Взаимодействие вариантов штамма сибирского генотипа вируса

ФГБНУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П.Чумакова»
ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток имени И.И.Мечникова»
Взаимодействие вариантов штамма
сибирского генотипа вируса клещевого
энцефалита с дендритными клетками мыши.
Мотузова Оксана Вячеславовна
лаборатория биологии арбовирусов
аспирант 3 года обучения
Москва, 2015
Используемые в работе варианты штамма ЭК-328
ЭК-328
вариант М
Клон 57
Клон 58
Область генома
ЭК-328
Вариант М
Клон 57
Клон 58
122 ак. белка Е
Glu
Gly
Gly
Glu
124 ак. белка Е
Lys
Lys
Glu
Lys
52 ак. белка NS2A
Lys
Asn
Asn
Asn
22 ак. белка NS4A
Ser
Gly
Gly
Gly
41 ак. белка NS4A
Arg
Lys
Lys
Lys
prM
Ala
Val
Val
Val
42нт 5’-НТО
+с
а
а
а
Используемые в работе клоны штамма ЭК-328 и
их свойства
NS2A и NS4A , 42нт 5’-НТО
Нейроинвазивность
Нейровирулентность
Индукция ИФН
Чувствительность к ИФН
Время появления ИФНα
Конформационная
стабильность белка Е
Термостабильность
ЭК-328
57
58
Высокая
Низкая
Высокая
Высокая
Средняя
Высокая
Высокая
Низкая
Высокая
Высокая
Средняя
Низкая
10ч
28ч в/д
5ч
Устойчив
Неустойчив
Устойчив
Средняя
устойчивость
Неустойчив
Супер устойчив
Белок Е
Фенотип дендритных клеток
Антиген
MHC II
CD4
CD80,86
CD40
CD11c
CD38
Захват антигена процессинг а/г
MHC экспрессия
Способность к миграции
Молекулы адгезии
Костимуляторная активность
Цель – изучить взаимодействие штамма ЭК328 и его вариантов с ДК костномозгового
происхождения.
.
Задачи:
Сравнить:
1)динамику размножения исходного штамма ЭК328 и его вариантов – клона 57 и клона 58 в
дендритных клетках мыши ДК
2)динамику синтеза ИФН-α ДК
3)изменение фенотипа ДК под влиянием
исследуемых вирусов.
Динамика размножения
Динамика размножения штамма ЭК-328 в
культуре ДК мыши
lgБОЕ
5,3
Множественность
заражения
4,3
0,1 БОЕ/кл
3,3
1 БОЕ/кл
10 БОЕ/кл
2,3
1,3
0
5
10
14
18
24
48
часы
72
(высоковирулентный)
Динамика размножения клона 57 в
культуре ДК мыши
lgБОЕ
Динамика размножения клона 58 в
культуре ДК мыши
lgБОЕ
5,3
5,3
4,3
Множественность
заражения
4,3
Множественность
заражения
0,1 БОЕ/кл
3,3
1 БОЕ/кл
0,1 БОЕ/кл
3,3
1 БОЕ/кл
10 БОЕ/кл
2,3
10 БОЕ/кл
2,3
1,3
0
5
10
14
18
24
48
(низковирулентный)
72
часы
1,3
0
5
10
14
18
24
48
(высоковирулентный)
72
часы
Индукция ИФН-α
Вирус
Шт. ЭК-328
57 клон
58 клон
Доза (БОЕ/кл)
5ч п/и
10ч п/и
0,1
3/3
2/3
1
0/3
1/3
10
1/3
0/3
0,1
1/2
1/2
1
1/2
1/2
10
1/2
0/2
0,1
2/2
1/2
1
1/2
1/2
10
1/2
1/2
Влияние вариантов одного штамма
ВКЭ на фенотип ДК
%
90
80
70
60
штамм ЭК-328
58 клон
50
57 клон
40
Контроль
30
TNF-alfa
20
10
0
CD38
CD34
CD40
CD83
CD80/83
CD11c
CD86/11c
MHCII
CD14
Гипотеза
57 клон
MHC II
CD40
CD80,86
CD38
CD11c
штамм ЭК-328
CD4+
CD4
штамм ЭК-328
58 клон
Выводы
• Единичные точечные аминокислотные замены в
молекуле белка Е вариантов ВКЭ могут изменять
способность их взаимодействия с ДК.
• Характер активации врожденного и адаптивного
иммунного ответа может зависеть от соотношения этих
вариантов в популяции.
• Высоковирулентные вирусы отличились между собой по
степени экспрессии маркера CD11c, но сходны по
остальным маркерам.
• Высоковирулентный клон 58 оказался наиболее
активным индуктором созревания ДК.
• Под действием низковирулентного клона 57 ДК
экспрессировали MHCII на уровне отрицательного
контроля
Работа выполнена на базе лабораторий:
 ФГБНУ «ИПВЭ им. М.П.Чумакова» (зав. лаб. биологии
арбовирусов, проф. Г.Г. Карганова)
 ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова» (зав.лаб.
механизмов регуляции иммунитета, д.м.н. Н.К. Ахматова)
Благодарю за внимание