Набор реагентов для определения - ДНК

Только для научноисследовательских целей
117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, к.6
Тел./факс +7 (495) 980-45-55
Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15
(звонок по России бесплатный)
E-mail: hotline@dna-technology.ru,
www.dna-technology.ru
Набор реагентов для определения полиморфизмов в гене
CHEK2, ассоциированных с риском развития онкопатологии,
методом ПЦР в режиме реального времени
ОнкоГенетика CHEK2
Набор контрольных образцов CHEK21
Информация о наборах
Назначение:
Набор реагентов ОнкоГенетика CHEK2 и набор контрольных образцов CHEK2 предназначены для определения
аллельных вариантов гена человека CHEK2 (мутации 1100delC, IVS2+1G>A, 470T>C(Ile157Thr)), ассоциированных
с риском развития онкопатологии.
Метод:
Полимеразная цепная реакция с детекцией результатов в режиме реального времени; анализ кривых плавления,
качественный анализ.
Материал для исследования:
Периферическая кровь.
Выделение ДНК:
Рекомендуются комплекты реагентов для выделения ДНК ПРОБА-ГC-ГЕНЕТИКА, ПРОБА-МЧ-ГЕНЕТИКА и ПРОБАРАПИД-ГЕНЕТИКА (ООО «НПО ДНК-Технология»).
Особенности наборов:
Детекция трех полиморфизмов в двух пробирках.
Одновременная детекция – в одной пробирке определяются несколько аллельных вариантов гена.
Внутренний контроль (ВК) – позволяет оценить количество ДНК в амплификационной пробирке и исключить
ошибки генотипирования.
Приборное обеспечение:
Амплификаторы детектирующие (ООО «НПО ДНК-Технология») ДТлайт2, ДТпрайм3 и ДТ-96; версия программного
обеспечения не ниже 7.5.5.19.
Количество определений:
484
Условия хранения и эксплуатации
Смесь для амплификации, ПЦР-буфер, минеральное масло и контрольные образцы следует хранить при
температуре 2–8 °С в защищённом от света месте в течение всего срока годности.
Taq-АТ-полимеразу следует хранить при температуре минус 20 °С в течение всего срока годности.
Срок годности набора реагентов ОнкоГенетика CHEK2 – 6 месяцев с даты изготовления, набора
контрольных образцов CHEK2 – 12 месяцев с даты изготовления.
1
2
3
4
- поставляется отдельно
– только модели 4S1; 4S2; 5S1; 5S2; 6S1; 6S2
– только модели 4M1; 4M3; 4M6; 5M1; 5M3; 5M6; 6M1; 6M3; 6M6
– набор контрольных образцов CHEK2 рассчитан на 10 определений
Состав наборов
Реактив
Набор реагентов ОнкоГенетика CHEK2
Смеси для амплификации:
CHEK2:1100delC/IVS2+1G>A
960 мкл
CHEK2:470 T>C (Ile157Thr)
960 мкл
ПЦР-буфер
480 мкл
Taq-АТ-полимераза
48 мкл
Минеральное масло
960 мкл
Положительный
контрольный
образец
(К+)
[гомозиготный по нормальному аллелю по всем
полиморфизмам]5
100 мкл
Набор контрольных образцов CHEK2
Контрольные образцы:
Контрольный образец №1 [гетерозиготный по
CHEK2:1100delC]
50 мкл
Контрольный образец №2 [гетерозиготный по
CHEK2:IVS2+1G>A]
50 мкл
Контрольный образец №3 [гетерозиготный по
CHEK2:470T>C (Ile157Thr)]
50 мкл
Контрольный
образец
№4
[гомозиготный
по
мутантному аллелю CHEK2:470T>C(Ile157Thr)]
50 мкл






Количество
1
1
2
1
2
пробирка
пробирка
пробирки
пробирка
пробирки
1 пробирка
1 пробирка
1 пробирка
1 пробирка
1 пробирка
Каналы детекции аллельных вариантов и внутреннего контроля
Смесь для амплификации
Полиморфизм (мутация)
CHEK2:1100delC/IVS2+1G>A
CHEK2:470T>C (Ile157Thr)
Fam
Hex
CHEK2:1100delC
Ins
Del
CHEK2:IVS2+1G>A
G
A
CHEK2:470T>C(Ile157Thr)
T
C
Rox
Cy5
Cy5.
