Генотипы и гаплотипы гена-онкосупрессора р53

реклама
Èçó÷åíèå ýêñïðåññèè
ìîëåêóëÿðíî-áèîëîãè÷åñêèõ
ìàðêåðîâ â êëåòêàõ ìåòàñòàçîâ
ÃÅÍÎÒÈÏÛ
È ÃÀÏËÎÒÈÏÛ
ÃÅÍÀ-ÎÍÊÎÑÓÏÐÅÑÑÎÐÀ
Ð53:
àäåíîêàðöåíîìû òîëñòîé êèøêè
37
ÀÑÑÎÖÈÀÖÈß Ñ ÏÐÎÄÎËÆÈÒÅËÜÍÎÑÒÜÞ ÆÈÇÍÈ
Ó ÐÓÑÑÊÈÕ ÍÎÂÎÑÈÁÈÐÑÊÎÉ ÎÁËÀÑÒÈ
Í.À. Ñìåòàííèêîâà1, Â.Í. Ìàêñèìîâ2, Ñ.Í. Óñòèíîâ2,
Ò.Â. Ñòåïàíîâà1, Ë.Ã. Çàâüÿëîâà2, Ä.Â. Äåíèñîâà2, À.Â. Øàáàëèí2,3,
Ì.È. Âîåâîäà2, Â.À. Áåëÿâñêàÿ1
ÃÍÖ ÂÁ «Âåêòîð» ÌÇ ÐÔ, ï. Êîëüöîâî, Íîâîñèáèðñêàÿ îáë.1
ÍÈÈ òåðàïèè ÑÎ ÐÀÌÍ, ã. Íîâîñèáèðñê2
Íîâîñèáèðñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ ìåäèöèíñêàÿ àêàäåìèÿ3
Öåëüþ íàñòîÿùåé ðàáîòû áûëî èçó÷åíèå ÷àñòîòíîãî ðàñïðåäåëåíèÿ óêàçàííûõ ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 (âêëþ÷àÿ èõ
ãåíîòèïè÷åñêèå êîìáèíàöèè è ãàïëîòèïû) â ãðóïïàõ äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ äëÿ âûÿñíåíèÿ âîçìîæíîé àññîöèàöèè ñ
ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè. Ãåíîòèïèðîâàíèå è àíàëèç ãàïëîòèïîâ ãåíà ð53 â ãðóïïàõ ñðàâíåíèÿ áûëè âûïîëíåíû ìåòîäîì
ÏÖÐ-ÏÄÐÔ. Âëèÿíèÿ ïîëèìîðôèçìîâ â ýêçîíå 4 è èíòðîíå 3 íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè íå îáíàðóæåíî, â òî âðåìÿ êàê
ãîìîçèãîòíûé ãåíîòèï ñ îòñóòñòâèåì ñàéòà MspI â èíòðîíå 6 õàðàêòåðèçóåòñÿ âûðàæåííîé íåãàòèâíîé àññîöèàöèåé. Êîìáèíàöèÿ ãîìîçèãîòíîãî Pro-ãåíîòèïà â ýêçîíå 4 ñ ãåòåðîçèãîòíûìè ïî îáîèì èíòðîííûì ïîëèìîðôèçìàì ãåíîòèïàìè ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ñî÷åòàíèå «ïðî÷íîñòè». Ïîêàçàíî, ÷òî ðàçëè÷èÿ ãàïëîòèïíîãî ñîñòàâà ð53 âëèÿþò íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè
â çàâèñèìîñòè îò óðîâíÿ ãåòåðîçèãîòíîñòè.
GENOTYPES AND HAPLOTYPES OF P53 SUPPRESSOR GENE: ASSOCIATION
WITH LIFETIME OF THE RUSSIAN PEOPLE OF NOVOSIBIRSK AREA
N.A. Smetannikova1, V.N. Maksimov2, S.N. Ustinov2, T.V. Stepanova1,L.G. Zavjalova2, D.V. Denisova2,
A.V. Shabalin2,3, M.I. Voevoda2, V.A. Belyavskaya1
State Scientific Center VB “Vector” of Health Ministry of RF, Koltsovo, Novosibirsk area1
Therapy Research Institute, SB RAMS2, Novosibirsk
Novosibirsk State Medical Academy3
This study aimed to investigate the frequency distributions of p53 gene polymorphisms (including genotypic combinations and
haplotypes) in the groups of long survivors and teenagers for determining a possible association with lifetime. Genotyping and
analysis of p53 gene haplotypes in comparison groups were carried out using PCR-PDRF techniques. No impact of polymorphisms
in the forth exon and in the third intron on lifetime was found, while hemozygous genotype with the absence of MspI site in the 6th intron is characterized by the marked negative association. Differences in haplotypic composition of p53 were shown to influence
on lifetime depending on the level of heterozygosity.
