Прогностическое значение комбинации аллельных вариантов

Оригинальные исследования
2, 2007
УДК [616.36-002.12:578.891]-092
Прогностическое значение комбинации
аллельных вариантов генов цитокинов
и гемохроматоза у больных хроническим
гепатитом С
Л.М. Самоходская1, Т.М. Игнатова2, С.М. Абдуллаев2, Т.Н. Краснова2,
Т.П. Некрасова2, Н.А. Мухин1,2, В.А. Ткачук1
(1Кафедра биологической и медицинской химии факультета фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова,
2Клиника нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М. Тареева Московской медицинской
академии им. И.М. Сеченова)
ги
ро Р
эн ос
т с
ко ер ийс
ло ол ки
пр ог й
ок ии жу
то , ге рн
ло п ал
ги ато
и л
о
чаемых генетических факторов
относятся однонуклеотидные
полиморфизмы (однонуклеотидная замена, или SNP), которые
в ряде случаев сопряжены с
увеличением или уменьшением
концентрации и/или активности
продукта гена [16]. Считается,
что наличие однонуклеотидных замен является одним из
факторов, определяющих индивидуальные особенности течения болезней, и их выявление
может быть использовано для
определения прогноза заболевания. Между тем результаты
исследований, касающихся изучения ассоциации полиморфизма генов-кандидатов с вариантами течения ХГС, до настоящего
ст
50
имеются абсолютные противопоказания к ПВТ, а еще более
часто – различные сопутствующие заболевания, являющиеся
относительными противопоказаниями к ней. Возможно также
развитие осложнений во время
лечения, требующих его отмены. Поэтому необходимы тщательная оценка прогноза заболевания, взвешивание пользы и
риска ПВТ в каждой конкретной ситуации.
В последние годы отмечается
повышение интереса к исследованию генетических детерминант развития и прогрессирования заболеваний и ответа на лекарственную терапию.
К числу наиболее широко изу-
га
Б
олее 170 млн людей во
всем мире, т. е. около 3%
населения Земли, инфицированы вирусом гепатита С
(HCV), который в большинстве
развитых стран является самой
частой причиной развития хронического гепатита, цирроза
печени и гепатоцеллюлярной
карциномы (ГЦК) [1].
Определение прогноза ХГС
– вероятности развития ЦП или
тяжелых внепеченочных проявлений – одна из актуальных и
сложных проблем гепатологии.
Несмотря на значительные успехи современная противовирусная терапия (ПВТ) по-прежнему эффективна далеко не у всех
больных. Кроме того, нередко
и,
В работе изучено влияние полиморфизма генов цитокинов (IL-1b –511 C/T, IL-6 –174 G/C,
IL-10 –1082 G/A, TGF-b1 +915 G/C) и гемохроматоза (C282Y, H63D) на темпы прогрессирования фиброза у больных хроническим гепатитом С (ХГС). Обследовано 120 больных, в том
числе 63 на стадии гепатита и 57 на стадии цирроза печени (ЦП). На основании длительности
заболевания и установленной стадии фиброза определены медленно прогрессирующий (37)
или прогрессирующий (83) варианты поражения печени. При анализе полиморфизма выше­
указанных генов были установлены аллели, ассоциированные с прогрессирующим вариантом
течения ХГС – «профибротические» (аллель гена IL-1b –511 T, гена IL-6 –174 C, гена TGF-b1
+915 С и аллель 63 D гена HFE) и, наоборот, ассоциированные с медленным развитием фиброза – «протективные» (генотип гена IL-1b –511 CC и гена IL-6 –174 GG). Построена модель,
основанная на анализе комбинации полиморфных маркеров, определена ее специфичность
и чувствительность. Показано, что данная модель может быть использована для определения
прогноза ХГС.
Ключевые слова: хронический гепатит С, генетические факторы, прогрессирование фиброза, прогноз.
Среди обследованных больных было 88 женщин и 32
мужчины в возрасте от 18 до
78 лет (средний – 49,8 года).
Преобладание женщин обусловлено тем, что мужчины чаще не
включались в исследование изза злоупотребления алкоголем,
наличия сочетанной инфекции.