5
-
ВК
-
Генотипы, определяемые в контрольных образцах
Определяемый генотип
Смесь для амплификации
Полиморфизм (мутация)
Контрольный образец
К+
№1
№2
№3
№4
CHEK2:1100delC
Ins/Ins
Ins/Del
Ins/Ins
–
–
CHEK2:IVS2+1G>A
G/G
G/G
G/A
–
–
CHEK2:470T>C (Ile157Thr)
T/T
–
–
T/C
C/C
CHEK2:1100delC/IVS2+1G>A
CHEK2:470T>C (Ile157Thr)
Инструкция по применению
1.
Подготовка и проведение полимеразной цепной реакции
Внимание! Количество анализируемой ДНК должно быть не менее 1,0 нг на амплификационную
пробирку, что соответствует Ср≤32,0 на канале детекции ВК (Cy5). При использовании меньшего
количества ДНК (Ср>32,0) производитель не гарантирует корректную работу набора.
1.1.
Промаркируйте для каждой смеси для амплификации необходимое количество пробирок для
амплификации объёмом 0,2 мл (по одной для каждого исследуемого образца, отрицательного
контрольного образца «К–», положительного контрольного образца «К+»).
Например, необходимо проанализировать 6 образцов. Для каждой смеси для амплификации нужно
промаркировать 8 пробирок – 6 для исследуемых образцов, одну для «К–» и одну для «K+». Общее
количество пробирок для всех полиморфизмов – 16.
5
- количество рассчитано на 10 постановок
CHEK2:1100delC/IVS2+1G>A
CHEK2:470T>C (Ile157Thr)
Образец 1
√
√
Образец 2
√
√
Образец 3
√
√
Образец 4
√
√
Образец 5
√
√
Образец 6
√
√
«К–»
√
√
«К+»
√
√
1.2.
Встряхните пробирки со смесью для амплификации в течение 3–5 сек и центрифугируйте в течение 1–
3 сек на микроцентрифуге/вортексе.
1.3.
Внесите в промаркированные пробирки по 20 мкл соответствующей смеси для амплификации (каждую
отдельным наконечником).
1.4.
Встряхните пробирки с ПЦР-буфером и Taq-АТ-полимеразой в течение 3–5 сек и центрифугируйте в
течение 1–3 сек на микроцентрифуге/вортексе.
Внимание! Taq-АТ-полимеразу необходимо вынимать из морозильной камеры непосредственно перед
использованием.
1.5.
Приготовьте смесь ПЦР-буфера с Taq-АТ-полимеразой. Cмешайте в отдельной пробирке:

10 × (N+1) мкл ПЦР-буфера,

0,5 × (N+1) мкл Taq-AT-полимеразы,
где N – количество промаркированных пробирок с учётом «K–» и «К+».
Например, необходимо проанализировать 6 образцов, один К- и один К+. Промаркированных пробирок –
16. Нужно приготовить смесь ПЦР-буфера и Taq-AT-полимеразы для 17 (16+1) пробирок, т.е. 170 мкл
ПЦР-буфера + 8,5 мкл Taq-AT-полимеразы.
1.6.
Встряхните
пробирку
в
микроцентрифуге/вортексе.
течение
3–5
сек
и
центрифугируйте
в
течение
1–3
сек
на
Внимание! Смесь ПЦР-буфера и Taq-АТ-полимеразы необходимо готовить непосредственно перед
использованием.
1.7.
Добавьте в каждую пробирку со смесью для амплификации по 10 мкл смеси ПЦР-буфера и Taq-АТполимеразы.