Íà ðàçâèòèå çàáîëåâàíèé, ñîêðàùàþùèõ ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè ÷åëîâåêà, â òîì ÷èñëå îíêîëîãè÷åñêèõ, âëèÿþò êàê åãî èíäèâèäóàëüíûå ãåíåòè÷åñêèå îñîáåííîñòè, òàê è óñëîâèÿ, â êîòîðûõ îíè ïðîÿâëÿþòñÿ. Toupance et al. [23] ïðåäëîæåíà êëàññèôèêàöèÿ ãåíîâ ïî àññîöèàöèè ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè: ãåíû «ïðî÷íîñòè» (robust), «áðåííîñòè» (frail) è
íåéòðàëüíûå. Â îñíîâå òàêîãî ïîäðàçäåëåíèÿ ëåæèò
÷àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè èõ íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûõ àëëåëåé ó äîëãîæèòåëåé ïî ñðàâíåíèþ ñ äðóãèìè
âîçðàñòíûìè ãðóïïàìè (ñîîòâåòñòâåííî «âûøå»,
«íèæå» ëèáî «íå èçìåíÿåòñÿ»). Èçâåñòíî, ÷òî ñî÷åòàíèÿ àëëåëüíûõ âàðèàíòîâ ãåíîâ, ðåãóëèðóþùèõ
ôóíêöèîíèðîâàíèå ãîìåîñòàòè÷åñêèõ ñèñòåì îðãàíèçìà, îïðåäåëÿþò åãî ñïîñîáíîñòü àäåêâàòíî ðåàãè-
ðîâàòü íà ñòèìóëû, íàðóøàþùèå ãîìåîñòàç. Íà ïîïóëÿöèîííîì óðîâíå ìîæíî áûëî áû îæèäàòü óâåëè÷åíèÿ â ãðóïïå äîëãîæèòåëåé ÷àñòîòû ãåííûõ âàðèàíòîâ, îáåñïå÷èâàþùèõ óñòîé÷èâîñòü ê èçìåíåíèÿì, êîòîðûå èíèöèèðóþò çàáîëåâàíèÿ, ñîêðàùàþùèå
ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè.
Ãåí ð53 ÿâëÿåòñÿ êëþ÷åâûì ðåãóëÿòîðîì êëåòî÷íîãî äåëåíèÿ è àïîïòîòè÷åñêîé ýëèìèíàöèè ïàòîëîãè÷åñêè èçìåíåííûõ è, ñëåäîâàòåëüíî, ïîòåíöèàëüíî
çëîêà÷åñòâåííûõ êëåòîê. Ïî÷òè ó ïîëîâèíû îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ â îïóõîëåâûõ êëåòêàõ íàáëþäàþòñÿ
òî÷å÷íûå ìóòàöèè èëè äåëåöèè ãåíà ð53, ïðèâîäÿùèå ê óòðàòå ôèçèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè åãî áåëêà
[11].  ïðåäåëàõ ãåíà ð53 èäåíòèôèöèðîâàíî 13 ðàçÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18)
38
Í.À. ÑÌÅÒÀÍÍÈÊÎÂÀ, Â.Í. ÌÀÊÑÈÌÎÂ, Ñ.Í. ÓÑÒÈÍÎÂ è äð.
ëè÷íûõ ïîëèìîðôèçìîâ. Ïîëèìîðôèçì â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, êîäèðóþùèé çàìåíó àìèíîêèñëîòû
àðãèíèíà (Arg) íà ïðîëèí (Pro) â ïåðâè÷íîé ñòðóêòóðå áåëêà, ïðèçíàåòñÿ íàèáîëåå ôóíêöèîíàëüíî çíà÷èìûì [11, 26]. Îí ñâÿçàí ñ ðåàëèçàöèåé äâóõ ðàçëè÷íûõ àïîïòîòè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ, ñ íàðóøåíèåì êîòîðûõ àññîöèèðîâàíî ðàçâèòèå ðÿäà îíêîëîãè÷åñêèõ
çàáîëåâàíèé (ðàê ëåãêîãî, ïèùåâîäà, øåéêè ìàòêè,
êîæè; êîæíàÿ ìåëàíîìà) [2, 11, 26].
Ðàíåå ìû ïðîàíàëèçèðîâàëè ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò àëëåëåé è ãåíîòèïîâ äàííîãî ïîëèìîðôèçìà ó
äîëãîæèòåëåé Íîâîñèáèðñêîé îáëàñòè (ÍÑÎ) â ñðàâíåíèè ñ êîíòðàñòíîé âîçðàñòíîé ãðóïïîé (çäîðîâûå
ïîäðîñòêè ã. Íîâîñèáèðñêà). Ðàçëè÷èé â ÷àñòîòíîì
ðàñïðåäåëåíèè Arg/Pro-ïîëèìîðôèçìà ìåæäó ýòèìè
ãðóïïàìè îáíàðóæåíî íå áûëî [1].