Инфицирование
происходило преимущественно в молодом возрасте – от 1 года до
ги
Результаты
исследования
ро Р
эн ос
т с
ко ер ийс
ло ол ки
пр ог й
ок ии жу
то , ге рн
ло п ал
ги ато
и л
о
Обследовано 120 больных
ХГС, наблюдавшихся в клинике нефрологии, внутренних
и профессиональных болезней
им. Е.М. Тареева ММА им.
И.М. Сеченова. Из исследования исключались пациенты c
неустановленной длительностью
заболевания и дополнительными
факторами прогрессирования
поражения печени (злоупотребление алкоголем, сочетанная
инфекция вирусами гепатита В,
дельта и иммунодефицита человека, лекарственный фактор,
сахарный диабет).
У всех больных проводилось стандартное клиниколабораторное
исследование.
Морфологическое исследование
печени выполнено у 69 пациентов
(с определением индексов гистологической активности и стадии
фиброза по R.G. Knodell). У
51 больного с клинико-лабораторными и УЗ-признаками ЦП
(гепатоспленомегалия, портальная гипертензия) биопсия не
проводилась, при этом стадия
фиброза у них установлена как
IV (ЦП). Средний темп прогрессирования фиброза печени
рассчитывался как отношение
индекса фиброза к длительно­
сти заболевания. Длительность
заболевания определялась как
период от наиболее вероятного времени инфицирования (по
наличию фактора риска инфицирования – гемотрансфузии,
наркомания и др.) или перенесенного острого вирусного гепа-
57 лет (в среднем 28,7 года).
Предполагаемая длительность
течения ХГС составила от 1 года
до 50 лет (в среднем 20,5 года).
Стадия фиброза I установлена
у 37, II – у 16, III – у 10 и IV
(цирроз печени) – у 57 больных.
В зависимости от темпа прогрессирования фиброза выделены две группы. В I группу
(n=37) вошли пациенты с медленно прогрессирующим течением ХГС (в этой группе все
больные имели I стадию фиброза при давности инфицирования не менее 10 лет; средний
темп прогрессирования фиброза – 0,06 ед. фиброза/год).
Во II группу (n=83) включены больные с прогрессирующим течением ХГС (67 имели
III–IV стадии фиброза, 16 – II
стадию при длительности заболевания менее 10 лет; средний
темп прогрессирования фиброза
– 0,22 ед. фиброза/год).
Основные демографические,
клинические и лабораторные
данные обследованных приведены в табл. 1. Больные с медленно прогрессирующим течением
ХГС были моложе, инфицированы в более раннем возрасте и
имели среднее значение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) ниже, чем пациенты
с прогрессирующим течением
ХГС, причем выявленные различия были статистически значимы. Достоверных различий
между больными I и II групп
при сравнении длительности
заболевания, индекса массы
тела и частоты выявления определенного генотипа вируса не
найдено.
Распределение генотипов и
аллелей в контрольной группе
находилось в соответствии с распределением Харди–Вейнберга,
что свидетельствует о репрезентативности выборки контрольной группы и корректности
определения полиморфизмов.
Нами не выявлено статистически значимых различий
между сравниваемыми группами при изучении распростра-
51
ст
Материал и методы
исследования
тита до проведения морфологического исследования.
Контрольную группу (для
определения частоты полиморфизма изучаемых генов в популяции) составили 250 здоровых
доноров.
Для выделения ДНК использовали метод фенол-хлороформной экстракции. Изучался
полиморфизм генов цитокинов
– интерлейкина 1b (IL-1b),
интерлейкина-6 (IL-6), интерлейкина-10 (IL-10), трансформирующего ростового фактора-b1 (TGF-b1) и гена гемохроматоза (HFE). Определение
полиморфизма генов цитокинов
(–511 C/T гена IL-1b, –1082
G/A гена IL-10, –174 G/C гена
IL-6 и +915 G/C гена TGFb1) проводили методом полиморфизма длины рестрикт­
ных фрагментов (ПДРФ) [4,
7, 20, 22], а гена HFE (С282Y
и H63D) – аллельспецифичной
полимеразной цепной реакции
(ПЦР) [14].
Данные представлены как
среднее (±) стандартное отклонение. Статистическую обработку проводили с помощью t-критерия Стьюдента (для количе­
ственных признаков в случае
их нормального распределения)
и критерия χ2 (для качественных признаков). Достоверными
считались различия при p<0,05;
0,05≤p≤0,15
рассматривали
как тенденцию к различию.
