factor receptor // J Endocrinol. - 2011. Vol.209, №2. P. 139-51.
175.
Kopcow H.D.,Karumanchi S.A. Angiogenic factors and natural killer (NK) cells in the
pathogenesis of preeclampsia // J Reprod Immunol. - 2007. -Vol.76, №1-2. P. 23-9.
176.
Krishnaswamy G., Kelley J., Yerra L., Smith J.K.,Chi D.S. Human endothelium as a source of
multifunctional cytokines: molecular regulation and possible role in human disease // J
Interferon Cytokine Res. - 1999. -Vol.19, №2. P. 91-104.
177.
Krzewski K.,Strominger J.L. The killer's kiss: the many functions of NK cell immunological
synapses // Curr Opin Cell Biol. - 2008. -Vol.20, №5. P. 597-605.
178.
Kuldo J.M., Westra J., Asgeirsdottir S.A., Kok R.J., Oosterhuis K., Rots M.G., Schouten J.P.,
Limburg P.C.,Molema G. Differential effects of NF-{kappa}B and p38 MAPK inhibitors and
combinations thereof on TNF-{alpha}- and IL-1{beta}-induced proinflammatory status of
endothelial cells in vitro // Am J Physiol Cell Physiol. - 2005. -Vol.289, №5. P. C1229-39.
179.
Kumar C.A.,Das U.N. Lipid peroxides, anti-oxidants and nitric oxide in patients with preeclampsia and essential hypertension // Med Sci Monit. - 2000. -Vol.6, №5. P. 901-7.
180.
Kwan M., Hazan A., Zhang J., Jones R.L., Harris L.K., Whittle W., Keating S., Dunk C.E.,Lye
S.J. Dynamic changes in maternal decidual leukocyte populations from first to second trimester
gestation // Placenta. - 2014. -Vol.35, №12. P. 1027-34.
181.
Lam C., Lim K.H.,Karumanchi S.A. Circulating angiogenic factors in the pathogenesis and
prediction of preeclampsia // Hypertension. - 2005. -Vol.46, №5. P. 1077-85.
182.
Langer-Gould A., Gupta R., Huang S., Hagan A., Atkuri K., Leimpeter A.D., Albers K.B.,
Greenwood E., Van Den Eeden S.K., Steinman L.,Nelson L.M. Interferon-gamma-producing T
cells, pregnancy, and postpartum relapses of multiple sclerosis // Arch Neurol. - 2010. -Vol.67,
№1. P. 51-7.
183.
Laresgoiti-Servitje E. A leading role for the immune system in the pathophysiology of
preeclampsia // J Leukoc Biol. - 2013. -Vol.94, №2. P. 247-57.
184.
Laresgoiti-Servitje E., Gomez-Lopez N.,Olson D.M. An immunological insight into the origins
of pre-eclampsia // Hum Reprod Update. - 2010. -Vol.16, №5. P. 510-24.
185.
Le Bouteiller P.,Mallet V. HLA-G and pregnancy // Rev Reprod. - 1997. -Vol.2, №1. P. 7-13.
186.
Le Bouteiller P., Pizzato N., Barakonyi A.,Solier C. HLA-G, pre-eclampsia, immunity and
vascular events // J Reprod Immunol. - 2003. -Vol.59, №2. P. 219-34.
187.
Leeuwenberg J.F., von Asmuth E.J., Jeunhomme T.M.,Buurman W.A. IFN-gamma regulates
the expression of the adhesion molecule ELAM-1 and IL-6 production by human endothelial
cells in vitro // J Immunol. - 1990. -Vol.145, №7. P. 2110-4.
175
188.
Leitner J., Herndler-Brandstetter D., Zlabinger G.J., Grubeck-Loebenstein B.,Steinberger P.
CD58/CD2 Is the Primary Costimulatory Pathway in Human CD28-CD8+ T Cells // J
Immunol. - 2015. -Vol.195, №2. P. 477-87.
189.
Liang S., Ristich V., Arase H., Dausset J., Carosella E.D.,Horuzsko A. Modulation of dendritic
cell differentiation by HLA-G and ILT4 requires the IL-6--STAT3 signaling pathway // Proc
Natl Acad Sci U S A. - 2008. -Vol.105, №24. P. 8357-62.
190.
Libby P., Nahrendorf M., Pittet M.J.,Swirski F.K. Diversity of denizens of the atherosclerotic
plaque: not all monocytes are created equal // Circulation. - 2008. -Vol.117, №25. P. 3168-70.
191.
Lin S.J., Chang L.Y., Yan D.C., Huang Y.J., Lin T.J.,Lin T.Y. Decreased intercellular adhesion
molecule-1 (CD54) and L-selectin (CD62L) expression on peripheral blood natural killer cells
in asthmatic children with acute exacerbation // Allergy. - 2003. -Vol.58, №1. P. 67-71.
192.
Lin S.J.,Yan D.C. ICAM-1 (CD54) expression on T lymphocytes and natural killer cells from
umbilical cord blood: regulation with interleukin-12 and interleukin-15 // Cytokines Cell Mol
Ther. - 2000. -Vol.6, №4. P. 161-4.
193.
Lindaman A., Dowden A.,Zavazava N. Soluble HLA-G molecules induce apoptosis in natural
killer cells // Am J Reprod Immunol. - 2006. -Vol.56, №1. P. 68-76.
194.
Lissauer D., Goodyear O., Khanum R., Moss P.A.,Kilby M.D. Profile of maternal CD4 T-cell
effector function during normal pregnancy and in women with a history of recurrent
miscarriage // Clin Sci (Lond). - 2014. -Vol.126, №5. P. 347-54.
195.
Liu X., Liu Y., Ding M.,Wang X. Reduced expression of indoleamine 2,3-dioxygenase
participates in pathogenesis of preeclampsia via regulatory T cells // Mol Med Rep. - 2011. Vol.4, №1. P. 53-8.
196.
Liu Y., Shaw S.K., Ma S., Yang L., Luscinskas F.W.,Parkos C.A. Regulation of leukocyte
transmigration: cell surface interactions and signaling events // J Immunol. - 2004. -Vol.172,
№1. P. 7-13.
197.
Lockwood C.J., Huang S.J., Chen C.P., Huang Y., Xu J., Faramarzi S., Kayisli O., Kayisli U.,
Koopman L., Smedts D., Buchwalder L.F.,Schatz F. Decidual cell regulation of natural killer
cell-recruiting chemokines: implications for the pathogenesis and prediction of preeclampsia //
Am J Pathol. - 2013. -Vol.183, №3. P. 841-56.
198.
Lockwood C.J., Matta P., Krikun G., Koopman L.A., Masch R., Toti P., Arcuri F., Huang S.T.,
Funai E.F.,Schatz F. Regulation of monocyte chemoattractant protein-1 expression by tumor
necrosis factor-alpha and interleukin-1beta in first trimester human decidual cells: implications
for preeclampsia // Am J Pathol. - 2006. -Vol.168, №2. P. 445-52.