Ïîäîáíî èññëåäîâàíèÿì, ïîñâÿùåííûì ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè ïîëèìîðôèçìà ð53 â 72-ì êîäîíå 4-ãî
ýêçîíà, â ðÿäå ðàáîò èçó÷àëèñü àññîöèàöèè ðàçëè÷íûõ òèïîâ ðàêà (ëåãêîãî [6, 7, 14, 26], ÿè÷íèêîâ [17],
ìîëî÷íîé æåëåçû [13, 14, 18, 25], îáîäî÷íîé è ïðÿìîé êèøêè [18]) ñ ïîëèìîðôèçìàìè â 3-ì è 6-ì èíòðîíàõ ýòîãî ãåíà. Èíòðîííûå ïîëèìîðôèçìû, áëàãîäàðÿ ñâîåìó ó÷àñòèþ â ðåãóëÿöèè ñïëàéñèíãà ìÐÍÊ,
ýêñïðåñèè ãåíîâ è ÄÍÊ-áåëêîâûõ âçàèìîäåéñòâèé, ïðè
îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõ òàêæå ìîãóò îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü áåëêîâ [5, 12, 16].
Öåëüþ íàñòîÿùåé ðàáîòû áûëî ïðîâåñòè èññëåäîâàíèå îïóõîëåàññîöèèðîâàííûõ ïîëèìîðôèçìîâ
ãåíà ð53 (äóïëèêàöèÿ â 16 ïàð íóêëåîòèäîâ (dup16 bp)
â 3-ì èíòðîíå è MspI-ïîëèìîðôèçì â 6-ì èíòðîíå)
íà îñíîâå èçó÷åíèÿ èõ ðàñïðåäåëåíèÿ â ãðóïïàõ äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ äëÿ âûÿñíåíèÿ âîçìîæíîé
êîððåëÿöèè ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû
Èññëåäîâàëèñü îáðàçöû ãåíîìíîé ÄÍÊ çäîðîâûõ
äîëãîæèòåëåé Íîâîñèáèðñêîé îáëàñòè (ÍÑÎ, n=88,
âîçðàñò 84–105 ëåò) è ïîäðîñòêîâ ã. Íîâîñèáèðñêà
(n=146, âîçðàñò 14–17 ëåò). Âûáîðêè áûëè ñôîðìèðîâàíû ïî ýòíè÷åñêîìó êðèòåðèþ (ïðîñëåæåííàÿ â òðåõ
ïîêîëåíèÿõ ïðèíàäëåæíîñòü ê ðóññêîé íàöèîíàëüíîñòè). Ðàáîòà ïðîâîäèëàñü ñ ñîáëþäåíèåì ïðèíöèïîâ
äîáðîâîëüíîñòè è êîíôèäåíöèàëüíîñòè â ñîîòâåòñòâèè ñ «Îñíîâàìè çàêîíîäàòåëüñòâà ÐÔ îá îõðàíå
çäîðîâüÿ ãðàæäàí» (Óêàç Ïðåçèäåíòà ÐÔ îò 24. 12. 1993
¹ 2288).
ÄÍÊ áûëà âûäåëåíà èç öåëüíîé âåíîçíîé êðîâè ñ
èñïîëüçîâàíèåì ïðîòåèíàçû Ê ñ ïîñëåäóþùåé ôåíîëüíî-õëîðîôîðìíîé ýêñòðàêöèåé [3]. Îöåíêà ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 ïðîâîäèëàñü ñ ïîìîùüþ ÏÖÐ(dup16 bp â 3 èíòðîíå) è ÏÖÐ-MspI-ÏÄÐÔ-àíàëèçà
(MspI-ïîëèìîðôèçì â 6-ì èíòðîíå), êàê îïèñàíî Wu
et al. [26]. Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ îñóùåñòâëÿëàñü ñ ïðèìåíåíèåì ïàêåòà ïðèêëàäíûõ ñòàòèñòè÷åñêèõ ïðîãðàìì SPSS v. 9.0. Ñîîòâåòñòâèå ðàñïðåäåëåíèÿ ÷àñòîò ãåííûõ âàðèàíòîâ çàêîíó Õàðäè –
Âàéíáåðãà (ÕÂ) îöåíèâàëîñü ïî êðèòåðèþ P2.