Для статистической обработки
использован пакет программ
Statistica 6.0.
га
времени противоречивы, что
может быть связано с преобладанием работ, изучавших изолированное влияние на течение
ХГС каждого из полиморфных
маркеров. Преодоление имеющихся противоречий возможно
при изучении комбинации полиморфизма генов-кандидатов с
обследованием этнически однородной группы больных, что
послужило целью настоящей
работы.
и,
Оригинальные исследования
2, 2007
Оригинальные исследования
2, 2007
Таблица 1
Демографические, клинические и лабораторные данные обследованных больных
Признак
I группа
(n=37)
II группа
(n=83)
p
Средний темп прогрессирования фиброза, ед. фиброза/год
0,06
0,22
<0,001
Пол: мужчины/женщины, абс. число
Возраст, лет
10/27
22/61
0,560
41,8±12,9
53,6±12,7
<0,001
51,4
15,7
0,003
0
67,5
–
% больных до 40 лет
% больных ЦП
Длительность заболевания, лет
19,2±7,5
21,2±9,9
0,277
Продолжительность инфицирования, лет
22,5±12,8
31,9±13,2
<0,001
Индекс массы тела, кг/м2
24,0±3,9
26,1±5,5
0,068
АлАТ, МЕ/л
47,4±33,4
99,8±93,1
0,002
Уровень сывороточного железа, мкг/дл
117,9±47,8
131,6±58,0
0,238
1
26 (83,87)
50 (86,21)
0,766
не 1
5 (16,13)
8 (13,79)
Генотип вируса (%):
Таблица 2
II группа
Генотип СС
101(40,6)
24 (64,9)
40 (48,2)
0,067
Генотип СТ
120 (48,2)
11 (29,7)
35 (42,2)
0,137
Генотип ТТ
28 (11,2)
2 (5,4)
8 (9,6)
Не достоверны
Аллель Т
20,3
30,7
0,063
73 (36,7)
20 (54,1)
18 (21,7)
<0,001
Генотип GC
94 (47,2)
14 (37,8)
50 (60,2)
0,019
Генотип CC
32 (16,1)
3 (8,1)
15 (18,1)
0,126
Аллель C
TGF-b1
+915 G/C
39,7
27,0
48,2
0,016
Генотип GG
235 (86,7)
35 (94,6)
68 (81,9)
0,054
Генотип GC
35 (12,9)
2 (5,4)
14 (16,9)
0,073
Генотип CC
1 (0,4)
0 (0)
1 (1,2)
Не достоверны
6,8
2,7
9,6
0,046
Генотип HH
606 (72,4)
29 (78,4)
50 (60,2)
0,040
Генотип HD
207 (24,6)
8 (21,6)
27 (32,5)
Не достоверны
Генотип DD
27 (2,9)
0 (0)
6 (7,2)
Не достоверны
15,5
10,8
23,5
0,015
Аллель C
HFE
H63D
Аллель D
ненности генотипов и аллелей
полиморфизма гена IL-10 –1082
G/A и гена HFE C282Y. В то
же время распространенность
полиморфных маркеров других
исследованных генов различалась между группами (табл. 2).
Как видно из представленных
данных, у больных II группы
достоверно или на уровне тен-
52
денции чаще выявлялись следующие аллели: –511 T гена
IL-1b, –174 C гена IL-6, +915
C гена TGF-b1 и 63D гена
HFE. Учитывая ассоциацию
вышеуказанных аллелей с прогрессирующим течением ХГС,
мы определили эти аллели как
«профибротические». Наоборот,
у больных с мягким течением
заболевания по сравнению с
контрольной группой и больными с прогрессирующим течением преобладали аллели –511 C
гена IL-1b и –174 G гена IL-6,
которые определены нами как
«протективные». Однако свой
протективный эффект эти аллели проявляли только в гомозиготном состоянии, вследствие
ро Р
эн ос
т с
ко ер ийс
ло ол ки
пр ог й
ок ии жу
то , ге рн
ло п ал
ги ато
и л
о
IL-6
–174 G/C
35,3
Генотип GG
ги
I группа
p
между I и II
группами
Больные ХГС
ст
IL-1b
–511 C/T
Контрольная
группа
Генотип/аллель
га
Полиморфизм
и,
Экспериментально определенная частота генотипов и аллелей полиморфных
маркеров генов IL-1b, IL-6, TGF-b1 и HFE в контрольной группе и у больных ХГС, абс. число (%)
Оригинальные исследования
2, 2007
Таблица 3
Цифровое представление генетического профиля
у каждого конкретного больного
Суммарный балл
–6
–5
–4
–3
–2
–1
0
+1
+2
Абс. число
0
0
0
2
3
8
13
1
10
%
0
0
0
5,4
8,1
21,6
35,1
2,7
27,0
Обсуждение
результатов
исследования
I
II
Абс. число
1
3
5
9
27
16
15
4
3
%
1,2
3,6
6,0
10,8
32,5
19,3
18,1
4,8
3,6
ния печени равен 4 (p<0,001).