199.
Lockwood C.J., Paidas M., Krikun G., Koopman L.A., Masch R., Kuczynski E., Kliman H.,
Baergen R.N.,Schatz F. Inflammatory cytokine and thrombin regulation of interleukin-8 and
176
intercellular adhesion molecule-1 expression in first trimester human decidua // J Clin
Endocrinol Metab. - 2005. -Vol.90, №8. P. 4710-5.
200.
Loewendorf A.I., Nguyen T.A., Yesayan M.N.,Kahn D.A. Normal human pregnancy results in
maternal immune activation in the periphery and at the uteroplacental interface // PLoS One. 2014. -Vol.9, №5. P. e96723.
201.
Lok C.A., Van Der Post J.A., Sargent I.L., Hau C.M., Sturk A., Boer K.,Nieuwland R. Changes
in microparticle numbers and cellular origin during pregnancy and preeclampsia // Hypertens
Pregnancy. - 2008. -Vol.27, №4. P. 344-60.
202.
Lozito T.P.,Tuan R.S. Endothelial
cell
microparticles act
as
centers
of matrix
metalloproteinsase-2 (MMP-2) activation and vascular matrix remodeling // J Cell Physiol. 2012. -Vol.227, №2. P. 534-49.
203.
Luppi P., Haluszczak C., Betters D., Richard C.A., Trucco M.,DeLoia J.A. Monocytes are
progressively activated in the circulation of pregnant women // J Leukoc Biol. - 2002. -Vol.72,
№5. P. 874-84.
204.
Luppi P., Irwin T.E., Simhan H.,Deloia J.A. CD11b Expression on circulating leukocytes
increases in preparation for parturition // Am J Reprod Immunol. - 2004. -Vol.52, №5. P. 3239.
205.
Luu N.T., Rainger G.E., Buckley C.D.,Nash G.B. CD31 regulates direction and rate of
neutrophil migration over and under endothelial cells // J Vasc Res. - 2003. -Vol.40, №5. P.
467-79.
206.
Lynge Nilsson L., Djurisic S.,Hviid T.V. Controlling the Immunological Crosstalk during
Conception and Pregnancy: HLA-G in Reproduction // Front Immunol. - 2014. -Vol.5. P. 198.
207.
Madazli R., Benian A., Ilvan S.,Calay Z. Placental apoptosis and adhesion molecules
expression in the placenta and the maternal placental bed of pregnancies complicated by fetal
growth restriction with and without pre-eclampsia // J Obstet Gynaecol. - 2006. -Vol.26, №1. P.
5-10.
208.
Mailliard R.B., Egawa S., Cai Q., Kalinska A., Bykovskaya S.N., Lotze M.T., Kapsenberg
M.L., Storkus W.J.,Kalinski P. Complementary dendritic cell-activating function of CD8+ and
CD4+ T cells: helper role of CD8+ T cells in the development of T helper type 1 responses // J
Exp Med. - 2002. -Vol.195, №4. P. 473-83.
209.
Malygin A.M., Meri S.,Timonen T. Regulation of natural killer cell activity by transforming
growth factor-beta and prostaglandin E2 // Scand J Immunol. - 1993. -Vol.37, №1. P. 71-6.
210.
Manten G.T., van der Hoek Y.Y., Marko Sikkema J., Voorbij H.A., Hameeteman T.M., Visser
G.H.,Franx A. The role of lipoprotein (a) in pregnancies complicated by pre-eclampsia // Med
Hypotheses. - 2005. -Vol.64, №1. P. 162-9.
177
211.
Mantovani A., Sica A., Sozzani S., Allavena P., Vecchi A.,Locati M. The chemokine system in
diverse forms of macrophage activation and polarization // Trends Immunol. - 2004. -Vol.25,
№12. P. 677-86.
212.
Mao G., Wang J., Kang Y., Tai P., Wen J., Zou Q., Li G., Ouyang H., Xia G.,Wang B.
Progesterone increases systemic and local uterine proportions of CD4+CD25+ Treg cells
during midterm pregnancy in mice // Endocrinology. - 2010. -Vol.151, №11. P. 5477-88.
213.
Masopust D., Vezys V., Usherwood E.J., Cauley L.S., Olson S., Marzo A.L., Ward R.L.,
Woodland D.L.,Lefrancois L. Activated primary and memory CD8 T cells migrate to
nonlymphoid tissues regardless of site of activation or tissue of origin // J Immunol. - 2004. Vol.172, №8. P. 4875-82.
214.
Mause S.F.,Weber C. Microparticles: protagonists of a novel communication network for
intercellular information exchange // Circ Res. - 2010. -Vol.107, №9. P. 1047-57.
215.
McLachlan J.B.,Jenkins M.K. Migration and accumulation of effector CD4+ T cells in
nonlymphoid tissues // Proc Am Thorac Soc. - 2007. -Vol.4, №5. P. 439-42.
216.
Mehendale S., Kilari A., Dangat K., Taralekar V., Mahadik S.,Joshi S. Fatty acids,
antioxidants, and oxidative stress in pre-eclampsia // Int J Gynaecol Obstet. - 2008. -Vol.100,
№3. P. 234-8.
217.
Melgert B.N., Spaans F., Borghuis T., Klok P.A., Groen B., Bolt A., de Vos P., van Pampus
M.G., Wong T.Y., van Goor H., Bakker W.W.,Faas M.M. Pregnancy and preeclampsia affect
monocyte subsets in humans and rats // PLoS One. - 2012. -Vol.7, №9. P. e45229.
218.
Mellembakken J.R., Aukrust P., Hestdal K., Ueland T., Abyholm T.,Videm V. Chemokines
and leukocyte activation in the fetal circulation during preeclampsia // Hypertension. - 2001. Vol.38, №3. P. 394-8.
219.
Mellembakken J.R., Aukrust P., Olafsen M.K., Ueland T., Hestdal K.,Videm V. Activation of
leukocytes during the uteroplacental passage in preeclampsia // Hypertension. - 2002. -Vol.39,
№1. P. 155-60.
220.
Messerli M., May K., Hansson S.R., Schneider H., Holzgreve W., Hahn S.,Rusterholz C. Fetomaternal interactions in pregnancies: placental microparticles activate peripheral blood
monocytes // Placenta. - 2010. -Vol.31, №2. P. 106-12.
221.
Mezentsev A., Merks R.M., O'Riordan E., Chen J., Mendelev N., Goligorsky M.S.,Brodsky
S.V. Endothelial microparticles affect angiogenesis in vitro: role of oxidative stress // Am J
Physiol Heart Circ Physiol. - 2005. -Vol.289, №3. P. H1106-14.
222.
Michimata T., Tsuda H., Sakai M., Fujimura M., Nagata K., Nakamura M.,Saito S.