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå
Íà ïåðâîì ýòàïå ìû èçó÷èëè ðàñïðåäåëåíèå àëëåëåé è ãåíîòèïîâ êàæäîãî èíòðîííîãî ïîëèìîðôèçìà ãåíà ð53 â êîíòðàñòíûõ âîçðàñòíûõ ãðóïïàõ (äîëãîæèòåëè è ïîäðîñòêè) äëÿ âûÿñíåíèÿ èõ âëèÿíèÿ íà
ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè (òàáë. 1).
Ò à á ë è ö à
1
Ðàñïðåäåëåíèå àëëåëåé è ãåíîòèïîâ ïîëèìîðôèçìîâ â 3-ì è 6-ì èíòðîíàõ ãåíà ð53 ó äîëãîæèòåëåé è
ïîäðîñòêîâ
3-é èíòðîí (dup 16 bp)
Àëëåëè
Ãåíîòèïû
Ãðóïïà
W
M
W/W
W/M
M/M
Äîëãîæèòåëè ÍÑÎ
154/176
67/88
20/88
1/88
22/176 (0,125)
n=88
(0,875)
(0,761)
(0,227)
(0,012)
245/292
33/146
7/146
Ïîäðîñòêè ã. Íîâîñèáèðñêà n=146
47/292 (0,161)
106/146 (0,726)
(0,839)
(0,226)
(0,048)
6-é èíòðîí (MspI)
Àëëåëè
Ãåíîòèïû
Ãðóïïà
W
M
W/W
W/M
M/M
Äîëãîæèòåëè ÍÑÎ
140/168
26/168 (0,167)
57/84 (0,679)
26/84 (0,310)
1/84 (0,012)
n=84
(0,833)
201/266
Ïîäðîñòêè ã. Íîâîñèáèðñêà n=133
65/266 (0,254)
79/133 (0,594)
43/133 (0,325)
14/133 (0,105) *
(0,756)
Ïðèìå÷àíèå: 3-é èíòðîí: W (wild) – îòñóòñòâèå dup16 bp, M (minor) – íàëè÷èå dup16 bp; 6-é èíòðîí: W – íàëè÷èå ñàéòà
ðåñòðèêöèè MspI, M – îòñóòñòâèå ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI; * – ðàçëè÷èÿ ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìû ñ ãðóïïîé «Äîëãîæèòåëè».
ÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18)
Ãåíîòèïû è ãàïëîòèïû ãåíà-îíêîñóïðåññîðà ð53: àññîöèàöèÿ ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè ó
ðóññêèõ Íîâîñèáèðñêîé îáëàñòè
39
Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ðàíåå Wu et al. [26], èññëåäóÿ
ãåíîòèïè÷åñêèå êîìáèíàöèè òðåõ íàçâàííûõ ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 ñ èñïîëüçîâàíèåì ëèíèé ëèìôîáëàñòîèäíûõ
êëåòîê îò çäîðîâûõ íîñèòåëåé ýòèõ êîìáèíàöèé, îáíàðóæèëè âûðàæåííîå ñíèæåíèå ïîêàçàòåëåé àïîïòîòè÷åñêîãî èíäåêñà è ýôôåêòèâíîñòè ðåïàðàöèè ÄÍÊ ïî ìåðå óâåëè÷åíèÿ ÷èñëà ìèíîðíûõ àëëåëåé â êàæäîì ëîêóñå ð53.
Äëÿ áîëüøåé íàãëÿäíîñòè è îáîñíîâàíèÿ ñëåäóþùåãî ýòàïà íàøèõ èññëåäîâàíèé ìû ñî÷ëè íåîáõîäèìûì ïðèâåñòè
ýòè äàííûå â âèäå òàáëèöû (òàáë. 2).
Îáðàùàåò âíèìàíèå ôàêò, ÷òî íåãàòèâíîå âëèÿíèå ìèíîðíûõ (Ì) àëëåëåé óñèëèâàåòñÿ ïðè íàðàñòàíèè óðîâíÿ ãåòåðîçèãîòíîñòè ïî òðåì ëîêóñàì ð53:
òàê, àïîïòîòè÷åñêèé èíäåêñ êëåòîê â ãðóïïàõ íîñèòåëåé, ãåòåðîçèãîòíûõ òîëüêî ïî îäíîìó ëîêóñó è
ãîìîçèãîòíûõ ïî ìèíîðíîìó àëëåëþ âî âñåõ ëîêóñàõ, çíà÷èòåëüíî ñíèæàåòñÿ (â 3,2 è 8,3 ðàçà, ñîîòâåòñòâåííî) ïî ñðàâíåíèþ ñ ãðóïïîé ãîìîçèãîòíûõ íîñèòåëåé äèêîãî àëëåëÿ (òàáë. 2).
