Определение мутантного поверхностного антигена вируса
advertisement
Определение мутантного поверхностного антигена вируса гепатита В (НВsАg) методом Immulite 2000 J. Lei, B.A. Campbell, C. Cervantes, L. Bronstein, D. Hond, D. Sustarsic Определение мутантного поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) методом IMMULITE 2000. J. Lei, B.A. Campbell, C. Cervantes, L. Bronstein, D. Hond, D. Sustarsic Введение Ранее было показано, что мутантные формы поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) могут являться причиной ложноотрицательных результатов, полученных с использованием коммерческих систем для иммуноанализа. В этой статье представлены результаты анализа сывороток пациентов и рекомбинантных белков, представляющих различные мутации HBsAg, полученные с использованием анализатора IMMULITE 2000. Эти данные показывают, что исследование, проведенное с использованием системы IMMULITE 2000, является предпочтительным для выявления инфекции, обусловленной вирусом гепатита В. Эпидемиология Всего на планете вирусом гепатита В (HBV) инфицировано более 2 миллиардов человек, большая часть которых (более 95%) выздоравливает с приобретением иммунитета [2]. От 1 до 5% случаев выявления инфекции приходится на долю вирусоносителей с хронической формой инфекции [2]. Это приблизительно 350 миллионов носителей вируса гепатита во всем мире [1,3]. Все население планеты можно распределить по областям с высоким, средним и низким уровнем хронической инфекции [1]. В высоко эндемичных областях, таких как Юго-Восточная Азия, Китай, Африка и некоторые части Южной Америки, более 8 процентов населения являются хроническими носителями HBV. В умеренно эндемичных областях (Восточная и Южная Европа, Средний Восток, Япония и некоторые части Южной Америки) хроническими носителями являются 2-7% населения. В тех регионах, где уровень HBV-инфекции низкий, таких как Северная Америка, Северная и Западная Европа и Австралия, на долю хронических носителей HBV приходится только 1,5-2% [1]. Носители HBV являются основным источником инфекции. Своевременная диагностика инфекции путем скрининга крови и предотвращение передачи путем вакцинации способны снизить негативное воздействие HBV на здоровье населения. На уровне ДНК вирусы гепатита В (HBV) очень гетерогенны и могут быть распределены по 8 классам от А до Н, различия между которыми составляют более 8%[1,4]. Доказано, что каждый определенный генотип HBV связан с определенным географическим регионом. Например, генотипы В и С преобладают в Азии, генотип Е в западной Африке, генотип F в Центральной и Южной Америке, генотип G в Соединенных Штатах Америки и во Франции [1]. Кроме того, генотипы HBV могут обладать различными биологическими свойствами, а вызываемый ими инфекционный процесс может сопровождаться различными клиническими проявлениями [1]. Так, например, инфекция, вызванная HBV генотипов В и С, коррелирует с повреждением печени; а инфекция, обусловленная HBV генотипа А, эффективно излечивается терапевтическими методами с использованием интерферона [1]. Структура вируса Вирус гепатита В - небольшой ДНК-содержащий вирус, геном которого состоит примерно из 3200 нуклеотидов [5]. Компактный геном содержит последовательности четырех перекрывающихся генов, кодирующих структурные и неструктурные белки вирусных частиц (рис.1) [6]. Большинство вирусных частиц имеют сферическую форму, комплексную структуру и размер приблизительно 43 нм в диаметре (рис.2) [7]. Ядро состоит из ДНК, вирусной полимеразы и других белков, заключенных в оболочку, покрывающую ядро [8]. Ядро окружено мембраной, содержащей большие, средние и малые белки поверхностного антигена гепатита В (HBsAg). Малые HBsAg (рис.3) - наиболее распространенные белки вируса гепатита В. Они состоят из 226 аминокислотных остатков [6] и являются наиболее значимыми диагностическими маркерами инфекции, вызванной HBV. Основные антигенные детерминанты (эпитопы) наружной поверхности HBV находятся в пределах большого