Accumulation of CRTH2-positive T-helper 2 and T-cytotoxic 2 cells at implantation sites of
178
human decidua in a prostaglandin D(2)-mediated manner // Mol Hum Reprod. - 2002. -Vol.8,
№2. P. 181-7.
223.
Middleton J., Patterson A.M., Gardner L., Schmutz C.,Ashton B.A. Leukocyte extravasation:
chemokine transport and presentation by the endothelium // Blood. - 2002. -Vol.100, №12. P.
3853-60.
224.
Mihu D., Razvan C., Malutan A.,Mihaela C. Evaluation of maternal systemic inflammatory
response in preeclampsia // Taiwan J Obstet Gynecol. - 2015. -Vol.54, №2. P. 160-6.
225.
Minas V., Jeschke U., Kalantaridou S.N., Richter D.U., Reimer T., Mylonas I., Friese
K.,Makrigiannakis A. Abortion is associated with increased expression of FasL in decidual
leukocytes and apoptosis of extravillous trophoblasts: a role for CRH and urocortin // Mol Hum
Reprod. - 2007. -Vol.13, №9. P. 663-73.
226.
Mincheva-Nilsson L., Baranov V., Yeung M.M., Hammarstrom S.,Hammarstrom M.L.
Immunomorphologic studies of human decidua-associated lymphoid cells in normal early
pregnancy // J Immunol. - 1994. -Vol.152, №4. P. 2020-32.
227.
Mincheva-Nilsson L., Baranov V., Yeung M.M., Hammarstrom S.,Hammarstrom M.L.
Immunomorphologic studies of human decidua-associated lymphoid cells in normal early
pregnancy // Adv Exp Med Biol. - 1995. -Vol.371A. P. 367-71.
228.
Mirandola P., Ponti C., Gobbi G., Sponzilli I., Vaccarezza M., Cocco L., Zauli G., Secchiero
P., Manzoli F.A.,Vitale M. Activated human NK and CD8+ T cells express both TNF-related
apoptosis-inducing ligand (TRAIL) and TRAIL receptors but are resistant to TRAIL-mediated
cytotoxicity // Blood. - 2004. -Vol.104, №8. P. 2418-24.
229.
Mittag A., Lenz D., Gerstner A.O., Sack U., Steinbrecher M., Koksch M., Raffael A., Bocsi
J.,Tarnok A. Polychromatic (eight-color) slide-based cytometry for the phenotyping of
leukocyte, NK, and NKT subsets // Cytometry A. - 2005. -Vol.65, №2. P. 103-15.
230.
Miwa N., Hayakawa S., Miyazaki S., Myojo S., Sasaki Y., Sakai M., Takikawa O.,Saito S.
IDO expression on decidual and peripheral blood dendritic cells and monocytes/macrophages
after treatment with CTLA-4 or interferon-gamma increase in normal pregnancy but decrease
in spontaneous abortion // Mol Hum Reprod. - 2005. -Vol.11, №12. P. 865-70.
231.
Mold J.E., Michaelsson J., Burt T.D., Muench M.O., Beckerman K.P., Busch M.P., Lee T.H.,
Nixon D.F.,McCune J.M. Maternal alloantigens promote the development of tolerogenic fetal
regulatory T cells in utero // Science. - 2008. -Vol.322, №5907. P. 1562-5.
232.
Molitor-Dart M.L., Andrassy J., Kwun J., Kayaoglu H.A., Roenneburg D.A., Haynes L.D.,
Torrealba J.R., Bobadilla J.L., Sollinger H.W., Knechtle S.J.,Burlingham W.J. Developmental
exposure to noninherited maternal antigens induces CD4+ T regulatory cells: relevance to
mechanism of heart allograft tolerance // J Immunol. - 2007. -Vol.179, №10. P. 6749-61.
179
233.
Molvarec A., Ito M., Shima T., Yoneda S., Toldi G., Stenczer B., Vasarhelyi B., Rigo J.,
Jr.,Saito S. Decreased proportion of peripheral blood vascular endothelial growth factorexpressing T and natural killer cells in preeclampsia // Am J Obstet Gynecol. - 2010. -Vol.203,
№6. P. 567 e1-8.
234.
Morita M., Watanabe Y.,Akaike T. Inflammatory cytokines up-regulate intercellular adhesion
molecule-1 expression on primary cultured mouse hepatocytes and T-lymphocyte adhesion //
Hepatology. - 1994. -Vol.19, №2. P. 426-31.
235.
Moser B.,Willimann K. Chemokines: role in inflammation and immune surveillance // Ann
Rheum Dis. - 2004. -Vol.63 Suppl 2. P. ii84-ii89.
236.
Muller W.A. Mechanisms of leukocyte transendothelial migration // Annu Rev Pathol. - 2011. Vol.6. P. 323-44.
237.
Murphy S.P., Tayade C., Ashkar A.A., Hatta K., Zhang J.,Croy B.A. Interferon gamma in
successful pregnancies // Biol Reprod. - 2009. -Vol.80, №5. P. 848-59.
238.
Nagamatsu T.,Schust D.J. The contribution of macrophages to normal and pathological
pregnancies // Am J Reprod Immunol. - 2010. -Vol.63, №6. P. 460-71.
239.
Nakayama J., Terao H., Koga T.,Furue M. Induction of CD54 and CD58 expression in cultured
human endothelial cells by beta-interferon with or without hyperthermia in vitro // J Dermatol
Sci. - 2001. -Vol.26, №1. P. 19-24.
240.
Ng S.C., Gilman-Sachs A., Thaker P., Beaman K.D., Beer A.E.,Kwak-Kim J. Expression of
intracellular Th1 and Th2 cytokines in women with recurrent spontaneous abortion,
implantation failures after IVF/ET or normal pregnancy // Am J Reprod Immunol. - 2002. Vol.48, №2. P. 77-86.
241.
Nhan-Chang C.L., Romero R., Kusanovic J.P., Gotsch F., Edwin S.S., Erez O., Mittal P., Kim
C.J., Kim M.J., Espinoza J., Friel L.A., Vaisbuch E., Than N.G., Mazaki-Tovi S.,Hassan S.S. A
role for CXCL13 (BCA-1) in pregnancy and intra-amniotic infection/inflammation // J Matern
Fetal Neonatal Med. - 2008. -Vol.21, №11. P. 763-75.
242.
O'Brien M., Dausset J., Carosella E.D.,Moreau P. Analysis of the role of HLA-G in
preeclampsia // Hum Immunol. - 2000. -Vol.61, №11. P. 1126-31.
243.
Oldenborg P.-A. CD47: A Cell Surface Glycoprotein Which Regulates Multiple Functions of
Hematopoietic Cells in Health and Disease // ISRN Hematology. - 2013. -Vol.2013. P. 19.
244.
Olson T.S.,Ley K. Chemokines and chemokine receptors in leukocyte trafficking // Am J
Physiol Regul Integr Comp Physiol. - 2002. -Vol.283, №1. P. R7-28.