Суммарный балл «0» и более
имели 64,8% больных с мягким
течением ХГС и 26,5% больных с его прогрессирующим
течением: у таких пациентов
относительный риск прогрессирования заболевания составил
0,4 (p<0,001).
Для определения чувствительности и специфичности
предложенной модели нами
была построена характеристическая кривая, отражающая
взаимосвязь между чувствительностью и специфичностью (см.
рисунок). Площадь под кривой составила 0,758 (p<0,001).
Специфичность и чувствительность модели, выявляющей
больных с прогрессирующим
течением ХГС при суммарном
балле «–2» и менее, составила
86,5 и 54,2% соответственно, а
модели, выявляющей больных
с благоприятным течением заболевания при суммарном балле
1,0
0,8
и,
0,5
ги
0,3
0
0,3
0,5
Специфичность
0,8
ро Р
эн ос
т с
ко ер ийс
ло ол ки
пр ог й
ок ии жу
то , ге рн
ло п ал
ги ато
и л
о
Чувствительность
1,0
Характеристическая кривая (площадь под кривой 0,758, p<0,001)
53
ст
чего к «протективным» были
отнесены именно генотипы гена
IL-1b –511 СС и гена IL-6 –174
GG.
По нашим наблюдениям,
повышение риска прогрессирования заболевания при наличии одного профибротического
аллеля составляет от 1,4 для
–511 CT генотипа гена IL-1b до
2,2 для –174 СС генотипа гена
IL-6, т. е. один полиморфный
аллель, хотя и достоверно, но
незначительно повышает риск
неблагоприятного исхода заболевания. В случае же носительства защитных аллелей, т. е.
генотипа гена IL-1b –511 СС
или генотипа гена IL-6 –174 GG,
относительный риск прогрессирования снижался и составил
0,7 и 0,4 соответственно.
С целью повышения достоверности прогноза осуществлялось
суммирование благоприятных
и неблагоприятных аллелей/
генотипов у каждого конкретного больного. Для упрощения
суммирования проведено кодирование с присвоением каждому профибротическому аллелю
«–1» балла, а защитному генотипу «+1» с последующим суммированием (табл. 3).
Суммарный балл «–2» и
ниже (т. е. группы с большим
количеством профибротических
аллелей) имел каждый седьмой больной (13,5%) с медленно прогрессирующим течением
ХГС и каждый второй (54,1%)
с прогрессирующим течением
ХГС: при такой генетической
комбинации
относительный
риск прогрессирования пораже-
Существующие подходы к
прогнозированию течения ХГС
основываются на анализе клинической картины заболевания, данных инструментальных
и лабораторных исследований
и результатах биопсии печени
[19]. Такие хорошо известные
факторы риска прогрессирования ХГС, как поздний возраст
инфицирования, мужской пол,
злоупотребление
алкоголем,
иммуносупрессия, сочетанное
инфицирование другими вирусами, наличие сахарного диабета и стеатоза печени позволяют
выявить группу больных повышенного риска развития ЦП.
Вместе с тем у пациентов, не
имеющих этих факторов риска
или имеющих только некоторые
из них, прогнозирование течения заболевания затруднено.
Согласно последним исследованиям, нормальные показатели активности АлАТ, определяемые в период наблюдения
за больными ХГС, не исключают прогрессирования фиброза, что диктует необходимость
выполнения биопсии печени
для определения тактики ведения пациентов. Однако инвазивность процедуры, нередко
га
Группа
«0» и более – 73,5 и 64,9% соответственно.