гидрофильного региона (БГР), состоящего из 100-160 аминокислотных остатков HBsAg. В пределах БГР находится высококонсервативный домен, состоящий из 124-147 аминокислот, известный как "а"-детерминанта (рис.3) [9]. Многочисленные субтипоспецифические детерминанты, локализованные внутри БГР, делают вирус гепатита В высокогетерогенным, дифференцирующимся по меньшей мере на 9 серологических подтипов (ауw1, ayw2, ayw3, ayw4 ayr, adw2, adw4, adrq+ и adrq-) [10]. Несмотря на гетерогенность, наличие консервативной "а"-детерминанты дает возможность выявления HBsAg и, следовательно, инфекции, обусловленной HBV, в большинстве видов иммуноанализа [9]. Рис. 1. Геном HBV и открытые рамки считывания для трансляции закодированных пептидов. большой Рис. 2. Структура HBV поверхность вирусной частицы вирусное пространство Рис 3. Модель белковой структуры малого HBsAg: -кружки - аминокислотные остатки -серые кружки с буквами - БГР (аминокислотные остатки 100-160) -черные кружки с буквами - "а"-детерминанта (аминокислотные остатки 124-147) замена аминокислотного остатка инсерции Рис. 4. БГР (аминокислоты 100-160) и "а"-детерминанта (аминокислоты 124-147). Буквы в кружках обозначают аминокислотные остатки HBsAg дикого типа, буквы вне кружков мутации, исследованные в данной работе. Мутации разделены по типам. Мутантные формы HBsAg Гетерогенность HBV на уровне ДНК и белков может быть связана с ошибками в работе HBVполимеразы в процессе репликации вирусного генома. Известно, что скорость появления ошибок полимеразы составляет порядка 1 на 107 оснований [11]. В период активной фазы инфекции, когда продуцируется до 1011 вирусных частиц в день, скорость появления ошибок в работе полимеразы может значительно увеличиваться [11]. Частично благодаря тому, что вирусные белки кодируются перекрывающимися рамками считывания, некоторые из возникающих мутантов HBV не могут реплицироваться так же эффективно, как и дикий тип вируса HBV. Тем не менее, увеличение количества мутантных форм HBsAg связано с селективным давлением, которое оказывается в процессе лечения инфекции (активная иммунизация и пассивная иммунопрофилактика) (рис.1) [1113]. Основным районом, вовлеченным в иммуноселекцию, является БГР. Многие штаммы вируса с мутациями в этом районе жизнеспособны. БГР-мутации могут быть эффективными маркерами при выявлении инфекции с помощью коммерческих иммунодиагностических тестов, потому что БГРрегион, в составе которого находится "а"-детерминанта (124-147 аминокислотные остатки), включает эпитопы антител, используемые в иммунодиагностике для выявления гепатита В. Большинство известных мутаций затрагивают 145-й аминокислотный остаток. В штаммах дикого типа на этой позиции находится глицин, который в мутантных штаммах замещен на аргинин (G145R) (рис.4) [11-14]. Наличие G145R-мутации не позволяет проводить исследования некоторых образцов пациентов с помощью ряда коммерческих иммунологических методов [11]. Существуют мутанты, у которых присутствуют другие изменения в "а"-детерминанте (например, мутации G130D, T131N, T143L, T143M, D144A), также не позволяющие проводить исследования пациентов с использованием некоторых коммерческих иммунологических тестов для определения HBsAg (рис.4) [11, 15, 16]. Эти данные легли в основу разработки теста IMMULITE 2000 HBsAg (определение поверхностного антигена гепатита В) для выявления природных и рекомбинантных белков, в которых присутствуют наиболее распространенные и стабильные мутации - G145R. Необходимо заметить, что были исследованы и другие рекомбинантные мутанты с единичными или множественными инсерциями (вставками) аминокислотных остатков [11-13]. Результаты таких исследований наглядно демонстрируют, что тест IMMULITE 2000 HBsAg может выявлять как дикий тип, так и разнообразные мутантные формы с изменениями в детерминанте "а" и в других областях БГР. Методы Метод IMMULITE 2000 HBsAg - это качественный двухступенчатый твердофазный хемилюминесцентный иммуноферментный анализ, адаптированный для