245.
Orange J.S.,Ballas Z.K. Natural killer cells in human health and disease // Clin Immunol. 2006. -Vol.118, №1. P. 1-10.
180
246.
Oyama R. The relationship between the level of expression of intercellular adhesion molecule1 in placenta and onset of preeclampsia // J Obstet Gynaecol Res. - 2001. -Vol.27, №3. P. 14754.
247.
Pachynski R.K., Wu S.W., Gunn M.D.,Erle D.J. Secondary lymphoid-tissue chemokine (SLC)
stimulates integrin alpha 4 beta 7-mediated adhesion of lymphocytes to mucosal addressin cell
adhesion molecule-1 (MAdCAM-1) under flow // J Immunol. - 1998. -Vol.161, №2. P. 952-6.
248.
Page N.M. The endocrinology of pre-eclampsia // Clin Endocrinol (Oxf). - 2002. -Vol.57, №4.
P. 413-23.
249.
Pennington K.A., Schulz L.C.,Schust D.J. Placental IDO and oxidative damage in preeclampsia: fresh chicken or fresh eggs? Preface // Syst Biol Reprod Med. - 2011. -Vol.57, №4.
P. 171-3.
250.
Perez-Sepulveda A., Torres M.J., Khoury M.,Illanes S.E. Innate immune system and
preeclampsia // Front Immunol. - 2014. -Vol.5. P. 244.
251.
Piccinni M.P., Scaletti C., Vultaggio A., Maggi E.,Romagnani S. Defective production of LIF,
M-CSF and Th2-type cytokines by T cells at fetomaternal interface is associated with
pregnancy loss // J Reprod Immunol. - 2001. -Vol.52, №1-2. P. 35-43.
252.
Puppo F., Costa M., Contini P., Brenci S., Cevasco E., Ghio M., Norelli R., Bensussan A.,
Capitanio G.L.,Indiveri F. Determination of soluble HLA-G and HLA-A, -B, and -C molecules
in pregnancy // Transplant Proc. - 1999. -Vol.31, №4. P. 1841-3.
253.
Quenby S., Nik H., Innes B., Lash G., Turner M., Drury J.,Bulmer J. Uterine natural killer cells
and angiogenesis in recurrent reproductive failure // Hum Reprod. - 2009. -Vol.24, №1. P. 4554.
254.
Quinn K.H., Lacoursiere D.Y., Cui L., Bui J.,Parast M.M. The unique pathophysiology of
early-onset severe preeclampsia: role of decidual T regulatory cells // J Reprod Immunol. 2011. -Vol.91, №1-2. P. 76-82.
255.
Rabinovich G.A., Baum L.G., Tinari N., Paganelli R., Natoli C., Liu F.T.,Iacobelli S. Galectins
and their ligands: amplifiers, silencers or tuners of the inflammatory response? // Trends
Immunol. - 2002. -Vol.23, №6. P. 313-20.
256.
Raijmakers M.T.M., Dechend R.,Poston L. Oxidative Stress and Preeclampsia. Rationale for
Antioxidant Clinical Trials // Hypertension. - 2004. -Vol.44. P. 374-380.
257.
Raijmakers M.T.M., Peters W.H.M., Steegers E.A.P.,Poston L. Amino Thiols, Detoxification
and Oxidative Stress in Pre-Eclampsia and Other Disorders of Pregnancy // Current
Pharmaceutical Design. - 2005. -Vol.11, №6. P. 711-734.
181
258.
Rajagopalan S., Bryceson Y.T., Kuppusamy S.P., Geraghty D.E., van der Meer A., Joosten
I.,Long E.O. Activation of NK cells by an endocytosed receptor for soluble HLA-G // PLoS
Biol. - 2006. -Vol.4, №1. P. e9.
259.
Rajashekhar G., Loganath A., Roy A.C., Chong S.S.,Wong Y.C. Hypoxia up-regulated
angiogenin and down-regulated vascular cell adhesion molecule-1 expression and secretion in
human placental trophoblasts // J Soc Gynecol Investig. - 2005. -Vol.12, №5. P. 310-9.
260.
Ramma W.,Ahmed A. Is inflammation the cause of pre-eclampsia? // Biochem Soc Trans. 2011. -Vol.39, №6. P. 1619-27.
261.
Rao R.M., Yang L., Garcia-Cardena G.,Luscinskas F.W. Endothelial-dependent mechanisms of
leukocyte recruitment to the vascular wall // Circ Res. - 2007. -Vol.101, №3. P. 234-47.
262.
Redman C.W.,Sargent I.L. Immunology of pre-eclampsia // Am J Reprod Immunol. - 2010. Vol.63, №6. P. 534-43.
263.
Reister F., Frank H.G., Heyl W., Kosanke G., Huppertz B., Schroder W., Kaufmann P.,Rath W.
The distribution of macrophages in spiral arteries of the placental bed in pre-eclampsia differs
from that in healthy patients // Placenta. - 1999. -Vol.20, №2-3. P. 229-33.
264.
Reister F., Frank H.G., Kingdom J.C., Heyl W., Kaufmann P., Rath W.,Huppertz B.
Macrophage-induced apoptosis limits endovascular trophoblast invasion in the uterine wall of
preeclamptic women // Lab Invest. - 2001. -Vol.81, №8. P. 1143-52.
265.
Renaud S.J., Macdonald-Goodfellow S.K.,Graham C.H. Coordinated regulation of human
trophoblast invasiveness by macrophages and interleukin 10 // Biol Reprod. - 2007. -Vol.76,
№3. P. 448-54.
266.
Renaud S.J., Postovit L.M., Macdonald-Goodfellow S.K., McDonald G.T., Caldwell
J.D.,Graham C.H. Activated macrophages inhibit human cytotrophoblast invasiveness in vitro
// Biol Reprod. - 2005. -Vol.73, №2. P. 237-43.
267.
Rieger L., Segerer S., Bernar T., Kapp M., Majic M., Morr A.K., Dietl J.,Kammerer U.
Specific subsets of immune cells in human decidua differ between normal pregnancy and
preeclampsia--a prospective observational study // Reprod Biol Endocrinol. - 2009. -Vol.7. P.
132.
268.
Riesbeck K., Billstrom A., Tordsson J., Brodin T., Kristensson K.,Dohlsten M. Endothelial
cells expressing an inflammatory phenotype are lysed by superantigen-targeted cytotoxic T
cells // Clin Diagn Lab Immunol. - 1998. -Vol.5, №5. P. 675-82.
269.
Robb A.O., Mills N.L., Newby D.E.,Denison F.C. Endothelial progenitor cells in pregnancy //
Reproduction. - 2007. -Vol.133, №1. P. 1-9.
270.
Roberts J.M.,Gammill H.S. Preeclampsia: recent insights // Hypertension. - 2005. -Vol.46, №6.
P. 1243-9.
182
271.