Оригинальные исследования
и,
ги
ро Р
эн ос
т с
ко ер ийс
ло ол ки
пр ог й
ок ии жу
то , ге рн
ло п ал
ги ато
и л
о
I группы по сравнению с больными II группы (p=0,067). На
основании этих данных аллель
гена IL-1b –511 Т был определен нами как «профибротический», а аллель –511 С – как
«протективный».
Известно, что IL-10 играет ключевую роль в патогенезе
инфекционных и воспалительных процессов. В исследовании
D.R. Nelson и соавт. было показано, что после введения IL-10
больным ХГС с выраженным
фиброзом или даже циррозом
печени уменьшаются воспалительная активность и стадия
фиброза [13]. Носительство
вариантного аллеля полиморфизма гена IL-10 –1082 A приводит к снижению продукции
этого цитокина. В нашей работе
не найдено статистически значимых отличий в распространенности генотипов и аллелей
данного полиморфизма между
исследованными
группами,
вследствие чего этот полиморфизм не был включен в модель
определения прогноза ХГС.
IL-6 как плейотропный цитокин участвует в воспалительных
процессах и является эссенциальным фактором для регенерации печени. В ряде работ [8, 11,
21] показано, что IL-6 стимулирует экспрессию матриксной
металлопротеиназы-13 (MMP13) и снижает экспрессию ингибитора матриксных протеиназ-1
(TIMP-1), тем самым способ­
ствуя деградации внеклеточного
матрикса. Полиморфизм в –174
положении гена IL-6 с заменой
G на C приводит к снижению
экспрессии этого цитокина.
Согласно полученным нами
данным, генотип гена IL-6 –174
GG, ассоциированный с высокой продукцией IL-6, достоверно чаще выявляется у больных
I группы по сравнению с больными II группы. И наоборот,
генотипы гена IL-6 –174 GC
и –174 CC достоверно чаще
обнаруживаются при прогрессирующем, чем при благоприятном течении заболевания.
Таким образом, аллель гена IL-6
ст
54
рованием фиброза, может быть
использована для определения
прогноза ХГС [18]. Особый
интерес представляют результаты масштабной работы американских авторов, которые,
проанализировав 24 823 полиморфизма у 433 больных ХГС,
выявили, что с прогрессированием фиброза ассоциированы
1609 однонуклеотидных замен
[10]. Необходимо отметить, что
данные литературы по русской
этнической группе, касающиеся роли генетических факторов в прогрессировании ХГС,
крайне ограничены, а приводимые зарубежными авторами
сведения требуют валидации на
нашей популяции.
Исходя из современных
представлений о фиброгенезе при ХГС нами впервые в
России были изучены четыре
полиморфизма генов цитокинов
(–511 C/T гена IL-1b, –1082
G/A гена IL-10, –174 G/C гена
IL-6 и +915 G/C гена TGF-b1)
и два полиморфизма гена HFE
(С282Y и H63D) у больных ХГС
русской этнической группы.
IL-1b выступает не только
важным медиатором и маркером воспаления, он индуцирует
также экспрессию коллагенов I
и III типа и обладает митогенным действием на фибро­бласты
посредством стимуляции экспрессии PDGF и его рецептора на поверхности последних
[3], в результате чего высокий
уровень IL-1b способствует прогрессированию фиброза печени. Наиболее изученным полиморфизмом гена IL-1b является
однонуклеотидная замена С на
Т в –511 положении промоторного региона гена, приводящая
к увеличению секреции IL-1b
[6].
Установлено, что генотипы
гена IL-1b –511 CT и –511 TT,
ассоциированные с повышенной
продукцией IL-1b, чаще обнаруживаются при прогрессирующем
типе поражения печени, чем
при благоприятном (p=0,067).
Генотип гена IL-1b –511 СС
выявляется чаще у больных
га
несоответствие между локальным и общим (sampling error)
состоянием ткани печени [17], а
также потребность в повторных
биопсиях в связи с неравномерностью темпов прогрессирования фиброза на протяжении
заболевания создают ограничения в их применении в качестве
метода выбора при наблюдении за больными. Применение
неинвазивных маркеров оценки
фиброза ограничено их малой
информативностью у пациентов
с мягким и умеренным фиброзом, а также недостаточностью
доказательной базы по данным
тестам [12].