использования на автоматическом анализаторе IMMULITE 2000, с аналитической чувствительностью 0,063 IU/mL (WHO IS для HBsAg, NIBSC 80/549). Твердая фаза состоит из полистироловых шариков, покрытых антителами к HBsAg. Полученные от пациентов образцы вносятся в реакционные пробирки, содержащие шарики, затем проводится 30-минутная инкубация при 37°С. За это время HBsAg образцов связывается с антителами к HBsАg (HBs-АТ), покрывающими шарики. После инкубации несвязавшийся материал удаляется путем промывки и центрифугирования. Затем в реакционную пробирку добавляют антитела (АТ) к HBsAg, меченные фосфатазой, и инкубируют 30 минут. Меченые АТ к HBsAg связываются в образце с иммобилизованным HBsAg. Несвязавшиеся AT удаляются последующей промывкой с центрифугированием, после чего добавляется хемилюминесцентный субстрат, который взаимодействует с щелочной фосфатазой. Фотонный выброс измеряется с помощью люминометра, интенсивность сигнала коррелирует с наличием в образце HBsAg. Полученные результаты показали, что исследование HBsAg на анализаторе IMMULITE 2000 позволяет выявить мутантные формы HBsAg. При определении мутантных форм HBsAg этот метод оказался лучше, чем результаты конкурентного анализа [17]. Настоящее исследование включало в себя изучение большого количества разнообразных мутаций HBsAg. Было использовано два подхода. Во-первых, методом IMMULITE 2000 HBsAg были исследованы HBV-позитивные образцы пациентов из Тайваня (региона с высоким процентом носителей HBV). Одновременно из генома HBV-позитивного пациента была выделена и секвенирована ДНКпоследовательность вируса гепатита В. Образцы с ожидаемыми показателями ниже предела разрешения метода IMMULITE 2000 HBsAg были изучены с помощью технологии рекомбинантных ДНК и количественной ПЦР. Во-вторых, с использованием метода получения рекомбинантной ДНК in vitro был получен ряд образцов с подтвержденным наличием мутаций HBsAg, которые были проанализированы методом IMMULITE 2000 HBsАg. Результаты Исследование образцов, содержащих HBV, методом IMMULITE 2000 HBsАg Все 13 HBV-положительных образцов сыворотки пациентов из Тайваня были исследованы методом IMMULITE 2000 HBsАg. Положительный результат получен в 12 из 13 образцов, в одном образце (№2), результат оказался отрицательным (табл.1). Этот образец ранее также показывал отрицательный результат при исследовании методом BioRad Genetic Systems HBsАg EIA 2,0 (Hercules, CA). Табл. 1. Результаты, полученные на образцах HBV-позитивных пациентов методом IMMULITE 2000 HBsAg. Анализ последовательности ДНК БГР-домена, выделенной из образцов пациентов. Во всех 13 HBV-положительных образцах пациентов была определена относящаяся к БГРрегиону последовательность ДНК и проведен поиск замен нуклеотидных пар, приводящих к заменам аминокислотных остатков и, соответственно, к мутациям. HBV-последовательность была выделена и амплифицирована с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). В каждом образце были исследованы 5 независимо полученных клонов. Было проведено секвенирование выделенной из клонов ДНК с ее последующим компьютерным анализом (неопубликованные данные). Изучаемые мутации затрагивали два аминокислотных остатка в пределах района БГР. Данные суммированы в таблице 2. В 4-х образцах мутация является результатом замены аминокислотного остатка 145 (G145R-мутация). Образцы 1-4, по-видимому, относились к смешанной инфекции, так как некоторые из клонов этих образцов несли изменения в положении 122 (K122N или K122T). Ранее в литературе уже были описаны смешанные инфекции у пациентов с HBV (включая и K122N-мутации). Таблица 2. Аминокислотные последовательности, определенные по последовательностям HBsAg 13 исследуемых образцов, содержащих HBV. Образец 1 2 3 4 5-13 Аминокислота 122 (№ клона)* К† (4) Т (1) К (4) N (1) K (2) N (3) K (2) N (3) K (45) Аминокислота 145 (№ клона)* R (5) R (5) R (5) R (5) G† (44) R (1) * для каждого образца пациента было получено и исследовано по 5 клонов † аминокислоты дикого