Robertson M.J., Caligiuri M.A., Manley T.J., Levine H.,Ritz J. Human natural killer cell
adhesion molecules. Differential expression after activation and participation in cytolysis // J
Immunol. - 1990. -Vol.145, №10. P. 3194-201.
272.
Robertson S.A., Guerin L.R., Bromfield J.J., Branson K.M., Ahlstrom A.C.,Care A.S. Seminal
fluid drives expansion of the CD4+CD25+ T regulatory cell pool and induces tolerance to
paternal alloantigens in mice // Biol Reprod. - 2009. -Vol.80, №5. P. 1036-45.
273.
Roda-Navarro P., Vales-Gomez M., Chisholm S.E.,Reyburn H.T. Transfer of NKG2D and
MICB at the cytotoxic NK cell immune synapse correlates with a reduction in NK cell
cytotoxic function // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2006. -Vol.103, №30. P. 11258-63.
274.
Rudd C.E., Taylor A.,Schneider H. CD28 and CTLA-4 coreceptor expression and signal
transduction // Immunol Rev. - 2009. -Vol.229, №1. P. 12-26.
275.
Russell K.J., McRedmond J., Mukherji N., Costello C., Keatings V., Linnane S., Henry M.,
Fitzgerald M.X.,O'Connor C.M. Neutrophil adhesion molecule surface expression and
responsiveness in cystic fibrosis // Am J Respir Crit Care Med. - 1998. -Vol.157, №3 Pt 1. P.
756-61.
276.
Sacks G.P., Redman C.W.,Sargent I.L. Monocytes are primed to produce the Th1 type cytokine
IL-12 in normal human pregnancy: an intracellular flow cytometric analysis of peripheral blood
mononuclear cells // Clin Exp Immunol. - 2003. -Vol.131, №3. P. 490-7.
277.
Sacks G.P., Studena K., Sargent I.L.,Redman C.W.G. Normal pregnancy and preeclampsia
both produce inflammatory changes in peripheral blood leukocytes akin to those of sepsis //
American Journal of Obstetrics and Gynecology. - 1998. -Vol.179, №1. P. 80-86.
278.
Sacks G.P., Studena K., Sargent K.,Redman C.W. Normal pregnancy and preeclampsia both
produce inflammatory changes in peripheral blood leukocytes akin to those of sepsis // Am J
Obstet Gynecol. - 1998. -Vol.179, №1. P. 80-6.
279.
Sans E., Delachanal E.,Duperray A. Analysis of the roles of ICAM-1 in neutrophil
transmigration using a reconstituted mammalian cell expression model: implication of ICAM-1
cytoplasmic domain and Rho-dependent signaling pathway // J Immunol. - 2001. -Vol.166,
№1. P. 544-51.
280.
Sasaki Y., Sakai M., Miyazaki S., Higuma S., Shiozaki A.,Saito S. Decidual and peripheral
blood CD4+CD25+ regulatory T cells in early pregnancy subjects and spontaneous abortion
cases // Mol Hum Reprod. - 2004. -Vol.10, №5. P. 347-53.
281.
Sbrana S., Bevilacqua S., Buffa M., Spiller D., Parri M.S., Gianetti J., De Filippis R.,Clerico A.
Post-reperfusion changes of monocyte function in coronary blood after extracorporeal
circulation // Cytometry B Clin Cytom. - 2005. -Vol.65, №1. P. 14-21.
183
282.
Scaife P.J., Bulmer J.N., Robson S.C., Innes B.A.,Searle R.F. Effector activity of decidual
CD8+ T lymphocytes in early human pregnancy // Biol Reprod. - 2006. -Vol.75, №4. P. 562-7.
283.
Schanz A., Winn V.D., Fisher S.J., Blumenstein M., Heiss C., Hess A.P., Kruessel J.S.,
McMaster M.,North R.A. Pre-eclampsia is associated with elevated CXCL12 levels in
placental syncytiotrophoblasts and maternal blood // Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. - 2011.
-Vol.157, №1. P. 32-7.
284.
Schara K., Jansa V., Sustar V., Dolinar D., Pavlic J.I., Lokar M., Kralj-Iglic V., Veranic P.,Iglic
A. Mechanisms for the formation of membranous nanostructures in cell-to-cell communication
// Cell Mol Biol Lett. - 2009. -Vol.14, №4. P. 636-56.
285.
Scheiermann C., Frenette P.S.,Hidalgo A. Regulation of leucocyte homeostasis in the
circulation // Cardiovasc Res. - 2015.
286.
Schroder K., Hertzog P.J., Ravasi T.,Hume D.A. Interferon-gamma: an overview of signals,
mechanisms and functions // J Leukoc Biol. - 2004. -Vol.75, №2. P. 163-89.
287.
Schumacher A., Brachwitz N., Sohr S., Engeland K., Langwisch S., Dolaptchieva M.,
Alexander T., Taran A., Malfertheiner S.F., Costa S.D., Zimmermann G., Nitschke C., Volk
H.D., Alexander H., Gunzer M.,Zenclussen A.C. Human chorionic gonadotropin attracts
regulatory T cells into the fetal-maternal interface during early human pregnancy // J Immunol.
- 2009. -Vol.182, №9. P. 5488-97.
288.
Segerer S., Kammerer U., Kapp M., Dietl J.,Rieger L. Upregulation of chemokine and cytokine
production during pregnancy // Gynecol Obstet Invest. - 2009. -Vol.67, №3. P. 145-50.
289.
Sekizawa A., Purwosunu Y., Farina A., Shimizu H., Nakamura M., Wibowo N., Rizzo N.,Okai
T. Prediction of pre-eclampsia by an analysis of placenta-derived cellular mRNA in the blood
of pregnant women at 15-20 weeks of gestation // BJOG. - 2010. -Vol.117, №5. P. 557-64.
290.
Sereshki N., Gharagozloo M., Ostadi V., Ghahiri A., Roghaei M.A., Mehrabian F., Andalib
A.A., Hassanzadeh A., Hosseini H.,Rezaei A. Variations in T-helper 17 and Regulatory T Cells
during The Menstrual Cycle in Peripheral Blood of Women with Recurrent Spontaneous
Abortion // Int J Fertil Steril. - 2014. -Vol.8, №1. P. 59-66.
291.
Shah V.O., Civin C.I.,Loken M.R. Flow cytometric analysis of human bone marrow. IV.
Differential quantitative expression of T-200 common leukocyte antigen during normal
hemopoiesis // J Immunol. - 1988. -Vol.140, №6. P. 1861-7.
292.
Shakhawat A., Shaikly V., Elzatma E., Mavrakos E., Jabeen A.,Fernandez N. Interaction
between HLA-G and monocyte/macrophages in human pregnancy // J Reprod Immunol. 2010. -Vol.85, №1. P. 40-6.
293.
Shi C.,Pamer E.G. Monocyte recruitment during infection and inflammation // Nat Rev
Immunol. - 2011. -Vol.11, №11. P. 762-74.