Таким образом, на сегодняшний день практикующие специалисты лишены надежного и
простого метода определения
прогноза у больных ХГС, а
принятие решения о проведении ПВТ часто основывается,
главным образом, на индивидуальном опыте врача и мотивации пациента. В условиях
ожидаемого в ближайшие годы
четырехкратного увеличения
выявления ранее недиагностированных случаев ХГС [1]
поиск новых надежных и простых методов прогнозирования
течения заболевания приобретает особую актуальность.
В последние годы накапливаются материалы о возможности применения генетических
факторов или их комбинации
с уже известными клиническими факторами, влияющими на
темпы прогрессирования болезни, для определения течения и
прогноза ХГС. Так, E.E. Powell
и соавт. доказали, что в случае совместного наследования
профибротического
аллеля
гена TGF-b1 и гена ангиотензиногена у больных обнаруживается более тяжелая стадия
фиброза, чем у пациентов, не
имеющих этих полиморфных
маркеров или имеющих только
один из них [15]. В исследовании M.M. Richardson и соавт.
показано, что комбинация из
8 профибротических аллелей,
ассоциирующаяся с прогресси-
2, 2007
Оригинальные исследования
Заключение
Генетический полиморфизм
генов цитокинов IL-1b –511 C/T,
IL-6 –174 G/C, TGF-b1 +915
G/C и гена гемохроматоза
HFE H63D является фактором,
определяющим индивидуальные особенности прогрессирования фиброза у больных ХГС.
Установлены аллели, ассоциированные с прогрессирующим
типом течения ХГС – «профибротические» (аллель гена
IL-1b –511 Т, гена IL-6 –174 C,
гена TGF-b1 +915 С и аллель
63 D гена HFE) и, наоборот,
ассоциированные с медленным
прогрессированием фиброза –
«протективные» (генотип гена
IL-1b –511 CC и гена IL-6 –174
GG). Таким образом, определение генетического профиля
у больных ХГС может служить
дополнительным фактором при
обсуждении показаний к ПВТ,
прогнозировании течения и
исхода болезни.
– Vol. 115, N 2. – P. 209–218.
Di Giovine F.S., Takhsh E.,
Blakemore A.I., Duff G.W. Single
base polymorphism at –511 in the
human interleukin-1 beta gene (IL1
beta) // Hum. Mol. Genet. – 1992.
– Vol. 1, N 6. – P. 450.
7. Fernandez-Real J.M., Broch M.,
Vendrell J. et al. Interleukin-6 gene
polymorphism and insulin sensitivity
// Diabetes. – 2000. – Vol. 49,
N 3. – P. 517–520.
8. Fishman D., Faulds G., Jeffery R. et
al. The effect of novel polymorphisms
in the interleukin-6 (IL-6) gene
и,
6.
ги
1. Alberti A., Benvegnu L., Boccato S.
et al. Natural history of initially
mild chronic hepatitis C // Dig.
Liver Dis. – 2004. – Vol. 36, N 10.
– P. 646–654.
2. Awad M.R., El-Gamel A., Hasleton P.
et al. Genotypic variation in the
transforming growth factor-beta1
gene: association with transforming
growth factor-beta1 production,
fibrotic lung disease, and graft
fibrosis after lung transplantation
// Transplantation. – 1998. –
Vol. 66, N 8. – P. 1014–1020.
3. Azouz A., Razzaque M., El-Hallak M.,
Taguchi T. Immunoinflammatory
responses and fibrogenesis //
Med. Electron Microsc. – 2004.
– Vol. 37. – P. 141–148.
4. Bahr M.J., El-Menuawy M., Boe­
ker K.H. et al. Cytokine gene
polymorphisms and the susceptibility
to liver cirrhosis in patients with
chronic hepatitis C // Liver Int.
– 2003. – Vol. 23, N 6. – P. 420–
425.
5. Bataller R., Brenner D.A. Liver
fibrosis // J. Clin. Invest. – 2005.
модели, позволяющей прогнозировать течение заболевания
[10, 18].
К главным преимуществам
предложенной нами модели
можно отнести то, что она позволяет оценить индивидуальный
риск прогрессирования болезни,
предсказать течение заболевания
на самых ранних этапах и соответственно планировать тактику
ведения больного. Кроме того,
данный тест легок в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и может быть
автоматизирован.