типа HBV ДНК- Определение рекомбинантных мутантов HBsAg G145R с использованием метода IMMULITE 2000 Методом IMMULITE 2000 HBsAg были исследованы 4 образца HBV-положительной сыворотки, 3 из которых содержали HBsAg с G145R-мутацией; 1 образец (№2) показал отрицательный результат. Как отмечалось ранее, этот образец давал отрицательный результат и при исследовании методом BioRad Genetic Systems HBs-Аg EIA 2,0. Кроме того, провести амплификацию ДНК HBV для выделения БГР методом ПЦР в этом образце оказалось сложно (неопубликованные данные). Эта сложность объяснялась тем, что образец имел низкий титр HBV, и показатели находились ниже уровня предела разрешения обоих методов иммуноанализа. Для проверки этой гипотезы было проведено еще два исследования. В первом были клонированы последовательности HBsАg из штамма дикого типа (образец 6) и всех образцов, содержащих G145R-мутацию (образцы 1-4) для экспрессии рекомбинантного HBsАg. Во втором тесте методом количественной ПЦР в образце 2 был измерен титр HBV. С помощью ПЦР из 5 образцов пациентов (образцы 1-4 и образец 6) была выделена тотальная ДНК HBsAg. Эта ДНК была клонирована с помощью вектора экспрессии в клетки насекомых. Анализ последовательности клонированной ДНК HBsAg показал, что в выделенной из образцов 1 и 3 ДНК имеется только одна G145R-мутация (рис. 5). Образец 2 содержит также еще и K122N-мутацию. Замены аминокислотных остатков в положении между 160 и 214 лежат вне пределов района БГР, не приводят к изменению его структуры и не влияют на результаты исследований образцов пациентов с помощью иммунологических методов. Экспрессия рекомбинантных белков HBsAg в культуре клеток насекомых была подтверждена для всех клонов с использованием Western blot с применением поликлональной антисыворотки к HBsAg. Область экспрессии была идентична для всех клонов (Рис.6). Рис.5. Аминокислотные последовательности HBsAg, выделенные из образцов пациентов. Изменения отмечены жирным шрифтом. Рис. 6 Анализ методом Western blot белка HBsАg, экспрессированного в культуре клеток насекомых. Определение рекомбинантного HBsАg. Обозначения: Стд стандартная молекулярная масса; М - средняя; Р - растворимая фракция; Н - нерастворимая фракция. Белковые экстракты клеток насекомых, содержащие белки мутантов или рекомбинантов дикого типа, были исследованы с помощью метода IMMULITE 2000 HBsAg. Полученные результаты (таблица 3) показали, что метод IMMULITE 2000 HBsAg выявил наличие мутантного рекомбинантного белка HBsAg в образцах 1, 3 и 4, показавших в предыдущих исследованиях также положительные результаты (таблица 1). Аналогичный положительный результат получился и при исследовании образца 2 (с двойной мутацией, при наличии которой обычно получался отрицательный результат). Положительные результаты определения рекомбинантного HBsAg, полученные с использованием IMMULITE 2000 из образца 2 показали, что причиной отрицательных результатов в первоначальных исследованиях было не присутствие G145R- или K122N-мутаций, а то, что титр в этом образце был ниже предела разрешения иммунометода. Таблица 3. Результаты, полученные с помощью метода IMMULITE 2000 HBsAg для определения рекомбинантного белка HBsAg Образец Рекомбинантный HBsAg Результат 1 G145R мутант положит. 2 G145R+K122N мутант положит. 3 G145R мутант положит. 4 G145R мутант положит. 6 дикий тип положит. отр. конт. отсутствует отрицат. Метод количественной ПЦР для определения ДНК HBV Для определения титра была поставлена количественная ПЦР с ДНК HBV, выделенными из образца 2 и 12 (дикий тип). Титр ДНК HBV был определен методом сравнения со стандартной кривой, построенной на основе измерения параметров стандартного HBV (Qiagen RealArtTM HBV TM PCR ASR). В образце №2 титр ДНК HBV был настолько низким, что с помощью метода ПЦР в реальном времени ДНК HBV можно было определить лишь после 39 циклов ПЦР. Это свидетельствует о том, что в образце содержание вирусных частиц было менее 100 геномов/мл. Титр образца 12, показавшего положительные