184
294.
Shibuya M. Involvement of Flt-1 (VEGF receptor-1) in cancer and preeclampsia // Proc Jpn
Acad Ser B Phys Biol Sci. - 2011. -Vol.87, №4. P. 167-78.
295.
Sica A.,Mantovani A. Macrophage plasticity and polarization: in vivo veritas // J Clin Invest. 2012. -Vol.122, №3. P. 787-95.
296.
Skrzeczynska-Moncznik J., Bzowska M., Loseke S., Grage-Griebenow E., Zembala M.,Pryjma
J. Peripheral blood CD14high CD16+ monocytes are main producers of IL-10 // Scand J
Immunol. - 2008. -Vol.67, №2. P. 152-9.
297.
Somerset D.A., Zheng Y., Kilby M.D., Sansom D.M.,Drayson M.T. Normal human pregnancy
is associated with an elevation in the immune suppressive CD25+ CD4+ regulatory T-cell
subset // Immunology. - 2004. -Vol.112, №1. P. 38-43.
298.
Soni C.,Karande A.A. Glycodelin A suppresses the cytolytic activity of CD8+ T lymphocytes //
Mol Immunol. - 2010. -Vol.47, №15. P. 2458-66.
299.
Staines-Urias E., Paez M.C., Doyle P., Dudbridge F., Serrano N.C., Ioannidis J.P., Keating
B.J., Hingorani A.D.,Casas J.P. Genetic association studies in pre-eclampsia: systematic metaanalyses and field synopsis // Int J Epidemiol. - 2012. -Vol.41, №6. P. 1764-75.
300.
Stallmach T., Hebisch G., Orban P.,Lu X. Aberrant positioning of trophoblast and lymphocytes
in the feto-maternal interface with pre-eclampsia // Virchows Arch. - 1999. -Vol.434, №3. P.
207-11.
301.
Stanciu L.A.,Djukanovic R. The role of ICAM-1 on T-cells in the pathogenesis of asthma //
Eur Respir J. - 1998. -Vol.11, №4. P. 949-57.
302.
Straszewski-Chavez S.L., Abrahams V.M., Funai E.F.,Mor G. X-linked inhibitor of apoptosis
(XIAP) confers human trophoblast cell resistance to Fas-mediated apoptosis // Mol Hum
Reprod. - 2004. -Vol.10, №1. P. 33-41.
303.
Straszewski-Chavez S.L., Abrahams V.M.,Mor G. The role of apoptosis in the regulation of
trophoblast survival and differentiation during pregnancy // Endocr Rev. - 2005. -Vol.26, №7.
P. 877-97.
304.
Sumagin R.,Sarelius I.H. TNF-alpha activation of arterioles and venules alters distribution and
levels of ICAM-1 and affects leukocyte-endothelial cell interactions // Am J Physiol Heart Circ
Physiol. - 2006. -Vol.291, №5. P. H2116-25.
305.
Svensson J., Jenmalm M.C., Matussek A., Geffers R., Berg G.,Ernerudh J. Macrophages at the
fetal-maternal interface express markers of alternative activation and are induced by M-CSF
and IL-10 // J Immunol. - 2011. -Vol.187, №7. P. 3671-82.
306.
Szarka A., Rigo J., Jr., Lazar L., Beko G.,Molvarec A. Circulating cytokines, chemokines and
adhesion molecules in normal pregnancy and preeclampsia determined by multiplex suspension
array // BMC Immunol. - 2010. -Vol.11. P. 59.
185
307.
Tabiasco J., Rabot M., Aguerre-Girr M., El Costa H., Berrebi A., Parant O., Laskarin G.,
Juretic K., Bensussan A., Rukavina D.,Le Bouteiller P. Human decidual NK cells: unique
phenotype and functional properties -- a review // Placenta. - 2006. -Vol.27 Suppl A. P. S34-9.
308.
Tacke F.,Randolph G.J. Migratory fate and differentiation of blood monocyte subsets //
Immunobiology. - 2006. -Vol.211, №6-8. P. 609-18.
309.
Takahashi T., Tagami T., Yamazaki S., Uede T., Shimizu J., Sakaguchi N., Mak
T.W.,Sakaguchi S. Immunologic self-tolerance maintained by CD25(+)CD4(+) regulatory T
cells constitutively expressing cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 // J Exp Med. 2000. -Vol.192, №2. P. 303-10.
310.
Takashi S., Okubo Y.,Horie S. Contribution of CD54 to human eosinophil and neutrophil
superoxide production // J Appl Physiol (1985). - 2001. -Vol.91, №2. P. 613-22.
311.
Takeshita J., Mohler E.R., Krishnamoorthy P., Moore J., Rogers W.T., Zhang L., Gelfand
J.M.,Mehta N.N. Endothelial cell-, platelet-, and monocyte/macrophage-derived microparticles
are elevated in psoriasis beyond cardiometabolic risk factors // J Am Heart Assoc. - 2014. Vol.3, №1. P. e000507.
312.
Taraboletti G., D'Ascenzo S., Borsotti P., Giavazzi R., Pavan A.,Dolo V. Shedding of the
matrix metalloproteinases MMP-2, MMP-9, and MT1-MMP as membrane vesicle-associated
components by endothelial cells // Am J Pathol. - 2002. -Vol.160, №2. P. 673-80.
313.
Thery C., Ostrowski M.,Segura E. Membrane vesicles as conveyors of immune responses //
Nat Rev Immunol. - 2009. -Vol.9, №8. P. 581-93.
314.
Thornhill M.H., Li J.,Haskard D.O. Leucocyte endothelial cell adhesion: a study comparing
human umbilical vein endothelial cells and the endothelial cell line EA-hy-926 // Scand J
Immunol. - 1993. -Vol.38, №3. P. 279-86.
315.
Thornton J.,McDaniel L.S. THP-1 monocytes up-regulate intercellular adhesion molecule 1 in
response to pneumolysin from Streptococcus pneumoniae // Infect Immun. - 2005. -Vol.73,
№10. P. 6493-8.
316.
Tian L.,King N.J. Interferon gamma induces intercellular adhesion molecule-1 on murine
midterm trophoblast and enhances susceptibility to specific lysis by paternally directed alloimmune cytotoxic T cells // Biol Reprod. - 1994. -Vol.51, №6. P. 1164-72.
317.
Tilburgs T., Scherjon S.A., Roelen D.L.,Claas F.H. Decidual CD8+CD28- T cells express
CD103 but not perforin // Hum Immunol. - 2009. -Vol.70, №2. P. 96-100.
318.
Tohma S., Ramberg J.E.,Lipsky P.E. Expression and distribution of CD11a/CD18 and CD54
during human T cell-B cell interactions // J Leukoc Biol. - 1992. -Vol.52, №1. P. 97-103.
186
319.