Íåñîìíåííî, ñòîëü ðàçèòåëüíûå îòëè÷èÿ â àïîïòîòè÷åñêîé àêòèâíîñòè áåëêà ð53 íå ìîãóò íå îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ýôôåêòèâíîñòü ïðåäîòâðàùåíèÿ
ðàçâèòèÿ ïàòîëîãèé è ñâèäåòåëüñòâóþò î ôóíêöèîíàëüíîé çíà÷èìîñòè íå òîëüêî ãåíîòèïè÷åñêèõ êîìáèíàöèé, íî è ãàïëîòèïîâ ãåíà ð53 â çàâèñèìîñòè
îò óðîâíÿ ãåòåðîçèãîòíîñòè. Ïîýòîìó íà ñëåäóþùåì ýòàïå ìû èçó÷èëè ÷àñòîòíîå ðàñïðåäåëåíèå
ãàïëîòèïîâ ð53 â ãðóïïàõ äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ äëÿ ãîìîçèãîòíûõ íîñèòåëåé è èíäèâèäóóìîâ,
ãåòåðîçèãîòíûõ ïî îäíîìó èç òðåõ ëîêóñîâ. Îïðåäåëåíèå ãàïëîòèïîâ ó ýòèõ ëèö, â îòëè÷èå îò ãåòåðîçèãîò ïî äâóì è òðåì ëîêóñàì, íå òðåáóåò ïðîâåäåíèÿ äîïîëíèòåëüíîãî ãåíîòèïèðîâàíèÿ. Ïîëó÷åííûå äàííûå ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 3.
Ïî ðàñïðåäåëåíèþ ïîëèìîðôèçìà â 3-ì èíòðîíå (dup16 bp) èçó÷àåìûå âûáîðêè ñòàòèñòè÷åñêè
çíà÷èìî íå îòëè÷àþòñÿ.  òî æå âðåìÿ îáíàðóæåíî
çíà÷èìîå ïîâûøåíèå ÷àñòîòû ãåíîòèïà M/M èíòðîíà 6 (ãîìîçèãîòíîñòü ïî îòñóòñòâèþ ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI) ó ïîäðîñòêîâ ã. Íîâîñèáèðñêà ïî ñðàâíåíèþ ñ äîëãîæèòåëÿìè ÍÑÎ â 8,75 ðàçà (P2=6,97,
ð=0,0083; OR=9,76, 95% CI=1,26–75,70). Âûÿâëåííîå
îòëè÷èå ïîçâîëÿåò ñ÷èòàòü îòñóòñòâèå ñàéòà MspI â
6-ì èíòðîíå ð53 âàðèàíòîì «áðåííîñòè». Ýòî ïîäòâåðæäàåòñÿ ñîîáùåíèÿìè îá àññîöèàöèÿõ äàííîãî
àëëåëÿ ñ ðàêîì ëåãêîãî [7, 14, 26], ÿè÷íèêîâ [17], ìîëî÷íîé æåëåçû [14, 18] è îáîäî÷íîé êèøêè [18]. Â
íàøèõ èññëåäîâàíèÿõ ãåíà-îíêîñóïðåññîðà ð53 òàêîé îäèíî÷íûé ïîëèìîðôèçì «áðåííîñòè» îáíàðóæåí âïåðâûå ïðè ñðàâíåíèè ãðóïïû äîëãîæèòåëåé ñ äðóãèìè âîçðàñòíûìè ãðóïïàìè.
Äàëåå äëÿ ãðóïï äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ áûë
âûïîëíåí àíàëèç ãåíîòèïè÷åñêèõ êîìáèíàöèé òðåõ
ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 (Arg/Pro-ïîëèìîðôèçì â
72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, dup16 bp-ïîëèìîðôèçì â
3-ì èíòðîíå, MspI-ïîëèìîðôèçì â 6-ì èíòðîíå). Èç
20 ðàçëè÷íûõ ñî÷åòàíèé ãåíîòèïîâ òðåõ ëîêóñîâ ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìûå ðàçëè÷èÿ ìåæäó êîíòðàñòíûìè âûáîðêàìè áûëè îáíàðóæåíû òîëüêî äëÿ êîìáèíàöèè MM-WM-WM (Pro/Pro-ãîìîçèãîòíîñòü è ãåòåðîçèãîòíîñòü ïî íàëè÷èþ dup16 bp- è MspI-ïîëèìîðôèçìîâ). Áûëî âûÿâëåíî ñíèæåíèå åå ÷àñòîòû
ñðåäè ïîäðîñòêîâ ã. Íîâîñèáèðñêà ïî ñðàâíåíèþ ñ
ãðóïïîé äîëãîæèòåëåé ÍÑÎ (0,015 è 0,1 ñîîòâåòñòâåííî; P2=7,82, ð=0,0052, OR=0,14, 95%CI=0,03–0,63), ÷òî
äàåò âîçìîæíîñòü ðàññìàòðèâàòü äàííóþ êîìáèíàöèþ â êà÷åñòâå «êîìáèíàöèè ïðî÷íîñòè».