результаты при исследовании методом IMMULITE 2000 HBsAg, составил 1,6х105 геном/ мл (таблица 4). Таблица 4. Результаты постановки количественной ПЦР для образцов 2 и 12. Образец Колич. Стандарт А Колич. Стандарт В Колич. Стандарт С Обр. 2 (мутант) Обр. 12 (дикий тип) Порог. знач. 30,9 Титр ДНК HBV(геном/mL) 1,0х104 28,1 1,0х105 24,8 1,0х106 39,3 очень (<100) 1,6х105 27,3 низкий Определение других рекомбинантных мутаций HBsAg методом IMMULITE 2000 HBsAg С использованием IMMULITE 2000 HBsAg с достаточной точностью можно выявлять рекомбинантные белки HBsAg с мутациями по 145-ому аминокислотному остатку (G145R) и (K122N). Ранее опубликованные исследования показали, что многие вирусные мутации исключают возможность применения коммерческих иммунотестов [11,15,16,18]. С использованием рекомбинантных HBsAg были проведены дополнительные исследования для оценки других естественных мутаций БГР HBsAg. Все мутантные конструкции были созданы на основе клонированной последовательности ДНК HBsAg, выделенной из образца дикого типа №6. Замены нуклеотидных пар были получены с помощью ПЦР с использованием мутагенных праймеров. Были получены 8 дискретных единичных мутантных последовательностей: T126S, Q129H, G130D, T131N, M133L, T143L, T143M, D144A (рис. 4). Кроме того, при использовании снова того же метода ПЦР было получено 3 мутантных комплекса: T126S+Q129H+M133L, 122RG (R- и G-инсерции между 122-ой и 123-ей аминокислотными остатками) и 123RGT (R-, G- и T-инсерции между 123 и 124 аминокислотными остатками). ДНК каждого из этих 8 мутантов была клонирована в вектор переноса, после чего была определена их последовательность. Эти мутантные формы HBsAg были использованы для создания рекомбинантных бакуловирусов для экспрессии в клетках насекомых мутантных рекомбинантных HBsAg-белков. Мутантные рекомбинантные белки HBsAg были выделены из клеток насекомых и исследованы методом IMMULITE 2000 HBsAg. Методом IMMULITE 2000 были обнаружены все рекомбинантные мутантные белки (таблица 5). Табл. 5. Результаты, полученные с помощью метода IMMULITE 2000 HBsAg при исследовании других рекомбинантных мутаций HBsAg. Мутантная форма T126S Q129H G130D T131N M133L T143L T143M D144A T126S+Q129H+M133L 122RG 123RGT отрицательн. контроль Результат положительный положительный положительный положительный положительный положительный положительный положительный положительный положительный положительный отрицательный Резюме 1. Использование метода IMMULITE 2000 HBsAg позволяет выявлять нормальные и рекомбинантные HBsAg с наиболее часто встречаемой и не выявляемой при использовании других методов иммуноанализа мутацией - G145R. 2. Один из образцов (с мутацией HBsAg G145R) был отрицательным при первичном исследовании не вследствие наличия мутации, а из-за низкого уровня HBV (менее 1000 геномов/мл), но оказался позитивным при исследовании на IMMULITE 2000 HBsAg рекомбинантных белков, полученных из этого образца. 3. Метод IMMULITE 2000 HBsAg способен определять рекомбинантный белок HBsAg, несущий мутации в пределах БГР-домена. Это мутации T126S, Q129H, G130D, T131N, M133L, T143L, T143M, D144A, T126S+Q129H+M133L, 122RG и 123RGT. Заключение Метод IMMULITE 2000 HBsAg позволяет проводить определение мутации HBsAg, выявление которых невозможно при использовании других иммунометодов, и дает четкие и точные результаты при диагностике HBV-инфекции. Список литературы 1. Hou J., Liu Z., Gu F. Epidemiology and prevention of hepatitis В virus infection. Int. J. Med. Sci. 2005:2(1):50-57. 2. Fagan E.A., Harrison T.J. Viral hepatitis. A handbook for clinicians and scientists. New York: Springer Verlag; 2000. 3. Allen M.I., Gauthier J., DesLauriers M., Bourne E.J., Carrick K.M., Baldanti F. et al. Two sensitive PCR-based methods for detection of hepatitis В virus variants associated with reduced susceptibility to Lamivudine. J. Clin. Microbiol. 1999 Oct, 37(10):3338-47. 4. Weber B. Genetic variability of the S gene of hepatitis В virus: clinical and diagnostic impact. J. Clin. Virol. 