Toldi G., Rigo J., Jr., Stenczer B., Vasarhelyi B.,Molvarec A. Increased prevalence of IL-17producing peripheral blood lymphocytes in pre-eclampsia // Am J Reprod Immunol. - 2011. Vol.66, №3. P. 223-9.
320.
Tsuda H., Michimata T., Hayakawa S., Tanebe K., Sakai M., Fujimura M., Matsushima
K.,Saito S. A Th2 chemokine, TARC, produced by trophoblasts and endometrial gland cells,
regulates the infiltration of CCR4+ T lymphocytes into human decidua at early pregnancy //
Am J Reprod Immunol. - 2002. -Vol.48, №1. P. 1-8.
321.
Tsuda H., Michimata T., Sakai M., Nagata K., Nakamura M.,Saito S. A novel surface molecule
of Th2- and Tc2-type cells, CRTH2 expression on human peripheral and decidual CD4+ and
CD8+ T cells during the early stage of pregnancy // Clin Exp Immunol. - 2001. -Vol.123, №1.
P. 105-11.
322.
Tsukimori K., Tsushima A., Fukushima K., Nakano H.,Wake N. Neutrophil-derived reactive
oxygen species can modulate neutrophil adhesion to endothelial cells in preeclampsia // Am J
Hypertens. - 2008. -Vol.21, №5. P. 587-91.
323.
Tziotis J., Malamitsi-Puchner A., Vlachos G., Creatsas G.,Michalas S. Adhesion molecules
expression in the placental bed of pregnancies with pre-eclampsia // BJOG. - 2002. -Vol.109,
№2. P. 197-201.
324.
Udenze I., Amadi C., Awolola N.,Makwe C.C. The role of cytokines as inflammatory
mediators in preeclampsia // Pan Afr Med J. - 2015. -Vol.20. P. 219.
325.
van Buul J.D., Kanters E.,Hordijk P.L. Endothelial signaling by Ig-like cell adhesion molecules
// Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2007. -Vol.27, №9. P. 1870-6.
326.
van den Heuvel M.J., Peralta C.G., Hatta K., Han V.K.,Clark D.A. Decline in number of
elevated blood CD3(+) CD56(+) NKT cells in response to intravenous immunoglobulin
treatment correlates with successful pregnancy // Am J Reprod Immunol. - 2007. -Vol.58, №5.
P. 447-59.
327.
van der Meer A., Lukassen H.G., van Lierop M.J., Wijnands F., Mosselman S., Braat
D.D.,Joosten I. Membrane-bound HLA-G activates proliferation and interferon-gamma
production by uterine natural killer cells // Mol Hum Reprod. - 2004. -Vol.10, №3. P. 189-95.
328.
van Gils J.M., Zwaginga J.J.,Hordijk P.L. Molecular and functional interactions among
monocytes, platelets, and endothelial cells and their relevance for cardiovascular diseases // J
Leukoc Biol. - 2009. -Vol.85, №2. P. 195-204.
329.
VanWijk M.J., Kublickiene K., Boer K.,VanBavel E. Vascular function in preeclampsia //
Cardiovasc Res. - 2000. -Vol.47, №1. P. 38-48.
187
330.
VanWijk M.J., Nieuwland R., Boer K., van der Post J.A., VanBavel E.,Sturk A. Microparticle
subpopulations are increased in preeclampsia: possible involvement in vascular dysfunction? //
Am J Obstet Gynecol. - 2002. -Vol.187, №2. P. 450-6.
331.
Vassiliadou N.,Bulmer J.N. Quantitative analysis of T lymphocyte subsets in pregnant and
nonpregnant human endometrium // Biol Reprod. - 1996. -Vol.55, №5. P. 1017-22.
332.
Veenstra van Nieuwenhoven A.L., Heineman M.J.,Faas M.M. The immunology of successful
pregnancy // Hum Reprod Update. - 2003. -Vol.9, №4. P. 347-57.
333.
Verkarre V., Patey-Mariaud de Serre N., Vazeux R., Teillac-Hamel D., Chretien-Marquet B.,
Le Bihan C., Leborgne M., Fraitag S.,Brousse N. ICAM-3 and E-selectin endothelial cell
expression differentiate two phases of angiogenesis in infantile hemangiomas // J Cutan Pathol.
- 1999. -Vol.26, №1. P. 17-24.
334.
Vogel D.Y., Glim J.E., Stavenuiter A.W., Breur M., Heijnen P., Amor S., Dijkstra C.D.,Beelen
R.H. Human macrophage polarization in vitro: Maturation and activation methods compared //
Immunobiology. - 2014. -Vol.219, №9. P. 695-703.
335.
Voll R.E., Herrmann M., Roth E.A., Stach C., Kalden J.R.,Girkontaite I. Immunosuppressive
effects of apoptotic cells // Nature. - 1997. -Vol.390, №6658. P. 350-1.
336.
von Dadelszen P., Watson R.W., Noorwali F., Marshall J.C., Parodo J., Farine D., Lye S.J.,
Ritchie J.W.,Rotstein O.D. Maternal neutrophil apoptosis in normal pregnancy, preeclampsia,
and normotensive intrauterine growth restriction // Am J Obstet Gynecol. - 1999. -Vol.181,
№2. P. 408-14.
337.
von Rango U., Krusche C.A., Beier H.M.,Classen-Linke I. Indoleamine-dioxygenase is
expressed in human decidua at the time maternal tolerance is established // J Reprod Immunol.
- 2007. -Vol.74, №1-2. P. 34-45.
338.
Walenta K., Schwarz V., Schirmer S.H., Kindermann I., Friedrich E.B., Solomayer E.F., Sliwa
K., Labidi S., Hilfiker-Kleiner D.,Bohm M. Circulating microparticles as indicators of
peripartum cardiomyopathy // Eur Heart J. - 2012. -Vol.33, №12. P. 1469-79.
339.
Wang J., Huang Y., Huang Y., Zhou J.,Liu X. Effect of lipoxin A(4) on IL-1beta production of
monocytes and its possible mechanism in severe preeclampsia // J Huazhong Univ Sci
Technolog Med Sci. - 2010. -Vol.30, №6. P. 767-70.
340.
Wang Y., Gu Y.,Lucas M.J. Expression of thrombin receptors in endothelial cells and
neutrophils from normal and preeclamptic pregnancies // J Clin Endocrinol Metab. - 2002. Vol.87, №8. P. 3728-34.
341.
Wang Y., Lewis D.F., Gu Y., Zhang Y., Alexander J.S.,Granger D.N. Placental trophoblastderived factors diminish endothelial barrier function // J Clin Endocrinol Metab. - 2004. Vol.89, №5. P. 2421-8.
188
342.
Watson C., Whittaker S., Smith N., Vora A.J., Dumonde D.C.,Brown K.A. IL-6 acts on
endothelial cells to preferentially increase their adherence for lymphocytes // Clin Exp
Immunol. - 1996. -Vol.105, №1. P. 112-9.