Внимание! После добавления смеси ПЦР-буфера и Taq-АТ-полимеразы в пробирки со смесями для
амплификации необходимо в течение двух часов выполнить пп. 1.8 – 1.13.
1.8.
Добавьте в каждую пробирку по 1 капле (около 20 мкл) минерального масла. Закройте крышки пробирок.
1.9.
Для предотвращения контаминации следует перед внесением ДНК открывать крышки только тех
пробирок, в которые будет вноситься данный образец, и закрывать их перед внесением следующего.
Препараты ДНК следует вносить наконечниками с аэрозольным барьером.
Внесите в соответствующие пробирки для исследуемых образцов (2 шт. для каждого образца) по 5,0 мкл
выделенного из образцов препарата ДНК.
1.10.
Внесите в пробирки, маркированные «K–», по 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего
этап выделения ДНК. Внесите в пробирки, маркированные «K+», по 5,0 мкл положительного контрольного
образца.
1.11.
Центрифугируйте пробирки на микроцентрифуге/вортексе в течение 1–3 сек.
1.12.
Установите все пробирки в блок амплификатора детектирующего.
1.13.
Запустите программное обеспечение RealTime_PCR в режиме «Работа с прибором». При первом
проведении ПЦР загрузите файл «CHEK2.ini». При последующих постановках добавьте в протокол тесты
«CHEK2:1100delC/IVS2+1G>A» и «CHEK2:470T>C(Ile157Thr)» (или используйте многотестовый режим
«CHEK2»), укажите количество и идентификаторы образцов, в том числе отрицательных и положительных
контрольных образцов, отметьте расположение пробирок на матрице термоблока в соответствии с их
установкой (см. п.1.12) и проведите ПЦР.
Примечание. Тип пробирки для отрицательных и положительных контрольных образцов следует
указывать как «Образец».
2.
Регистрация и учёт результатов ПЦР проводится автоматически программным обеспечением для
амплификаторов детектирующих.
В образцах, прошедших ПЦР и содержащих достаточное для корректного анализа количество ДНК,
программа определяет генотип исследуемого образца. Для образцов с недостаточным для анализа
количеством ДНК (менее 1,0 нг на пробирку, Ср>32,0 на канале детекции ВК) программа определяет
недостоверный результат («нд»).
Внимание! В связи с высокой медицинской и социальной значимостью носительства полиморфизма
(мутации) в гене CHEK2 рекомендуется проводить повторное проверочное генотипирование
гетерозиготных и гомозиготных по мутантному аллелю образцов, начиная с этапа выделения ДНК.
При проведении повторного генотипирования вместо положительного контрольного образца (К+) следует
использовать соответствующий контрольный образец из набора контрольных образцов CHEK2.
Схема внесения контрольных образцов CHEK2 для повторного генотипирования
Смесь для амплификации
Контрольный образец
Полиморфизм (мутация)
CHEK2:1100delC
Генотип
№1
№2
№3
№4
Ins/Del
+
–
–
–
G/A
–
+
–
–
T/C
–
–
+
–
C/C
–
–
–
+
CHEK2:1100delC/IVS2+1G>A
CHEK2:IVS2+1G>A
CHEK2:470T>C (Ile157Thr)
CHEK2:470T>C
(Ile157Thr)
По вопросам, касающимся качества набора реагентов для определения генетических полиморфизмов в гене
CHEK2, ассоциированных с риском развития онкопатологии, методом полимеразной цепной реакции (ОнкоГенетика
CHEK2) и набора контрольных образцов (CHEK2), следует обращаться к официальному представителю
производителя по адресу:
ООО «ДНК-Технология», 117587, Москва, Варшавское шоссе, д.125ж, к.6, тел./факс +7 (495) 980-45-55, www.dnatechnology.ru
Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный),
E-mail: hotline@dna-technology.ru
Анкета для осуществления обратной связи находится на сайте компании «ДНК-Технология»:
http://www.dna-technology.ru/support/
Номер 294
27.01.14