ро Р
эн ос
т с
ко ер ийс
ло ол ки
пр ог й
ок ии жу
то , ге рн
ло п ал
ги ато
и л
о
Список литературы
железа и накоплением его в
организме, преимущественно
в печени. Предполагается, что
в случае сочетания мутации в
гене HFE с HCV-инфекцией
избыток железа в печени потенцирует воспалительный процесс
и фиброгенез посредством усиления образования свободных
форм кислорода.
Статистически достоверных
отличий в распространенности генотипов и аллелей C282Y
полиморфизма между больными
I и II групп, а также контрольной группой не найдено. В то
же время частота гетеро- и гомозигот по D аллелю H63D полиморфизма гена HFE в I группе
была достоверно выше, чем в
группе сравнения (p=0,040), что
позволило определить аллель
гена HFE 63D как «профибротический».
С учетом выявленных взаимосвязей между течением ХГС
и генетическим полиморфизмом
нами была построена модель
для определения прогноза заболевания, основанная на исследовании трех полиморфизмов
генов цитокинов (–511 C/T
гена IL-1b; –174 G/C гена
IL-6 и +915 G/C гена TGF-b1) и
полиморфизма гена HFE H63D.
Эта модель обладает достаточной чувствительностью и специфичностью.
Результаты нашего исследования согласуются с данными
литературы последних лет, свидетельствующими о значимости изучения комбинации фиброз-ассоциированных аллелей
у больных ХГС для создания
55
ст
–174 G был определен нами как
«защитный», а аллель –174 С
– как «профибротический», и
в дальнейшем оба аллеля были
использованы при создании
модели прогноза ХГС.
Среди ростовых факторов
TGF-b1 является, по-видимому,
ключевым
медиатором
фиброгенеза [5]. Он участвует
в трансформации покоящихся
клеток Ито в активированные
звездчатые клетки, стимулирует
продукцию внеклеточного матрикса и угнетает его деградацию. Кроме того, в экспериментальных моделях показано, что блокирование эффекта
TGF-b1 вызывает существенное
уменьшение фиброза. В гене
TGF-b1 описан полиморфизм
в +915 положении с заменой G
на C, приводящий к снижению
концентрации этого цитокина
в сыворотке крови. Генотип
+915GG, характеризующийся
повышенной продукцией TGFb1, ассоциирован с развитием
фиброза легких и печени [2,
15], однако не во всех исследованиях выявлена указанная
взаимосвязь [9].
Генотипы гена TGF-b1 +915
GC и +915 СС, ассоциированные с низкой продукцией
TGF-b1, выявлялись достоверно
чаще у больных с прогрессирующим течением ХГС (p=0,05),
что позволило определить вариантный аллель +915 С как «профибротический» и включить его
в модель прогноза ХГС.
Исследованные
мутации
в гене HFE ассоциированы с
повышенным
всасыванием
га
2, 2007
Оригинальные исследования
on IL-6 transcription and plasma
IL-6 levels, and an association with
systemic-onset juvenile chronic
arthritis // J. Clin. Invest. – 1998.
– Vol. 102, N 7. – P. 1369–1376.
9. Gewaltig J., Mangasser-Stephan K.,
Gartung C. et al. Association of
poly­morphisms of the transforming
growth factor-beta1 gene with the
rate of progression of HCV-induced
liver fibrosis // Clin. Chim. Acta.
– 2002. – Vol. 316, N 1–2. –
P. 83–94.
10.
Huang
H.
Shiffman
M.,
Cheung C. et al. Identification
of two gene variants associated
with risk of advanced fibrosis in
patients with chronic hepatitis C
// Gastroenterology. – 2006. –
Vol. 130. – P. 1679–1687.
11. Jin X., Zimmers T.A., Perez E.A. et al. Paradoxical effects of
short- and long-term interleukin-6
expo­sure on liver injury and repair
// Hepatology. – 2006. – Vol. 43,
N 3. – P. 474–484.
12. Lackner C., Struber G., Liegl B.
et al. Comparison and validation
of simple noninvasive tests for
prediction of fibrosis in chronic
hepatitis C // Hepatology. – 2005.