343.
Wieczorek A., Wilczynski J.R., Malinowski A., Lewkowicz P., Banasik M., Tchorzewski H.,
Szpakowski M., Krasomski G., Oszukowski P., Kolasa D., Nowak M.,Wilczynski J.
[Parameters of peripheral whole blood neutrophil activity in women with pregnancy induced
hypertension] // Ginekol Pol. - 2001. -Vol.72, №12. P. 1222-7.
344.
Wienecke J., Hebel K., Hegel K.J., Pierau M., Brune T., Reinhold D., Pethe A.,BrunnerWeinzierl M.C. Pro-inflammatory effector Th cells transmigrate through anti-inflammatory
environments into the murine fetus // Placenta. - 2012. -Vol.33, №1. P. 39-46.
345.
Wilczynski J.R. Immunological analogy between allograft rejection, recurrent abortion and
pre-eclampsia - the same basic mechanism? // Hum Immunol. - 2006. -Vol.67, №7. P. 492-511.
346.
Wilczynski J.R., Banasik M., Tchorzewski H., Glowacka E., Malinowski A., Szpakowski M.,
Lewkowicz P., Wieczorek A., Zeman K.,Wilczynski J. Expression of intercellular adhesion
molecule-1 on the surface of peripheral blood and decidual lymphocytes of women with
pregnancy-induced hypertension // Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. - 2002. -Vol.102, №1. P.
15-20.
347.
Wilczynski J.R., Tchorzewski H., Banasik M., Glowacka E., Wieczorek A., Lewkowicz P.,
Malinowski A., Szpakowski M.,Wilczynski J. Lymphocyte subset distribution and cytokine
secretion in third trimester decidua in normal pregnancy and preeclampsia // Eur J Obstet
Gynecol Reprod Biol. - 2003. -Vol.109, №1. P. 8-15.
348.
Williams P.J.,Broughton Pipkin F. The genetics of pre-eclampsia and other hypertensive
disorders of pregnancy // Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. - 2011. -Vol.25, №4. P. 405-17.
349.
Williams P.J., Bulmer J.N., Searle R.F., Innes B.A.,Robson S.C. Altered decidual leucocyte
populations in the placental bed in pre-eclampsia and foetal growth restriction: a comparison
with late normal pregnancy // Reproduction. - 2009. -Vol.138, №1. P. 177-84.
350.
Wolniak K.L., Shinall S.M.,Waldschmidt T.J. The germinal center response // Crit Rev
Immunol. - 2004. -Vol.24, №1. P. 39-65.
351.
Woodfin A., Voisin M.B.,Nourshargh S. PECAM-1: a multi-functional molecule in
inflammation and vascular biology // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2007. -Vol.27, №12. P.
2514-23.
352.
Wright H.L., Moots R.J., Bucknall R.C.,Edwards S.W. Neutrophil function in inflammation
and inflammatory diseases // Rheumatology (Oxford). - 2010. -Vol.49, №9. P. 1618-31.
189
353.
Wu H.X., Jin L.P., Xu B., Liang S.S.,Li D.J. Decidual stromal cells recruit Th17 cells into
decidua to promote proliferation and invasion of human trophoblast cells by secreting IL-17 //
Cell Mol Immunol. - 2014. -Vol.11, №3. P. 253-62.
354.
Wu X., Jin L.P., Yuan M.M., Zhu Y., Wang M.Y.,Li D.J. Human first-trimester trophoblast
cells recruit CD56brightCD16- NK cells into decidua by way of expressing and secreting of
CXCL12/stromal cell-derived factor 1 // J Immunol. - 2005. -Vol.175, №1. P. 61-8.
355.
Wulff C., Weigand M., Kreienberg R.,Fraser H.M. Angiogenesis during primate placentation
in health and disease // Reproduction. - 2003. -Vol.126, №5. P. 569-77.
356.
Xu X.,Chong A.S. Cross-linking of CD45 on NK cells stimulates p56lck-mediated tyrosine
phosphorylation and IFN-gamma production // J Immunol. - 1995. -Vol.155, №11. P. 5241-8.
357.
Yesner L.M., Huh H.Y., Pearce S.F.,Silverstein R.L. Regulation of monocyte CD36 and
thrombospondin-1 expression by soluble mediators // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 1996. Vol.16, №8. P. 1019-25.
358.
Yin W., Ghebrehiwet B.,Peerschke E.I. Expression of complement components and inhibitors
on platelet microparticles // Platelets. - 2008. -Vol.19, №3. P. 225-33.
359.
Yong Z., Chang L., Mei Y.X.,Yi L. Role and mechanisms of CD4+CD25+ regulatory T cells in
the induction and maintenance of transplantation tolerance // Transpl Immunol. - 2007. Vol.17, №2. P. 120-9.
360.
Yoshida R., Nagira M., Imai T., Baba M., Takagi S., Tabira Y., Akagi J., Nomiyama H.,Yoshie
O. EBI1-ligand chemokine (ELC) attracts a broad spectrum of lymphocytes: activated T cells
strongly up-regulate CCR7 and efficiently migrate toward ELC // Int Immunol. - 1998. Vol.10, №7. P. 901-10.
361.
Yuana Y., Oosterkamp T.H., Bahatyrova S., Ashcroft B., Garcia Rodriguez P., Bertina
R.M.,Osanto S. Atomic force microscopy: a novel approach to the detection of nanosized blood
microparticles // Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2010. -Vol.8, №2. P. 315-323.
362.
Zahler S., Kupatt C.,Becker B.F. Endothelial preconditioning by transient oxidative stress
reduces inflammatory responses of cultured endothelial cells to TNF-alpha // FASEB J. - 2000.
-Vol.14, №3. P. 555-64.
363.
Zavazava N.,Kronke M. Soluble HLA class I molecules induce apoptosis in alloreactive
cytotoxic T lymphocytes // Nat Med. - 1996. -Vol.2, №9. P. 1005-10.
364.
Zhang R., Zheng X., Li B., Wei H.,Tian Z. Human NK cells positively regulate gammadelta T
cells in response to Mycobacterium tuberculosis // J Immunol. - 2006. -Vol.176, №4. P. 26106.
365.
Zhou L.J.,Tedder T.F. CD14+ blood monocytes can differentiate into functionally mature
CD83+ dendritic cells // Proc Natl Acad Sci U S A. - 1996. -Vol.93, №6. P. 2588-92.
190
366.
Zhou Y., Damsky C.H.,Fisher S.J. Preeclampsia is associated with failure of human
cytotrophoblasts to mimic a vascular adhesion phenotype. One cause of defective endovascular
invasion in this syndrome? // J Clin Invest. - 1997. -Vol.99, №9. P. 2152-64.
367.
Ziegler-Heitbrock L. The CD14+ CD16+ blood monocytes: their role in infection and
inflammation // J Leukoc Biol. - 2007. -Vol.81, №3. P. 584-92.