Ò à á ë è ö à
2
Àïîïòîòè÷åñêèé èíäåêñ è îáúåì ðåïàðàöèè ÄÍÊ â ëèìôîáëàñòîèäíûõ êëåòî÷íûõ ëèíèÿõ ñ ðàçëè÷íûìè
êîìáèíàöèÿìè ãåíîòèïîâ ð53 (4-é ýêçîí – 3-é èíòðîí – 6-é èíòðîí) (Wu et al., 2002)
Ãåíîòèïû p53
WW-WW-WW n=11
WM-WW-WW
WW-WM-WW
WW-WW-WM n=11
(WM+MM)-WM-WM
WM-(WM+MM)-WM
WM-WM-(WM+MM)
n=8
MM-MM-MM n=1
Àïîïòîòè÷åñêèé èíäåêñ
Ñðåäíèé %
95 % CI
13,66
8,61-18,71
p
Ýôôåêòèâíîñòü ðåïàðàöèè ÄÍÊ
Ñðåäíèé %
95 % CI
p
27,63
21,72-33,53
4,29
2,23-6,35
<0,001
20,45
13,11-27,80
0,11
3,50
1,08-5,91
0,002
17,48
7,99-26,96
0,04
1,64
15,6
Ïðèìå÷àíèå. W (wild) – Arg-àëëåëü â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, îòñóòñòâèå dup16 bp â 3-ì èíòðîíå, íàëè÷èå ñàéòà ðåñòðèêöèè
MspI â 6-ì èíòðîíå; M (minor)– Pro-àëëåëü â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, íàëè÷èå dup16 bp â 3-ì èíòðîíå, îòñóòñòâèå ñàéòà
ðåñòðèêöèè MspI â 6-ì èíòðîíå.
ÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18)
40
Í.À. ÑÌÅÒÀÍÍÈÊÎÂÀ, Â.Í. ÌÀÊÑÈÌÎÂ, Ñ.Í. ÓÑÒÈÍÎÂ è äð.
Ñîïîñòàâëåíèå ÷àñòîò âñòðå÷àåìîñòè ãàïëîòèïîâ
ãåíà ð53 âûÿâèëî óìåðåííîå, íî ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîå ðàçëè÷èå â ðàñïðåäåëåíèè íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííîãî ãàïëîòèïà W-W-W (Arg– îòñóòñòâèå dup16 bp–
íàëè÷èå ñàéòà MspI) ìåæäó äîëãîæèòåëÿìè ÍÑÎ è
ïîäðîñòêàìè ã. Íîâîñèáèðñêà, ãåòåðîçèãîòíûìè ïî
îäíîìó èç òðåõ ëîêóñîâ. Îòìå÷åíî ñíèæåíèå äîëè óêàçàííîãî ãàïëîòèïà â ãðóïïå ïîäðîñòêîâ (P 2=4,32,
ð=0,0378, OR=0,14; CI= 0,02–1,15). Â òî æå âðåìÿ äëÿ
ãîìîçèãîòíûõ íîñèòåëåé çíà÷èìûõ ðàçëè÷èé ìåæäó
êîíòðàñòíûìè ãðóïïàìè îáíàðóæåíî íå áûëî. Ýòî
ïîäòâåðæäàåò ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî àññîöèàöèÿ êîíêðåòíîãî ãàïëîòèïíîãî âàðèàíòà ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè çàâèñèò íå òîëüêî îò ñî÷åòàíèÿ «äèêèõ» è
ìèíîðíûõ àëëåëåé, íî è îò ñîñòîÿíèÿ ãîìî- èëè ãåòåðîçèãîòíîñòè ïî ïîëèìîðôíûì ëîêóñàì. Â íàñòîÿùåå
âðåìÿ èçó÷åíèþ ãàïëîòèïîâ ð53 ïî óêàçàííûì ëîêóñàì óäåëÿåòñÿ áîëüøîå âíèìàíèå [6, 7, 13, 25, 26].
Äëÿ ïîëíîãî ïðåäñòàâëåíèÿ î ñâÿçè ãàïëîòèïîâ
ãåíà ð53 ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè íåîáõîäèìî
ïðîàíàëèçèðîâàòü èõ ÷àñòîòíîå ðàñïðåäåëåíèå òàêæå è ó èíäèâèäóóìîâ, ãåòåðîçèãîòíûõ ïî äâóì è òðåì
ïîëèìîðôèçìàì, ÷òî ïëàíèðóåòñÿ â äàëüíåéøåì.