2005 Feb; 32(2): 102-12. 5. Stuyver L., de Gendt S., van Geyt C., Zoulim F., Fried M., Schinazi R.F. et al. A new genotype of hepatitis В virus: complete genome and phylogenetic relatedness. J. Gen. Virol. 2000;81:67-74. 6. Offensperger W., Wahl S., Neurath A.R., Price P., Strick N., Kent S.B.H. et al. Expression in Escherichia coli of a cloned DNA sequence encoding the pre-S2 region of hepatitis В virus. Proc Natl. Acad. Sci. USA. 1985 Nov.82:7540-44. 7. Hitzeman R.A., Chen C.Y., Hagie F.E.. Patzer E.J., Liu С., Estell D.A. et al. Expression of hepatitis В virus surface antigen in yeast. Nucl. Acids. Res. 1983; 11 (9):2745-63. 8. Fujiyama A., Miyanohara A., Nozaki C., Yoneyama T., Ohtomo N.. Matsubara K. Cloning and structural analyses of hepatitis В virus DNAs. subtype adr. Nucl Acids Res. 1983; ll(13):4601-10. 9. Carman W.F., van Deursen F.J., Mimms L.T., Hardie D., Coppola R., Decker R. et al. The prevalence of surface antigen variants of hepatitis В virus in Papua New Guinea, South Africa, and Sardinia. Hepatology. 1997, Dec; 26(6): 1658-66. 10. Norder H., Hammas B., Lofdahl S., Courouce A., Magnius L.O. Comparison of the amino acid sequences of nine different serotypes of hepatitis В surface antigen and genomic classification of the corresponding hepatitis В virus strains. J. Gen. Virol. 1992:73:1201-8. 11. Coleman P.F. Detecting hepatitis В surface antigen mutants. Emerg. Infect. Dis. 2006:12:198-203. Available from http://www.cdc.gov/ncidod/EID/voll2no02/05-0038.htm. 12. Gerlich W.H. Diagnostic problems caused by HBsAg mutants-a consensus report of an expert meeting. Intervirology. 2004; 47:310-13. 13. Grethe S., Monazahian M., Bohme L., Thomssen R. Characterization of unusual escape variants of hepatitis В virus isolated from a hepatitis В surface antigen-negative subject. J. Virol. 1998 Sept; 72(9):7692-96. 14. Waters J.A., Kennedy M., Voet P., Hauser P., Petre J., Carman W. et al. Loss of the common "a" determinant of hepatitis В surface antigen by a vaccine-induced escape mutant. J. Clin. Invest. 1992, Dec;90:2543-47. 15. Chen W.N., Oon C.J. Changes in the antigemcity of a hepatitis В virus mutant steming from lamivudine therapy. Antimicrob. Agents Chemother. 2000 Jun;44(6):1765. 16. Chen W.N., Oon C.J. Hepatitis В virus surface antigen (HBsAg) mutants in Singapore adults and vaccinated children with high anti-hepatitis В virus antibody levels but negative for HBsAg. J. Clin. Microbiol. 2000 Jul; 38(7):2793-4 17. Weber B., Dengler T., Berger A., Doerr H.W., Rabenan H. Evaluation of two new automated assays for hepatitis В virus surface antigen (HBsAg) detection: IMMULITE HBsAg and IMMULITE 2000 HBsAg. J. Clin. Microbiol. 2003 Jan; 41(l): 135-43. 18. Hou J., Wang Z., Cheng J., Lin Y., Lau G.K.K., Sun J. et al. Prevalence of naturally occurring surface gene variants of hepatitis В virus in nonimmunized surface antigen-negative Chinese carriers. Hepatology. 2001 Nov; 34(5): 1027-34. IMMULITE® 2000 Medical Solutions Diagnostics Производительность до 200 тестов в час Одновременная загрузка 90 проб пациентов Охлаждаемая карусель реагентов на 24 позиции Анализаторы серии IMMULITE® Самый широкий спектр выполняемых исследований среди анализаторов аналогичного класса Постоянно расширяющееся меню тестов Использование пробирочной технологии Высокая точность за счет использования метода ферментативно-усиленной хемилюминесценции Оптимальное соотношение "цена-качество" получаемых результатов Возможность выполнения срочных тестов Встроенная программа контроля качества Возможность управлять приборами как с клавиатуры, так и прикосновением к сенсорному экрану Регистрационное удостоверение Бесперебойная поставка реагентов Методическая и сервисная поддержка специалистами, сертифицированными фирмой-производителем IMMULITE® 1000 Производительность до 120 тестов в час Программное обеспечение на русском языке Непрерывная дозагрузка проб Карусель для реагентов на 12 позиций