– Vol. 41, N 6. – P. 1376–1382.
2, 2007
13. Nelson D.R., Tu Z., SoldevilaPico C. et al. Long-term interleukin
10 therapy in chronic hepatitis C
patients has a proviral and antiinflammatory effect // Hepatology.
– 2003. – Vol. 38, N 4. – P. 859–
868.
14. Potekhina E.S., Lavrov A.V.,
Samokhodskaya L.M. et al. Uni­
que genetic profile of hereditary
hemochromatosis in Russians: high
frequency of C282Y mutation in
population, but not in patients
// Blood Cells Mol. Dis. – 2005.
– Vol. 35, N 2. – P. 182–188.
15. Powell E.E., Edwards-Smith C.J.,
Hay J.L. et al. Host genetic factors
influence disease progression in
chronic hepatitis C // Hepatology.
– 2000. – Vol. 31, N 4. – P. 828–
833.
16. Pui-Yan Kwok. Single nucleotide
polymorphisms methods and proto­
cols. – Totowa, New Jersey. –
P. 270.
17. Regev A., Berho M., Jeffers L.J. et
al. Sampling error and intraobserver
variation in liver biopsy in patients
with chronic HCV infection //
Am. J. Gastroenterol. – 2002. –
Vol. 97, N 10. – P. 2614–2618.
18. Richardson M.M., Powell E.E.,
Barrie H.D. et al. A combination
of genetic polymorphisms increases
the risk of progressive disease in
chronic hepatitis C // J. Med.
Genet. – 2005. – Vol. 42, N 7.
– P. 45.
19. Seeff L.B. Natural history of chro­
nic hepatitis C // Hepatology.
– 2002. – Vol. 36, N 5 (suppl. 1).
– P. 35–46.
20. Shu Q., Fang X., Chen Q.,
Stuber F. IL-10 polymorphism is
associated with increased incidence
of severe sepsis // Chin. Med. J.
(Engl). – 2003. – Vol. 116, N 11.
– P. 1756–1759.
21. Solis-Herruzo J.A., Rippe R.A.,
Schrum L.W. et al. Interleukin-6
increases rat metalloproteinase-13
gene expression through stimulation
of activator protein 1 transcription
factor in cultured fibroblasts // J.
Biol. Chem. – 1999. – Vol. 274,
N 43. – P. 30919–30926.
22. Suzuki S., Tanaka Y., Orito E.
et al. Transforming growth factorbeta-1 genetic polymorphism in
Japanese patients with chronic
hepatitis C virus infection // J.
Gastroenterol. Hepatol. – 2003.
– Vol. 18. – P. 1139–1143.
Prognostic value of combination of allelic variants
of cytokine and hemochromatosis genes in patients
with chronic hepatitis C
L.M. Samokhodskaya, T.M. Ignatova, S.M. Abdullaev, T.N. Krasnova,
T.P. Nekrasova, N.A. Mukhin, V.A. Tkachuk
ст
га
56
ро Р
эн ос
т с
ко ер ийс
ло ол ки
пр ог й
ок ии жу
то , ге рн
ло п ал
ги ато
и л
о
ги
и,
The study investigated the effect of polymorphism of cytokine (IL-1b-511 C/T,
IL-6-174 G/C, IL-10-1082 G/A, TGF-b1 +915 G/C) and hemochromatosis (C282Y,
H63D) genes on the rates of fibrosis progression at patients with chronic hepatitis
C (CHC). Overall 120 patients, including 63 patients in hepatitis stage and 57 — at
liver cirrhosis (LC) stage were investigated. According to duration of disease and
evaluated stage of fibrosis two types of the liver lesions were defined: slowly progressing (37) and progressing (83) variants. Analysis of polymorphism of the abovementioned gene has revealed alleles associated with CHC progressing variant
- «profibrotic» (IL-1b-511 T, IL-6-174 C and TGF-b1 +915 С gene alleles and 63 D
gene alleles HFE) and, on the contrary, associated with slow development of fibrosis – «protective» (IL-1b-511 CC and IL-6-174 GG genotypes). The model based
on polymorphism markers combination was designed, its specificity and sensitivity
was evaluated. It was shown, that the presented model can be used for assessment
of CHC prognosis.
Key words: chronic hepatitis C, genetic factors, progression of fibrosis,
prognosis.