Îáîáùàÿ ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå îòíîñèòåëüíî êîððåëÿöèé ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà-îíêîñóïðåññîðà ð53 ñ
ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè, ìîæíî ñêàçàòü, ÷òî â
äîïîëíåíèå ê ðàíåå îáíàðóæåííîìó «íåéòðàëüíîìó»
ýôôåêòó ïîëèìîðôèçìà â 4-ì ýêçîíå [2] âûÿâëåí òàêîé æå ýôôåêò è äëÿ ïîëèìîðôèçìà â 3-ì èíòðîíå.
Ãîìîçèãîòíûé ãåíîòèï ñ îòñóòñòâèåì ñàéòà MspI â
6-ì èíòðîíå õàðàêòåðèçóåòñÿ âûðàæåííîé íåãàòèâíîé
àññîöèàöèåé («ýôôåêò áðåííîñòè»). Â òî æå âðåìÿ
êîìáèíàöèÿ «ãîìîçèãîòíûé Pro-ãåíîòèï â 4-ì ýêçîíå – ãåòåðîçèãîòíîñòü ïî îáîèì èíòðîííûì ïîëèìîðôèçìàì» ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ãåíîòèïè÷åñêîå
«ñî÷åòàíèå ïðî÷íîñòè». Ïîêàçàíî, ÷òî êîððåëÿöèè
òðåõ óêàçàííûõ ïîëèìîðôèçìîâ ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè îïðåäåëÿþòñÿ òàêæå èõ ãàïëîòèïíûìè ñî÷åòàíèÿìè è ñîñòîÿíèåì ãîìî- èëè ãåòåðîçèãîòíîñòè. Ýòè äàííûå â ñîâîêóïíîñòè ñâèäåòåëüñòâóþò î
ïëåéîòðîïíîì (ðàçíîíàïðàâëåííîì) âëèÿíèè ãåíà
ð53 íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè. Òåîðåòè÷åñêîå
ïðåäïîëîæåíèå î ïëåéîòðîïíîì âëèÿíèè ãåíà ð53
áûëî ñäåëàíî ðàíåå èòàëüÿíñêèìè àâòîðàìè, õîòÿ â
èõ ðàáîòå îíî íå ïîëó÷èëî ýêñïåðèìåíòàëüíîãî ïîäòâåðæäåíèÿ [8].
Ðàçíîíàïðàâëåííîñòü âëèÿíèÿ íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè îáíàðóæåíà òàêæå ïðè èçó÷åíèè ïîëèìîðôèçìîâ äðóãèõ ãåíîâ ñèñòåìû ïðîòèâîîïóõîëåâîé çàùèòû (ãåíû öèòîõðîìà ð450, ãëþòàòèîíòðàíñôåðàçû [19, 22], áåëêîâ òåïëîâîãî øîêà [4, 15], ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé àëüôà [9, 20, 24], èíòåðëåéêèíîâ
6 è 10 [10, 21, 24]). Ïðè ýòîì áûëà âûÿâëåíà çàâèñèìîñòü ýôôåêòîâ ïîëèìîðôèçìîâ îò ýòíîãåîãðàôè÷åñêîé ïðèíàäëåæíîñòè âûáîðîê.
Ïðåäñòàâëåííûå íàìè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î
íåîáõîäèìîñòè ïðîâåäåíèÿ êîìáèíàöèîííîãî è ãàïëîòèïíîãî àíàëèçà ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 äëÿ âûÿñíåíèÿ åãî ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè â êëþ÷åâûõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ. Ó÷èòûâàÿ ïëåéîòðîïíîñòü åãî áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ, ðåøåíèå ýòîé ïðîáëåìû ñëåäóåò òàêæå èñêàòü ïóòåì êîìïëåêñíîãî ãåíåòè÷åñêîãî, ýïèäåìèîëîãè÷åñêîãî è ýòíîãåîãðàôè÷åñêîãî èçó÷åíèÿ ÷åëîâå÷åñêèõ ïîïóëÿöèé.
Ò à á ë è ö à
3
Ðàñïðåäåëåíèå ãàïëîòèïîâ ð53 â ãðóïïàõ äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ (Arg/Pro-ïîëèìîðôèçì â 4-ì ýêçîíå,
dup16-ïîëèìîðôèçì â 3-ì èíòðîíå, MspI-ïîëèìîðôèçì â 6-ì èíòðîíå)
Ïðèìå÷àíèå: W (wild) – Arg-àëëåëü â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, îòñóòñòâèå dup16 bp â 3-ì èíòðîíå, íàëè÷èå ñàéòà ðåñòðèêöèè
MspI â 6-ì èíòðîíå; M (minor)– Pro-àëëåëü â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, íàëè÷èå dup16 bp â 3-ì èíòðîíå, îòñóòñòâèå ñàéòà
ðåñòðèêöèè MspI â 6-ì èíòðîíå; * – ðàçëè÷èÿ ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìû ñ ãðóïïîé «Äîëãîæèòåëè».
ÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18)
Ãåíîòèïû è ãàïëîòèïû ãåíà-îíêîñóïðåññîðà ð53: àññîöèàöèÿ ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè ó
ðóññêèõ Íîâîñèáèðñêîé îáëàñòè
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ
1. Áåëÿâñêàÿ Â.À., Ñìåòàííèêîâà Í.À., Ìàêñèìîâ Â.Í. è
äð. // Ìîëåêóëÿðíàÿ ìåäèöèíà. 2005. ¹ 4. Ñ. 18–28.
2. Ñìåòàííèêîâà Í.À., Ñìåòàííèêîâà Ì.À., Áåëÿâñêàÿ
Â.À. è äð. // Ñèáèðñêèé îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë. 2004. ¹ 2–3.
Ñ. 124–129.
3. Ñìèò Ê., Êîëëèíç Ô., Êàíòîð ×. Àíàëèç ãåíîìà / Ïîä
ðåä. Ê. Äåéâèñà. Ì.: Ìèð, 1990. C. 58–94.
4. Altomare K., Greco V., Bellizzi D. et al. // Biogerontology.
2003. Vol. 4, ¹ 4. Ð. 215–220.
5. Avigad S., Barel D., Blan O. et al. // Oncogene. 1997. Vol.
14. P. 1541–1545.
6. Birgander R., Sjalander A., Rannug A. et al. //
Carcinogenesis. 1995. Vol. 16. P. 2233–2236.
7. Biros E., Kalina I., Kohut A. et al. // Lung Cancer. 2001.
Vol. 31. P. 157–162.
8. Bonafe M., Olivieri F., Cavallone L. et al. // Am. J. Hum.
Genet. 1999. Vol. 65. P. 1782–1785.
9. Bruunsgaard H., Benfield T.L., Andersen–Ranberg K. et
al. // J. Am. Geriatr. Soc. 2004. Vol. 52, ¹ 8. P. 1361–1366.
10. Capurso C., Solfrizzi V., D’Introno A. et al. // Exp.
Gerontol. 2004. Vol. 39, ¹ 7. P. 1109–1114.
11. Fan R., Wu M.-T., Miller D. et al. // Cancer Epid. Biom.
Prev. 2000. Vol. 9. P. 1037–1042.
12. Hillebrandt S., Streffer C., Demidchik E.P. et al. // Mutat.
Res. 1997. Vol. 381. P. 201–207.
41
13. Khaliq S., Hameed A., Khaliq T. et al. // Genet. Test.
2000. Vol. 4. ¹ 1. P. 23–29.
14. Mahasneh A.A., Abdel–Hafiz S.S. // Saudi Med. J. 2004.
Vol. 25, ¹ 11. P. 1568–1573.
15. Marini M., Lapalombella R., Canaider S. et al. // Exp.
Gerontol. 2003. Vol. 39, ¹ 1. P. 83–90.
16. Mattick J.S. // Curr. Opin. Genet. Des. 1994. Vol. 4. P.
823–831.
17. Mavridou D., Gornall R., Campbell I.G. et al. // Br. J.
Cancer. 1998. Vol. 77. P. 676–677.
18. Peller S., Kopilova I., Slutzki S. et al. // DNA Cell Biol.
1995. Vol. 14. P. 983–990.
19. Persh B., Dusing R., Rabstein S. et al. // Toxicol. Lett.
2004. Vol. 151, ¹ 1. P. 283–290.
20. Ross O.A., Curran M.D., Rea I.M. et al. // Mech. Ageing
Dev. 2003. Vol. 124, ¹ 4. P. 563–567.
21. Scola L. Crivello A., Marino V. et al. // Mech. Ageing
Dev. 2003. Vol. 124. ¹ 4. P. 569–572.
22. Taioli E., Mari D., Franceschi C. et al. // Biochem.
Biophys. Res. Commun. 2001. Vol. 280, ¹ 5. P. 1389–1392.
23. Toupance B., Godelle B., Gouyon P. et al. // Am. J. Hum.
Genet. 1998. Vol. 65. P. 1525–1534.
24. Wang X.Y., Hurme M., Jylha M. et al. // Mech. Ageing
Dev. 2003. Vol. 123, ¹ 1. P. 29–38.
25. Weston A., Perrin L.S., Forrester K. et al. // Cancer Epid.
Biom. Prev. 1997. Vol. 6. P. 105–112.
26. Wu X., Zhao H., Amos C.I. et al. // J. Natl. Canc. Ins.
2002. Vol. 94. ¹ 9. P. 681–690.
Ïîñòóïèëà 8.06.05
ÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18)
Скачать